1、考試時間：11月12日 考試地點：圖書館電子閱覽室,一、盡量選擇與人類相似的實驗動物,1結(jié)構(gòu)和功能的相似性,實驗動物選擇的基本原則,2時象或年齡狀態(tài)的相似性 3群體分布的相似性 與人群具有相似的自然群體基因的實驗動物類別為封閉群動物。,4生態(tài)或健康狀況的相似性 現(xiàn)有的不同微生物學質(zhì)量級別的普通動物、清潔動物、SPF動物、無菌及悉生動物分別代表著不同的微生態(tài)模式并具有不同特點，適用于不同研究目的。 5疾病特點的相似性 6解剖特點的相似性 外科手術(shù)性的操作模型中或教學示教中，體型大的動物比體型小者在實踐感上更接近人類。,二、選用解剖、生理特點符合實驗目的要求的實驗動物,家兔頸部的交感神經(jīng)、迷走神經(jīng)

2、和主動脈減壓神經(jīng)是獨立行走的，如要觀察減壓神經(jīng)對心臟等作用時，須選用家兔； 家兔對體溫變化十分靈敏，適于發(fā)熱、解熱和檢查致熱原等實驗研究；,三、根據(jù)實驗動物不同品種、品系的特點選擇,1、嗎啡對兔、犬、猴起中樞抑制，而小鼠和貓是中樞興奮。 2、津白1號為低癌系而津白2號為高癌系。,四、根據(jù)課題研究的目的、內(nèi)容、水平，選用相匹配的標準化動物,近交系動物遺傳的均質(zhì)性及實驗反應的穩(wěn)定性較封閉群動物好，但生存抵抗力差； 封閉群動物能較好地代表自然群體； F1雜交群動物在一定程度上兼有近交系及封閉群的特點 。,教學示范選用普通級動物，清潔級動物是國內(nèi)科研工作要求的標準動物，適合于大多數(shù)科研課題，而SPF動

3、物則是國際標準的實驗動物，對于一些具有國際交流意義的重大課題，最好選用SPF動物，但無菌及悉生動物為非常規(guī)動物，僅在特殊課題需要時才選用。,六、選用與實驗要求相適應的實驗動物規(guī)格,年齡：應選擇體成熟的青壯年動物為宜。 體重：實驗動物體重與年齡間有一定的相關(guān)性，選擇發(fā)育正常、體重符合要求的實驗動物。 性別：同一品種（系）動物不同性別對許多外界刺激的反應不一致。 生理狀況：不同生理狀態(tài)對外界的刺激的反應不一致。,七、經(jīng)濟性原則八、動物實驗結(jié)果的外推九、實驗動物的選擇和應用應注意有關(guān)國際規(guī)范,動物實驗基本技術(shù)和方法,第一節(jié)實驗動物的抓取與固定 第二節(jié)實驗動物性別鑒定和標志 第三節(jié)實驗動物血液采集 第

4、四節(jié)實驗動物麻醉方法 第五節(jié)實驗動物給藥方法 第六節(jié) 安樂死,第一節(jié)實驗動物的抓取與固定,一、小鼠的抓取與固定,二、大鼠的抓取與固定,三、豚鼠的抓取與固定,四、兔的抓取與固定,五、犬的抓取與固定,六、獼猴的抓取與固定,第二節(jié) 性別鑒定和標記,一、性別鑒定 1、嚙齒目,二、動物的標記,1、染色法 3% -5%苦味酸溶液，可染 成黃色。 0.5% 中性紅或品紅溶液, 可染成紅色。,2、耳號鉗標記法 3、掛牌法,4、斷趾編號5、籠子編號,第三節(jié) 常規(guī)采血方法,一、小鼠采血 1剪尾采血 2摘除眼球采血 3眼眶采血 4、心臟采血,二、大 鼠 采 血,1、眼眶采血 2、股靜脈或股動脈采血 3、腹主動脈采血

5、,三、家 兔 采 血,1、耳靜脈采血 2、心臟采血,四、犬 采 血,1、前肢皮下頭靜脈或后肢小隱靜脈采血 2、頸動脈采血,第四節(jié)實驗動物麻醉方法,1、呼入法：多選用乙醚作麻醉藥。本法最適合于大、小鼠的短期操作試驗的麻醉。 2、腹腔或靜脈給藥麻醉法：硫噴妥鈉、戊巴比妥鈉、氯胺酮、水合氯醛,第五節(jié)實驗動物給藥方法,1、小鼠灌胃給藥 將喂管順咽后壁輕輕往下推，喂管會順著食管滑入小鼠的胃，插入深度約3cm。,2注射給藥 （1）皮下注射給藥 作皮下注射常選項背或大腿內(nèi)側(cè)的皮膚。將皮膚提起，注射針頭取一鈍角角度刺入皮下，把針頭輕輕向左右擺動，易擺動則表示已刺入皮下，再輕輕抽吸。注射量約為0.1-0.3ml

6、/10g體重。,（2）皮內(nèi)注射給藥 接種、過敏實驗等一般作皮內(nèi)注射。先將注射部位的被毛剪掉，局部常規(guī)消毒，左手拇指和食指按住皮膚使之繃緊，用4.5針頭穿刺，針頭進入皮膚淺層，再向上挑起并梢刺入，將藥液注入皮內(nèi)。注射后皮膚出現(xiàn)一白色小皮丘，而皮膚上的毛孔極為明顯。注射量為0.1ml/次。,（3）肌肉注射給藥 小鼠體積小，肌肉少，很少采用肌肉注射。當給小鼠注射不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時，采用肌肉注射。用藥量不超過0.1ml/10g體重。,(4)靜脈注射給藥 用75%酒精棉球反復擦拭尾部,以達到消毒和使尾部血管擴張的目的. 以左手拇指和食指捏住鼠尾兩側(cè),使靜脈更為充盈, 右手持4號針頭注

7、射器,使針頭與靜脈平行(小于30角),從尾巴的下1/4處進針, 注射量為0.05-0.1ml/10g體重。,（5）腹腔注射 使鼠腹部朝上，鼠頭略低于尾部，在下腹部靠近腹白線的兩側(cè)進行穿刺，保持針尖不動，回抽針栓，如無回血、腸液和尿液后即可注射藥液。注射量為0.1-0.2ml/10g體重。,家 兔 給 藥,1、灌胃給藥 使用開口器和導尿管灌胃。,2、靜脈給藥 先拔去注射部位的被毛，用手指彈動或輕揉兔耳，使靜脈充盈，右手持注射器連6號針頭盡量從靜脈的遠端刺入，將藥液注入，然后拔出針頭，用手壓迫針眼片刻。,3、涂布法給藥,犬 給 藥,灌胃給藥,靜脈注射 靜脈注射多選前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈或后肢小隱靜脈注

8、射。,人與動物及各種動物間藥物劑量的換算方法,Meeh-Rubner氏公式： A（體表面積，m2）=KW( 體重，g) 231000 K為常數(shù)，隨動物不同而不同： 小鼠和大鼠 9.1 豚鼠 9.8 家兔 10.1 狗 11.2 猴 11.8 人 10.6,某利尿藥大鼠灌胃給藥時的劑量為250mg/kg,試粗略估計狗灌胃給藥可以試用的劑量。 大鼠體表面積A=9.1 200 231000=0.0311 m2 2500.20.0311=1608mg/m2 狗體表面積A=11.2 10000 231000=0.5198 m2 1608 0.519810=84mg/kg,250 6（大鼠轉(zhuǎn)換因子）19（

9、犬轉(zhuǎn)換因子）=79mg/kg 250 0.16（犬體表面積比值）0.47（大鼠體表面積比值）=85mg/kg,安樂死藥物與方法,吸入性藥劑 非吸入性(化學性）藥劑 物理性方法 首選使用過量的化學性麻醉劑?？蒲兴锜o法使用麻醉藥時，使用物理性安樂死方法。,吸入性藥劑,常用藥物：乙醚、氮氣、一氧化碳、二氧化碳等； 注意對人體有害，須在通風良好場所進行； 二氧化碳常用于嚙齒類實驗動物，兔子以上中大型動物較不建議使用。吸入40%二氧化碳很快達到麻醉效果，長時間吸入則動物死亡。,非吸入性(化學性）藥劑,靜脈注射是最佳選擇。腹腔注射需較高劑量且可能使動物死亡時間延長及死前掙扎。 巴比妥鹽及衍生物是首選藥物

10、。 深度麻醉中的動物可以快速靜脈注射KCl(2mmol/kg)來完成安樂死。,物理性方法,包括頸椎脫臼、放血、電擊等； 頸椎脫臼法常用于體重低于200克的嚙齒類動物、禽類及體重低于一公斤的仔兔； 實驗需要無法使用化學性藥物或二氧化碳時，可利用斷頭臺（嚙齒類實驗動物及仔兔）； 如需放血時，動物需麻醉后進行。,Definition: Transgenic Animal,Animal in which a segment of DNA has been physically inserted into the genome. The genome of all cells of the organi

11、sm contains the DNA segment. The DNA segment is present in the germ line so it can be transmitted to progeny as a Mendelian trait.,1. Test gene function 2. Provide models of specific diseases (progression of disease, alterations in other pathways related to disease, test therapies) Determine functio

12、n of genes in embryogenesis and in adult life Drug validation,Purposes/Applications,Two General Classes: 1. Transgenic (overexpressing) 2. Knockout or targeted gene disruption Techniques: 1. Pronuclear transfers: Addition of new genetic material Microinjection of DNA into embryo 2. Homologous recomb

13、ination between exogenous and genomic DNA (the specific replacement of a subset of genetic material with other genetic material) 3. Inducible/Conditional Knockout,Transgenesis in MiceRetroviral Vector,Transgenesis in MiceMicroinjection,Transgenesis in MiceStem Cell Method,10%-90% egg survival after

14、microinjection 20-60% of eggs surviving microinjection will develop to term 5-20% of animals born will carry the transgene,A Few Facts about Transgenic Mouse Production,Advantages: 1. Can use heterologous promoters to drive tissue or cell-specific gene expression 2. Can produce animals that express

15、the transgene at several different levels 3. Can cross species boundaries; no species specificity of the transgenes Concerns: 1. Transgene incorporates randomly into the genome 2. Multiple copies of the transgene incorporate 3. Possible to have more than one site of insertion 4. Transgene is subject

16、 to the influences of regulatory sequences flanking the site of insertion,Considerations in making Tg mice,Homologous recombination between exogenous and genomic DNA This is performed in pluripotent embryonic stem cells (ES cells),Knockout or Targeted Gene Disruption,Isolation of ES Cells,Mate Chime

17、ra Mice to Generate Gene Knockout Mice,Advantages: 1. Rather than random insertion of a transgene, defined, specific modifications are made in the endogenous gene and stably expressed in the germline of a mouse. Genetic modifications are made directly to the endogenous gene. 3. Eliminate problems wi

18、th abnormal regulation by flanking regulatory elements Concerns: 1. Phenotypic variation on different genetic backgrounds 2. Gene redundancy or compensatory mechanisms,Considerations in Making Knockout Mice,Cre/lox system Cre recombinase = gene splicing enzyme derived from bacteriophage P1 Cre binds to specific DNA sequence called loxP In bacteriophage, loxP is used as a landmark for Cre to assure that only one