1、臨床微生物標(biāo)本采集、轉(zhuǎn)運與處理,微生物標(biāo)本規(guī)范化采集的重要性,正確采集、處理與運送細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本直接關(guān)系到致病菌培養(yǎng)的正確性與陽性率的高低，是臨床細(xì)菌檢驗成功的關(guān)鍵。 標(biāo)本質(zhì)量的好壞直接影響診斷結(jié)果的正誤，不當(dāng)?shù)臉?biāo)本可導(dǎo)致假陰性、假陽性結(jié)果的出現(xiàn)，因此標(biāo)本采集與處理的規(guī)范化是準(zhǔn)確、及時地向臨床提供重要的臨床感染信息的基礎(chǔ)。 好的微生物檢驗標(biāo)本可提升實驗室工作效率及病患照顧質(zhì)量，降低醫(yī)療成本。,臨床標(biāo)本的分類,發(fā)現(xiàn)感染應(yīng)及時采集微生物標(biāo)本作病原學(xué)檢查，二、三級醫(yī)院微生物標(biāo)本送 檢率不應(yīng)低于70%。 盡量在抗菌藥物使用前采集標(biāo)本。 標(biāo)本采集時應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作，減少或避免機體正常菌群及其他雜菌污染

2、。 標(biāo)本采集后應(yīng)立即送至實驗室。床邊接種可提高病原菌檢出率。 以棉拭子采集的標(biāo)本如咽拭、肛拭或傷口拭子，宜采用插入運送培養(yǎng)基送檢。 混有正常菌群的標(biāo)本如咳痰、尿液、傷口拭子，不可置肉湯培養(yǎng)基內(nèi)送檢。 盛標(biāo)本容器須經(jīng)滅菌處理，但不得使用消毒劑。 送檢標(biāo)本應(yīng)注明來源和檢驗?zāi)康?，使實驗室能正確選用相應(yīng)的培養(yǎng)基和適宜的培養(yǎng)環(huán)境。,血培養(yǎng),采集的臨床指征一般患者出現(xiàn)以下一種體征時可作為采血的重要指征：,發(fā)熱（38）或（低溫36） 寒戰(zhàn) 白細(xì)胞增多（特別有“核左移”未成熟的或桿狀核白細(xì)胞） 皮膚黏膜出血、昏迷、多器官衰竭、血壓降低、CRP升高及呼吸快 特殊患者（如血液?。┏霈F(xiàn)粒細(xì)胞減少（成熟的多形核白細(xì)胞

3、1000109/L）、血小板減少等，或同時具備上述幾種體征的臨床可疑菌血癥應(yīng)采集血培養(yǎng) 新生兒菌血癥，進(jìn)行血培養(yǎng)同時應(yīng)增加尿液和腦脊液培養(yǎng) 對入院危重感染患者在未進(jìn)行系統(tǒng)性抗菌藥物治療之前，應(yīng)及時采集血培養(yǎng),采血量：,血液中細(xì)菌和真菌的檢出率依賴于足夠的血量，但并非越多越好，超過一定數(shù)量的采血量會稀釋培養(yǎng)基內(nèi)的肉湯，使肉湯無法有效中和血中的抑制物質(zhì)（補體、抗體、抗生素）。血量與培養(yǎng)液的比例以 1：10為宜，但對已接受抗菌藥物長達(dá) 10 天以上的患者， 采血量與培養(yǎng)基的比例應(yīng)為 1：20 或大于 1：20 為宜。 成人1015ml 兒童35ml 嬰幼兒12ml 骨髓12ml,標(biāo)本采集,常規(guī)消毒病

4、人采血部位，抽一定量血液后，另換一無菌針頭，消毒接種瓶口后將血液接種在瓶內(nèi)（一瓶需氧，一瓶厭氧），輕輕搖勻。,采集要點：,1. 每一對血培養(yǎng)應(yīng)當(dāng)從身體的不同部位采集 2. 用來培養(yǎng)的血應(yīng)當(dāng)是靜脈血而不是動脈血 3. 盡量避免從靜脈導(dǎo)管中抽血 4. 皮膚和瓶子的消毒非常關(guān)鍵,采集時機：,應(yīng)在病人發(fā)病初期或發(fā)熱高峰到來之前采集。一般情況下應(yīng)盡量選擇在使用抗菌藥之前進(jìn)行，在24h內(nèi)采集2-3份血培養(yǎng)（一次靜脈采血注入到多個培養(yǎng)瓶中應(yīng)視為單份血培養(yǎng)）。如患者已經(jīng)應(yīng)用抗菌藥物進(jìn)行治療，應(yīng)在下一次用藥之前采血培養(yǎng)。,采血套數(shù),檢測靈敏度,血培養(yǎng)瓶的運送,采集后的血培養(yǎng)瓶應(yīng)立即送檢（室溫24h） 如不能立即

5、送檢，需室溫保存或置3537孵箱中，切勿冷藏,上呼吸道標(biāo)本,采集的臨床指征,懷疑上呼吸道感染時如發(fā)熱、咽部疼痛等，尤其是懷疑化膿性鏈球菌感染或念珠菌感染時進(jìn)行咽拭子培養(yǎng)。,標(biāo)本采集,采集注意事項,采集標(biāo)本應(yīng)于抗生素治療前，以晨起進(jìn)食前為宜，取樣前數(shù)小時內(nèi)不得用消毒藥物漱口或涂抹病灶部位。 取樣部位應(yīng)準(zhǔn)確，反復(fù)涂抹數(shù)次，避免接觸口腔、舌粘膜和唾液。 口腔表面組織的標(biāo)本不適于細(xì)菌學(xué)評價。 咽拭子禁用于會厭發(fā)炎患者。 檢查白喉棒狀桿菌，應(yīng)取疑為白喉假膜邊緣部的分泌物；扁桃體部位標(biāo)本取扁桃體小窩處為宜。,下呼吸道（痰培養(yǎng)）標(biāo)本,采集的臨床指征,咳嗽咳痰是下呼吸道感染最常見的癥狀。 咯血包括泡沫血痰、鮮

6、血和痰中帶血等 呼吸困難，呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛 發(fā)熱伴WBC增高尤其是中性粒細(xì)胞或CRP明顯增高 胸部影像學(xué)檢查提示感染可能,標(biāo)本采集,自然咳痰法,以晨痰為佳。采集標(biāo)本前應(yīng)用清水漱口或用牙刷（不用牙膏）清潔口腔和牙齒，有假牙者應(yīng)取下假牙（為減少口腔正常菌群污染標(biāo)本），用力咳出呼吸道深部的痰（非后鼻部分泌物、非唾液），痰液直接吐入無菌容器中，盡快送檢。否則有的細(xì)菌（如肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌）在外界可能死亡。不能及時送檢的標(biāo)本，室溫保存2h。,標(biāo)本質(zhì)量,合格標(biāo)本的判斷標(biāo)準(zhǔn),外觀：觀察顏色、粘度、有無血絲或膿。若標(biāo)本為水狀且很明顯是唾液，則應(yīng)拒收。 為了判定是否來自下呼吸道的痰，需檢查是否為

7、合格的痰標(biāo)本：WBC25個/低倍視野，鱗狀上皮細(xì)胞10個/低倍視野為合格標(biāo)本。采集合格標(biāo)本對細(xì)菌的診斷極為重要。,注意事項,在抗生素應(yīng)用前采集痰標(biāo)本 對于細(xì)菌性肺炎，痰標(biāo)本送檢每天1次，連續(xù)23天；不建議24h內(nèi)多次采集，除非痰液外觀形狀改變 懷疑分枝桿菌感染者，應(yīng)連續(xù)收集3天清晨痰液送檢，也可收集24h痰液。,痰培養(yǎng)標(biāo)本的運送,標(biāo)本采集后正確蓋好，防止泄露或容器外部留有殘留物 采集后的標(biāo)本應(yīng)立即送往實驗室（室溫2） 申請抗酸桿菌檢查或真菌培養(yǎng)的痰液如不能及時送檢，應(yīng)放入4冰箱，以免雜菌生長，但存放時間應(yīng)不超過24 懷疑嗜血桿菌或肺炎鏈球菌感染時，標(biāo)本應(yīng)立即送檢，切忌冷藏,中段尿培養(yǎng),采集的臨

8、床指征,1. 尿痛、尿急、尿頻等典型的尿路感染癥狀 2. 出現(xiàn)血尿或膿尿 3. 泌尿系統(tǒng)疾病手術(shù)前 4. 留置導(dǎo)尿管時間太長，患者出現(xiàn)發(fā)熱 5. 尿常規(guī)中WBC高和（或）亞硝酸鹽陽性 尿感根據(jù)感染部位分為： 上尿路感染（腎盂腎炎） 下尿路感染（膀胱炎、尿道炎) 男性可出現(xiàn)前列腺炎,標(biāo)本采集,一般認(rèn)為來自正常尿液是無菌的，而尿道口有正常菌群寄生，標(biāo)本的采集必須無菌操作。 1. 女性（female）：成年女性外陰部以肥皂水清洗，再用無菌水洗凈，用無菌紗布擦拭，然后排尿棄去前段尿，留取中段尿 3 毫升，置于無菌容器內(nèi)。 2. 男性（male）：用肥皂水清洗尿道口，后用清水洗后取中段尿。包皮過長者為防

9、止包皮內(nèi)細(xì)菌污染，可將包皮翻開沖洗后再取中段尿。 3. 兒童（children）：采集中段尿較困難。如尿中細(xì)菌明顯增多，可高度懷疑尿路感染，無細(xì)菌則可否定，細(xì)菌數(shù)中度增加時，有必要用膀胱穿刺術(shù)（vesicopuncture）或?qū)颍╱rethral catheterization）采集尿液。,留取中段尿,簡單易行，又無感染的危險。通常取晨起第一次尿送檢。尿液在膀胱內(nèi)停留6-8h以上（給細(xì)菌足夠的繁殖時間） 尿標(biāo)本必須用無菌帶螺帽的容器采集，否則為拒收標(biāo)本。 痰培養(yǎng)容器？NO。,腦脊液培養(yǎng),采集的臨床指征,在生理情況下，血液和腦脊液之間有血腦屏障，阻礙各種微生物通過血液進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)。因此正常

10、人的腦脊液是絕對無菌的。 當(dāng)懷疑結(jié)核性、化膿性、流行性、霉菌性腦膜炎時進(jìn)行腦脊液培養(yǎng)。,嚴(yán)格無菌操作,標(biāo)本采集,以 70%酒精或 2%碘酊消毒背部下方，并麻醉之，然后以一特制通管針，輕輕的由第三與第四腰椎間的中線部位穿刺入脊髓蛛網(wǎng)膜，采集約 3-5ml 腦脊液于 3 支無菌試管中，每支試管至少 1-2ml，然后馬上將第 2 根（或第 1 根）送至實驗室。做腦脊液培養(yǎng)時，建議同時做血培養(yǎng)。腰穿時必須作徹底消毒和無菌操作。,腦脊液標(biāo)本的運送,采集后應(yīng)正確蓋好，防止泄漏或容器外部留有殘留物。常溫立即送檢，實驗室收到標(biāo)本后應(yīng)立即接種。腦脊液標(biāo)本送檢的理想時間為 15 分鐘內(nèi)，半小時送檢是可接受的，如果

11、送檢時間超過 1 小時，則會影響結(jié)果。 注：某些細(xì)菌具有自溶酶，放置時間過長易自溶死亡，因此，標(biāo)本應(yīng)立即送檢，并且保溫（禁止放冰箱，因腦膜炎雙球菌遇冷死亡）,穿刺液培養(yǎng),穿刺液主要包括：,膽汁 胸水 腹水 心包液 關(guān)節(jié)液 腦脊液 在正常人體中，上述體液均是無菌的。有感染的情況下檢出的細(xì)菌，在排除污染后應(yīng)視為病原菌，及時給予正確的治療。,采集的臨床指征,臨床上出現(xiàn)胸腔積液（胸水）、腹腔積液（腹水）、關(guān)節(jié)液、心包腔積液、鞘膜腔積液等情況時，多因漿膜腔發(fā)生循環(huán)障礙、炎癥、癌浸潤等病變，腔內(nèi)液體滲漏增加所致。,標(biāo)本采集,一般由臨床醫(yī)師在無菌操作下穿刺抽取或外科手術(shù)采集標(biāo)本。取于無菌肝素抗凝管中（.肝素

12、可抗凝標(biāo)本），充分混勻后立即送檢，不能有凝塊。,大便培養(yǎng),采集指征,腹瀉病人應(yīng)盡量在急性期（天內(nèi)）、在用抗生素前留取標(biāo)本以提高病原菌的檢出率，陳舊標(biāo)本影響檢出陽性率。 連續(xù)出現(xiàn)膿血、黏液、糊狀、米泔樣等形狀異常的糞便。 疑似細(xì)菌性食物中毒患者，大便培養(yǎng)可作為一個輔助檢查手段。 懷疑感染傷寒沙門菌、細(xì)菌性痢疾的患者。 胃腸道感染懷疑霍亂等弧菌感染者。,標(biāo)本采集,無需特別準(zhǔn)備，但最好不要住院超過，在使用抗生素前采集最佳。 自然排便后，可挑取新鮮糞便中有膿血、黏液部分的糞便約，液體糞便取絮狀物，糊狀、米泔樣等性狀異常的糞便盛于無菌的容器中或置于保存液中送檢。,大便標(biāo)本的運送,標(biāo)本采集后應(yīng)正確蓋好，防

13、止泄漏或容器外部留有殘留物。 糞便標(biāo)本：室溫 1 小時內(nèi)送至。 直腸拭子（procto swab）：室溫 1 小時內(nèi)送至。 高度懷疑霍亂弧菌感染的標(biāo)本室溫 1 小時內(nèi)送至，運送必須符合特殊標(biāo)本的安全要求。 堿性蛋白胨水：霍亂弧菌增菌培養(yǎng),膿性分泌物,采集指征： 軟組織有急性化膿性炎癥、化膿性疾病、膿腫、創(chuàng)傷感染等。,標(biāo)本采集,無菌生理鹽水擦洗病灶表面后，用棉拭子采取病灶深部的膿液和分泌物，置運送培養(yǎng)基內(nèi)送檢。 開放性膿腫：盡可能抽吸或?qū)⑹米由钊雮?，緊貼傷口前沿取樣。從膿腫底部或膿腫壁取樣最好。 封閉性膿腫：宜用碘酒、酒精消毒皮膚后，無菌注射器抽取膿液送檢，最好做厭氧培養(yǎng)。 采樣前病灶局部應(yīng)避

14、免用抗菌藥物或消毒劑。 采集量：盡可能多取,生殖道標(biāo)本,標(biāo)本采集,男性：翻起包皮，無菌生理鹽水沖洗尿道口，采集從尿道口溢出的膿性分泌物或用男性專用拭子插入尿道內(nèi)24cm處取分泌物。前列腺液可用前列腺按摩法采集標(biāo)本于無菌試管。 女性：先用生理鹽水局部沖洗，使用窺器擴張陰道，用無菌棉拭子根據(jù)臨床需要采集陰道、宮頸、宮內(nèi)分泌物。 采集之后的標(biāo)本需密封好，盡可能采用轉(zhuǎn)運培養(yǎng)基拭子轉(zhuǎn)運（阿米斯拭子），冷藏（28）保存，懷疑有淋球菌感染的應(yīng)采用常溫保存，盡快送檢。 注：推薦用革蘭染色方法確定細(xì)菌性陰道炎.細(xì)菌培養(yǎng)往往容易誤導(dǎo)。,其他實驗標(biāo)本的采集,尿毒品（urine dope）檢測：使用新鮮尿液 2ml，

15、不需任何特殊處理 其它血清學(xué)實驗：用潔凈干燥的試管采血 2ml，及時送檢 其它需要找細(xì)菌、找隱球菌、找抗酸桿菌的標(biāo)本用無菌容器送檢,標(biāo)本的保存和運送,需培養(yǎng)的標(biāo)本均應(yīng)保存于無菌容器中，防止干燥，盡快送檢。 血液和骨髓接種的需氧和厭氧培養(yǎng)瓶應(yīng)立即送到實驗室，如因某種原因不能及時送檢，應(yīng)將培養(yǎng)瓶放在室溫，切勿放入冰箱或溫箱，否則將影響實驗結(jié)果。 做培養(yǎng)的尿液標(biāo)本應(yīng)立即送檢或冷藏保存 ，通常不超過 2 小時。尿液標(biāo)本中不得加防腐劑和消毒劑，以免影響檢出率。 培養(yǎng)的大便標(biāo)本應(yīng)盡快送檢，不能立即送檢者應(yīng)放入卡里-布來爾運送培養(yǎng) 基或PH7.0 的磷酸鹽甘油中保存?？芍?2-8 度冰箱保存待檢。 結(jié)核菌培

16、養(yǎng)、真菌培養(yǎng)和一般細(xì)菌培養(yǎng)應(yīng)及時送檢，若不能則保存于 2-8冰箱中。,支原體培養(yǎng)（mycoplasma culture）的標(biāo)本一定要使用阿米斯運送培養(yǎng)基 （2-8冷藏保存 )。 腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌能產(chǎn)生自溶酶，離體后迅速自溶，對寒冷和干燥敏 感。肺炎鏈球菌及流感嗜血桿菌對外界環(huán)境抵抗力低。故需要培養(yǎng)這些菌的標(biāo)本采集后必須立即保溫送檢（25-37），或進(jìn)行床旁接種，切不可置冰箱保存。淋球菌培養(yǎng)標(biāo)本或男女生殖道分泌物和一般分泌物可用阿米斯運送培養(yǎng)基保存。 做院感實驗的培養(yǎng)液或培養(yǎng)基送檢時間不得超過 6h，若樣品保存在 0-4， 則不得超過 24h。 嗜異性凝集試驗、肥達(dá)氏試驗、外斐氏試驗的標(biāo)

17、本分離血清 2-8冷藏送檢。,標(biāo)本的處理,標(biāo)本處理過程中均應(yīng)遵循無菌操作（sterile operation）的原則。 痰培養(yǎng)標(biāo)本的處理：微生物室收到標(biāo)本后分區(qū)劃線接種于血平板和巧克力平板。 中段尿一般培養(yǎng)標(biāo)本的處理：無菌取 10ul 尿液，垂直劃線，35普通培養(yǎng)箱培養(yǎng) 18-24 小時。 大便常規(guī)培養(yǎng)標(biāo)本應(yīng)分區(qū)劃線接種于血平板、麥康凱（MAC）平板、SS平板?；魜y弧菌培養(yǎng)接種于弧菌顯色平板（VIB）。 傷口分泌物（膿液）、前列腺液、穿刺液等標(biāo)本的處理：分區(qū)劃線接種于血平板和MAC平板。 特殊細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本的處理：淋球菌培養(yǎng)接種淋球菌平板，念珠菌培養(yǎng)接種念珠菌顯色平板。 已接種的培養(yǎng)基放CO2培養(yǎng)箱，35培養(yǎng) 18-24h。,培養(yǎng)基的選擇,痰標(biāo)本（血、巧） 傷口分泌物、膿汁（血、MAC） 淋球