1、實(shí)驗(yàn)三 主要內(nèi)容 （一）細(xì)菌的人工培養(yǎng) （二）正常人體及環(huán)境中細(xì)菌的檢查 （三）理化生物因素對細(xì)菌的影響,細(xì)菌的生長條件包括：營養(yǎng)；適宜溫度；一定的酸堿度；適當(dāng)?shù)臍怏w環(huán)境；滲透壓。 因此，可根據(jù)細(xì)菌對營養(yǎng)、PH、滲透壓的要求制備細(xì)菌培養(yǎng)基。把細(xì)菌接種于培養(yǎng)基后，放恒溫 （一般為37）箱內(nèi)培養(yǎng)一定時(shí)間（通常1824h），細(xì)菌便可大量繁殖，可進(jìn)一步觀察和研究其生物學(xué)特性。,細(xì)菌的人工培養(yǎng),細(xì)菌的人工培養(yǎng)程序?yàn)?1. 估計(jì)標(biāo)本中細(xì)菌種類、數(shù)量及培養(yǎng)目的等，選用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基及接種技術(shù)。 2. 適宜的氣體環(huán)境，37，1824h。,液體 培養(yǎng)基,斜面 培養(yǎng)基,接種技術(shù)一般分為分離培養(yǎng)接種法和純種細(xì)菌接種法

2、。,細(xì)菌的接種技術(shù),被檢材料如糞便、痰、膿汁、尿液等?；祀s有多種細(xì)菌，平板劃線法可使混雜的細(xì)菌在瓊脂平板表面分散生長，各自形成不同的菌落，再根據(jù)菌落的形態(tài)特征，挑選單個(gè)菌落繼續(xù)培養(yǎng)，以此分離獲得純種細(xì)菌，用于進(jìn)一步研究、鑒定或保存。 平板劃線的方法根據(jù)待檢標(biāo)本中細(xì)菌的數(shù)量來選擇，可分為分段劃線法和連續(xù)劃線法兩大類。,（一）分離培養(yǎng)接種法-平板劃線法：,第一區(qū)劃線,接種環(huán)滅菌,第二區(qū)劃線,接種環(huán)滅菌,第三區(qū)劃線,接種環(huán)滅菌,1分段劃線法（分區(qū)劃線法）： 檢查材料中含菌量較多時(shí)多用此法，以求獲得孤立菌落。,2. 連續(xù)劃線法： 檢查材料中含菌量較少時(shí)可用本法。,（二）純種細(xì)菌接種法 細(xì)菌經(jīng)分離培養(yǎng)出

3、單個(gè)菌落后，常需再移種至其他培養(yǎng)基中，以進(jìn)一步鑒定或保存菌種。根據(jù)接種培養(yǎng)基之物理性狀，純種細(xì)菌接種法可分為斜面培養(yǎng)基接種、液體培養(yǎng)基接種和半固體培養(yǎng)基穿刺接種法三類。,斜面培養(yǎng)基接種法 一般用于純培養(yǎng)。從平板上挑取單個(gè)菌落接種至斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后獲得大量純種細(xì)菌（有菌苔生長），可進(jìn)一步對細(xì)菌進(jìn)行鑒定或作為菌種保存。,正常人體及環(huán)境中細(xì)菌的檢查（4人/組） 1. 皮膚細(xì)菌的檢查,右手食指在平板培養(yǎng)基表面相應(yīng)部位輕輕涂抹,普通培養(yǎng)基,4,3,2,1,2.水中細(xì)菌檢查,無菌空平皿,污水1ml,傾注約50瓊脂培養(yǎng)基1管（約14ml），搖勻。,傾注普通瓊脂培養(yǎng)基時(shí)溫度勿太高或太低！,3. 空氣中細(xì)菌

4、的檢查,打開皿蓋，暴露在空氣中510分鐘,普通培養(yǎng)基,4. 正常人體咽喉部細(xì)菌的檢查,用滅菌棉拭在被檢查者咽喉部輕輕涂擦后涂于血瓊脂培養(yǎng)基一側(cè)，然后改用滅菌接種環(huán)作分段劃線接種。 （做好標(biāo)記）,血瓊脂培養(yǎng)基,4,3,2,1,（1）密集劃線法接種細(xì)菌：用無菌接種環(huán)取細(xì)菌培養(yǎng)物少許，先在平板瓊脂表面中央豎劃一條線；垂直該線作平行密集劃線，劃滿平板；將平板轉(zhuǎn)動(dòng)90度，再作平行密集劃線，劃滿平板。,理化生物因素對細(xì)菌的影響（4人/組） 1. 紫外線對細(xì)菌的影響,照射,理化生物因素對細(xì)菌的影響（4人/組） 1. 紫外線對細(xì)菌的影響,（2）在紫外線燈下將平皿蓋拉開一半，另半面由平皿蓋遮住，照射20分鐘。 （做好標(biāo)記）,照射,2. 細(xì)菌對藥物的敏感性試驗(yàn)（紙片法）,（1）以密集劃線法接種細(xì)菌于整個(gè)平板 （2）用無菌鑷子分別夾取含生理鹽水及不同抗生素的濾紙片，輕輕貼在平板表面，并用鑷子稍壓，使之貼緊，濾紙片之間距離應(yīng)基本相等。,注意無菌操作！,結(jié)果判定 將平板置37溫箱培養(yǎng)24小時(shí)后取出觀察濾紙片周圍的抑菌圈，用