1、微生物的培養(yǎng)與應用（時間：45分鐘 滿分：100分）一、選擇題(每小題4分，共48分)1下列關于配制培養(yǎng)基的敘述，正確的是()A配制固體培養(yǎng)基必須加入瓊脂BpH調(diào)至6.57.5的培養(yǎng)基可培養(yǎng)放線菌C培養(yǎng)自生固氮菌的培養(yǎng)基中不需添加氮源D發(fā)酵工程一般用半固體培養(yǎng)基或液體培養(yǎng)基解析：選C在配制固體培養(yǎng)基時，可加入瓊脂作為凝固劑，但瓊脂并不是唯一的凝固劑；放線菌生長適宜的pH為7.58.5，細菌生長適宜的pH為6.57.5；發(fā)酵工程應用于生產(chǎn)實踐一般用液體發(fā)酵，可以連續(xù)培養(yǎng)，提高產(chǎn)量；自生固氮菌能夠?qū)⒖諝庵械腘2還原為NH3，因此培養(yǎng)基中不需加氮源。2某同學用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基進行大腸桿菌純化培

2、養(yǎng)，下列說法錯誤的是()A蛋白胨可為大腸桿菌的生長提供氮源和維生素等營養(yǎng)B牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基需經(jīng)高壓蒸汽滅菌后調(diào)節(jié)pHC倒平板操作中，待平板冷卻凝固后將平板倒過來放置D大腸桿菌純化培養(yǎng)可以采用平板劃線法或稀釋涂布平板法解析：選B培養(yǎng)基應先調(diào)節(jié)pH后滅菌，若先滅菌后調(diào)節(jié)pH，調(diào)節(jié)pH時會污染培養(yǎng)基。3微生物培養(yǎng)是微生物工程中的基礎技術，下列相關敘述正確的是()A病毒和細菌的培養(yǎng)基成分相同B平板劃線法中的“線”是連續(xù)的、不分區(qū)域的C微生物培養(yǎng)基中并不是都必須添加碳源或氮源D在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進行消毒解析：選C病毒必須寄生在活細胞內(nèi)才能進行生命活動，如可用活雞

3、胚培養(yǎng)病毒；平板劃線法每次劃線前都要灼燒接種環(huán)，劃線是分區(qū)域的；微生物種類不同，對營養(yǎng)物質(zhì)的需求不同，應根據(jù)所培養(yǎng)微生物的需要確定培養(yǎng)基的成分；對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿要進行滅菌，而不是消毒。4稀釋涂布平板法是微生物培養(yǎng)中的一種常用的接種方法。下列相關敘述錯誤的是()A操作中需要將菌液進行一系列的濃度梯度稀釋B需將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基表面C不同濃度的菌液均可在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落D對培養(yǎng)基和涂布器等均需進行嚴格滅菌處理解析：選C只有菌液稀釋到一定程度后，在固體培養(yǎng)基表面才能形成單個的菌落，否則可能會出現(xiàn)兩個或兩個以上的細菌共同形成一個菌落，或菌落出現(xiàn)重疊。5某學者欲研究被石油污染過

4、的土壤中細菌的數(shù)量，并從中篩選出能分解石油的細菌。下列操作錯誤的是()A利用平板劃線法對細菌進行計數(shù)B用以石油為唯一碳源的培養(yǎng)基篩選C采用稀釋涂布平板法分離菌種D稱取和稀釋土壤樣品時應在酒精燈火焰旁解析：選A分離細菌常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，但平板劃線法不能對細菌進行計數(shù)；篩選能分解石油的細菌，要以石油作為培養(yǎng)基中唯一的碳源；篩選細菌的整個操作過程都需要在無菌條件下進行，所以稱取、稀釋土壤樣品應在酒精燈火焰旁進行。6下表為某培養(yǎng)基的配方，有關敘述正確的是()成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4伊紅美藍蒸餾水含量10 g10 g2 g0.4 g0.065 g1 000 mLA.從物理性質(zhì)看

5、該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，從用途看該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基B培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是蛋白胨C該培養(yǎng)基缺少提供生長因子的物質(zhì)D該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的pH后就可以用于接種菌種解析：選B此培養(yǎng)基中沒有瓊脂等凝固劑，因此為液體培養(yǎng)基；伊紅、美藍能對大腸桿菌起鑒別作用。糖類(尤其是葡萄糖)是最常用的碳源；蛋白胨主要用作氮源，也提供生長因子，或作為異養(yǎng)型微生物的碳源。該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)pH并滅菌后才能接種使用。7下列關于微生物培養(yǎng)和利用的敘述，錯誤的是()A利用稀釋涂布平板法既能分離微生物也能對微生物進行計數(shù)B接種時連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌種逐步分散獲得單個菌落C以尿素為唯一氮源且含酚紅的

6、培養(yǎng)基可選擇和鑒別尿素分解菌D選擇培養(yǎng)基作用的原理是顯現(xiàn)某微生物的特征，以區(qū)別于其他微生物解析：選D稀釋涂布平板法能分離純化微生物也能對微生物進行計數(shù)；連續(xù)劃線是將聚集的菌種逐步分散，以獲得單菌落；尿素分解菌的分離可以選用以尿素為唯一氮源，且含酚紅的培養(yǎng)基；選擇培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入某一化學物質(zhì)或改變某一理化性質(zhì)，使某一微生物正常生長，而其他微生物則被殺滅或生長受到抑制，從而選出所需要的微生物。8下列有關分解纖維素的微生物分離的敘述，錯誤的是()A在加入剛果紅的培養(yǎng)基中，當纖維素被纖維素分解菌釋放的纖維素酶分解后會出現(xiàn)透明圈B在用剛果紅染色時只能先培養(yǎng)微生物再加入剛果紅，不能在倒平板時加入C纖

7、維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵法和固體發(fā)酵法D纖維素酶的測定方法，一般是對所產(chǎn)生的葡萄糖進行定量的測定解析：選B剛果紅染色有兩種方法，一種是先培養(yǎng)微生物再加入剛果紅，另一種是在倒平板時就將剛果紅染液加入培養(yǎng)基中，然后再培養(yǎng)微生物，兩種方法各有優(yōu)缺點，但都可以應用。9微生物(除病毒外)需要從外界吸收營養(yǎng)物質(zhì)并通過代謝來維持正常的生長和繁殖。下列有關微生物營養(yǎng)的說法，正確的是()A乳酸菌與硝化細菌所利用的碳源物質(zhì)是相同的B微生物生長中不可缺少的一些微量的無機物稱為生長因子C培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)濃度越高對微生物的增殖越有利D生長因子一般是酶或核酸的組成成分，微生物本身合成這些生長因子的能力往往不足解析：選

8、D微生物的營養(yǎng)物質(zhì)包括碳源、氮源、水、無機鹽和生長因子。乳酸菌的碳源是有機物，而硝化細菌可以利用無機物作為碳源；生長因子是微生物體內(nèi)不能合成的，需要量很小的一些有機物；培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)濃度過高會造成微生物細胞失水，不利于微生物的生長、繁殖。10農(nóng)田土壤的表層，自生固氮菌的含量比較多，將用表層土制成的稀泥漿，接種到特制的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，可將自生固氮菌與其他細菌分開，對培養(yǎng)基的要求是()加抗生素不加抗生素加氮素不加氮素加葡萄糖不加葡萄糖37 恒溫箱培養(yǎng)2830 溫度下培養(yǎng)ABC D解析：選C自生固氮菌是異養(yǎng)菌，生長繁殖需要有機碳源；自生固氮菌能利用空氣中的氮氣，培養(yǎng)基中不需要加氮源，固氮菌能生長繁殖

9、，不能固氮的菌不能生長繁殖；自生固氮菌生長繁殖的最適溫度是2830 ；自生固氮菌對抗生素敏感，培養(yǎng)基中不能加抗生素，所以從土壤浸出液中分離出自生固氮菌對培養(yǎng)基的要求是不加抗生素、不加氮素、加葡萄糖、2830 溫度下培養(yǎng)。11下表表示在不同培養(yǎng)基中細菌的生長繁殖情況(A、B、C、H、I、J、K、M為培養(yǎng)基的成分，“”表示生長，“”表示不生長)，請分析細菌不能合成下列哪種物質(zhì)()培養(yǎng)基成分A、B、CA、B、C I、MA、B、C H、KA、B、C M、JA、B、C I、KA、B、C H、JA、B、C K、M生長狀態(tài)AHBICKDM解析：選C凡添加了物質(zhì)K的培養(yǎng)基，細菌都能生長，反之則不能生長，說明物

10、質(zhì)K是細菌不能合成的。12現(xiàn)有兩種固體培養(yǎng)基，已知其配制時所加的成分和含量如下表，用這兩種培養(yǎng)基分別去分離土壤中的兩種微生物，你認為它們適于分離()成分KH2PO4MgSO47H2ONaClCaSO42H2OCaCO3葡萄糖純淀粉甲培養(yǎng)基0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%0.5%2%乙培養(yǎng)基0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%A.甲培養(yǎng)基適于分離自養(yǎng)型自生固氮菌；乙培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型自生固氮菌B甲培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型自生固氮菌；乙培養(yǎng)基適于分離自養(yǎng)型自生固氮菌C甲培養(yǎng)基適于分離酵母菌；乙培養(yǎng)基適于分離真菌D甲培養(yǎng)基適于分離自養(yǎng)型共生細菌；乙培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型共生固

11、氮菌解析：選B固氮菌中能獨立生存的是自生固氮菌，需和其他生物結(jié)合在一起才能生存的是共生固氮菌，甲培養(yǎng)基中含有的葡萄糖和淀粉是有機物，由此推出該培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型的自生固氮菌；乙培養(yǎng)基中不含有機碳源，所以可用來分離培養(yǎng)自養(yǎng)型的自生固氮菌。二、非選擇題(共52分)13(17分)為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細菌含量，并進行了細菌分離等工作?；卮鹣铝袉栴}：(1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中的細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是_；然后，將1 mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當培

12、養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為_個。(2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌，操作時，接種環(huán)通過_滅菌，在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線，這樣做的目的 是_。(3)示意圖A和B中，_表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。(4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進行靜置培養(yǎng)，另一部分進行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中_的含量，同時可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高_的利用率。解析：(1)為了檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格，可在涂布接種前，隨機

13、取滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時間。0.1 mL稀釋液中平均有(393837)/338(個)活菌，則每毫升稀釋液中活菌的數(shù)目為38/0.1380(個)，則稀釋前每毫升水樣中活菌數(shù)目為3801003.8104(個)，則每升水樣中活菌數(shù)目為3.81041 0003.8107(個)。(2)接種環(huán)、接種針等金屬用具可直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，以達到迅速徹底滅菌的目的。在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線，其目的是將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落。(3)比較圖A和圖B可以看出：A培養(yǎng)基中細菌的分布呈線形，是用平板劃線法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果；B培養(yǎng)基中細菌均勻分布，是用稀釋涂

14、布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。(4)振蕩培養(yǎng)可以提高培養(yǎng)液中溶解氧的含量，還可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高了營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，因此振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。答案：(除標明外，每空2分，共17分)(1)檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格(3分)3.8107(3分)(2)灼燒將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落(3分)(3)B(4)溶解氧營養(yǎng)物質(zhì)14(17分)類胡蘿卜素中的胡蘿卜素是一種常用的色澤鮮艷、對人體有益的天然色素類食品添加劑，且類胡蘿卜素可從微生物體中獲取。下圖為篩選獲得高產(chǎn)紅酵母菌菌種的過程，下表為篩選培養(yǎng)過程中獲得的部分數(shù)據(jù)(表中細胞生物量是指培養(yǎng)期間單位體積內(nèi)所含的生物個

15、體總量)。請分析回答下列問題： 紅酵母菌在不同的培養(yǎng)基中類胡蘿卜素產(chǎn)量菌種培養(yǎng)基成分細胞生物量(g/L)類胡蘿卜素含量(mg/g)類胡蘿卜素產(chǎn)量(mg/L)葡萄糖2.426.0162.4甘蔗汁9.21.917.5泥炭提取物4.81.2616.03(1)酵母菌不具有的結(jié)構(gòu)有_(填“擬核”“芽體”“葉綠體”或“細胞壁”)。(2)圖中過程的目的是_。為獲得單菌落，可采用_法，通過接種環(huán)將初篩菌液接種在固體培養(yǎng)基上，后連續(xù)劃線培養(yǎng)，接種時需要先進行的操作是_。(3)表中顯示的培養(yǎng)基成分是為紅酵母菌生長提供的_，圖中過程的目的是_。(4)根據(jù)上表信息，你認為進一步提高高產(chǎn)紅酵母菌類胡蘿卜素產(chǎn)量的有效措施

16、是_。解析：(1)酵母菌屬于真核生物，擬核是原核細胞特有的結(jié)構(gòu)，葉綠體是綠色植物特有的細胞器，酵母菌都沒有，但是在出芽生殖的過程中會產(chǎn)生芽體，并且具有細胞壁。(2)過程的目的是人工誘變(提高紅酵母菌的突變率)。為獲得單菌落，可采用平板劃線法將初篩菌液接種在固體培養(yǎng)基上，接種時需要對接種環(huán)滅菌處理，即先進行的操作是灼燒接種環(huán)并冷卻。(3)表中葡萄糖、甘蔗汁以及泥炭提取物等均為酵母菌生長提供碳源，圖中過程的目的是篩選出最適宜用于培養(yǎng)高產(chǎn)紅酵母菌的培養(yǎng)基。(4)根據(jù)表中信息，進一步提高高產(chǎn)紅酵母菌類胡蘿卜素產(chǎn)量的有效措施是優(yōu)化培養(yǎng)基。答案：(除標明外，每空2分，共17分)(1)擬核、葉綠體(3分)(

17、2)人工誘變(提高紅酵母菌的突變率)平板劃線灼燒接種環(huán)并冷卻(3分)(3)碳源篩選出最適宜用于培養(yǎng)高產(chǎn)紅酵母菌的培養(yǎng)基(3分)(4)優(yōu)化培養(yǎng)基15(18分)羧甲基纖維素鈉(CMC)是常用的食品添加劑，不能被人體消化吸收，因此通常被認為是安全的食品添加劑。研究者用含1.0% CMC無菌水作為飲用水，連續(xù)飼喂實驗小鼠12周，測定小鼠體重，結(jié)果如圖1、圖2所示。(1)圖1所示實驗中的對照處理是_。圖1結(jié)果顯示，食用CMC能夠_。綜合圖1、圖2結(jié)果，通過比較_，說明CMC的這種作用依賴于小鼠消化道內(nèi)的各種微生物。(2)有人提出：小鼠攝入的CMC改變了其腸道內(nèi)各種微生物的比例。為檢驗上述推測，研究者設計了如下實驗：搜集_(填圖中分組編號)組小鼠糞便制成懸浮液涂布于全營養(yǎng)固體培養(yǎng)基上。接種后置于_(填“無氧”或“有氧”)條件下培養(yǎng)，通過觀察_以初步鑒定小鼠消化道中的微生物類群。統(tǒng)計比較_，以確定推測是否成立。解析：(1)該實驗的自變量為飲用水中是否含有CMC，實驗組飼喂含有CMC的無菌水，則對照處理是飼喂不含CMC的無菌水；圖1結(jié)果顯示，食用CMC能夠使小鼠體重增加。綜合圖1、圖2結(jié)果，通過比較A、B組體重差值與C、D組體重差值，可以看出在普通環(huán)境中體重差值較大，在無菌環(huán)境中差值不