急性髓系白血病的免疫表型分析及臨床意義【摘要】 目的 探討成人急性髓細(xì)胞白血病(AML)的免疫表型特征及臨床意義。方法 采用流式細(xì)胞儀對(duì)113例AML患者進(jìn)行免疫表型分析。結(jié)果 髓系抗原表達(dá)陽性率依次為CD13CD33CD15CD14，AML患者CD34陽性表達(dá)率為35.40。113例患者中有28例(24.78)伴有淋系抗原表達(dá)，以CD7多見，表達(dá)陽性率為71.43，其次CD19表達(dá)陽性率為35.71。Ly+AML與LyAML相比較，兩者在個(gè)別形態(tài)學(xué)亞型、臨床體征及CD34表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而在異常染色體核型檢出率方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CD+34組CR率(69.23)較其陰性組(78.05)低，但兩者差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Ly+AML組CR率為52.94(9/17)，低于LyAML組78(39/50)，其中，CD+7組CR率(41.67)與其陰性組(80)相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 AML患者高表達(dá)CD13、CD33，部分患者同時(shí)表達(dá)髓系、淋系抗原；CD34及CD7陽性與治療反應(yīng)顯著相關(guān)。 【關(guān)鍵詞】 急性髓系白血病 免疫表型 骨髓細(xì)胞隨著系列單克隆抗體的應(yīng)用，白血病細(xì)胞免疫分型的廣泛開展，使白血病得到正確的診斷和分型，而免疫標(biāo)記結(jié)合FAB(法、美、英三國學(xué)者制定)形態(tài)學(xué)分型1，對(duì)急性髓系白血病(AML)各亞型的鑒別及特殊類型急性白血病(AL)的發(fā)現(xiàn)、指導(dǎo)治療及判斷預(yù)后有重大意義。本文對(duì)113例急性髓系白血病的免疫分型及臨床特點(diǎn)進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)告如下。1 資料和方法1.1 病例資料 寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院血液科20022007年間的住院初治AML患者113例，男58例，女55例，年齡1476歲，中位年齡39歲。根據(jù)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞化學(xué)染色及免疫分型而確診。FAB分型：M04例，M114例，M230例，M318例，M49例，M528例，M65例，CML急變5例。1.2 免疫表型分析 受檢者抽取骨髓或外周血經(jīng)肝素抗凝，采用活細(xì)胞三色免疫熒光法標(biāo)記，流式細(xì)胞儀檢測(cè)(型號(hào)為FACS Calibur，美國Becton-Dickinson公司生產(chǎn))，通過二維點(diǎn)圖分析抗原表達(dá)情況；所用單克隆抗體均為美國BD公司產(chǎn)品。B淋巴細(xì)胞系單抗：CD10、CD19、CD20；T淋巴細(xì)胞系單抗：CD3、CD5、CD7；髓系單抗：CD13、CD14、CD15、CD33；造血干/祖細(xì)胞單抗：CD34。結(jié)果判定用Cell Quest軟件分析，CD45/SSC設(shè)計(jì)中的白血病細(xì)胞群表面標(biāo)記檢測(cè)陽性率20判斷為陽性。1.3 細(xì)胞遺傳學(xué)檢查 染色體標(biāo)本采自治療前骨髓，用直接培養(yǎng)法和24h短期培養(yǎng)法，按常規(guī)制備染色體并進(jìn)行R顯帶染色分析2030個(gè)中期分裂相，根據(jù)人類細(xì)胞遺傳學(xué)國際命名制(ISCN)(1995)描述核型，至少2個(gè)細(xì)胞存在同樣的染色體增加或結(jié)構(gòu)異常或者3個(gè)細(xì)胞存在同樣的染色體丟失定義為1個(gè)克隆2。1.4 治療方法 除急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)以外的AML患者多采用三尖衫酯堿(HA，23mg/d，共57d)、阿糖胞苷(150300mg/d，共57d)或米托蒽醌(NA，10mg/d，共3d)，阿糖胞苷(150300mg/d，共57d)方案治療，APL患者多采用亞砷酸誘導(dǎo)，少數(shù)患者采用亞砷酸與維甲酸雙誘導(dǎo)治療，參考血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)1判斷完全緩解(CR)或未緩解(NR)。1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 11.5軟件，采用卡方檢驗(yàn)。2 結(jié)果2.1 AML患者CD抗原表達(dá)情況 (表1) 113例均有髓系抗原表達(dá)，多數(shù)表達(dá)23個(gè)髓系抗原。進(jìn)一步分析免疫表型特點(diǎn)，可見髓系抗原表達(dá)率以CD13陽性率最高(94.69)，按陽性率高低依次為CD13CD33CD15CD14。HLA-DR在AML患者中表達(dá)陽性率為45.13，M3患者無HLA-DR陽性表達(dá)。AML患者CD34陽性表達(dá)率為35.40，以M1表達(dá)最高(57.14)，按CD34表達(dá)陽性率高低依次為M1M5M2M0M4M3，M3陽性率最低為16.67。113例患者中有28例(24.78)伴有淋系抗原表達(dá)，以CD7多見，表達(dá)陽性率為71.43，其次CD19表達(dá)陽性率為35.71，28例中各有1例表達(dá)CD20、cCD3。2.2 伴淋系抗原(Ly)表達(dá)的AML患者的特征 (表2) Ly+AML與Ly-AML相比較，兩者在發(fā)病年齡、性別等方面差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但其個(gè)別形態(tài)學(xué)亞型、臨床體征及CD34表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在28例Ly+AML患者中，肝脾腫大的發(fā)生率為46.43(13/28)，而在Ly-AML患者中僅為11.76(10/85)，兩者相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。此外在28例Ly+AML患者中，CD+3416例(57.14)，而在85例Ly-AML患者中，CD+34僅24例(28.24)，兩者相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AML各FAB亞型與淋系抗原表達(dá)有一定的相關(guān)性，CD+7AML患者FAB亞型主要為M0(50)及M1(28.57)，其次為M5、M2及M6，在M3中CD7為陰性表達(dá)。CD+19AML患者FAB亞型主要為M2(23.33)，其次在M5中也有表達(dá)。CD20等淋系抗原在AML中表達(dá)率極低。表1 113例AML患者免疫表型特征（略）2.3 Ly+AML患者細(xì)胞遺傳學(xué)改變的特征 對(duì)8例Ly+AML患者及40例Ly-AML患者進(jìn)行了染色體核型分析，兩者異常染色體核型檢出率分別為62.5(5/8)及72.5(29/40)，相比差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在40例Ly-AML患者中特征性染色體t(15；17)的檢出率為25(10/40)，而在8例Ly+AML患者中則未檢到此特征性染色體。Ly-AML患者中t(8；21)的檢出率為15(6/40)，1例CD+19AML患者中檢到此染色體。表2 Ly+AML與Ly-AML患者特征比較（略）2.4 免疫標(biāo)記與預(yù)后的關(guān)系 (表3)表3 免疫標(biāo)記與預(yù)后的關(guān)系（略）完成12個(gè)療程治療，并有隨訪資料的患者納入統(tǒng)計(jì)。CD+34組CR率(69.23)較其陰性組(78.05)低，但兩者無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但從隨訪資料看，CD+34組18例CR患者中有7例1年內(nèi)復(fù)發(fā)，而CD-34組32例CR患者中僅有4例1年內(nèi)復(fù)發(fā)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Ly+AML組CR率為52.94(9/17)，低于Ly-AML組78(39/50)，但兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中，CD+7組CR率(41.67)與其陰性組(80)相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3 討論 FAB診斷標(biāo)準(zhǔn)是依靠形態(tài)學(xué)和細(xì)胞酶學(xué)對(duì)急性白血病進(jìn)行分型，而免疫分型是針對(duì)細(xì)胞表面標(biāo)志，從造血細(xì)胞克隆進(jìn)化過程中分化抗原表達(dá)的角度來認(rèn)識(shí)白血病細(xì)胞的克隆源性及分化階段，可使白血病診斷的準(zhǔn)確率達(dá)90以上，但免疫標(biāo)記對(duì)AML各亞型分型的鑒別意義有限，只有M0、M6、M7可通過表型確診。國內(nèi)報(bào)道3在髓系抗原標(biāo)記中，表達(dá)陽性率最高的是CD33，而本組資料中，CD13的陽性率最高，達(dá)到94.69，而且在各亞型中的表達(dá)均較高(77.8100)。CD33及CD15的表達(dá)也較高，分別是85.84和65.49，這與其報(bào)道基本一致。一般認(rèn)為CD14是單核細(xì)胞較特異的表面標(biāo)志，與M4、M5相關(guān)，本組資料中CD14在M5的表達(dá)陽性率為17.9，較文獻(xiàn)報(bào)道低，而在M4中未表達(dá)，這與國內(nèi)一些報(bào)道不完全一致3-4。究其原因，可能與白血病細(xì)胞在分化抗原表達(dá)方面具有高度的異質(zhì)性、異源性等特點(diǎn)以及受檢測(cè)方法和所選單抗等影響，抗原伴系表達(dá)、反向表達(dá)或無特異性抗原表達(dá)有關(guān)5。此外M3亞型表型具有一定特征性，常表達(dá)CD33及CD13，而CD34及HLA-DR常呈低表達(dá)，與一般國內(nèi)外報(bào)道結(jié)果相似。 CD34抗原為造血干/祖細(xì)胞標(biāo)志抗原，正常骨髓單個(gè)核細(xì)胞中表達(dá)率一般3，故可以作為檢測(cè)原始細(xì)胞的一個(gè)極好的標(biāo)志。然而并非所有的急性白血病均表達(dá)CD34，本組資料113例AML中有40例CD34陽性，陽性率為35.40，F(xiàn)AB分型主要為M1、M5及M2，故可認(rèn)為CD34抗原主要表達(dá)于不成熟的造血細(xì)胞上，系較早期的造血干細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化所致。CD34在AML中的表達(dá)可能揭示白血病細(xì)胞的惡變程度，不同類型的AML其CD34表達(dá)不盡相同，其中，M3最低僅為16.67，明顯低于其它類型白血病，這與文獻(xiàn)報(bào)道近似3，6。同時(shí)CD34 的表達(dá)對(duì)判斷白血病患者的療效與預(yù)后有一定的意義，大多數(shù)文獻(xiàn)均報(bào)道CD34抗原表達(dá)的AML預(yù)后差7-8，其與AML的低CR及短生存期有關(guān)。本研究結(jié)果表明，CD+34AML患者CR率略低于CD-34組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。從隨訪結(jié)果看，CD+34組在一年內(nèi)的復(fù)發(fā)率明顯高于CD-34組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。至于CD+34組CR低的原因更可能是由于CD+34細(xì)胞多藥耐藥基因產(chǎn)物P糖蛋白表達(dá)，將多種結(jié)構(gòu)、功能與作用不同的化療藥物排出細(xì)胞外，導(dǎo)致對(duì)各種常用的臨床化療藥物產(chǎn)生耐藥所致6。 白血病細(xì)胞的高度異質(zhì)性、分化發(fā)育程序紊亂以及抗原表達(dá)的高度復(fù)雜性，使部分患者造血細(xì)胞可同時(shí)表達(dá)髓系和淋系抗原，其中包括Ly+AML這一類型。本組Ly+AML與Ly-AML患者的臨床特點(diǎn)存在差異，Ly+AML患者中肝脾腫大明顯(13/28)，而Ly-AML患者僅為10/85，兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組患者在染色體異常核型檢出率及治療緩解率方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本組資料還顯示Ly+AML占AML的24.78，淋系抗原中以CD7表達(dá)最高，其次為CD19，這與梁建英9的報(bào)道相似。有學(xué)者認(rèn)為CD+7AML是一類獨(dú)特的AML亞型，具有與CD-7的AML不同的臨床特點(diǎn)、生物學(xué)特征與預(yù)后10-11。CD7抗原為分子量40KD的單鏈糖蛋白，主要表達(dá)在所有胸腺細(xì)胞、大部分外周血T淋巴細(xì)胞和起源于T淋巴系的白血病細(xì)胞表面，但隨著免疫分型的廣泛開展及分子生物學(xué)研究的發(fā)展，目前認(rèn)為CD7抗原并非T淋巴細(xì)胞的特異性標(biāo)志抗原，多能干細(xì)胞、髓系干細(xì)胞與微分化型AML細(xì)胞等均可表達(dá)CD7抗原10。CD+7AML與AML的FAB亞型有一定相關(guān)，本組資料中，CD+7AML患者占AML的17.70，主要在M0、M1中高表達(dá)，也可在M2、M5及M6中表達(dá)，其在M3中未表達(dá)，與文獻(xiàn)報(bào)道一致9，12。CD+7AML患者與Ly-AML患者比較，雖然總的染色體核型異常檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，但其t(15；17)檢出率低于Ly-AML，從這一點(diǎn)也可看出CD7在M3中表達(dá)極低。從治療結(jié)果看CD+7組治療CR率為41.67，較CD-7組明顯降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與文獻(xiàn)報(bào)道一致12。CD19雖然是B淋巴細(xì)胞的特異性抗原，但近來人們發(fā)現(xiàn)CD19在AML中也有表達(dá)。本組資料中，CD+19AML患者占AML的8.85，主要見于M2型。潘湘濤等13報(bào)道CD19與t(8；21)密切相關(guān)，且臨床治療結(jié)果表明t(8；21)和CD19均是M2預(yù)后好的指標(biāo)。本組資料中，CD+19AML患者僅2例做了染色體檢查，其中1例檢到t(8；21)，且CD+19AML患者僅5例有治療資料，3例達(dá)CR，因例數(shù)太少，未觀察到文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果，有待以后病例積累?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 張之南. 血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)M. 第2版. 北京：科學(xué)技術(shù)出版社，1998：184-214.2 薛永全. 白血病細(xì)胞遺傳學(xué)及圖譜M. 天津：天津科學(xué)技術(shù)出版社，2003：45-46.3 鹿群先，張光彩，李德鵬，等. 急性髓細(xì)胞白血病免疫表型分析J. 臨床內(nèi)科雜志，2001，18(2)：127-129.4 蔣玉玲，黃泛舟，龍紅，等. 成人急性髓細(xì)胞白血病免疫表型及其在預(yù)后中的意義J. 白血病，1997，6(1)：208-211.5 張宏，梁建英，李軍，等. 71例急性白血病免疫表型特征分析及意義J. 白血病淋巴瘤，2004，13(2)：79-81.6 李玲，王蕊，鐘笛，等. 急性髓系白血病細(xì)胞CD34+抗原表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系J. 中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2005，13(5)：812-814.7 Solary E，Casanovas RO，Campos L，et al. Surface markers in adult myeloblastic leukemia： correlation of CD19+， CD34+ and CD14+/DR phenotypes with shorter survivalJ.Leukemia，1992，6：393-399.8 秘營昌，卞壽庚，薛艷萍，等. 急性髓細(xì)胞白血病免疫表型特點(diǎn)及與預(yù)后的關(guān)系J. 白血病，1997，6(4)：194-198.9 梁建英，馬勤芬，朱明清，等. 伴淋系抗原表達(dá)的急性髓系白血病的臨床及MIC分型特征J. 中華血液學(xué)雜志，2007，28(11)：776-777.10 Del Poeta G，Stasi R，Venditti A，et al. CD7 expression in acute myeloid leukemiaJ. Blood，1993，