1、食品中的菌落總數(shù)的測(cè)定,第三組：胡婷、黃純、黃依潔,Contents,1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理,2. 實(shí)驗(yàn)材料,3. 實(shí)驗(yàn)方法與步驟,4.檢樣中細(xì)菌菌落總數(shù)的計(jì)算,5. 室內(nèi)空氣中細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)實(shí)施細(xì)則,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理,目的 1、學(xué)習(xí)和掌握測(cè)定食品中菌落總數(shù)的基本方法 2、學(xué)會(huì)菌落總數(shù)的報(bào)告方式 3、明確菌落總數(shù)測(cè)定對(duì)被檢樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)的意義。 原理 平板菌落計(jì)數(shù)法又稱標(biāo)準(zhǔn)平板活菌計(jì)數(shù)法（standard plate count，簡(jiǎn)稱SPC法），是最常用的一種活菌計(jì)數(shù)法。菌落總數(shù)可作為判定食品清潔程度（被污染程度）的標(biāo)志，通常越干凈的食品，單位樣品菌落總數(shù)越低，反之，菌落總數(shù)就越高。因此，細(xì)

2、菌菌落總數(shù)測(cè)定對(duì)檢樣進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)提供依據(jù)。,二、實(shí)驗(yàn)材料,1、儀器與設(shè)備：恒溫培養(yǎng)箱、托盤(pán)天平、電爐、吸管、三角瓶、平皿、試管、試管架、酒精燈、滅菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蠟筆。 2、培養(yǎng)基和試劑：75%乙醇、0.85%生理鹽水、瓊脂培養(yǎng)基：胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、瓊脂15.0g、蒸餾水1000mL、pH 7.00.2 3、檢樣：伊利包裝鮮牛奶250ml,三、實(shí)驗(yàn)方法與步驟,1、檢驗(yàn)程序 菌落總數(shù)檢驗(yàn)程序： 檢樣做成幾個(gè)適當(dāng)倍數(shù)的稀釋液選擇2-3個(gè)適宜稀釋度各以1ml之量分別入滅菌平皿內(nèi)每皿內(nèi)加入4615-20ml營(yíng)養(yǎng)瓊脂置361恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)（482）h取出

3、 菌落數(shù)報(bào)告,2、檢樣稀釋及培養(yǎng) （1）以無(wú)菌操作，將檢樣包裝打開(kāi)，用吸管取25ml鮮牛奶，放于含有225ml滅菌生理鹽水的500ml滅菌玻璃三角瓶?jī)?nèi)（瓶?jī)?nèi)預(yù)先置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠），經(jīng)充分振搖做成1：10的均勻稀釋液。 （2）用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水的試管內(nèi)（注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液，下同），振搖試管混合均勻，做成1：100的稀釋液。 （3）另取1ml的滅菌吸管，按上項(xiàng)操作順序作10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用1支1ml滅菌吸管。,（4）根據(jù)食品衛(wèi)生檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)要求和檢樣的菌落數(shù)量，選擇3個(gè)連續(xù)適宜稀釋度即10、10-1、10

4、2，分別在作10倍遞增稀釋的同時(shí)，即以吸取該稀釋度的吸管移1ml稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度作兩個(gè)平皿。 （5）稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時(shí)將涼至46營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿15ml20mL，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使與稀釋檢樣混合均勻，同時(shí)將營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1ml稀釋液（不含樣品）的滅菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。 （6）等瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置361恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)（482）h取出，計(jì)算平板內(nèi)菌落數(shù)目乘以倍數(shù)，即得1mL樣品所含菌落總數(shù)。,四、檢樣中細(xì)菌菌落總數(shù)的計(jì)算,1、菌落計(jì)算方法 （1）菌落計(jì)數(shù)方法 做平板菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀查，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平

5、均菌落總數(shù)。,公式計(jì)算：,N = 樣品中菌落數(shù) C = 含適宜范圍菌落數(shù)的平板菌落數(shù)之和 n1 = 第一稀釋度（低稀釋度）平板個(gè)數(shù) n2 = 第二稀釋度（高稀釋度）平板個(gè)數(shù) d = 稀釋因子（第一稀釋度）,實(shí)驗(yàn)結(jié)果與記錄,五、室內(nèi)空氣中細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)實(shí)施細(xì)則,一、范圍適用于室內(nèi)空氣細(xì)菌總數(shù)測(cè)定。 二、引用標(biāo)準(zhǔn)GB/T18883-2002 室內(nèi)空氣中細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法 三、原理撞擊法：采用撞擊式空氣微生物采樣器采樣通過(guò)抽氣動(dòng)力作用，使空氣通過(guò)狹縫或小孔而產(chǎn)生高速氣流，從而使懸浮在空氣中的帶菌粒子撞擊到營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，經(jīng)37、48h培養(yǎng)后，計(jì)算每立方米空氣中所含的細(xì)菌菌落數(shù)的采樣測(cè)定方法。,四、儀器和

6、設(shè)備 1高壓蒸汽滅菌器。2干熱滅菌器。3恒溫培養(yǎng)箱。4冰箱。5平皿。（直徑9）6制備培養(yǎng)基用一般設(shè)備：量筒，三角燒瓶，pH計(jì)或精密pH試紙等。7撞擊式空氣微生物采樣器（FSC-IV便攜式浮游生物采樣器）。 五、培養(yǎng)基 1營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 1成分：蛋白胨 20g ，牛肉浸膏 3g ，氯化鈉 5g 瓊脂 15g20g ，蒸餾水 1000ml。 2制法：將上述各成分混合，加熱溶解，校正pH至7.4，過(guò)濾分裝，12120min高壓滅菌。營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板的制備參照采樣器使用說(shuō)明。,六、選點(diǎn)要求 1采樣點(diǎn)的數(shù)量根據(jù)監(jiān)測(cè)室內(nèi)面積大小和現(xiàn)場(chǎng)情況而確定，以期能正確反映室內(nèi)空氣污染物的水平。原則上小于50的房間應(yīng)設(shè)（13）個(gè)點(diǎn)；50100設(shè)（35）個(gè)點(diǎn)；100以上至少設(shè)5個(gè)點(diǎn)。在對(duì)角線上或梅花式均勻分布。2采樣點(diǎn)應(yīng)避開(kāi)通風(fēng)口，離墻壁距離應(yīng)大于0.5m。3采樣點(diǎn)的高度：原則上與人的呼吸帶高度相一致。相對(duì)高度0.5m1.5m之間。,七、采樣 將采樣器消毒，按儀器使用說(shuō)明進(jìn)行采樣。一般情況下采樣量為30L150L，應(yīng)根據(jù)所使用儀器性能和室內(nèi)空氣微生物污染程度，酌情增加或減少空氣采樣量。 八、