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1、動物細胞工程,動物細胞融合與單克隆抗體,第 三 課 時,融合的原生質體AB,再生細胞壁,雜種細胞AB,雜種植株,脫分化,愈傷組織,再分化,原生質體B,原生質體A,去 壁,人 工 誘 導,植物細胞A,植物細胞B,回顧植物體細胞雜交過程,去 壁,一、動物細胞融合,也稱細胞雜交。 是指兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的過程。,雜交細胞：融合后形成的具有兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞。,1、概念：,動物細胞融合,細胞膜的流動性,4、原理：,3、誘導融合方法：,物理法:,化學法:,生物法：,滅活的病毒,離心、振動、電刺激,聚乙二醇（PEG）,2、過程：,思考與探究：P55T1,是否去細胞壁,為什么滅

2、活的病毒能作為誘導劑？(P52) 不滅活的病毒能作為誘導劑嗎？,生物法：,滅活的病毒,喪失感染性,（不感染細胞）,保留融合活性,仙臺病毒,紫外線,5、動物細胞融合技術的意義,打破生殖隔離，使遠緣雜交成為可能； 廣泛應用多個學科領域； 重要用途：制備單克隆抗體。,動物細胞融合,二、單克隆抗體,1.抗體是由何種細胞產生的？ .一個漿細胞能分泌多種抗體嗎？ .簡述獲得抗體的傳統(tǒng)途徑？ .這種方法獲得的抗體有什么缺陷？,思考,單克隆抗體,傳統(tǒng)血清抗體的制備：,方法：向動物體內反復注射某種抗原，然后從動物血清中分離所需要的抗體。,特異性差、純度低；產量低、反應不夠靈敏,傳統(tǒng)血清抗體的制備的缺陷：,、單克

3、隆抗體概念,由單個B淋巴細胞（漿細胞）經過無性繁殖（克?。?，形成基因型相同的細胞群，由這一細胞群所產生的化學性質單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。,那么，如何大量獲得化學性質單一、特異性強的抗體？（即單克隆抗體）,單克隆抗體的制備,一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體,雜種細胞,動物細胞培養(yǎng)技術,、設計思路：,動物細胞融合,單克隆抗體,既能產生專一的抗體，又能大量繁殖,單克隆抗體的制備,骨髓瘤細胞（癌細胞）能無限增殖,(雜交瘤細胞),體內或體外,3、單克隆抗體的制備,單克隆抗體的制備過程,特異性強 靈敏度高,(兩次篩選),既能產生專一的抗體，又能大量繁殖,單克隆抗體的制備,4、制備過程中：,1.注射抗原的目的是什么？ 2.誘導其融合的方法有哪些？ 3.融合后(兩兩融合)培養(yǎng)液中有幾類細胞？ 4.怎樣篩選出雜交瘤細胞，雜交瘤細胞有何優(yōu)點？ 5.大量增殖雜交瘤細胞獲得單抗的方法?,單克隆抗體,5、單克隆抗體的應用：,作為診斷

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