真菌基礎(chǔ)知識(shí)概述和產(chǎn)品介紹,市場部,Part 5 聯(lián)合檢測,侵襲性真菌感染概述,Part ,4,真菌是指有細(xì)胞壁、不含葉綠素、無根莖葉，以寄生或腐生方式生存，按有性或無性方式進(jìn)行繁殖的真核細(xì)胞類微生物。 真菌在自然界中分布極為廣泛，將近有20萬種，大多對(duì)人無害，僅有150種可引起人和動(dòng)物致病。,真菌定義,真菌按形態(tài)可分為單細(xì)胞和多細(xì)胞兩大類。 1、酵母菌（yeast)） 屬于單細(xì)胞真菌，包括酵母菌和類酵母菌兩類。目前已知有1000多種。類酵母菌通過母細(xì)胞長出芽體繁殖，并延長成芽體，稱為假菌絲。假菌絲聯(lián)接在一起，稱為假菌絲體。,大量菌絲和成群芽孢,真菌分類,類酵母菌菌落形態(tài)和酵母型真菌的菌落基本相似，不同的是可有假菌絲伸進(jìn)培養(yǎng)基內(nèi)，故又稱為假絲酵母菌（念珠菌，Candida）。 酵母菌生殖方式有有性生殖和無性生殖兩種。假絲酵母菌（念珠菌）不能進(jìn)行有性生殖。 酵母菌中對(duì)人致病的主要是白色假絲酵母菌和新生隱球菌等。,白色假絲酵母菌,隱球菌,2、霉菌（mould） 又稱絲狀真菌（filamentous fungi），屬于多細(xì)胞真菌，有菌絲和孢子。菌絲伸長分枝，交織成團(tuán)，在營養(yǎng)基質(zhì)上形成絨毛狀、棉絮狀或蜘蛛網(wǎng)形絲狀菌體。霉菌的菌絲呈長管、分枝狀，無橫隔壁，具有多個(gè)細(xì)胞核，并會(huì)聚成菌絲體。霉菌的種類很多，約有45000種以上。常見的霉菌有根霉、毛霉、脈孢菌、曲霉和青霉。,煙曲霉,黃曲霉,土曲霉,3、雙相真菌（dimorphic fungi） 在不同的溫度條件下可產(chǎn)生不同的形態(tài)學(xué)特征，如在人體內(nèi)部寄生或在37度條件下為酵母相，而在室溫條件下則為霉菌相（菌絲相）。主要包括幾種致病菌：皮炎芽生菌、莢膜組織胞漿菌、巴西副球孢子菌、粗球孢子菌、申克氏孢子絲菌、馬爾尼菲青霉等。,馬爾尼菲青霉,皮炎芽生菌,侵襲性真菌病（invasive fungal disease，IFD）即深部真菌病，是指致病性真菌侵犯皮下組織、黏膜、肌肉和內(nèi)臟器官等所引起的真菌感染性疾病。 真菌寄生是指臨床上患有慢性肺部疾病的免疫功能正常者，大多數(shù)為真菌在呼吸道寄生，稱為定植。 只有當(dāng)機(jī)體免疫功能下降或者粘膜屏障破壞或者菌群嚴(yán) 重失調(diào)，真菌可進(jìn)入血液或組織引起感染。,侵襲性真菌病,5/19/2019,1、侵襲性肺真菌病（曲霉、念珠菌 、隱球菌 、肺孢子菌 、毛霉） 真菌性肺炎占所有侵襲性真菌病的60%，居首位，占醫(yī)院獲得性肺炎的10-15% 2、真菌性敗血癥（念珠菌、曲霉、隱球菌） 粒缺的血液腫瘤和HSCT及ICU病房的非粒缺患者，美國病死率40% 3、真菌性腦膜炎（新型隱球菌、曲霉、毛霉） 4、真菌性腸炎（念珠菌（最多）、放線菌、毛霉、曲霉、隱球菌） 5、真菌性尿路感染 （皮炎牙生菌、組織包漿菌、球孢子菌） （念珠菌、曲霉、隱球菌、地絲菌、青霉菌） 6、真菌性陰道炎（念珠菌） 7、真菌性角膜炎和眼內(nèi)炎（念珠菌）,常見侵襲性真菌病,根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)告侵襲性真菌感染（ invasive fungal infection，IFI） 占醫(yī)院獲得性感染的8% 15%1，其中以念珠菌為主的酵母樣真菌和以曲霉為主的絲狀真菌是IFI 最常見的病原菌，分別占91.4% 和5.9%2-3。根據(jù)我國醫(yī)院感染監(jiān)測網(wǎng)分析，醫(yī)院真菌感染從90年代初期的 13.9%上升至90年代末期的 24.4%。深部真菌病發(fā)病率每年增長約10%-20%。 1 Erjavec Z，Kluin-Nelemans H，Verweij PE Trends in invasive fungal infections，with emphasis on invasive aspergillosisJ Clin Microbiol Infect，2009，15( 7) : 625-633 2 Lau A，Chen S，Sleiman S，et al Current status and future perspectives on molecular and serological methods in diagnostic mycologyJ Future Microbiol，2009，4( 9) : 1185-4222 3 Bellocchio S，Bozza S，Montagnoli C，et al Immunity to Aspergillus fumigatus: the basis for immunotherapy and vaccinationJ Med Mycol，2005，43( S1) : S181-S188,侵襲性真菌感染現(xiàn)狀,盡管新的抗真菌藥物不斷問世，臨床醫(yī)師對(duì)IFI 的診治也日趨重視，但I(xiàn)FI 的死亡率仍居高不下。侵襲性念珠菌?。╥nvasive candidiasis，IC）的病死率可達(dá)30% 50%，而侵襲性曲霉?。?invasive aspergillosis，IA）的病死率高達(dá)50% 80%，未獲得有效治療的患者死亡率幾乎達(dá)100% 4 。這主要是因?yàn)槲茨艿玫皆缙谠\斷和及時(shí)治療。 4 Einsele H，Loeffler J Contribution of new diagnostic approaches to antifungal treatment plans in high-risk haematology patientsJ Clin Microbiol Infect，2008，14( Suppl 4) : 37-45,目前深部真菌病的診斷率尚遠(yuǎn)低于實(shí)際感染率，主要是各地醫(yī)院發(fā)展很不平衡，真菌檢測技術(shù)及水平參差不齊，提高深部真菌病診治水平的關(guān)鍵在于建立規(guī)范、可靠的實(shí)驗(yàn)室檢查方法以及實(shí)施可行、相對(duì)統(tǒng)一的診斷標(biāo)準(zhǔn)，以利于臨床早期診斷、及時(shí)治療，降低病死率。,侵襲性真菌病之所以診斷困難，主要是因?yàn)? 1、臨床表現(xiàn)不典型，易被基礎(chǔ)疾病所掩蓋。 2、確診常需侵入性手段獲得組織標(biāo)本，侵入性操作常因患者的病情所限難以實(shí)施。 3、真菌檢測項(xiàng)目開展相對(duì)不足或滯后。,目前有關(guān)真菌實(shí)驗(yàn)室檢查和診斷手段主要包括： 1、顯微鏡直接檢查（包括涂片和病理切片） 2、培養(yǎng)法（包括小培養(yǎng)） 3、血清學(xué)試驗(yàn)（含真菌結(jié)構(gòu)及抗原） （1）抗原：曲霉菌的半乳甘露聚糖（GM試驗(yàn)）；(1，3)- -D 葡聚糖試驗(yàn)（G 試驗(yàn)） 、念珠菌甘露聚糖（MA試驗(yàn)）和隱球菌莢膜多糖（ GXM） （2）抗體：念珠菌IgM、IgG抗體，曲霉菌IgM、IgG抗體 4、核酸檢測（PCR等）,侵襲性真菌感染診斷方法,臨床診斷 實(shí)驗(yàn)室微生物檢查 病史（宿主因素） 培養(yǎng)法 非培養(yǎng)法 癥狀（高熱或體溫不升等） 影像學(xué)（肺、顱腦等） 培養(yǎng)鑒定 形態(tài)學(xué) 血清學(xué) 分子生物學(xué) +藥敏 涂片 病理 PCR （種） （種） G試驗(yàn)（界） DNA GM試驗(yàn)（屬） RNA MA試驗(yàn)（屬） 隱球菌抗原（種） 念珠菌 抗體（屬或種） 曲霉菌抗體（屬或種）,真菌病的臨床診斷流程和實(shí)驗(yàn)室方法,真菌全套檢測方案提供者,1、核心產(chǎn)品介紹醫(yī)療器械,IGL-800全自動(dòng)型微生物 快速動(dòng)態(tài)檢測系統(tǒng),2、核心產(chǎn)品介紹體外診斷試劑,GKT-1M GKT-5M,GKT-2M GKT-5M GKT-12M GKT-25M,真菌(1-3)-D檢測,5/19/2019,真菌（1,3）-D 葡聚糖簡介,葡聚糖廣泛存在于真菌細(xì)胞壁中，1,3-D-葡聚糖占真菌壁成分50%以上，是真菌細(xì)胞壁上的特有成分，或稱為真菌的分子標(biāo)志物。,在淺部真菌感染中，1,3-D 葡聚糖未被釋放出來，故其在體液中的量不增高，因此能區(qū)分定植和感染。在念珠菌和曲霉菌細(xì)胞壁中含量較多，對(duì)G試驗(yàn)靈敏。,5/19/2019,真菌（1，3）-D葡聚糖檢測原理,5/19/2019,真菌檢測試劑盒,1,3-D 葡聚糖檢測試劑盒-1M 試劑盒組成 反應(yīng)主劑 A 0.2mL 樣品處理液 B 0.9mL 產(chǎn)品規(guī)格 20人份/盒 1,3-D 葡聚糖檢測試劑盒-5M 試劑盒組成 反應(yīng)主劑 A 0.6mL 樣品處理液 B 0.9mL 反應(yīng)主劑溶解液 C 0.6mL 產(chǎn)品規(guī)格 50人份/盒,2,試劑盒規(guī)格 GKT-2M ：50人份/盒； GKT-5M ：50人份/盒； GKT-12M：50人份/盒； GKT-25M：50人份/盒。,注：不同批號(hào)，不同規(guī)格試劑盒中各組分不可以互換。,堿處理法試劑盒規(guī)格及組成,5/19/2019,結(jié)果判讀,診斷值 血清 臨床解釋 - 陰性值 60pg/ml 無宿主因素和臨床表現(xiàn)可排除侵襲性真菌感染 陽性值 100pg/ml 有宿主因素和/或臨床表現(xiàn)可診斷侵襲性真菌感染 如不具備宿主因素和侵襲性真菌感染臨床癥狀,也 不要輕易診斷 灰色區(qū)間 60-100pg/ml 結(jié)合臨床動(dòng)態(tài)觀察 - 危急值 ：尚不明確，建議將G試驗(yàn)兩次陽性結(jié)果作為危急值報(bào)告。,內(nèi)毒素檢測,Part 3,5/19/2019,細(xì)菌內(nèi)毒素簡介,細(xì)菌內(nèi)毒素（ Endotoxin ）是G-菌細(xì)胞壁上的特有結(jié)構(gòu)，內(nèi)毒素為外源性致熱原，它可激活中性粒細(xì)胞等，使之釋放出一種內(nèi)源性熱原質(zhì)，作用于體溫調(diào)節(jié)中樞引起發(fā)熱。內(nèi)毒素的主要化學(xué)成分為脂多糖（LPS）中的類脂A。,5/19/2019,細(xì)菌內(nèi)毒素檢測原理,內(nèi)毒素檢測原理,5/19/2019,內(nèi)毒素檢測試劑盒,1M-試劑盒組成 反應(yīng)主劑 A 0.2mL 樣品處理液 B 0.9mL 產(chǎn)品規(guī)格 20人份/盒 5M-試劑盒組成 反應(yīng)主劑 A 0.6mL 樣品處理液 B 0.9mL 反應(yīng)主劑溶解液 C 0.6m 產(chǎn)品規(guī)格 50人份/盒,5/19/2019,結(jié)果判讀,診斷值 血清 臨床解釋 - 陰性值 10pg/ml 無宿主因素和臨床表現(xiàn)可排除革蘭陰性菌感染 陽性值 20pg/ml 有宿主因素和/或臨床表現(xiàn)可診斷革蘭陰性菌感染 如不具備宿主因素和革蘭陰性菌感染臨床癥狀,也 不要輕易診斷 灰色區(qū)間 10-20pg/ml 結(jié)合臨床動(dòng)態(tài)觀察 - 危急值 ：尚不明確，建議將內(nèi)毒素試驗(yàn)兩次陽性結(jié)果作為危急值報(bào)告。,曲霉菌半乳甘露聚糖檢測,Part 4,5/19/2019,Lin SJ, et al. J Clin Infect Dis, 2001, 32(3): 358-366,煙曲霉,黃曲霉,黑曲霉,曲霉菌(Aspergillus)是廣泛存在于自然界一種腐生菌，孢子較小直徑2-3um，可在空氣中漂浮，可通過呼吸道進(jìn)入人體。 多種曲霉菌都可引起侵襲性曲霉病，如煙曲霉、黑曲霉、土曲霉、黃曲霉和構(gòu)巢曲霉等。,一、曲霉菌簡介,曲霉菌簡介,5/19/2019,的檢測原理,檢測物質(zhì) 本實(shí)驗(yàn)檢測曲霉菌中的半乳甘露聚糖。 半乳甘露聚糖（Galactomannan，簡寫GM）是曲霉菌細(xì)胞壁上特有的成分，當(dāng)菌絲生長時(shí)，半乳甘露聚糖從薄弱的菌絲頂端釋放，是最早釋放的抗原。 當(dāng)曲霉在深部組織中生長時(shí)，半乳甘露聚糖可釋放入血液，因此檢測病人血液或者是體液中的半乳糖甘露聚糖可以作為早期診斷感染的方法。,5/19/2019,試劑盒組成,試劑盒組成： 酶標(biāo)板 標(biāo)準(zhǔn)品 半乳甘露聚糖抗體 半乳甘露聚糖抗體稀釋液 酶標(biāo)抗體 酶標(biāo)抗體稀釋液 底物溶液 終止液 封板膜 存儲(chǔ)條件：2-8冷藏保存 試劑規(guī)格：96人份/盒,5/19/2019,陽性：GM0.95g/L 陰性：GM0.75g/L 灰區(qū)：0.75GM0.95g/L，建議連續(xù)多次檢測并應(yīng)結(jié)合臨床資料綜合評(píng)價(jià),結(jié)果判讀,聯(lián)合檢測 Part 5,5/19/2019,Suhail Ahmad, Ziauddin U. Khan. Diagnostic value of DNA, (1-3)-D-glucan, and g