興 安 職 業(yè) 技 術 學 院 院 題目 ：仔 豬 鏈球 菌 病 的 病理 學 觀察 院 系 名 稱 ： 興 安 職 業(yè) 技 術 學 院 農 牧 分 院 專 業(yè)： 畜 牧 獸 醫(yī) 學 生 姓 名 ： 王長江 指 導 教 師 ： 朝 克 圖 完 成 日 期 ： 2010 年 5 月 15 日 2010 年度 畢業(yè)論文 畢業(yè)論文獨創(chuàng)性聲明 本人所呈交的學位論文是我在導師的指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據我所知，除文中已經注明引用的內容外，本論文不包含其他個人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中作了明確說明并表示謝意。 作者簽名： 日期： 摘要 ： 豬鏈球菌病是由鏈球菌引起的豬 的 多種疾病的總稱， 是一種人畜共患傳染病。臨床上主要表現(xiàn)為淋巴結膿腫、腦膜炎、關節(jié)炎以及敗血癥等癥狀，還可引起人類腦膜炎、敗血癥等，導致嚴重疾患，甚至死亡。由于鏈球菌血清型較多，侵害的部位廣泛及機體抵抗力不同，臨床上可呈現(xiàn)多種多樣的病癥與病理變化，并且常與其他疾病發(fā)生混合感染，對疾病的診斷和治療帶來了很大困難。本試驗以某豬場送檢并已確診為豬鏈球菌感染死亡的仔豬病例為實驗動物，采用病理解剖學和病理組織學技術，觀察其病理學變化，為臨床的鑒別診斷及治療提供理論依據。結果表明：患病仔豬胸腹下部和四肢內側的皮膚有紫紅色出血斑，關節(jié)部腫脹 變形。各臟器呈現(xiàn)不同程度的充血、出血 、淤血 ；肺臟的病理變化明顯，呈充血、出血、氣腫；淋巴結高度腫脹，切面呈大理石狀花紋，淋巴竇內充滿大量血液，呈現(xiàn)出血性、壞死性淋巴結炎的病理變化；腦膜出血；心局部呈點狀出血；肝、脾、肺、腎廣泛充血、出血；各臟器實質細胞變性壞死。 關鍵詞 ： 仔 豬 ； 鏈球菌 病 ；病理學 目 錄 前 言 1 材料與方法 2 1 試驗材料 2 驗動物 2 驗試劑 2 器設備 2 2 試驗方法 2 色液配制 2 理解剖學方法 2 理組織學方法 2 結 果 4 1 病理解剖學觀察結果 4 表變化 4 檢變化 4 2 病理組織學觀察結 果 6 臟 7 臟 7 臟 7 臟 8 臟 8 巴結 9 討 論 11 結 論 13 參考文獻 14 1 前 言 豬鏈球菌病 (由鏈球菌引起的 鏈球菌屬中馬鏈球菌獸疫亞種 (S. 馬鏈 球菌類馬亞種 (S. 致豬的疫病的總稱 。近年來，國內此病的發(fā)生率呈上升趨勢，嚴重威脅著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，而且還可引起從業(yè)人員感染發(fā)病和死亡，日益受到關注 。 近年來，在我國及其他各國均有鏈球菌感染致人患病死亡的報道 1。 豬鏈球菌病是一種人畜共患傳染病。臨床上主要表現(xiàn)為淋巴結膿腫、腦膜炎、關節(jié)炎以及敗血癥等癥狀，還可引起人類腦膜炎、敗血癥等，導致嚴重疾患，甚至死亡2,3。其中，豬鏈球菌是世界范圍內引致豬鏈球菌病最主要的病原，該菌可引起豬腦膜炎以及敗血病等疫病，人通過特定的傳播途徑亦可感 染該菌 4。 豬鏈球菌病 對豬不分年齡、性別、品種均易感，其中仔豬、懷孕母豬及保育豬較常見。 感染途徑廣泛 ，主要通過呼吸道感染 。 此病一年四季均可發(fā)生，在有許多其他的細菌和病毒感染壓力下可加速豬鏈球菌的感染。擁擠、通風不良、天氣變化、混群、運輸遷移、免疫接種，以及同時發(fā)生其他疾病等壓力都使豬只可能感染豬鏈球菌 5。 豬鏈球菌血清 2 型是豬中的重要病原菌，主要致腦膜炎，也可致心內膜炎、關節(jié)炎與肺炎。但此菌也可存在于豬的扁桃體而并不引起疾病，處于帶菌狀態(tài)。致病鏈球菌經呼吸道或其他途徑（受損處的皮膚和粘膜）進入機體后 ，首先在入侵處分裂繁殖。之后，很快進入淋巴管和淋巴結。繼之突破淋巴屏障，沿淋巴系統(tǒng)擴散到血液中，引起菌血癥。由于細菌繁殖過程中產生的毒素作用，使大量紅細胞溶解，血液成分改變，血管壁受損和整個血液循環(huán)系統(tǒng)發(fā)生障礙，網狀內皮系統(tǒng)的吞噬機能降低，以致發(fā)生熱性全身性敗血癥。臨診上表現(xiàn)體溫升高。最后導致各個實質器官嚴重充血、出血，漿液腔 內 出現(xiàn)大量漿液纖維素蛋白。 目前，對于豬鏈球菌病的報道多為對所遇到的病例的診斷、診治的研究，而缺乏對該病的病理學的系統(tǒng)的 研究 和 報道 。 病理解剖和組織學方法是一種傳統(tǒng)的實驗室診斷方法， 是一 種準確、直觀的診斷方法，能通過該方法了解到疾病對患病機體的損傷部位和程度，為疾病的預防、診斷和治療提供可靠的理論依據。 本試驗 所用動物是送檢的 經 關節(jié)液涂片鏡檢后 確診為豬鏈球菌感染死亡 的 仔豬，利用病理解剖和組織學方法進行進一步實驗研究，并對其病理學變化進行 觀察討論 ，以期為該病的診斷、鑒別及防治提供參考資料。 2 材料與方法 1 試驗材料 試驗動物 延吉某豬場 送檢 的并已確診為豬鏈球菌感染 死 亡 仔豬 4只 。 試驗試劑 10%甲醛溶液； 無水乙醇 ； 95%酒精；二甲苯；軟蠟；硬蠟；蛋白甘油；蘇木精 染液 ； 伊紅 染液 ；冰醋酸；樹膠； 蒸餾 水等。 儀器設備 解剖工具（如 解剖刀，鑷子，剪刀，骨鉗， 鋸等）；恒溫箱； 包埋盒 ；組織盒；載玻片；蓋玻片； 海儀表廠）；電熱恒溫培養(yǎng)箱（湖北省黃石市醫(yī)療器械廠）； 江省金華市科第儀器設備有限公司）； 江省金華市科第儀器設備有限公司）； 本 箱（長嶺電冰箱公司）；北省黃石市醫(yī)療器械廠）。 2 試驗方法 染色液配制 102000液混合后繼續(xù)加熱煮沸。往煮沸的混合液中加入 止加熱并用玻璃 棒攪拌染液加速氧化。兩天后，過濾 加入 4可使用 。 伊紅染色液配法：將 5g 伊紅溶于 250精 中，最后加入 醋酸。同樣，需要 1成熟方可使用。 10%福爾馬林配制： 10醛加 90餾水混合即可。 病理解剖學方法 首先，對 4只仔豬尸體外部及天然孔進行眼觀檢查，之后 借助解剖刀、鑷子、剪刀、骨鉗等解剖器械，剖檢仔豬 2只 ，對 肝、脾、腎、 心、肺 、淋巴結、關節(jié) 組織器官進行常規(guī)病理解剖學觀察并照相，同時取材放入 10%甲醛固定液固定，供病理組織學觀察用。 病理組織學方法 取仔豬 的心、腎、肝、肺 、脾 、頜下淋巴結、肺門淋巴結、腸淋巴結 組織塊，制作病理石蠟組織切片， H學顯微鏡下觀察并照相。 具體步驟如下： 固定 將患病組織用 10甲醛溶液進行固定； 取材 切取組織塊 ,使其平滑 ,組織塊的厚度為 5 ，選取病變特征部位 ； 水洗 流水 水洗 24h； 脫水 70酒精 3h 80酒精 12h 90酒精 1h 95酒精 1h 100酒精 3 1h 100酒精 30 透明 二甲苯 20甲苯 10 浸蠟 蠟塊放入恒溫箱中 60人融化后，浸入， 軟蠟 蠟 3h； 包埋 包埋盒 預熱從恒溫箱中取出酒精燈上加熱倒入包埋 蠟 （反復融化使用的硬蠟） 放入組織塊 ,平面朝下趕氣泡再在酒精燈上稍微加熱壓上 組織盒蓋 再倒 些許包埋 蠟趕氣泡冷卻凝固 ，從包埋盒中取出，修蠟塊 ； 切片 利用組織切片機，厚度 57 m； 貼片、干燥 放入 恒溫箱 中 ， 40 ， 至少 4h；或者 放于恒溫箱中干燥后， 常溫過夜 ； 二甲 苯 10甲苯 5100酒精 295酒精 20酒精 280酒精 270酒精 2木精染色 約 4水沖洗 約 30紅染色 2幾滴冰醋酸 ) 70酒精 30s 80酒精 190酒精 195酒精 1100酒精 11:1=酒精 :二甲苯 1甲苯10甲苯 10 封片 滴中性樹膠 ,蓋蓋玻片； 觀察 顯微鏡下觀察并照相 。 4 結 果 1 病理解剖學 觀察結果 體表變化 病豬營養(yǎng)狀況良好 ，兩耳、鼻端、腹部、四肢下端等處皮膚可見大小不等的淤血點或出血斑點。眼部有眼屎，口、鼻部污穢，呈現(xiàn)角弓反張狀。關節(jié)部腫脹變形。頸部、頜下部腫脹。 （ 圖 1） 剖檢變化 腎：一個 表面呈粉白色，有出血點，如“麻雀蛋樣” （圖 2） 。 另一個表面出血、充血明顯，呈“花斑樣”，被膜易剝離，有白色壞死灶，切開后髓質變寬，皮質變薄，有明顯出血斑，腎乳頭擴大并充血 （圖 3） 。 脾：兩只均較正常 稍腫大 ， 質軟， 一個 色深 ，另一個 表面發(fā)白 ，均附著有纖維素，但第 二只 較 重 ， 均 稍腫大，局部 有大小不同的 腫脹、 淤血 。 （圖 4） 圖 1 病豬外觀 體表可見出血斑，頸部、頜下部腫脹，呈現(xiàn)角弓反張狀，關節(jié)部腫脹 圖 2 腎 表面呈粉白色，有出血點，如“麻雀蛋樣” 圖 3 腎 表面出血、充血明顯，呈“花斑樣” 5 肺：均呈 水腫、 氣腫，淤血，間質增寬。一只表面有出血斑點， 另一只 前 下部呈廣泛淤血。 切面流出帶血的泡沫樣液體。 （圖 5） 頜下淋巴結及其他淋巴結：高度腫大，呈暗紅色，充血，呈大理石花紋樣。 （圖 6） 心：心包腔積液。心臟表面充血，色淡，松弛。右心室擴張，右心心肌變性、易碎，心瓣增厚，表面粗糙，二尖瓣瓣膜上有菜花樣贅生物。心內外膜有出血斑點，心冠溝及縱溝脂肪充血，心耳外膜 及冠狀溝脂肪有豌豆大小出血點，心臟色淡。 肝 及膽囊 ：無明顯變化，顏色稍變深 ，稍腫大 ，質硬 ；膽囊 壁炎性水腫 。 腦：腫脹，毛細血管充血、出血，質軟，腦回變淺，腦脊髓膜出血。 圖 6 頜下淋巴結 淋巴 結腫脹，出血，呈大理石樣變形。頸部、頜下部腫脹 圖 5 肺 水腫，局部氣腫，充血、淤血，間質增寬 圖 4 脾 表面發(fā)白，附著有纖維素，局部有大小不同的腫脹、淤血 6 喉頭、氣管、支氣管黏膜出血。 回盲口：鈕 扣狀潰瘍。 局部充血， 黏膜肥厚腫脹，皺折成腦回樣皺 紋 。 第二只潰瘍和褶皺比第一只嚴重許多。 （圖 7） 關節(jié)：肘關節(jié)切開后，關節(jié)腔內 滑液增多，呈淡紅色， 含有纖維素性滲出液 ， 關節(jié)囊增厚 ，滑膜血管的擴張和充血 。 （圖 8） 2 病理組織學觀察結果 圖 7 回盲口 鈕扣狀潰瘍，局部充血，黏膜肥厚腫脹，皺折成腦回樣皺襞 圖 8 膝關節(jié) 關節(jié)腔內滑液增多，呈淡紅色，含有纖維素性滲出液，關節(jié)囊增厚，滑膜血管的擴張和充血 7 A B D C C 心臟 局部心 肌纖維 濃縮、腫脹、出現(xiàn)空泡， 彎曲、斷裂，變性壞死，顆粒變性 ，局部溶解液化 。 心肌纖維間 散在有紅細胞 和炎性細胞 ，局部有出血點和淤血。心 內、外膜有炎性 水腫、 滲出。心肌纖維間有炎性細胞浸潤，尤其是心肌纖維斷裂處更明顯。（圖 9） 肝小葉中央靜脈及其附近的肝血竇擴張 充滿大量血細胞 (圖 10)。肝細胞腫脹，顆粒變性， 多數(shù)細胞界限不清， 部分細胞核濃縮，染色較重 ，少數(shù)細胞碎裂 、消失，出現(xiàn)空泡 。肝血竇內出現(xiàn)大量的淋巴細胞 （圖 11） 。肝小葉間有白細胞浸潤，門管區(qū)尤為明顯。小葉間膽管細胞腫 脹 ，顆粒變性。 脾小結增多， 發(fā)育不良，生發(fā)中心不明顯。脾淤血， 小結周圍有大量紅細胞浸潤， 脾小結淋巴細胞減少，部分有壞死灶出現(xiàn)。 血竇內紅細胞數(shù)量增多，有含鐵血黃素顆粒出現(xiàn) 。 （圖 12） 圖 10 肝小葉 HE 190 淤血，肝小葉中央靜脈及其附近的肝血竇擴張，充滿大量的血細胞 圖 9 心肌 HE 680 A:炎性細胞聚集 B:細胞溶解液化 C:細胞腫脹、彎曲，出現(xiàn)空泡 D:心肌纖維斷裂 A B D C C 圖 11 肝細胞 HE 680 肝細胞腫脹，顆粒變性，核濃縮，血竇內充滿血細胞，且有炎性細胞出現(xiàn) 8 有明顯的充血、出血現(xiàn)象。局部 表現(xiàn)為氣腫，可見大量紅細胞 ，肺泡破裂、融合、脫落 （圖 13） 。 肺泡腔內可見少量均質、淡紅色的纖維素性滲出， 肺泡壁增厚，毛細血管淤血，小支氣管、細支氣管上皮細胞腫脹，纖毛脫落，破裂 （圖 14） 。 有含鐵血黃素顆粒出現(xiàn)。 腎 臟 所取兩個腎的眼觀變化差異很大。 出血較嚴重的一只，鏡下出血、充血嚴重，腎小球內、腎小管間均有大量紅細胞、白細胞浸潤，尤以腎小球出血嚴重，膨大的血管球幾乎占據整個腎小囊的囊腔，囊腔內有滲出的白細胞和漿液，腎小球透明變性，腎小管上皮細胞顆粒變性、壞死。 （圖 15 另一只，呈局灶壞死，壞死灶周邊組織病理變化較輕。壞死處腎小球腫脹，甚至破碎，系膜細胞增生和中性粒細胞圖 13 肺氣腫 HE 240 肺泡腫脹，互相融合；肺泡隔中有大量紅細胞 圖 14 肺 HE 240 肺泡隔增厚，有纖維素性滲出和大量紅細胞浸潤，小支氣管內有滲出物，且管壁上附著紅細胞 圖 12 脾淋巴小結 H E 680 小結周圍有大量紅細胞浸潤，細胞腫脹，變性。局部細胞核崩解消失，形成空洞。 9 浸潤。腎小管上皮細胞顆粒變性，部分崩解、消失，管腔中有均質，淡粉色物質。皮質和髓質的腎小管間毛細血管充血，局部有點狀出血。 （圖 17 頜下淋巴結、肺門淋巴結充血、出血較腸系膜淋巴結嚴重，三者均高度腫大。 被膜與小梁炎性水腫。 淋巴組織內含 有多量巨噬細胞 。 肺門淋巴結， 淋巴竇擴大，被膜下竇與小梁旁竇充滿大量紅細胞，相鄰淋巴組織充血、出血較輕微。 （圖 18） 頜下淋巴結呈彌散性出 血，彌散性淋巴組織及淋巴竇內有大量的紅細胞浸潤，局部 呈現(xiàn)淋巴細胞的變性壞死， 細胞腫脹， 核濃縮、裂解。 （圖 19） 腸系膜淋巴結，充血、出血輕微，可見散在的單獨存在的紅細胞，呈廣泛的淋巴細胞的變性壞死，局部形 成壞死灶。 （圖 20） 圖 16 腎 1 HE 760 腎小球腫脹，含有均質透明粉紅色的物質，可能為細菌性血栓。腎小管顆粒變性、裂解，出現(xiàn)上皮管型，小管間有少量淋巴細胞 圖 15 腎 1 HE 210 A:腎小管內可見均質、粉紅色滲出物 B:腎小球脹，細胞透明變性 C:小管上皮細胞濃縮，嗜堿性增強 D:腎小球變性為均質 、粉紅色物質，失去細胞形態(tài) B C D A A 圖 18 腎 2 HE 760 A:白細胞浸潤 B:腎小管上皮細胞顆粒變性、破裂 C:腎小管上皮細胞裂解，失去細胞形態(tài) D:紅細胞浸潤 B C D A A B A 圖 17 腎 2 HE 240 髓質部紅細胞聚集于幾處，呈點狀出血。集合管上皮細胞顆粒變性、脫落。小管間有少量淋巴細胞 10 圖 19 頜下淋巴結淋巴小結 HE 960 可見大量散在的紅細胞 ，一些淋巴細胞變性壞死，核濃縮、裂解消失 圖 18 肺門淋巴結 HE 120 被膜下竇 充滿大量紅細胞 圖 20 腸系膜淋巴結 HE 960 只可見零星散在紅細胞，許多淋巴細胞濃縮、融解消失，失去細胞結構 ，形成壞死灶 11 討 論 豬鏈球菌病是鏈球菌屬中馬鏈球菌獸疫亞種、馬鏈球菌類馬亞種引致豬的疫病的總稱，是一種人畜共患傳染病，可侵害機體的任何器官與組織。臨床上主要表現(xiàn)為淋巴結膿腫、腦膜炎、關節(jié)炎以及敗血癥等癥狀，還可引起人類腦膜炎、敗血癥等，導致嚴重疾患，甚至死亡 6。 在此試 驗中，死亡仔豬已經經關節(jié)液涂 片 染色 鏡檢確診為豬鏈球菌感染，經解剖和組織學觀察后，病理解剖學變化主要為胸腹下部和四肢內側的皮膚有紫紅色出血斑，關節(jié)部腫脹變形。 各臟器呈現(xiàn)充血、出血 、淤血 ，程度有所不同，從點狀出血到廣泛斑塊。肺臟的病理變化明顯，水腫、氣腫。淋巴結高度腫脹，切面呈大理石狀花紋。腦脊髓出血。各關節(jié)滑液量增多，有纖維素性漿液性滲出液。病理組織學變化主要是心的點狀出血和肝、脾、肺、腎、淋 巴結的廣泛充血、出血 、淤血 。實質細胞的變性壞死。淋巴結的出血性炎和壞死 性炎。 這與林太明 7報道的 典型的鏈球菌病的 病理變化相符 。 而不同之處主要表現(xiàn)在 病理解剖學上：纖維素性胸膜炎，胸膜肺炎，各臟器表面有纖維素性滲出物、發(fā)生粘連等，這種細菌性疾病變化較少，僅在脾表面上可看到白色 纖維素性滲出。原因可能與仔豬病程較短，發(fā)病較急，且此病例中呈混合感染，并有應激反應有關，沒有該種病理變化。 近幾年，豬病流行與往年相比有些新變化，典型豬瘟、仔豬副傷寒、豬肺疫 、豬丹毒已經很少見到，而非典型豬瘟、豬鏈球菌病、附紅細胞體病、豬傳染性胃腸炎卻頻繁發(fā)生 8。 豬 鏈球菌病 與往年相比 也 有些新變化， 典型的豬鏈球菌病或是單純的鏈球菌感染，而是與非典型豬瘟、 附紅細胞體病、豬傳染性胃腸炎卻頻繁發(fā)生，且時?；旌细腥?，給診斷、治療帶來了很大困難 。從試驗結果 發(fā)現(xiàn) ，病豬具 有豬瘟的特征性 病理 變化，如“麻雀蛋樣”腎、回盲 口黏膜的紐扣狀潰瘍，淋巴結 的出血性炎，呈“大理石樣”，這與邵世偉 9等報道的病理解剖學變化相符，但其缺乏病理組織學變化。 所以，當豬鏈球菌病與豬瘟混合感染時，主要在腎臟和回盲口處呈現(xiàn)豬瘟的典型病理變化。 從發(fā)病機理看，豬鏈球菌病的感染途徑看，主要是通過呼吸道感染，首先在入侵處分裂繁殖。之后，很快進入淋巴管和淋巴結。繼之突破淋巴屏障，沿淋巴系統(tǒng)擴散到血液中，引起菌血癥。 此試驗結果 所呈現(xiàn)的病理變化主要表現(xiàn)在呼吸系統(tǒng)的肺臟，泌尿系統(tǒng)的 腎臟 和免疫系統(tǒng)的淋巴組織 。 豬鏈球菌病在有許多其他的細菌和病毒感染壓力下可加速豬 鏈球菌的感染。擁擠、通風不良、天氣變化、混群、運輸遷移、免疫接種，以及同時發(fā)生其他疾病等壓力都使豬只