1、消毒劑使用及效力驗證,2007.4,2,能消除以細胞繁殖形態(tài)出現(xiàn)的微生 物污染的化學物質(zhì)。,消毒劑的習慣定義：,3,消毒劑的分類定義（USP29 ）,抗菌劑（Antiseptic) 化學殺菌劑(Chemical Disinfectant) 清潔劑(Cleaning Agent) 消毒劑(Disinfectant) 衛(wèi)生洗滌劑(Sanitizing Agent) 殺孢子劑(Sporicidal Agent) 滅菌劑(Sterilant Agent),4,5,消毒劑配制,按供應商的使用說明進行配制和儲存 純化水、注射用水 潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境使用，應進行除菌過濾。 溫度提高，殺菌效力增大。效力驗證

2、時，在常溫下配制。,6,影響消毒劑效力的因素：,pH 溫度，濃度 材質(zhì)和附著物質(zhì) 溶劑（水） 接觸時間 微生物的類型和數(shù)量,7,消毒劑作用機理,鈍化胞內(nèi)酶活性，影響細胞的正常代謝 酚類 阻斷物質(zhì)運輸通道 季銨鹽類（電荷），附著于細胞膜特定部分（電荷） 破壞微生物細胞（膜）的結(jié)構(gòu)和功能 醛類、含氯、過氧化物,8,微生物對消毒劑的耐受性,形成生物膜 粘性多糖物質(zhì) 消毒劑的相互作用 中和反應 固有耐受性和概率殘存 致死劑量,9,微生物抗力,由小到大排列一般為： 細菌繁殖體 真菌繁殖體 真菌孢子 病毒 分枝桿菌 細菌芽孢,10,消毒劑的選擇,需控制的微生物的類型和數(shù)量 市售消毒劑的抗菌譜 消毒劑的品牌

3、 濃度、使用方法和接觸時間 待消毒物體的材質(zhì)和對消毒劑的兼容性 可能影響殺菌效力的表面有機物數(shù)量 反復使用，對設備表面的腐蝕程度 對操作者的安全性 和清潔劑/其它消毒劑的相容性 交替使用方案和對產(chǎn)品的影響,11,消毒劑驗證的目的： 通過特定的微生物與某消毒劑在規(guī)定的使用濃度下，接觸規(guī)定的時間后，對微生物進行培養(yǎng)、計數(shù)，考察消毒劑的消毒/殺菌效果。,12,消毒劑驗證的內(nèi)容：,使用中稀釋檢測（use-dilution tests) 對不同濃度下，對消毒劑的效力進行篩選 針對不同標準菌株和環(huán)境微生物，確認接觸時間 表面挑戰(zhàn)試驗（surface challenge tests) 使用標準菌株和典型環(huán)境

4、分離微生物 選擇合適的濃度和接觸時間，進行試驗 獲得挑戰(zhàn)微生物數(shù)量下降的對數(shù)值 對使用新消毒劑前后環(huán)境微生物的檢出頻率和數(shù)量進行統(tǒng)計學評估（無菌生產(chǎn)區(qū)域、GMP要求）,13,消毒劑驗證步驟： 第一步：在實驗室對代表細菌在規(guī)定的使用濃 度和規(guī)定的作用時間進行確認。 第二步：應用不同材質(zhì)的載體，進行模擬試驗 第三步：完成驗證報告，形成SOP。,14,驗證用菌種：金黃色葡萄球菌、銅綠色假單胞菌、沙門氏菌、大腸埃希菌、枯草桿菌、白色念珠菌、黑曲霉、環(huán)境分離菌。 菌種選擇的原則:代表性,普遍性,標準菌種。(環(huán)境中常見的污染菌)。 菌種的要求：不得超過5代。采用適宜的方法保存。,驗證菌種：,15,挑戰(zhàn)微生

5、物(USP 29),16,準備性試驗（一）,選擇適合的中和劑 Letheen肉湯、D/E中和肉湯（酚類，季銨鹽類）、TAT肉湯基礎吐溫20卵磷脂胰蛋白胨,17,D/E中和肉湯（每升）,配方 胰蛋白胨 5 g 酵母膏 2.5 g 葡萄糖 10 g 硫乙醇酸鈉 1 g 硫代硫酸鈉 6 g 亞硫酸氫鈉2.5 g 吐溫 80 5 g 卵磷脂 7 g 溴甲酚紫 0.02 g 最終 pH 7.60.2 于 25,18,準備性試驗（二）,中和劑毒性 將10100 CFU的微生物加入到中和劑中 薄膜過濾，沖洗，培養(yǎng)，計數(shù) 與菌液對照組比較，回收率應70,19,準備性試驗（三）,中和效力 將消毒劑和中和劑混合（

6、記錄時間） 加入10100 CFU微生物 薄膜過濾，沖洗，培養(yǎng)，計數(shù) 與菌液對照組比較，回收率應70,20,驗證方法 - 薄膜過濾法,菌懸液和消毒劑直接混合，在不同的時間間隔條件下過濾，培養(yǎng)后評價。,21,驗證準備：,- 測試菌液準備 增菌過夜，并調(diào)整至106108 CFU/ml - 消毒劑稀釋至規(guī)定濃度。 分裝10ml于若干無菌試管中；試管上標注消毒時間：如“1分鐘組” ，“5分鐘組” ，“10分鐘組”或其他要求的時間段。 - 配制中和劑（分裝100ml，300ml）,22,驗證步驟（1）：,- 接種 接種各驗證菌種至盛有待驗證消毒劑的試管（使接后濃度104 CFU/ml)，混合均勻，并立即

7、開始計時。 - 中和、過濾將消毒劑傾入100ml中和劑中，混合，稀釋（如需要），過濾，然后用100ml中和劑清洗濾膜，濾過3次。 - 陽性對照 用無菌水代替消毒劑，步驟同上。,23,驗證步驟（2）：,培養(yǎng)和計數(shù) 取下濾膜放入規(guī)定的培養(yǎng)基平板，在規(guī)定的溫度、時間培養(yǎng)后，記數(shù)。 和陽性對照相比，微生物數(shù)量下降應至少3個對數(shù)值（細菌芽孢至少2個對數(shù)值）。,24,驗證步驟（3）：表面挑戰(zhàn)試驗,根據(jù)設施的實際情況，選擇不同材質(zhì)的載體。 玻璃，不銹鋼，塑料薄膜，乳膠，墻面涂料，地面材質(zhì) 接種，并確認實際數(shù)量 接觸殺菌、中和、過濾,25,正確使用消毒劑（1）,稀釋消毒劑時應用純化水、注射用水 設備使用后作徹底清潔 將環(huán)境常見菌列入驗證范疇 輪換使用不同的消毒劑，消毒劑間要用無菌水充分清洗,26,正確使用消毒劑（2）,使用消毒劑的人員要接受相關(guān)的培訓 嚴格遵守“人流”、“物流”的途徑