1、布魯氏菌病檢驗方法：依據(jù)標準：GB/T18646-2002,適用范圍 本標準規(guī)定了動物布魯氏菌病的診斷技術。 本規(guī)定的虎紅平板凝集試驗、乳牛全乳環(huán)狀試驗適用于家畜布病田間篩選試驗和乳牛場布病的監(jiān)測及診斷泌乳母牛布病的初篩試驗；試管凝集試驗和補體結合試驗適用于診斷羊種、牛種和豬種布病感染的家畜。 本標準規(guī)定的試管凝集試驗不適用于犬種和綿羊副睪種布病感染家畜的檢疫。,虎紅平板凝集試驗,材料準備,抗原、標準陽性血清、陰性血清由指標單位提供，按說明用。 受檢血清應新鮮，無明顯蛋白凝塊，無溶血和無腐敗氣味。 準備一塊潔凈玻璃板，畫成若干個4厘米小格或虎紅平板凝集試驗卡片。 吸管或移液器，適于滴加0.03

2、ml（即300l）液體。 牙簽或火柴桿供攪拌用。,操作方法,將玻璃板上各格標記受檢血清號(或在布病反映卡上操作)，然后加相應血清0.03ml。圖1. 在受檢血清旁滴加抗原0.03ml。 用牙簽類小棒攪動血清和抗原使之混合。圖2 每次試驗應設陰性、陽性血清對照,圖 1,圖 2,結果判定,判定結果前最好將抗原與血清混合物搖動幾下.如圖3. 在陰性、陽性血清對照成立的條件下，方可對被檢血清進行判定。 被檢血清在4分鐘內出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象者判為陽性（+），無凝集現(xiàn)象，呈均勻粉紅色者判為陰性（）。圖4.圖5 每份被檢血清在規(guī)定時間內出現(xiàn)凝集反應者判為陽性，不出現(xiàn)凝集為陰性反應。,圖3,陽性,陰性,圖

3、 4,陰性,陽性,圖5,注意事項：,本抗原適合于大數(shù)量田間檢疫和篩選診斷試驗用。 本試驗出現(xiàn)陽性反應的動物，需經補體結合試驗或其它輔助試驗方可定性。 本抗原使用前應充分搖勻，方可使用。 凡本抗原出現(xiàn)污染或搖不散的凝集塊者不得使用。,布魯氏菌病乳環(huán)試管凝集試驗,布病全乳環(huán)狀抗原，由指標單位提供，按說明用。 乳樣 受檢乳樣須為新鮮全乳。 采乳樣時應將母畜的乳房用溫水洗凈、擦干，然后將乳液擠入潔凈的器皿中。 采集的乳樣夏季時應于當日內檢查；保存于2時，7d內仍可適用。 需要器具有：水浴鍋、100l移液器、1000l移液器、小試管、試管架、移液器槍頭、乳環(huán)抗原等。,材料準備：,操作方法,取乳樣1ml，

4、加于滅菌凝集試驗管內。 取充分震蕩混合均勻的全乳環(huán)狀抗原1滴（約50l）加入乳樣中充分混勻。 置3738水浴中60min。 加熱后取出試管勿使震蕩，立即進行判定。,結果判定,強陽性反應（+），乳柱上層乳脂形成明顯紅色環(huán)帶，乳柱白色，臨界分明； 陽性反應（+），乳脂層的環(huán)帶呈紅色，但不顯著，乳柱略帶顏色； 弱陽性反映（+）乳脂層的環(huán)帶顏色較淺，但比乳柱上顏色略深； 疑似反映（）乳脂層的環(huán)帶顏色不明顯，于乳柱分界不清，乳柱不褪色； 陰性反映（）乳柱上層無任何變化，乳柱顏色均勻。,乳環(huán)試驗陽性,乳環(huán)試驗陽性,乳環(huán)試驗陰性，乳汁顏色均勻，未見紅色乳環(huán),布魯氏菌病試管凝集試驗,材料準備,稀釋液：0.5%

5、石碳酸生理鹽水。檢驗羊血清時用含0.5%石碳酸的10%鹽溶液，如果血清稀釋用含0.5%石碳酸的10%鹽溶液，抗原的稀釋亦用含0.5%石碳酸的10%鹽溶液。 1.2抗原、陽性血清、陰性血清由指標單位提供，按說明書使用。 1.3 凝集試驗管（三分管）、試管架、吸管及溫箱等。,3分是英制管道直徑長度的叫法，換算成毫米為9.525mm，這里指內徑約為10mm試管,操作方法,1.按常規(guī)方法采血分離血清。 2.運送和保存血清樣品時防止凍結和受熱，以免影響凝集價。若3d內不能送檢，按每9ml血清加1ml5%石碳酸生理鹽水防腐，也可冷藏方法運送血清。 3.被檢血清的稀釋 以羊和豬為例，每份血清用4支凝集試管。

6、 3.1 第1管標記檢驗編碼后加1.15mL稀釋液。 3.2 第24管各加入0.5mL稀釋液。 3.3 然后向第1管內加入0.1mL被檢血清，并混合均勻。充分混勻后棄去混合液0.25mL。,3.4 取0.5ml混合液加入第2管，混合均勻。 3.5 再吸第2管混合液0.5mL至第3管，如此倍比稀釋至第4管，從第4管棄去混勻液0.5mL。 3.6 稀釋完畢，從第1至第4管的血清稀釋度分別為1:12.5、1:25、1:50和1:100。 3.7 牛、馬、鹿、駱駝血清稀釋法與上述基本一致，差異是第1管加1.2mL稀釋液和0.05mL被檢血清。,3.8 將0.5mL稀釋好（具體稀釋倍數(shù)參照試劑生產廠家的

7、要求，一般是1：10）的抗原加入已稀釋好的各血清管中，并振搖均勻，羊和豬的血清稀釋則依次變?yōu)?:25、1:50、1:100和1:200，牛、馬和駱駝的血清稀釋度則依次變?yōu)?:50、1:100、1:200和1:400。 大規(guī)模檢疫時也可只用2個稀釋度，即牛、馬、鹿、駱駝用1：50和1：100，豬、山羊、綿羊和狗用1:25和1:50。,布魯氏菌病試管凝集反應試驗（羊、豬）,吸0.5ml,布魯氏菌病試管凝集反應試驗（牛）,吸0.5ml,3.9 每次試驗均應設陽性血清、陰性血清和抗原對照， a)陰性血清對照：陰性血清的稀釋和加抗原的方法與被檢血清相同。 b)陽性血清對照：陽性血清須稀釋到原有滴度，加抗

8、原的方法與被檢血清相同。 c)抗原對照：稀釋好的抗原液0.5ml,再加0.5ml稀釋液，觀察抗原是否有自凝現(xiàn)象。 3.10 將稀釋好各管置3740溫箱24小時，取出檢查并記錄結果。,結果判定,1供判定參照比濁管制備方法略 2 結果判定 2.1凝集成度分為： 參照比濁管，按各試管上層液體清亮度判讀 菌體完全凝集，100%下沉，上層液體100%清亮； 菌體幾乎完全凝集，上層液體75%清亮； 菌體凝集顯著，液體50%清亮； 凝集物有沉淀，液體25%清亮； 凝集物無沉淀，液體均勻混濁。,2.2牛、馬、鹿、駱駝1：100血清稀釋，豬、山羊、綿羊和狗1：50血清稀釋，出現(xiàn)“”以上凝集現(xiàn)象時，被檢血清判定為陽性。 2.3牛、馬、鹿、駱駝1：50血清稀釋，豬、山羊、綿羊、狗1：25血清稀釋，出現(xiàn)“”以上凝集現(xiàn)象時，被檢血清判定為可疑反應。 可疑反應家畜經34周后重檢，如果仍為可疑，該牛