1、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)教學(xué)目標(biāo)： 知識(shí)目標(biāo) 利用選擇培養(yǎng)基分離細(xì)菌，運(yùn)用相關(guān)技術(shù)解決生產(chǎn)生活中有關(guān)微生物的計(jì)數(shù)。 能力目標(biāo) 分析研究思路的形成過程，找出共性和差異性。 情感目標(biāo) 形成無菌不在的概念，養(yǎng)成講究衛(wèi)生的習(xí)慣。 教學(xué)重點(diǎn) 對(duì)土樣的選取和選擇培養(yǎng)基的配制 教學(xué)難點(diǎn) 對(duì)分解尿素的細(xì)菌的計(jì)數(shù)班級(jí)1344 教學(xué)方法 啟發(fā)式教學(xué)教 教具 ppt 教學(xué)過程: （一）引入新課：上節(jié)課我們學(xué)習(xí)了培養(yǎng)基的配置以及接種技術(shù)。下面我們來學(xué)習(xí)如何進(jìn)行細(xì)菌的分離，獲得所需要的目的微生物。（二）進(jìn)行新課1基礎(chǔ)知識(shí) 11 尿素是一種重要的氮肥，農(nóng)作物不能（能，不能）直接吸收利用，而是首先通過土壤中的細(xì)菌將

2、尿素分解為氨和CO2 ，這是因?yàn)榧?xì)菌能合成 脲酶 。 12 科學(xué)家能從熱泉中把耐熱細(xì)菌篩選出來是因?yàn)?熱泉的高溫條件淘汰了絕大多數(shù)微生物，這樣也適用于實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選，原理是人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度、PH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長 。生物適應(yīng)一定環(huán)境，環(huán)境對(duì)生物具有選擇作用。所以通過配制選擇培養(yǎng)基、控制培養(yǎng)條件等選擇目的微生物。思考1在該培養(yǎng)基配方中，為微生物的生長提供碳源的是 葡萄糖 ，提供氮源的的是 尿素 ，瓊脂的作用是 凝固劑 。思考2該培養(yǎng)基對(duì)微生物 具有 （具有，不具有）選擇作用。如果具有，其選擇機(jī)制是只有能夠以尿素作為氮源的微生物才能在該培養(yǎng)基上

3、生長 。 13在統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌數(shù)目的方法是 稀釋涂布平板法 。除此之外， 顯微鏡直接計(jì)數(shù)也是測定微生物數(shù)量的常用方法?！狙a(bǔ)充】顯微鏡直接計(jì)數(shù)是測定微生物的方法。 公式：觀察到的紅細(xì)胞平均數(shù)觀察到的細(xì)菌平均數(shù)紅細(xì)胞含量細(xì)菌含量 14 采用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于 樣品稀釋液中一個(gè)活菌 。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù) ，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在 30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。思考3從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)的計(jì)算方法是 （平均菌落數(shù)涂布的稀釋液體積）稀釋倍數(shù) 。思考4利用稀釋涂布平板法成功統(tǒng)

4、計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是 恰當(dāng)?shù)南♂尪?。思考5第 二位同學(xué)的結(jié)果接近真實(shí)值。你認(rèn)為這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)需要改進(jìn)的操作是第一位同學(xué)需設(shè)置重復(fù)實(shí)驗(yàn)組；第二位同學(xué)統(tǒng)計(jì)的三個(gè)菌落數(shù)相差太大，說明操作有誤，需重新實(shí)驗(yàn)。 15統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)比活菌的實(shí)際數(shù)目 低 。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞在一起時(shí)，平板上觀察到的只是 一個(gè)菌落。因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用 菌落數(shù) 來表示。16設(shè)置對(duì)照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。17對(duì)照實(shí)驗(yàn)是指除了 被測試 的條件外，其他條件都 相同 的實(shí)驗(yàn)。滿足該條件的稱為 對(duì)照組，未滿足該條件的稱為實(shí)驗(yàn)組。思考6請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)的對(duì)照實(shí)驗(yàn)組： 方案1：其他同學(xué)用

5、A同學(xué)的土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 方案2：A同學(xué)以不接種的培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。菌落計(jì)數(shù) 配制土壤溶液 系列稀釋 涂布平板與培養(yǎng) 2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的內(nèi)容包括實(shí)驗(yàn)方案、材料用具、實(shí)施步驟和時(shí)間安排等。 22 土壤微生物主要分布在距地表38cm的近中性土壤中，約7080為細(xì)菌。 23分離不同的微生物采用不同的稀釋度，其原因是不同微生物在土壤中含量不同，其目的是保證獲得菌落數(shù)在30300之間、適于計(jì)數(shù)的平板。細(xì)菌稀釋度為104、105、106，放線菌稀釋度為103、104、105，真菌稀釋度為102、103、104。 2.4培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。細(xì)菌一般在3037培養(yǎng)12d，放線菌一般在

6、2528培養(yǎng)57d，霉菌一般在2528的溫度下培養(yǎng)34d。 2.5 在菌落計(jì)數(shù)時(shí)，每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。菌種中有些菌體增殖快，有些菌體增值慢，所以培養(yǎng)時(shí)間要充足，使得每個(gè)菌體都能形成肉眼可觀察到的菌落。 2.6菌落的特征包括 形狀、大小、隆起程度、顏色 等方面。思考8土壤微生物種類最多、數(shù)量最大的原因是什么？土壤中營養(yǎng)物質(zhì)含量豐富，環(huán)境條件適宜等。 29 實(shí)驗(yàn)過程：1）取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。2）應(yīng)在火焰旁稱取土壤 10g。將稱好的土樣倒入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，塞好棉塞。3）在稀

7、釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁進(jìn)行。4）實(shí)驗(yàn)時(shí)要對(duì)培養(yǎng)皿作好標(biāo)記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時(shí)間、稀釋度、培養(yǎng)物等。5）為了提高效率，在操作時(shí)更加有條不紊，應(yīng)當(dāng)事先規(guī)劃時(shí)間。 思考9在研究未知微生物時(shí)務(wù)必規(guī)范操作，以防被致病微生物感染，實(shí)驗(yàn)后一定要洗手。 3結(jié)果分析與評(píng)價(jià)31對(duì)分離的菌種作進(jìn)一步的鑒定，還需要借助 生物化學(xué)的方法。32在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的 脲酶 將尿素分解成了 氨 。氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性 增強(qiáng)，PH 升高 。因此，我們可以通過檢測培養(yǎng)基 pH 變化來判斷該化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生。33在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入 酚紅 指示劑。培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果PH升高，指示劑將變 紅 ，