1、名校名 推薦第 2 節(jié)基因工程的基本操作程序【本節(jié)重難點(diǎn)】重點(diǎn)：基因工程基本操作程序的四個(gè)步驟難點(diǎn)：（ 1）從基因文庫中獲取目的基因（ 2）利用 pcr技術(shù)擴(kuò)增目的基因【知識(shí)精講】教材梳理基因工程的基本操作程序主要包括四個(gè)步驟： 目的基因的獲取、 基因表達(dá)載體的構(gòu)建、 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測與鑒定。知識(shí)點(diǎn)一目的基因的獲取1. 獲取目的基因是實(shí)施基因工程的第一步。目的基因的獲取方法主要有兩種：從自然界中已有的物種中分離出來用人工的方法合成。2. 基因文庫將含有某種生物不同基因的許多dna片段，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存， 各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同的基因，成為基因文庫。基因文庫

2、根據(jù)其大小可分為基因組文庫和部分基因文庫。受體細(xì)胞是指接受目的基因的細(xì)胞，即表達(dá)載體導(dǎo)入的細(xì)胞?；蚬こ坛Ｓ玫氖荏w有細(xì)菌、真菌、動(dòng)植物細(xì)胞3.pcr 技術(shù)擴(kuò)增目的基因原理： dna復(fù)制做法：已知一段目的基因的核苷酸序列據(jù)已知序列合成引物dna擴(kuò)增結(jié)果：擴(kuò)增出許多結(jié)構(gòu)相同的目的基因。注意： 學(xué)習(xí)該部分知識(shí)時(shí)， 常出現(xiàn)將目的基因的來源和目的基因的提取相混淆，致使不理解課本所講，原因是課本都用了“獲取目的基因”字樣。目的基因的來源是：從自然界中已有的物種中分離出來。用人工的方法合成。目的基因的提取是指在基因工程操作時(shí)怎樣獲得目的基因。常用方法有二：從基因文庫中直接獲取如果需要大量的目的基因，需要對(duì)目

3、的基因進(jìn)行 pcr技術(shù)擴(kuò)增。 不管是從基因文庫中獲取的目的基因，還是需要進(jìn)行擴(kuò)增的目的基因，其來源既可能是從自然界中已有的物種中分離出來，也可能是人工合成的。知識(shí)點(diǎn)二基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心。其中心內(nèi)容是使目的基因與運(yùn)載體結(jié)合，形成重組運(yùn)載體，最后通過重組運(yùn)載體將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞。注意：在學(xué)習(xí)時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：1. 構(gòu)建表達(dá)載體的目的： 使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在， 并可遺傳給下一代， 同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。2. 基因表達(dá)載體的組成：目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因3. 所選運(yùn)載體應(yīng)具備的條件：（ 1） 載體 dna 必需有一個(gè)或多個(gè)限制酶的

4、切割位點(diǎn)，以便目的基因可以插入到載體上去。這些供目的基因插入的限制酶的切點(diǎn)所處的位置，還必須是在質(zhì)粒本身需要的基因片段之外，這樣才不至于因目的基因的插入而失活。（2）載體 dna 必需具備自我復(fù)制的能力，或整合到受體染色體dna 上隨染色體dna 的復(fù)制而同步復(fù)制。（ 3）載體 dna 必需帶有標(biāo)記基因，以便重組后進(jìn)行重組子的篩選。（ 4）載體 dna 必需是安全的，不會(huì)對(duì)受體細(xì)胞有害，或不能進(jìn)入到除受體細(xì)胞外的其他1名校名 推薦生物細(xì)胞中去。（5）載體 dna 分子大小應(yīng)適合，以便提取和在體外進(jìn)行操作，太大就不便操作。實(shí)際上自然存在的質(zhì)粒dna 分子并不完全具備上述條件，都要進(jìn)行人工改造后才

5、能用于基因工程操作。知識(shí)點(diǎn)三將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（1）轉(zhuǎn)化目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程，稱為轉(zhuǎn)化。說明：此處的“轉(zhuǎn)化”與肺炎雙球菌的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中的“轉(zhuǎn)化”的含義相同。（2）基因工程中常用的受體細(xì)胞有：大腸桿菌、枯草桿菌、土壤膿桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法：根據(jù)受體和運(yùn)載體的類型不同，所采用的導(dǎo)入方法也不同。 目前常用的方法有： 將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞膿桿菌轉(zhuǎn)化法，還有基因槍法和花粉管通道法。 將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞顯微注射技術(shù)將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞 ca處理細(xì)胞法說明：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法有很多種，同學(xué)們可以上網(wǎng)查詢更多的

6、方法和具體過程。知識(shí)點(diǎn)四目的基因的監(jiān)測與鑒定（1）檢測對(duì)象：檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體dna上是否插入了目的基因檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mrna 檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)（2）檢測方法：分子檢測法和都是dna分子雜交技術(shù)，抗原抗體雜交法形態(tài)檢測法可根據(jù)目標(biāo)性狀的有無來判斷目的基因是否表達(dá)說明： 基因操作過程中有多個(gè)步驟需要檢測，此處只講了目的基因的檢測，還有目的基因是否被整合到了運(yùn)載體上，運(yùn)載體是否進(jìn)入了受體細(xì)胞等都需要檢測，具體過程見拓展點(diǎn)2。知識(shí)點(diǎn)五教材深化：人工合成目的基因的過程：目的基因轉(zhuǎn)錄成的 mrna單鏈 dna雙鏈 dna（目的基因） 蛋 白 質(zhì) 中 氨 基 酸 的 序 列mrn

7、a中 的 堿 基 序 列dna 堿 基 序 列 目 的 基 因目的基因教材拓展拓展點(diǎn)一標(biāo)記基因和標(biāo)記基因的作用課本上提到運(yùn)載體要有標(biāo)記基因，其作用是供重組dna鑒定和篩選， 那么怎樣利用標(biāo)記基因進(jìn)行鑒定和篩選呢？請(qǐng)同學(xué)們閱讀下面一段文字：運(yùn)載體中所攜帶的一些抗性基因（如氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因）及發(fā)光基因等， 能控制一些特殊物質(zhì)的合成，利用這些特殊物質(zhì)可以篩選運(yùn)載體或重組運(yùn)載體，這些基因就叫做標(biāo)志基因。在用限制酶切割目的基因和運(yùn)載體、表達(dá)載體構(gòu)建及將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，這一系列過程都是在人為控制條件下，在有關(guān)酶的作用下自行完成的，而不是人為條件下一個(gè)一個(gè)處理的，是很多對(duì)象同時(shí)進(jìn)行的

8、，這樣，就會(huì)出現(xiàn)有的運(yùn)載體被限制酶切割開，有的運(yùn)載體2名校名 推薦沒有被限制酶切割開， 沒有被限制酶切割開的運(yùn)載體，就不可能連接上目的基因， 只有被限制酶切開的運(yùn)載體才有可能拼接上目的基因。我們就必須選擇出連接上目的基因的重組運(yùn)載體（即表達(dá)載體），然后進(jìn)行擴(kuò)增，得到大量的表達(dá)載體。然后把大量的表達(dá)載體和大量的受體細(xì)胞放在一起， 在一定的人為條件下，讓其自行導(dǎo)入受體細(xì)胞，這樣，在導(dǎo)入受體細(xì)胞時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)有的受體細(xì)胞被導(dǎo)入了表達(dá)載體，有的細(xì)胞沒有導(dǎo)入表達(dá)載體， 我們?cè)龠x出含有表達(dá)載體的受體細(xì)胞， 進(jìn)行擴(kuò)增， 培養(yǎng)。在上述過程中要進(jìn)行兩步篩選，一是篩選含有運(yùn)載體的受體細(xì)胞， 其過程是在含有相應(yīng)抗菌素

9、的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，只有獲得運(yùn)載體的受體細(xì)胞才能繼續(xù)生長， 這樣便可篩選出含有運(yùn)載體的受體細(xì)胞。二是篩選含有目的基因的受體細(xì)胞，其過程是從每個(gè)菌落取一部分再接種到含另一種抗生素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，由于目的基因插入該標(biāo)記基因中， 致使該基因不能表達(dá)，因而受體細(xì)胞不能在含該抗生素的培養(yǎng)基上生存，據(jù)此可以從該菌落剩余部分的菌體中篩選出含目的基因的受體細(xì)胞。注意：在基因操作的基本步驟中要進(jìn)行多次篩選。拓展點(diǎn)二從基因文庫中找到所需要的基因從基因文庫中找到目的基因是一件比較復(fù)雜的事情，要根據(jù)目的基因已有的某些信息來進(jìn)行。下面介紹一種根據(jù)基因的部分核苷酸序列找到目的基因的方法。第一步， 通過 pcr方法將目的基因已

10、知的部分核苷酸序列擴(kuò)增出來，進(jìn)行放射性同位素標(biāo)記（也可以用別的標(biāo)記方法進(jìn)行，如生物素、熒光素等），即用標(biāo)記了放射性同位素的目的 dna片段作為探針，與擴(kuò)增出來的dna雜交。第二步，將基因文庫中的所有菌落轉(zhuǎn)移至硝酸纖維膜上（也可以用其他類型的膜），然后，通過處理溶解消化掉細(xì)菌中的蛋白質(zhì)，并使dna固定在膜上。第三步，按 southern雜交的方法進(jìn)行雜交。第四步， 在 x 光底片上出現(xiàn)黑斑的菌落，這表明這個(gè)菌落中含有所需要的目的基因（若選用別的標(biāo)記方法，有陽性信號(hào)的菌落則含有所需要的目的基因）。第五步，從該菌落中再提取目的基因。拓展點(diǎn)三pcr 的擴(kuò)增過程pcr擴(kuò)增是獲取目的基因的一種非常有用的方

11、法，也是進(jìn)行分子鑒定和檢測的一種很靈敏的方法。 pcr的擴(kuò)增反應(yīng)過程包括以下幾個(gè)主要過程。第一步：將反應(yīng)體系（包括雙鏈模板、引物、耐高溫的dna聚合酶、四種脫氧核糖核苷酸以及酶促反應(yīng)所需的離子等）加熱至 9095 ，使雙鏈 dna模板兩條鏈之間的氫鍵打開，變成單鏈 dna，作為互補(bǔ)鏈聚合反應(yīng)的模板。第二步：將反應(yīng)體系降溫至5560 ，使兩種引物分別與模板dna鏈 3端的互補(bǔ)序列互補(bǔ)配對(duì)，這個(gè)過程稱為復(fù)性。第三步：將反應(yīng)體系升溫至7075 ，在耐高溫的 dna聚合酶催化作用下，將與模板互補(bǔ)的單個(gè)核苷酸加到引物所提供的3-oh 上，使 dna鏈延伸，產(chǎn)生一條與模板鏈互補(bǔ)的dna鏈。上述三步反應(yīng)完成

12、后，一個(gè)dna分子就變成了兩個(gè) dna分子，隨著重復(fù)次數(shù)的增多，dna分子就以 2n 的形式增加。 pcr的反應(yīng)過程都是在pcr擴(kuò)增儀中完成的。【典題分類精析】考點(diǎn)一、目的基因的獲取例 11993 年，我國科學(xué)工作者培育成的抗棉鈴蟲的最新轉(zhuǎn)基因抗蟲棉，其抗蟲基因來源于a普通棉花的基因突變b棉鈴蟲變異形成的致死基因c在棉鈴蟲體內(nèi)寄生的線蟲基因d蘇云金芽孢桿菌體內(nèi)的抗蟲基因3名校名 推薦分析： 1993 年，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院的科學(xué)家成功地將原核生物蘇云金芽孢桿菌中的抗蟲基因轉(zhuǎn)入棉植株，培育成了抗棉鈴蟲的轉(zhuǎn)基因抗蟲棉。答案： d點(diǎn)評(píng)：目的基因主要來源是原核生物。例 2 2005 高考全國鐮刀型細(xì)胞貧血

13、癥的病因是血紅蛋白基因的堿基序列發(fā)生了改變。檢測這種堿基序列改變必須使用的酶是a. 解旋酶b.dna連接酶c.限制性內(nèi)切酶d.rna聚合酶分析： 本題考查的知識(shí)點(diǎn)是 dna分子雜交原理。選項(xiàng) b、 d 可以直接排除。 對(duì)于選 a 可能理解為的：既然是檢測突變的部位, 那么很自然想到用該基因的探針，進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)雜交而檢測之 ( 相關(guān)知識(shí)見教材鑒定人猿親緣關(guān)系和基因工程處都有所涉及) ，但是分子雜交的前提必須是單鏈 dna，于是很自然想到用解旋酶處理被檢測基因。但是，解開dna雙鏈結(jié)構(gòu)不一定要用解旋酶，在高溫或者用強(qiáng)堿溶液處理也可以得到單鏈dna，而且題干上也有 必須使用的酶 的敘述，所以可以

14、排除a 選項(xiàng)。對(duì)于 c選項(xiàng)的理解： 限制酶只是把原dna切成很多片段， 其中某個(gè)片段可能包含突變的目的基因， 然后再用化學(xué)方法處理成單鏈，最后再和探針雜交，根據(jù)放射性 ( 或熒光 ) 出現(xiàn)部位而檢測出突變部位，這種技術(shù)其實(shí)就是所謂的基因診斷。如不用限制酶把dna切割成若干片段，通過其他方法把dna處理成單鏈，然后與dna探針雜交， 但是，已經(jīng)變性成單鏈的 dna很有可能常溫下復(fù)性，可能回折重新形成許多雙鏈區(qū)，如果恰恰突變部位及其臨近區(qū)域和該單鏈其他區(qū)域結(jié)合成雙鏈，那么必然影響探針與相應(yīng)部位的結(jié)合，也就無法準(zhǔn)確檢測到突變部位。答案： c點(diǎn)評(píng)：本題易錯(cuò)選a，用探針檢測 dna， dna必須解旋，但

15、解旋不一定要用解旋酶，這一點(diǎn)可聯(lián)系肺炎雙球菌的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，高溫使dna解旋。考點(diǎn)二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建例 3 2006 高考江蘇基因工程又叫基因拼接技術(shù)。（ 1）在該技術(shù)中，用人工合成方法獲得目的基因的途徑之一是：以目的基因轉(zhuǎn)錄的_為模板， _ 成互補(bǔ)的單鏈dna，然后在酶的作用下合成_ 。（ 2）基因工程中常用的受體細(xì)胞有細(xì)菌、真菌、_ 。若將真核基因在原核細(xì)胞中表達(dá)，對(duì)該目的基因的基本要求是_。（ 3）假設(shè)以大腸桿菌質(zhì)粒作為運(yùn)載體，并以同一種限制性內(nèi)切酶切割運(yùn)載體與目的基因，將切割后的運(yùn)載體與目的基因片段混合，并加入dna連接酶。連接產(chǎn)物至少有 _ 種環(huán)狀 dna分子，它們分別是 _ 。分析

16、：本題考查的是基因工程的相關(guān)知識(shí)。熟練掌握基因工程的四個(gè)步驟是解答本題的關(guān)鍵?；蚬こ毯苋菀着c其他知識(shí)相聯(lián)系命制綜合題，如基因操作基本步驟中目的基因的獲取常與“中心法則”、 “堿基互補(bǔ)配對(duì)原則”相結(jié)合，還可與基因的結(jié)構(gòu)、發(fā)酵工程、基因的遺傳定律相結(jié)合進(jìn)行綜合考查，是學(xué)習(xí)和重點(diǎn)之一。完全按照人的意愿， 由重新組裝基因到新生物產(chǎn)生的生物科學(xué)技術(shù)，就稱為“基因工程”，或者說是“遺傳工程”。在基因工程中，人工合成目的基因的途徑有兩條，其中之一就是以信使rna這模板經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄合成目的基因；基因工程常用的受體有細(xì)菌、真菌、動(dòng)植物細(xì)胞；原核生物的基因中無內(nèi)含子，若將真核生物的基因轉(zhuǎn)入原核生物，需除去內(nèi)含子部

17、分； 在本題操作過程中， 若在含有同一種限制酶切割的運(yùn)載體和目的基因混合物中，加入 dna連接酶將會(huì)形成 3 種環(huán)狀 dna分子，運(yùn)載體自連而成的環(huán)狀 dna分子，目的基因自連而成的環(huán)狀dna分子，運(yùn)載體與目的基因片段相連的環(huán)狀 dna分子。4名校名 推薦答案： (1) 信使 rna(mrna) 逆轉(zhuǎn)錄 ( 反轉(zhuǎn)錄 )雙鏈 dna(目的基因 ) (2)動(dòng)植物細(xì)胞除去內(nèi)含子(3)3運(yùn)載體自連的、目的基因自連的、運(yùn)載體與目的基因片段相連的環(huán)狀dna分子點(diǎn)評(píng)：解答該類題目的方法是熟練掌握課本知識(shí)，并對(duì)課本知識(shí)進(jìn)行深化、拔高。考點(diǎn)三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞例 4基因工程中科學(xué)家常采用細(xì)菌、酵母菌等微生

18、物作為受體細(xì)胞，原因是()a結(jié)構(gòu)簡單，操作方便b繁殖速度快c遺傳物質(zhì)含量少、簡單d性狀穩(wěn)定 , 變異少分析： 本題考查基因工程的受體細(xì)胞。目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，隨著受體細(xì)胞的繁殖而復(fù)制，由于細(xì)菌等微生物繁殖速度非?？?。在很短的時(shí)間內(nèi)就能獲得大量的目的基因。答案： b點(diǎn)評(píng)： 基因工程常用的受體有細(xì)菌、 真菌、動(dòng)植物細(xì)胞。 解答這類題目的方法應(yīng)結(jié)合受體細(xì)胞的特點(diǎn)回答?？键c(diǎn)四、目的基因的監(jiān)測與鑒定例 5. 目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，是否可以穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性，只有通過鑒定和檢測才能知道。下列屬于目的基因檢測和鑒定的是檢測受體細(xì)胞是否有目的基因檢測受體細(xì)胞是否有致病基因檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄信使

19、rna 檢測目的基因是否翻譯蛋白質(zhì)a. b.c.d.分析：本題考查目的基因的檢測的相關(guān)知識(shí)。目的基因的檢測包括：檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體 dna上是否插入了目的基因， 方法是用 dna探針，使 dna探針與基因組 dna雜交。檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了信使 rna，方法是用基因探針與信使 rna雜交。最后檢測目的基因是否翻譯了蛋白質(zhì)，方法是進(jìn)行抗原抗體雜交。答案： c點(diǎn)評(píng)：基因工程中需要進(jìn)行監(jiān)測的步驟較多，請(qǐng)同學(xué)們利用比較對(duì)比的方法進(jìn)行記憶和運(yùn)用。形態(tài)檢測法可根據(jù)目標(biāo)性狀的有無來判斷目的基因是否表達(dá)考點(diǎn)五、人工合成目的基因的過程例 6科學(xué)家已經(jīng)能夠通過基因工程的方法，能使番茄果肉細(xì)胞中含有人奶蛋白

20、。以下有關(guān)該基因工程的敘述錯(cuò)誤的是（）a 采用反轉(zhuǎn)錄的方法得到的目的基因有啟動(dòng)子、終止子b 用同種限制酶處理質(zhì)粒和含目的基因的dna，可產(chǎn)生相同的黏性末端而形成重組dna分子c番茄的葉肉細(xì)胞可作為受體細(xì)胞d啟動(dòng)子對(duì)于目的基因在番茄的葉肉細(xì)胞中的表達(dá)是不可缺少的分析： 本題主要考查了基因工程的有關(guān)知識(shí)。 反轉(zhuǎn)錄法獲取目的基因時(shí)， 由于是根據(jù)氨基酸的序列推測基因中的堿基序列， 因此，合成的基因中并不含有啟動(dòng)子、 終止子。在基因工程中，必須用相同的限制酶處理質(zhì)粒和目的基因的 dna，這樣可產(chǎn)生相同的黏性末端以便能而形成重組 dna分子?；蚬こ讨校Ｓ玫氖荏w細(xì)胞有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母

21、菌和動(dòng)植物細(xì)胞等，因此番茄的葉肉細(xì)胞可作為受體細(xì)胞。在基因表達(dá)的過程中，啟動(dòng)子5名校名 推薦對(duì)于目的基因在番茄的葉肉細(xì)胞中的表達(dá)也能起一定的作用，是不可缺少的， 它位于基因的首端，是 rna聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出信使rna，最終獲得所需的蛋白質(zhì)，因此，只有a 答案錯(cuò)誤。答案： a點(diǎn)評(píng)：啟動(dòng)子、終止子不屬于結(jié)構(gòu)基因，不能翻譯出蛋白質(zhì)，因此，采用反轉(zhuǎn)錄的方法不能得到。但啟動(dòng)子、終止子是基因表達(dá)不可缺少的?？键c(diǎn)六、標(biāo)記基因和標(biāo)記基因的作用例 7. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)原理和材料用具，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)確定細(xì)菌質(zhì)粒的抗菌素基因所控制的抗菌素的類別。實(shí)驗(yàn)原理： 作為運(yùn)載體的質(zhì)粒， 需要有標(biāo)記基因，

22、這一標(biāo)記基因是抗菌素抗性基因。有抗性基因的質(zhì)粒可用作運(yùn)載體。材料用具：青霉素、四環(huán)素各10 萬單位溶液，菌種試管，滅菌的含細(xì)菌培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿，酒精燈，接種環(huán)，一次性注射器，無菌水，恒溫箱方法步驟：第一步：取 3 個(gè)含培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿，分別編號(hào)為1、2、3 號(hào)，用三支注射器分別向3 個(gè)培養(yǎng)基中注入 1ml 無菌水，、青霉素液、四環(huán)素液，并使之均勻分布之整個(gè)培養(yǎng)基表面。第二步：。第三步：。結(jié)果預(yù)期：。分析： 運(yùn)載體中所攜帶的一些抗性基因（如氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因）及發(fā)光基因等， 能控制一些特殊物質(zhì)的合成，利用這些特殊物質(zhì)可以篩選運(yùn)載體或重組運(yùn)載體，這些基因就叫做標(biāo)志基因。目的基因中的標(biāo)志

23、基因最少要有2 個(gè)， 1 個(gè)是用來檢測運(yùn)載體是否進(jìn)入了受體細(xì)胞， 另一個(gè)是用來檢測目的基因是否被拼接到運(yùn)載體上；第一個(gè)標(biāo)志基因要保證其完整性， 能夠進(jìn)行表達(dá)， 若受體細(xì)胞表現(xiàn)出該基因所控制的性狀，說明運(yùn)載體已進(jìn)入受體細(xì)胞； 第二個(gè)標(biāo)志基因是插入目的基因的部位，由于目的基因的插入破壞了起結(jié)構(gòu)，不能表達(dá)其所控制的性狀， 若受體細(xì)胞沒有表達(dá)出第二個(gè)基因所控制的性狀，說明目的基因已進(jìn)入受體細(xì)胞。答案： 第二步： 將接種環(huán)在酒精燈上灼燒，在酒精燈旁用接種環(huán)挑取等量菌種，分別培養(yǎng)在三個(gè)不同的培養(yǎng)基上，置于恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)一段時(shí)間。第三步：將接種后的培養(yǎng)基放在37的恒溫箱中培養(yǎng)24 小時(shí)。預(yù)期結(jié)果： 1 號(hào)培

24、養(yǎng)基內(nèi)細(xì)菌正常生長，2、3 號(hào)內(nèi)的細(xì)菌死亡， 說明細(xì)菌無抗青霉素基因，無抗四環(huán)素基因； 1、2 號(hào)培養(yǎng)基內(nèi)細(xì)菌正常生長，3 號(hào)培養(yǎng)基內(nèi)細(xì)菌死亡， 說明細(xì)菌有抗青霉素基因，無抗四環(huán)素基因；1、 3 號(hào)培養(yǎng)基內(nèi)細(xì)菌正常生長，2 號(hào)培養(yǎng)基內(nèi)細(xì)菌死亡，說明細(xì)菌質(zhì)粒無抗青霉素基因，有抗四環(huán)素基因；1、 2、3 號(hào)培養(yǎng)基內(nèi)細(xì)菌都正常生長，說明細(xì)菌質(zhì)粒既有抗青霉素基因，又有抗四環(huán)素基因。點(diǎn)評(píng)： 本題較難理解，原因是對(duì)基因工程中的檢測了解不深、不全造成的。 兩個(gè)基因的作用不同是導(dǎo)致做錯(cuò)該題的原因?？键c(diǎn)七、從基因文庫中找到所需要的基因例 8有關(guān)基因工程的敘述正確的是 ( ) a限制酶只在獲取目的基因時(shí)才用b重組

25、質(zhì)粒的形成是在細(xì)胞內(nèi)完成的c質(zhì)粒都可以作為運(yùn)載體6名校名 推薦d蛋白質(zhì)的氨基酸排列順序可以為合成目的基因提供線索分析：在基因工程中，不僅要用限制酶切割目的基因，還要用同一種限制酶在質(zhì)粒上切割出一個(gè)切口，使目的基因與質(zhì)粒切口的黏性末端能進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)，所以a 錯(cuò)；重組質(zhì)粒是在細(xì)胞外進(jìn)行的，所以b 錯(cuò)；并不是所有的質(zhì)粒都可作運(yùn)載體，在科學(xué)研究中，人們通常只是用大腸桿菌的質(zhì)粒( 其上有抗藥基因) 作運(yùn)載體，所以c 錯(cuò)；在人工合成目的基因的方法中， 有一種方法是根據(jù)已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測出相應(yīng)的mrna序列，然后按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，推測出它的結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，最后通過化學(xué)方法，以單核苷酸

26、為原料合成目的基因。所以d 項(xiàng)正確。答案： d點(diǎn)評(píng)：基因文庫中的基因的來源，有的是從自然界獲取的，有的是人工合成的。考點(diǎn)八、 pcr的擴(kuò)增過程例 9多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (pcr)是一種體外迅速擴(kuò)增 dna片段的技術(shù)。 pcr過程一般經(jīng)歷下述三十多次循環(huán)： 95下使模板 dna變性、解鏈 55下復(fù)性 （引物與 dna模板鏈結(jié)合） 72下引物鏈延伸（形成新的脫氧核苷酸鏈）。下列有關(guān)pcr過程的敘述中不正確的是a變性過程中破壞的是dna分子內(nèi)堿基對(duì)之間的氫鍵，也可利用解旋酶實(shí)現(xiàn)b復(fù)性過程中引物與dna模板鏈的結(jié)合是依靠堿基互補(bǔ)配對(duì)原則完成c延伸過程中需要dna聚合酶、 atp、四種核糖核苷酸d pcr與

27、細(xì)胞內(nèi)dna復(fù)制相比所需要酶的最適溫度較高分析：本題考查 pcr擴(kuò)增過程。解題的關(guān)鍵是要全面理解pcr擴(kuò)增過程。 dna分子被破壞是指 dna分子被解旋成兩條長鏈， 破壞的部位是連接兩條長鏈之間的氫鍵，方法有多種， 用解旋酶、高溫等都可使 dna解旋， a 項(xiàng)正確。 b 中引物有引物兩種，分別與模板dna鏈 3端的互補(bǔ)序列互補(bǔ)配對(duì)。c 中的原料不正確，合成dna的原料是四種脫氧核苷酸。pcr技術(shù)中dna合成過程中的溫度在7075 ，所以， d 選項(xiàng)正確。點(diǎn)評(píng)： 要正確理解 pcr擴(kuò)增過程，才能做好本題。易錯(cuò)點(diǎn)：合成 dna的原料是四種脫氧核苷酸 使 dna解旋的方法。【針對(duì)性練習(xí)】1. 基因工

28、程是 dna分子水平的操作，下列有關(guān)基因工程的敘述中，錯(cuò)誤的是( )a. 限制酶只用于切割獲取目的基因b. 載體與目的基因必須用同一種限制酶處理c.基因工程所用的工具酶是限制酶，dna連接酶d.帶有目的基因的載體是否進(jìn)入受體細(xì)胞需檢測2. 運(yùn)用現(xiàn)代生物技術(shù)，將蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因整合到棉花細(xì)胞中，為檢測實(shí)驗(yàn)是否成功，最方便的方法是檢測棉花植株是否有()a. 抗蟲基因b.抗蟲基因產(chǎn)物c.新的細(xì)胞核d.相應(yīng)性狀3. 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物轉(zhuǎn)基因時(shí)的受體細(xì)胞是( )a. 受精卵 b.精細(xì)胞c.卵細(xì)胞d.體細(xì)胞4. 在基因工程操作中，運(yùn)載體的本質(zhì)是雙鏈dna分子，下列功能不能由運(yùn)載體完成的是a. 目的基因的轉(zhuǎn)

29、運(yùn)b.目的基因的擴(kuò)增c.目的基因的表達(dá)d.目的基因的定位5下列關(guān)于基因工程的說法中，正確的是a基因工程的設(shè)計(jì)和施工都是在細(xì)胞水平上進(jìn)行的b目前基因工程所有的目的基因都是從供體細(xì)胞中直接分離得到的7名校名 推薦c只要檢測出受體細(xì)胞中含有目的基因，那么目的基因一定能成功進(jìn)行表達(dá)d基因工程能使科學(xué)家打破物種界限，定向改造生物性狀6.在基因工程中，把選出的目的基因（共1000 個(gè)脫氧核苷酸對(duì)，其中腺嘌呤脫氧核苷酸460 個(gè)），放入 dna擴(kuò)增儀中擴(kuò)增 4 代，那么，在擴(kuò)增儀中應(yīng)放入胞嘧啶脫氧核苷酸的個(gè)數(shù)是a 540 個(gè)b 7560個(gè)c 8100 個(gè)d 17280個(gè)7利用基因工程生產(chǎn)蛋白質(zhì)藥物的方法之一

30、是將人的基因轉(zhuǎn)入動(dòng)物體內(nèi)，再飼養(yǎng)這些轉(zhuǎn)基因動(dòng)物， 從動(dòng)物乳汁或尿液中提取藥物。這一過程不涉及（）a dna按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則自我復(fù)制b dna以其一條鏈為模板合成 rnac rna以自身為模板自我復(fù)制d按照 rna密碼子的排列順序合成蛋白質(zhì)8.1975 年，科學(xué)家用基因工程的方法創(chuàng)造出了一種能分解石油的“超級(jí)細(xì)菌”，下列關(guān)于此種細(xì)菌的說法正確的是a與一般細(xì)菌相比它體積特別巨大b它是現(xiàn)在唯一能分解石油的細(xì)菌c它同時(shí)能分解石油中的四種烴類d與一般細(xì)菌相比，它繁殖速度極快9. 下列與基因工程無關(guān)的是 ( )a. 培養(yǎng)利用“工程菌”生產(chǎn)胰島素b.基因治療c.蛋白質(zhì)工程d.雜交育種10. 在基因工程技

31、術(shù)中，下列方法與目的基因獲得無關(guān)的是a. 輻射誘變法b.從基因文庫中獲取c.反轉(zhuǎn)錄法d.人工合成法11“轉(zhuǎn)基因動(dòng)物”是指()a含有可利用基因的動(dòng)物b基因組中插入外源基因的動(dòng)物c本身具有抗體蛋白類的動(dòng)物d能表達(dá)基因信息的動(dòng)物12下列有關(guān)“基因探針”的敘述，不正確的是a基因探針的工作原理是堿基互補(bǔ)配對(duì)b待測的 dna分子首先要解旋變?yōu)閱捂?，才可用基因探針測序c待測的 dna分子可以直接用基因探針測序d基因探針技術(shù)可用于疾病診斷和環(huán)境監(jiān)測13細(xì)菌抗藥性基因存在于a核區(qū)的 dnab rnac質(zhì)粒d小的直線型 dna14堿基互補(bǔ)配對(duì)發(fā)生在下列哪些生理過程或生物技術(shù)中：種子的萌發(fā) 病毒的增殖過程細(xì)菌的二分

32、裂過程目的基因與運(yùn)載體的結(jié)合 dna探針的使用分泌蛋白的加工和運(yùn)輸abcd 15. 研究發(fā)現(xiàn)，癌細(xì)胞能產(chǎn)生一種酶叫端粒酶，它能修復(fù)細(xì)胞分裂時(shí)產(chǎn)生在染色體端的dna的損傷，使損傷部位得以愈合，避免了老化趨勢， 因此癌細(xì)胞能無限增值。 而正常細(xì)胞沒有這種端粒酶，所以通常分裂50 次左右就會(huì)由于 dna的損傷而衰老死亡。就以上材料分析，以下說法錯(cuò)誤的是a. 正常細(xì)胞內(nèi)也應(yīng)該有控制這種端粒酶合成的基因的存在b. 端粒酶的功能類似于基因工程中dna連接酶c.研究端粒酶基因的作用機(jī)理有助于揭開細(xì)胞衰老之謎d.克隆動(dòng)物若通過基因工程獲得端粒酶基因可使其壽命達(dá)到正常甚至更長16. 美國科學(xué)家在研究生長在墨西哥

33、某地的野玉米后發(fā)現(xiàn)，這種玉米含有包括蘇云金芽孢桿菌基因內(nèi)的轉(zhuǎn)基因作物的基因，由此可見轉(zhuǎn)基因作物的基因可傳播到野生植物中轉(zhuǎn)基因作用可對(duì)天然植物的遺傳多樣性構(gòu)成威脅為防止基因污染，應(yīng)當(dāng)禁止轉(zhuǎn)基因作物的研8名校名 推薦究 自然 交 程 是一個(gè) 期的 基因 程，兩者沒有任何區(qū) 。其中正確的 法是 a. b. c. d. 17. 豇豆 多種害蟲具有抗蟲能力， 根本原因是豇豆體內(nèi)具有胰蛋白 抑制 基因（ cpti 基因）?？茖W(xué)家將其 移到水稻體內(nèi)后，卻 效果不理想，主要原因是 cpti 蛋白 的 累量不足。 在體外 cpti 基因 行了修 后， cpti 蛋白 在水稻中的 累量就得到了提高。修 和表達(dá) 程

34、如下 所示： 根據(jù)以上材料，回答下列 ：cpti 基因是基因工程中的基因，“信號(hào) ”序列及“內(nèi) 網(wǎng)滯留信號(hào)”序列的基本 成 位是，在 程中，首先要用 切開，暴露出，再用 接。在 基因 程中，供體 胞是，受體 胞是。 程稱 。 修 后的cpti 基因是否表達(dá)的最好方法是。18糖尿病是一種常 病，且 病率有逐年增加的 ，以致西方 達(dá)國家把它列 第三號(hào)“ 手”。（1）目前 糖尿病型的治 ，大多采用激素 法， 種激素是a甲狀腺激素b胰 素c胰高血糖素d性激素（2）在人體的胰腺內(nèi)， 生 種激素的 胞群，稱 _ 。（3） 種治 用的激素 去主要從 物（如豬、牛）中得到。自70 年代 工程（又稱基因工程）

35、展起來以后，人 開始采用 種高新技 生 ，其操作的基本 程如下 所示： 中的 粒存在于 菌 胞內(nèi)，從其分子 構(gòu)看，可確定它是一種。根據(jù)堿基配 的 律，在 接 的作用下，把 中甲與乙拼接起來（即重 ），若a 段與 d 段的堿基序列分 是aattc和 cttaa， b 段與 c 段分 是。 菌 行分裂后，其中被拼接的 粒也由一個(gè) 成二個(gè)，二個(gè) 成四個(gè)， 粒的 種增加方式在 學(xué)上稱 。目的是基因通 活 （即表達(dá)）后，能使 菌 生治 糖尿病的激素。 是因 基因具有合成的功能。它的 程包括 _和兩個(gè) 段。19人 牙病的一種性狀表 是由于牙本 育不良， 致牙釉 易破碎，使兒童9名校名 推薦時(shí)期牙齒就易受損

36、傷，該病稱為乳光牙。我國科學(xué)家在研究中發(fā)現(xiàn)，控制該遺傳病的基因是 dspp基因。該基因的第3 外顯子的一段堿基序列由原來決定谷氨酰胺( 一種氨基酸 ) 密碼子的序列變成決定終止的密碼子的序列。請(qǐng)回答：（1） 乳光牙致病基因是形成的。（2）已知谷氨酰胺密碼子分別是caa和 cag，那么 dspp基因第 3 外顯子與上述密碼子相對(duì)應(yīng)的堿基序列是_；由于第3 外顯子堿基序列的變化，導(dǎo)致所決定的肽鏈結(jié)構(gòu)的顯著改變是，因此使牙齒發(fā)育異常。（3）科學(xué)家對(duì)乳光牙致病基因進(jìn)行檢測是用被標(biāo)記的dna分子做探針，鑒定基因的堿基序列，這種方法遵循的原則是；如果科學(xué)家要對(duì)該病進(jìn)行基因治療，應(yīng)采取的方法是。20. 酵母

37、菌的維生素、蛋白質(zhì)含量高，可作食用、藥用等，是提取核苷酸、三磷酸腺苷等多種生化產(chǎn)品的原料， 還可用于生產(chǎn)維生素、 氨基酸等。 科學(xué)家將使啤酒產(chǎn)生豐富泡沫的 ltpl 基因植入啤酒酵母菌中， 使其產(chǎn)生 ltpl 蛋白，釀出泡沫豐富的啤酒， 具體的操作過程如下：請(qǐng)據(jù)圖回答問題：（ 1）若圖中 ltpl 基因與 b 結(jié)合產(chǎn)生的 c 是 _ ，通常在體外完成，此過程必需有 dna限制性核酸內(nèi)切酶和 _ 酶。（2）標(biāo)記基因的作用是。（3）檢測 ltpl 基因在啤酒酵母菌中是否表達(dá)可以通_ 。【課后答案點(diǎn)撥】思考與探究（ p15）1. 答：不可以。因?yàn)槟康幕蛟诒磉_(dá)載體中得到表達(dá)并發(fā)揮作用，還需要有其他控

38、制元件，如啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。必須構(gòu)建上述元件的主要理由是：（1） 生物之間進(jìn)行基因交流， 只有使用受體生物自身基因的啟動(dòng)子才能比較有利于基因的表達(dá)；（2） 通過 cdna文庫獲得的目的基因沒有啟動(dòng)子，只將編碼序列導(dǎo)入受體生物中無法轉(zhuǎn)錄；（ 3） 目的基因是否導(dǎo)入受體生物中需要有篩選標(biāo)記；（ 4） 為了增強(qiáng)目的基因的表達(dá)水平，往往還要增加一些其他調(diào)控元件，如增強(qiáng)子等；（5） 有時(shí)需要確定目的基因表達(dá)的產(chǎn)物存在于細(xì)胞的什么部位，往往要加上可以標(biāo)識(shí)存在部位的基因（或做成目的基因與標(biāo)識(shí)基因的融合基因），如綠色熒光蛋白基因等。2. 解析：農(nóng)桿菌可分為根瘤農(nóng)桿菌和發(fā)根農(nóng)桿菌，在植物基因工程中以根

39、瘤農(nóng)桿菌的ti 質(zhì)粒介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化最多。根瘤農(nóng)桿菌廣泛存在于雙子葉植物中。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，約有93 屬643 種雙子葉植物對(duì)根瘤農(nóng)桿菌敏感。裸子植物對(duì)該菌也敏感。當(dāng)這些植物被該菌侵染后會(huì)誘發(fā)腫瘤。近年來，也有報(bào)道該菌對(duì)單子葉植物也有侵染能力。根瘤農(nóng)桿菌侵染植物是一個(gè)非常復(fù)雜的過程。根瘤農(nóng)桿菌具有趨化性，即植物的受傷組織會(huì)產(chǎn)生一些糖類和酚類物質(zhì)吸引根瘤農(nóng)桿菌向受傷組織集中。研究證明， 主要酚類誘導(dǎo)物為乙酰丁香酮和羧基乙酰丁香酮，這些物質(zhì)主要在雙子葉植物細(xì)胞壁中合成，通常不存在于單子葉植物中， 這也是單子葉植物不易被根瘤農(nóng)桿菌侵染的原因。近年來還發(fā)現(xiàn)一些中性糖，10名校名 推薦如 l- 阿拉伯糖、

40、d-木糖等也有誘導(dǎo)作用。酚類物質(zhì)和糖類物質(zhì)既可以作為根瘤農(nóng)桿菌的趨化物， 又可以作為農(nóng)桿菌中ti 質(zhì)粒上 vir 區(qū)（毒性區(qū)）基因的誘導(dǎo)物，使 vir 區(qū)基因活化，導(dǎo)致 t-dna的加工和轉(zhuǎn)移，從而侵染植物細(xì)胞。需要注意的是農(nóng)桿菌中不同的菌株，侵染能力有差別， 在基因工程中需要加以選擇使用。利用農(nóng)桿菌侵染單子葉植物進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化時(shí)，是需要加上述酚類物質(zhì)的，同時(shí)單子葉植物種類不同，農(nóng)桿菌侵染進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化的效果也有很大差異。如果想將一個(gè)抗病毒基因轉(zhuǎn)入小麥，也可以用農(nóng)桿菌，但要注意兩點(diǎn)： 要選擇合適的農(nóng)桿菌菌株， 因?yàn)椴皇撬械霓r(nóng)桿菌菌株都可以侵染單子葉植物；要加趨化和誘導(dǎo)的物質(zhì)，一般為乙酰丁香酮等，

41、目的是使農(nóng)桿菌向植物組織的受傷部位靠攏（趨化性） 和激活農(nóng)桿菌的 vir區(qū)（誘導(dǎo)）的基因，使t-dna轉(zhuǎn)移并插入到染色體dna上。3. 解析：有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價(jià)結(jié)合的糖鏈， 這些糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體上加工完成的，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體存在于真核細(xì)胞中，大腸桿菌不存在這兩種細(xì)胞器，因此，在大腸桿菌中生產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的。4. 解析：基本操作如下：（1）從小鼠中克隆出 - 珠蛋白基因的編碼序列（cdna）。（2）將 cdna前接上在大腸桿菌中可以適用的啟動(dòng)子，另外加上抗四環(huán)素的基因，構(gòu)建成一個(gè)表達(dá)載體。（3）將表達(dá)載體導(dǎo)入無四環(huán)素抗性的大腸桿菌中，然后在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)大腸桿

42、菌。 如果表達(dá)載體未進(jìn)入大腸桿菌中，大腸桿菌會(huì)因不含有抗四環(huán)素基因而死掉；如果培養(yǎng)基上長出大腸桿菌菌落，則表明 - 珠蛋白基因已進(jìn)入其中。（4）培養(yǎng)進(jìn)入了- 珠蛋白基因的大腸桿菌，收集菌體，破碎后從中提取- 珠蛋白。求異思維（ p8）解析： 1970 年，特明（ h.m. temin ）和巴爾的摩（d. baltimore）證實(shí)了rna病毒中含有一種能將rna轉(zhuǎn)錄成 dna的酶，這種酶被稱為依賴rna的 dna聚合酶，由于與中心法則中的從 dna到 rna的轉(zhuǎn)錄是反向的，所以稱為反轉(zhuǎn)錄酶（reverse transcriptase）。反轉(zhuǎn)錄酶既可以利用 dna又可以利用 rna作為模板合成與之

43、互補(bǔ)的 dna鏈。像其他 dna 聚合酶一樣，反轉(zhuǎn)錄酶也以 5 3方向合成 dna（圖 1-3 ）。cdna合成過程是：第一步，反轉(zhuǎn)錄酶以rna為模板合成一條與rna互補(bǔ)的 dna單鏈，形成 rna-dna雜交分子。 第二步， 核酸酶 h使 rna-dna雜交分子中的rna鏈降解， 使之變成單鏈的 dna。第三步， 以單鏈 dna為模板，在 dna聚合酶的作用下合成另一條互補(bǔ)的dna鏈，形成雙鏈dna分子。尋根問底1（ p9）. 解析：構(gòu)建基因文庫是獲取目的基因的方法之一，并不是惟一的方式。如果所需要的目的基因序列已知， 就可以通過 pcr方式從含有該基因的生物的 dna中，直接獲得， 也可以

44、通過反轉(zhuǎn)錄，用 pcr方式從 mrna中獲得，不一定要構(gòu)建基因文庫。但如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段，或想從一種生物體內(nèi)獲得許多基因，或者想知道這種生物與另一種生物之間有多少基因不同，或者想知道一種生物在個(gè)體發(fā)育的不同階段表達(dá)的基因有什么不同，或者想得到一種生物的全基因組序列，往往就需要構(gòu)建基11名校名 推薦因文庫。2（p11）. 解析：有人采用總dna注射法進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，即將一個(gè)生物中的總dna提取出來，通過注射或花粉管通道法導(dǎo)入受體植物，沒有進(jìn)行表達(dá)載體的構(gòu)建，這種方法針對(duì)性差，完全靠運(yùn)氣， 也無法確定什么基因?qū)肓耸荏w植物。 此法目前爭議頗多， 嚴(yán)格來講不

45、算基因工程?！就卣归喿x】1. 基因工程載體的構(gòu)建需要考慮哪些方面的因素？道理何在？主要考慮以下幾方面的因素。（1）基因的特點(diǎn)：如果一個(gè)來自動(dòng)物的目的基因含有內(nèi)含子，就不能用于轉(zhuǎn)基因植物，因?yàn)閯?dòng)物中內(nèi)含子的剪接系統(tǒng)與植物的不同，植物不能將動(dòng)物基因的內(nèi)含子剪切掉，只能用該基因的 cdna?；虻漠a(chǎn)物如果是一個(gè)糖蛋白，那么該基因在原核生物細(xì)菌中表達(dá)出來的蛋白就可能不具備天然狀態(tài)下的活性，因?yàn)樘堑鞍咨系奶擎準(zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體上加上的，而細(xì)菌無這些細(xì)胞器。（ 2）要選擇強(qiáng)啟動(dòng)子或組織特異性啟動(dòng)子。啟動(dòng)子有強(qiáng)有弱，選擇強(qiáng)啟動(dòng)子可以增加轉(zhuǎn)錄活性，使基因產(chǎn)物量增多。如果希望基因在生物的某個(gè)組織表達(dá)，如只在植物種子中表達(dá)，就要選擇種子中特異表達(dá)的啟動(dòng)子。（ 3）要有選擇標(biāo)記基因，如抗生素基因，以便選擇出真正的轉(zhuǎn)基因生物。2. 什么是分子雜交技術(shù)的顯示帶？分子雜交技術(shù)是基因工程中使用頻率很高的一項(xiàng)技術(shù)， 主要用于檢測和鑒定， 可以分為核酸分子之間的雜交和蛋白質(zhì)分子之間的雜交。常用的技術(shù)有：southern 雜交 dna 和 dna分子之間的雜交。 目的基因是否整合到受體生物的染色體dna中，這在真核生物中是目的基因可否穩(wěn)定存在和遺傳的關(guān)鍵。如何證明這一點(diǎn)，就需要通過 southern雜交技術(shù)?；咀龇ㄊ牵旱谝徊?，將受體生物dna提取出來，經(jīng)過適當(dāng)?shù)拿盖泻螅?走瓊脂糖凝膠電泳，將不同大