第三十二章 其他病毒、朊粒 張卓然,本章講述 輪狀病毒(rotavirus) 狂犬病病毒(Rabies virus ) 人乳頭瘤病毒 （Human papilloma virus，HPV） 細小病毒B19（Parvovirus B19） 朊粒(prion),第一節(jié) 輪狀病毒 引起胃腸炎的病毒分別屬于4個病毒科： 輪狀病毒屬呼腸病毒科； 人類杯狀病毒屬杯狀病毒科； 腸道腺病毒屬腺病毒科； 星狀病毒屬星狀病毒科等。 輪狀病毒是引起嬰幼兒急性腹瀉最重 要病原體，病毒呈球形， 20面體，雙鏈 DNA，分節(jié)段，雙層衣殼，無包膜，外形 呈車輪狀具有診斷價值。,rotavirus,分類 屬于呼腸病毒科,輪狀病毒屬(rotavirus),1975年由國際病毒分類委員會正式命名。 根據(jù)病毒基因結(jié)構(gòu)和抗原性VP6分為7個組(AG)， 又根據(jù)VP6亞組特異性將A組RV分為： 、+、非非 4個亞組。 VP4為血凝素，是RV的中性抗原，經(jīng)胰酶作用裂解 為VP5和VP8兩部分；還是重要的型特異性抗原，以 VP4抗原性將A組RV分為19個P血清型(P1P19)。 VP7為糖蛋白，也是中和抗原，具有型特異性，以 VP7的抗原性將A組RV分為14個G血清型(G1G14)。,臨床意義,引起急性胃腸炎，主要經(jīng)糞-口傳播 Rota virus 致病性 以VP6抗原性分7個組（A-G組） A組：導(dǎo)致嬰幼兒腹瀉，占病毒性胃腸炎80% 是嬰幼兒死亡的主要原因之一； B組：成人腹瀉； C組：少數(shù)致??； D-G組：只引起動物腹瀉。,A組最常見引起嬰幼兒嚴(yán)重腹瀉 潛伏期2472小時，發(fā)病急，80%患兒先發(fā)熱、嘔 吐和腹痛，隨即頻繁的腹瀉，每日1020次，淡黃色 水樣便或蛋花湯樣酸性便、或白色米湯樣便，無黏液 和膿血，惡臭。病程一般26天。 B組引起成人腹瀉 潛伏期3866小時，起病急，黃色水樣便，無黏 液和膿血，每日腹瀉510次，重者可超過20次/日， 伴有腹痛、腹脹、惡心、嘔吐、脫水、乏力等癥狀。 病程36天。,生物學(xué)特性,形態(tài)結(jié)構(gòu) 輪狀病毒呈球形，直徑6080nm，核心含雙鏈RNA，分節(jié)段（基因組由11個雙鏈RNA節(jié)段組成），外被雙層衣殼，內(nèi)層核衣殼的殼粒呈放射狀排列，負染色在電鏡下觀察猶如車輪狀外形，故得名Rotavirus。,輪狀病毒的結(jié)構(gòu)及其核心RNA11條節(jié)段與編碼蛋白質(zhì),表32-1 輪狀病毒基因片斷及其編碼蛋白的定位和功能,微生物檢驗 (一)標(biāo)本采集與處理：發(fā)病早期采集5天內(nèi)的糞便 (二) 標(biāo)本直接檢查 1. 電鏡：IEM，ELISA，查病毒顆粒（rota） 2. 抗原檢測：常用ELISA法 3. PAGE分析，11個節(jié)段， 4. 核酸檢測：核酸雜交、PCR (三)病毒分離培養(yǎng) 原代猴腎細胞、傳代非洲綠猴腎(MA104)細胞,輪狀病毒（A、B組）與呼腸病毒核酸電泳圖形比較 1.呼腸病毒（10條RNA條帶）； 2. A組輪狀病毒（11條RNA條帶，長型）； 3. A組輪狀病毒（11條RNA條帶，短型）；4. B組輪狀病毒（11條RNA條帶）,糞便抽出液 熒光抗體染色可見輪狀病毒顆粒,狂犬病病毒（Rabies virus）是彈狀病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病病毒屬（Lyssavirus）的一種嗜神經(jīng)性病毒，通過動物咬傷、抓傷感染而引起狂犬病。屬彈狀病毒科狂犬病毒屬，是人及動物狂犬病的病原體,第二節(jié) 狂犬病病毒,臨床意義,人類狂犬病大多是由病犬咬傷所致，有時也可因貓、狼、帶毒動物咬傷而致感染。動物在發(fā)病前5天唾液中就帶有病毒。人被咬傷后，病毒經(jīng)傷口進入機體內(nèi)。 潛伏期一般為13個月，但亦有短至一周或長達數(shù)年的。潛伏期的長短取決于被咬傷部位距頭部的距離、傷口深淺及感染的病毒數(shù)量，傷口距頭部越近、傷口越深、傷口內(nèi)感染的病毒量越大，潛伏期越短。,進入體內(nèi)的病毒在肌纖維細胞中增殖，約46小時內(nèi)侵入周圍神經(jīng)，沿傳入神經(jīng)軸索及其外間隙上行,經(jīng)背根節(jié)和脊髓段上至中樞神經(jīng)系統(tǒng)。病毒在神經(jīng)細胞內(nèi)大量增殖并引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷，以腦干、小腦為主。然后又沿傳出神經(jīng)向全身擴散，以唾液腺、舌部味蕾、嗅神經(jīng)上皮等處為多，還有淚腺、視網(wǎng)膜、角膜及肺、腎等器官。,致病機制,首先在傷口局部肌肉細胞內(nèi)增殖,沿感覺神經(jīng)神經(jīng)軸索上行,中樞神經(jīng)系統(tǒng)增殖并引起損傷,沿傳出神經(jīng)擴散至唾液腺及其它組織,生物學(xué)特性 外形呈子彈狀，一端圓尖，另一端平直而凹進，長約100300nm，直徑為75nm。螺旋對稱，有包膜及刺突。 核心為一條由12000個核苷酸組成的單負鏈RNA，編碼五種蛋白，即： 核蛋白質(zhì)（nucleoprotein，N蛋白） 包膜表面糖蛋白（glycoprotein，G蛋白） 病毒衣殼基質(zhì)蛋白(matrix protein 1，M1) 包膜基質(zhì)蛋白(matrix protein 2，M2) 轉(zhuǎn)錄酶蛋白（large protein，L蛋白）,病毒在易感動物或人中樞神經(jīng)細胞(主要是 大腦海馬回的錐體細胞)中增殖，形成胞質(zhì)內(nèi)嗜 酸性包涵體，又稱內(nèi)基小體(Negri body)，具 有診斷價值。 病毒能在敏感細胞中培養(yǎng)，如鼠神經(jīng)母細 胞瘤(murine neuroblastoma)細胞。 本病毒存在于病獸或患者的神經(jīng)組織和唾 液中，對外界抵抗力不強，病毒對熱敏感，加 熱40約4h或60 30min可滅活，在冰凍干燥 或-70能存活數(shù)年。,微生物檢驗,人狂犬病根據(jù)咬傷史及典型癥狀即可診斷 （一）標(biāo)本直接檢查 1.抗原檢查 （1）免疫熒光技術(shù)：此法快速、敏感、特異性高。 （2）ELISA法 2.核酸檢查 運用RTPCR法檢測標(biāo)本中狂犬病病毒RNA。 （二）抗體檢測 （三）分離培養(yǎng) （四）捕捉動物觀察,神經(jīng)細胞中的狂犬病毒（綠色熒光）,（四）捕捉動物觀察 人被咬傷后，檢查動物是否患病十分重要 1.判斷動物是否患狂犬?。河^察710d 發(fā)病否，不發(fā)病為非病犬或咬人時唾液中無病毒。 2.發(fā)病殺死后，檢查腦內(nèi)有無內(nèi)基小體 （Negri body ），海馬回 胞質(zhì)嗜酸性包涵體 （7090）。,Negri body,第三節(jié) 人乳頭瘤病毒 （human papillomavirus,HPV）,屬乳多空病毒科致 病者為人乳頭瘤病 毒(HPV) ， 球形，5055nm, 20面體，無包膜， 環(huán)狀dsDNA。,2019/8/30,29,可編輯,臨床意義 尖銳濕疣(condyloma acminatum ,CA)，又稱生殖器疣、性病疣，是由人乳頭瘤病毒（HPV-6、11型等）引起的一種性傳播性疾病，占我國性病第二位。 宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN) 由高危型HPV(high-risk HPV types- HPV16、18型)感染。,致病性,HPV 直接接觸，對皮膚和粘膜上皮細胞高度親嗜，誘導(dǎo)上皮增殖形成乳頭狀瘤（疣） HPV-6,11 尖銳濕疣 HPV-1,2,4 尋常疣 HPV- 3，4 扁平疣 HPV-16，18，31，34 宮頸癌,生物學(xué)特性 1.形態(tài)結(jié)構(gòu) HPV呈球型，直徑為5255nm，20面體立 體對稱、核衣殼由72個殼微粒組成，無包膜。 2. 基因組及其編碼產(chǎn)物 病毒基因組為雙鏈環(huán)狀DNA， 以共價閉合的超螺旋結(jié)構(gòu)、開放的環(huán)狀結(jié)構(gòu)及線性分 子等三種形式存在，含有3個基因區(qū)： 早期區(qū)（ER）：6個早期開放讀框 （E1、E2、E4E7 ORFs）； 晚期區(qū)（LR）：有2個ORF。 上游調(diào)控區(qū)（URR）：是一個無編碼基因區(qū)，含有 病毒DNA的復(fù)制起點和基因表達的調(diào)控元件。,微生物檢驗,多聚酶鏈反應(yīng)（PCR） 原位濾膜雜交或點雜交 原位雜交：適用于經(jīng)甲醛溶液固定過的組織 DNA印跡 免疫學(xué)檢查：采用免疫組化法檢測病變組織中 的HPV抗原。反之可用晚期蛋白L1和L2，或用 病毒樣顆粒（VLP）檢測病人血清中抗HPV的 型特異性抗體。,第四節(jié) 細小病毒B19 細小病毒B19 屬細小病毒科、細小病毒亞科、紅 病毒屬的病毒。 細小病毒亞科包括三個屬 1.細小病毒屬(Parvovirus)：代表種為小鼠細小病毒 2.依賴性病毒屬(Dependovirus)：腺病毒伴隨病毒2型 3.紅病毒屬：代表種為細小病毒B19。,臨床意義,1981年發(fā)現(xiàn)細小病毒B19與兒童鐮狀細胞貧血 所致的造血障礙有關(guān)。還發(fā)現(xiàn)與傳染性紅斑病 (erythema infectiosum)、先天感染所致自發(fā)性流產(chǎn) （spontaneousabortion）及胎兒畸形等有關(guān)。還可出現(xiàn) 皮疹及關(guān)節(jié)炎等。 受細小病毒B19感染的婦女大部分是正常的，但 妊娠婦女可造成胎兒嚴(yán)重貧血、心衰、流產(chǎn)、畸形、 死亡。慢性癥狀有慢性貧血、神經(jīng)病變及脈管炎等。,生物學(xué)特性,呈小球形、無包膜、直徑約為1826nm，有VPl及VP2兩種衣殼蛋白?；蚪M為單鏈DNA分子，為正或負鏈，5.6kb長，呈線狀，有兩個大ORF及許多小ORF。病毒主要在細胞核內(nèi)復(fù)制. 1.自主復(fù)制型病毒 在分裂旺盛細胞中復(fù)制 2.復(fù)制缺陷型病毒 需輔助病毒存在才復(fù)制 如腺病毒伴隨病毒(AAV),微生物檢驗 檢測細小病毒B19是診斷再障有效指標(biāo) 1. 檢測細小病毒B19抗體(IgM早期抗體） 2. 檢測病毒顆粒 如電子顯微鏡 3. 檢測抗原 對流免疫電泳、RIA或EIA 4. 檢測核酸 核酸雜交、原位雜交、PCR 5. 檢測細小病毒B19抗體(IgG),第五節(jié) 朊粒 朊粒（prion）來源于蛋白性感染顆粒（proteinaceus infection particle）的英文 縮寫，是引起傳染性海綿狀腦?。═SE） 的病原體。 TSE是一特征性致死性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性退化性疾患，臨床上相應(yīng)出現(xiàn)癡呆、共 濟失調(diào)、震顫等癥狀，隨即昏迷死亡。,分類與命名 Prion感染人和動物引起TSE 1.常見動物TSE 羊瘙癢病（Scrapie） 牛海綿狀腦?。˙SE） 2.人類TSE 庫魯病（Kuru disease） 克雅?。–reulzfeldt Jakob disease,CJD）等。 關(guān)于Prion在生物學(xué)領(lǐng)域中的定位至今尚未定論。,臨床意義 （一）動物TSE 1.瘙癢?。⊿crapie） 皮膚瘙癢摩擦，脫毛，慢性消耗性，致死性疾病。 2.瘋牛?。╩ad cow disease） 牛海綿狀腦病（BSE）,朊粒存在的部位,（二）人TSE-克雅病及克雅病的新變種 1. 克雅病的分型 傳染型：約占10%，主要由醫(yī)源性傳播，如：角膜移 植和硬腦膜移植等，或使用污染的手術(shù)器 械，或使用人垂體制備的生長激素等； 家族遺傳型：占10%15% GSS綜合征 致死性家族性失眠癥 散發(fā)型：克雅病在三型中最常見，約占75%80%。,2.克雅?。–JD） 是一種致命性人海綿狀腦病，又稱傳染性癡呆（transmissible dementia）。潛伏幾十年發(fā)病，精神與感覺方面癥狀，隨后運動失調(diào)，晚期肌肉痙攣伴癡呆，多在512個月內(nèi)死亡。發(fā)病率1/106，年齡均50歲以上。腦海綿體病變類似羊瘙癢病的羊腦。PrPCJ類似PrPSC推測CJD因子來源于瘙癢病。1968年 CJD轉(zhuǎn)移給動物成功，現(xiàn)已證實，PrPres大量沉積腦組織淀粉樣斑塊CNS退行性變,. 克雅病新變 種(A variant of CJD, vCJD) 多發(fā)生青年人(平均年齡26歲)，病程14個月。 臨床特點： 開始精神與感覺異常，隨后運動失調(diào)， 后肌肉痙攣與癡呆，神經(jīng)病理特點呈現(xiàn)大量PrPcj沉積。 牛海綿狀腦?。˙SE）通過污染飼料在牛群中流行，跡象表明，此損害可以通過食物鏈傳給人。提出nvCJD和BSE由同一致病因子引起假說。,（三）庫魯（Kuru）病 Kuru(顫抖)病是第一個被認為由prion引起的人的傳染性海綿狀腦?。═SE）,發(fā)生于巴布亞新幾內(nèi)亞宗教性食尸惡習(xí)，患者多為婦女，兒童。潛伏期430年，病人小腦受損，產(chǎn)生共濟失調(diào)和震顫。 進行性小腦綜合癥伴癡呆，一旦發(fā)病，一年內(nèi)（69個月）內(nèi)死亡。,（四）GSS綜合征與致死性家族性失眠癥 GSS綜合征是一種罕見的人類傳染性海綿狀腦病，為常染色體顯性遺傳性疾病，主要與PrP基因102位密碼子(Pro-Leu)突變有關(guān)。 致死性家族性失眠癥是另一種罕見的人類傳染性海綿狀腦病，為常染色體顯性遺傳性疾病，主要為PrP基因178位密碼子(Asp-Asn)突變。,生物學(xué)特性 (一) PrP的蛋白結(jié)構(gòu) PrPc(Cellular isoform of PrP) 分子量（3335）103，PrP3335 4個-螺旋區(qū)(42)、幾乎無-折疊(3) PrPsc(Scrapie isoform of PrP, PrPsc) 分子量（2730）103，PrP2730 2個-螺旋(30)、4個-折疊(43),左為正常protein, 右為prion,（二）PrP的基因結(jié)構(gòu) 人PrP基因位于第20號染色體的短臂 基因全長為759bp ,編碼253個aa (三) PrP抵抗力 PrP抵抗力強，對甲