1、教 案（四）開課單位：化學(xué)及環(huán)境科學(xué)系課程名稱： 分析化學(xué)實(shí)驗專業(yè)年級：2006級化學(xué)專業(yè)任課教師： 分析化學(xué)課程組教材名稱： 分析化學(xué)實(shí)驗2008-2009學(xué)年第 1 學(xué)期授課內(nèi)容實(shí)驗三 分子熒光法測定羅丹明B的含量 課時安排4學(xué)時教學(xué)目的要求1.掌握熒光法測定羅丹明B含量的基本原理。2.了解F-4500型分子熒光分光光度計的基本構(gòu)造和原理，并能簡單的操作。教學(xué)重點(diǎn)難點(diǎn)教學(xué)方法手段教學(xué)內(nèi)容提綱課外學(xué)習(xí)要求預(yù)習(xí)下一實(shí)驗。教學(xué)后記實(shí)驗三 分子熒光法測定羅丹明B的含量一、實(shí)驗原理羅丹明B在水中是強(qiáng)的熒光物質(zhì)，并且在低濃度時，熒光強(qiáng)度與羅丹明B濃度呈正比：If=kc基此，測定一系列已知濃度的羅丹明B

2、的熒光強(qiáng)度，然后以熒光強(qiáng)度對羅丹明B濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線，再測定未知濃度羅丹明B的熒光強(qiáng)度，把它代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求出其濃度。圖1 羅丹明B的分子結(jié)構(gòu)二、儀器與試劑1儀器 F-4500型分子熒光分光光度計；1000 mL容量瓶2只，100 mL的容量瓶12支，1 mL的吸量管1支。2試劑 （1）110-2 gL-1的羅丹明B儲備液：準(zhǔn)確稱取1.0000 g 羅丹明B，加用二次蒸餾水定容至100 mL，將此溶液稀釋100 倍就得到10-4 gL-1的羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)溶液。三、實(shí)驗步驟1系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 取11只100 mL的容量瓶分別加入10-2 gL-1的羅丹明B儲備液0，0.10，0.20，0.30，

3、0.40，0.50，0.60，0.70，0.80，0.90，1.00 mL，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。2繪制激發(fā)光譜和發(fā)射光譜 在300600 nm范圍內(nèi)掃描激發(fā)光譜；在400700 nm范圍內(nèi)掃描熒光發(fā)射光譜。3繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 將激發(fā)波長固定在556 nm，熒光發(fā)射波長固定在573 nm處，測定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光發(fā)射強(qiáng)度。4未知試樣的測定 準(zhǔn)確移取一定量110-2 gL-1 的羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)溶液于100 mL的容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，配制成未知樣品。在標(biāo)準(zhǔn)系列溶液同樣條件下，測定未知樣品的熒光發(fā)射強(qiáng)度。5繪制熒光強(qiáng)度If對羅丹明B溶液濃度c的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線求算未知試樣的濃度。四、數(shù)據(jù)處理1.原始數(shù)據(jù)濃度（10-4 mgmL-1）0123456789x熒光強(qiáng)度扣除空白2.標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制和未知樣品含量計算。五、注意事項1.羅丹明B的濃度不要太高。2. 實(shí)驗結(jié)束后，檢查儀器是否正常，關(guān)閉是否正確。六、思考題：1.為什么羅丹明B會發(fā)熒光？