1、凝集試驗(yàn),1,概念,顆粒性抗原與相應(yīng)抗體，或表面包被抗原（抗體）的顆粒狀物質(zhì)與相應(yīng)的抗體（抗原）在電解質(zhì)存在的條件下相互結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集團(tuán)現(xiàn)象。,2,類型,直接凝集試驗(yàn) 玻片法測(cè)ABO血型（3） 試管法 間接凝集試驗(yàn) 正向間接凝集試驗(yàn)測(cè)RF（4） 反向間接凝集試驗(yàn)測(cè)HBsAg（1） 間接凝集抑制試驗(yàn)測(cè)HCG（2）,3,1.紅細(xì)胞 2.聚苯乙烯膠乳顆粒,載體顆粒：,反向間接凝集反應(yīng),4,直接凝集試驗(yàn)（玻片法）-測(cè)ABO血型,5,原理,天然的顆粒性抗原（如細(xì)胞、細(xì)菌等）與相應(yīng)抗體在適宜條件下反應(yīng)，出現(xiàn)肉眼可見的凝集物，稱為直接凝集反應(yīng)。 玻片法屬于定性試驗(yàn)。,6,7,主要的試劑和器材,抗A

2、血型定型試劑 抗B血型定型試劑 攪拌棒 玻片,8,步驟,取玻片1塊，左上角和右上角分別標(biāo)上“A”和“B” 用采血針采指尖血（左手無名指尺側(cè)），將血滴在玻片的兩端。 在兩血滴上分別滴上抗A標(biāo)準(zhǔn)血清和抗B標(biāo)準(zhǔn)血清，用攪拌棒攪勻。 手持玻片，前后旋轉(zhuǎn)搖動(dòng)，促使血清與紅細(xì)胞充分混合，用肉眼觀察有無凝集。,9,結(jié)果觀察和判斷,有凝集時(shí)紅細(xì)胞相互聚集成團(tuán)，出現(xiàn)大小不等的顆粒。,10,注意事項(xiàng),玻片應(yīng)潔凈、干燥、中性，以防止和減少非特異性凝集。 室溫低于10時(shí)，易出現(xiàn)冷凝集而造成的結(jié)果。,11,正向間接凝集試驗(yàn)測(cè)RF,12,原理（膠乳凝集試驗(yàn)）,類風(fēng)濕因子（RF）是一組抗變性IgG的自身抗體，它能與人或動(dòng)物

3、的變性IgG結(jié)合，而不與正常人IgG發(fā)生凝集反應(yīng)。 將處理過的人IgG與膠乳顆粒共價(jià)交聯(lián)，使其吸附于膠乳顆粒載體上，稱為致敏膠乳顆粒。當(dāng)待檢血清中有RF時(shí)，則與致敏膠乳顆粒上的變性IgG發(fā)生反應(yīng)，出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。,13,（正向）間接凝集反應(yīng)原理示意圖,（變性IgG）,14,主要的試劑和器材,類風(fēng)濕膠乳診斷試劑 RF陰性對(duì)照 RF陽性對(duì)照 反應(yīng)板 攪拌棒,15,步驟,取陽性血清、陰性血清各1滴于反應(yīng)板上，然后分別加類風(fēng)濕膠乳診斷試劑1滴。 用攪拌棒充分混勻后，輕輕搖動(dòng)反應(yīng)板23min，觀察結(jié)果。,16,結(jié)果觀察和判斷,在室內(nèi)的光線下觀察，有清晰的凝集顆粒出現(xiàn)，且液體澄清者為RF陽性 若需做半定量測(cè)

4、定，可將血清作倍比稀釋，重復(fù)上述測(cè)定，以出現(xiàn)凝集的血清最高稀釋度為RF的效價(jià)（滴度）。,17,反向間接凝集試驗(yàn)-測(cè)HBsAg,18,原理,將抗體致敏的紅細(xì)胞與樣本中相應(yīng)抗原作血凝試驗(yàn)，觀察紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，用以判斷樣本中相應(yīng)抗原的有無及其效價(jià)。,反向間接凝集反應(yīng)原理示意圖,19,主要的試劑和器材,HBsAg診斷血球 HBsAg稀釋液 HBsAg待檢血清 96孔V型凝集板,20,步驟,待檢血清的倍比稀釋：在凝集板的12個(gè)孔中依次加入25l HBsAg稀釋液，用加樣槍吸取HBsAg待檢血清25l，將血清在12孔中依次倍比稀釋成1:2，1:4，1:8，1:16，1:32，1:64，1:128，1:25

5、6，1:512，1:1024，1:2048，1:4096。 在上述各孔中依次加HBsAg診斷血球25l，混勻1min，置37溫浴1h，觀察結(jié)果。,21,結(jié)果觀察和判斷,紅細(xì)胞凝集強(qiáng)度分級(jí) ：紅細(xì)胞沉積于孔底； ：紅細(xì)胞沉積于孔底，周圍有散在少量凝集； ：紅細(xì)胞形成片層凝集，面積較小，邊緣較松散； ：紅細(xì)胞形成片層凝集，面積略多于； ：紅細(xì)胞形成片層凝集，均勻布滿孔底，或邊緣 皺縮如花邊狀。 出現(xiàn)“+”以上凝集強(qiáng)度判斷為陽性結(jié)果，以出現(xiàn)“+”凝集程度的血清最高稀釋度為該血清HBsAg的效價(jià)。,血凝反應(yīng)強(qiáng)度示意圖,22,注意事項(xiàng),器材必須十分潔凈，否則對(duì)結(jié)果影響較大。 不能使用溶血、污染細(xì)菌的待檢

6、血清，且待檢血清中不能含紅細(xì)胞。 試驗(yàn)的靈敏度與致敏紅細(xì)胞濃度有關(guān)，以0.25時(shí)的靈敏度最高，但不易觀察結(jié)果，一般選用0.5濃度為宜。 加致敏紅細(xì)胞懸液前應(yīng)先搖勻，以免影響靈敏度。 混勻不少于1min，以免因混合不均出現(xiàn)不清晰的凝集模式。,23,間接凝集抑制試驗(yàn)測(cè)HCG,24,原理,將含有可溶性抗原的待檢樣本先與相應(yīng)抗體（限量）混合，充分作用后再加入抗原致敏的膠乳顆粒，因抗體已與樣本中的可溶性抗原結(jié)合，無多余的抗體與膠乳顆粒發(fā)生反應(yīng)，故不再出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，稱膠乳凝集抑制試驗(yàn)。 本試驗(yàn)以檢測(cè)絨毛膜促性腺激素（HCG）的免疫妊娠試驗(yàn)為例。,25,26,主要的試劑和器材,妊娠試劑抗血清（抗HCG） 妊娠膠乳試劑 HCG待測(cè)尿液 反應(yīng)板 攪拌棒,27,步驟,將待檢尿液（HCG陽性）和陰性尿（用HBsAg稀釋液代替）分別取1滴于反應(yīng)板上。 各加1滴妊娠試劑抗血清，用攪拌棒攪勻，手持反應(yīng)板，前后旋轉(zhuǎn)搖動(dòng)1min（充分）。 在上述液體上各加1滴膠乳抗原，用攪拌棒攪勻，再輕搖1015min，觀察結(jié)果。,28,結(jié)果觀察與判斷,陰性對(duì)照應(yīng)出現(xiàn)明顯的均勻一致的凝集顆粒，液體澄清，否則試驗(yàn)無效。 陽性對(duì)照應(yīng)出現(xiàn)均勻一致的膠乳狀。 待檢樣本如出現(xiàn)明顯的凝集為HCG陰性；如不出現(xiàn)凝集，呈均勻膠乳狀為HCG陽性