學(xué)校編碼： 10384 分類號(hào) 密級(jí) 學(xué)號(hào)： 200426066 碩 士 學(xué) 位 論 文 轉(zhuǎn) 疫 抗病 效果的研究 on of an on in 者姓名 指導(dǎo)教師姓名： 專 業(yè) 名 稱：細(xì)胞生物學(xué) 論文提交日期： 2007 年 月 論文答辯時(shí)間： 2007 年 月 學(xué)位授予日期： 2006 年 月 答辯委員會(huì)主席 ： 評(píng) 閱 人： 2007 年 月 廈門(mén)大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明 茲呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師指 導(dǎo)下獨(dú)立完成的研究成果。本人在論文寫(xiě)作中參考的其他個(gè)人或集體的研究成果，均在文中以明確方式標(biāo)明。本人依法享有和承擔(dān)由此論文而產(chǎn)生的權(quán)利和責(zé)任。 聲明人（簽名）： 年 月 日 廈 門(mén) 大 學(xué)學(xué) 位 論 文著作 權(quán) 使用 聲 明 本人完全了解廈門(mén)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定。廈門(mén)大學(xué)有權(quán)保留并向國(guó)家主管部門(mén)或其指定機(jī)構(gòu)送交論文的紙質(zhì)版和電子版，有權(quán)將學(xué)位論文用于非贏利目的的少量復(fù)制并允許論文進(jìn)入學(xué)校圖書(shū)館被查閱，有權(quán)將學(xué)位論文的內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，有權(quán)將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版。保密的學(xué)位論文 在解密后適用本規(guī)定。 本學(xué)位論文屬于 1、保密（ ），在 年解密后適用本授權(quán)書(shū)。 2、不保密（ ） （請(qǐng)?jiān)谝陨舷鄳?yīng)括號(hào)內(nèi)打“”） 作者簽名： 日期： 年 月 日 導(dǎo)師簽名： 日期： 年 月 日 目錄 摘要 1 前言 1 菌性青枯病的分布與危害 1 枯雷爾氏菌的概況 1 枯雷爾氏菌的形態(tài)及生理生化特征 1 枯雷爾氏菌的選擇性培養(yǎng)基 2 枯雷爾氏菌的保存 2 菌性青枯病的發(fā)生 2 枯雷爾氏菌的致害特性 2 枯病發(fā)生的土壤條件 2 枯雷爾氏菌傳染途徑 3 枯雷爾氏菌致病侵染方式 3 菌性青枯病的流行規(guī)律與預(yù)測(cè)預(yù)報(bào) 4 菌性青枯病防治方法 4 物防治 4 業(yè)防治 7 學(xué)防治 8 色熒光蛋白（ 應(yīng)用 8 子結(jié)構(gòu)和發(fā)光機(jī)制 8 用的優(yōu)點(diǎn) 9 跟蹤觀察微生物方面的應(yīng)用 10 論文的研究目的及意義 10 2 材料與方法 12 驗(yàn)材料 12 株 12 養(yǎng)基 12 茄苗 12 備儀器 12 生物學(xué)試驗(yàn)基礎(chǔ)方法 12 枯雷爾氏菌平板培養(yǎng) 12 枯雷爾氏菌液體搖床培養(yǎng) 13 體血球計(jì)數(shù)器法 13 板菌落計(jì)數(shù)法 13 枯雷爾氏菌的無(wú)菌水保存 13 枯雷爾氏菌回接番茄苗的方法 13 驗(yàn)方 法 13 生物學(xué)特性研究 14 染特性的研究 14 疫抗病效果 的研究 15 疫接種防病盆栽試驗(yàn) 17 3 結(jié)果與分析 19 生物學(xué)特性研究 19 因 前后菌落形態(tài)觀察 19 枯雷爾氏菌無(wú)致病力菌株 轉(zhuǎn) 因 前后 單細(xì)胞形態(tài)觀察 20 染特性的研究 20 同侵染濃度侵染效果的觀察 20 染進(jìn)程的測(cè)定 20 同接菌方法侵染番茄組培苗效果的觀察 21 度對(duì) 對(duì) 番茄組培苗侵染的影響 22 染番茄組培苗菌量的 消長(zhǎng)動(dòng)態(tài) 23 種時(shí)間對(duì)番茄組培苗侵染的影響 23 同浸根時(shí)間侵染番茄盆栽苗效果的觀察 23 疫抗病效果 的研究 24 致病力菌株 染番茄組培苗菌量消長(zhǎng)動(dòng)態(tài) 24 番茄組培苗青枯病的 免疫抗病效果 25 疫接種防病盆栽試驗(yàn) 30 致病力菌株不同菌株和接菌方法對(duì)番茄盆栽苗侵染動(dòng)態(tài)的比較 30 致病力菌株對(duì)番茄盆栽苗 免疫抗病效果 的觀察 34 4 結(jié)論與討論 36 侵染特性 36 染番茄組培苗菌量消 長(zhǎng)動(dòng)態(tài) 36 番茄組培苗青枯病的 免疫抗病效果 37 致病力菌株不同菌株和接菌方法對(duì)番茄盆栽苗侵染動(dòng)態(tài)的比較 37 番茄盆栽苗青枯病的 免疫抗病效果 38 望 39 參考文獻(xiàn) 40 致謝 45 轉(zhuǎn) 枯雷爾氏菌無(wú)致病力 菌株 對(duì)青枯病防治效果 的研究 I 轉(zhuǎn) 疫 抗病 效果的研究 摘要 細(xì)菌性青枯病是一種由青枯雷爾氏菌 (起的 植物 毀滅性病 害 ， 廣泛 分布 于熱帶 、亞熱帶及溫帶地區(qū)。 青枯雷爾氏菌 寄主廣泛，可以侵染 44個(gè)科數(shù)百種植物，對(duì)農(nóng)業(yè)造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。 青枯病的 生物 防治 越來(lái)越引起大家的重視。本文觀察比較了青枯雷爾氏無(wú)致病力菌株 20626后的菌落形態(tài)和單細(xì)胞形態(tài)； 研究了無(wú)致病力菌株選出了最適侵染體系；研究了 疫抗病效果 ，并將其用于盆栽苗實(shí)驗(yàn)，初步研究了對(duì)番茄盆栽苗的 免疫抗病效果 。 研 究結(jié)果表明 ：無(wú)致病力菌株 0培養(yǎng)的情況下，侵染效果較好 ，將這個(gè)體系應(yīng)用于日后的研究中。 沒(méi)有出現(xiàn)像搖瓶培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)的平臺(tái)期。不同的浸根時(shí)間對(duì) 遠(yuǎn)低于 在 組培苗體內(nèi) 的繁殖量。 1混合回接組培苗的各處理中，均表現(xiàn)出發(fā)病時(shí)間有推遲的現(xiàn)象，其中菌液濃度為 104d 開(kāi)始有組培苗發(fā)病，比對(duì)照推遲了 3d 。 疫抗病效果 影響較大。當(dāng) 培苗的發(fā)病時(shí)間由所延遲但發(fā)病率并沒(méi)有明顯降低。當(dāng) 培苗不僅發(fā)病時(shí)間有所延遲，發(fā)病率也顯著降低。 1d， 比對(duì)照延遲了 7d；早 5病率為 遠(yuǎn)低于對(duì)照的 100%。 將 驗(yàn)也能取得一定的 免疫抗病效轉(zhuǎn) 枯雷爾氏菌無(wú)致病力 菌株 對(duì)青枯病防治效果 的研究 ， 發(fā)病 率為 低于對(duì)照組的 關(guān)鍵詞 ：青枯雷爾氏菌；無(wú)致病力菌株； 生物 防治 轉(zhuǎn) 枯雷爾氏菌無(wú)致病力 菌株 對(duì)青枯病防治效果 的研究 on of an on in is a in R. of at 4 it to a in It of on of 20626on on of of on of by 04of be in in of t in in in to by 04047V 1, to d 3d 20626or at t d to 1d 7d d 轉(zhuǎn) 枯雷爾氏菌無(wú)致病力 菌株 對(duì)青枯病防治效果 的研究 as 枯雷爾氏菌無(wú)致病力 菌株 對(duì)青枯病防治效果 的研究 1 1 前言 菌性青枯病的分 布與危害 細(xì)菌性青枯病是一種由青枯雷爾氏菌（ 起的毀滅性土傳病害，主要分布在熱帶、亞熱帶和溫帶地區(qū)，在我國(guó)南方各省市均有嚴(yán)重發(fā)生 1。 青枯雷爾氏菌可危害 44 個(gè)科的 300 余種植物 2，危害較重、分布較廣的主要寄主有馬鈴薯、番茄、煙草、茄子、花生、辣椒、姜、香蕉、甘薯、麻等。近年，又陸續(xù)在油橄欖、桑、木麻黃、木薯、番荔枝、澳洲松、桉樹(shù)等木本植物，蠶豆、大豆、豇豆、羽扇豆、南瓜、大白菜、蘿卜、茴香、棉花、三葉草、聚合草、草莓等草本植物上也發(fā)生了青枯病，可以說(shuō)青枯病 是分布廣、造成損失嚴(yán)重的植物病害 3。 青枯病對(duì)茄科植物的危害極為嚴(yán)重， 1988 年對(duì)南京地區(qū)茄科作物青枯病調(diào)查報(bào)道表明，一般田塊發(fā)病率為 25嚴(yán)重田塊可達(dá) 804；蕃茄生長(zhǎng)過(guò)程經(jīng)常受到青枯病的危害，特別在番茄結(jié)果期，適逢高溫高濕的雨季，可引起毀滅性的危害 5。馬鈴薯對(duì)青枯病十分敏感，通常造成 20產(chǎn)量損失，嚴(yán)重時(shí)可造成 75%以上的損失 6。我國(guó)南方各省都有青枯病危害，福建煙草的青枯病發(fā)病率一般為 10嚴(yán)重田塊達(dá) 100，以至全田煙草枯死，此病已成為福建煙草生產(chǎn)的主 要障礙之一 7。此外，在花生、辣椒、番茄、茄子、甘薯、生姜等作物上，青枯病發(fā)生亦很嚴(yán)重，易感病作物面積近 500 萬(wàn)畝 8。隨著研究的進(jìn)展，青枯病的新寄主不斷發(fā)現(xiàn)，以及全球氣溫變暖等因素，世界范圍內(nèi)青枯病發(fā)生越來(lái)越普遍，并日趨嚴(yán)重 9。近年來(lái)，我國(guó)南方桉樹(shù)、木麻黃、桑樹(shù)等林木青枯病害發(fā)生日趨嚴(yán)重，造成較大經(jīng)濟(jì)損失，林木青枯病害也已成為林業(yè)上的一種毀滅性病害 10。 枯雷爾氏菌的概況 枯雷爾氏菌的形態(tài)及生理生化特征 青枯雷爾氏菌（ 菌體呈長(zhǎng)橢圓形，近桿 狀，革蘭氏染色陰性， 菌體大小為 微米，極生鞭毛 1，不形成莢膜和芽孢，菌體內(nèi)均有聚 顯微鏡或電子顯微鏡下顯示兩極著色較深的特征。 青枯雷爾氏菌生長(zhǎng)最適溫度為 27， 41 以上不生長(zhǎng) 11，為好氣性細(xì)菌。不同寄主上的菌落形態(tài)無(wú)明顯差異，在肉汁胨瓊脂平板上， 32 下培養(yǎng) 48 小時(shí)后，出現(xiàn)直徑為 1灰白色不規(guī)則或近圓形菌落，邊沿光滑。 枯雷爾氏菌的選擇性培養(yǎng)基 養(yǎng)基是青枯雷爾氏菌的選擇性培養(yǎng)基。在 養(yǎng)基上，在 30 下劃線培養(yǎng) 48 小時(shí)后，可出現(xiàn)兩種菌落 ：（ a）菌落呈不規(guī)則形或近圓形， 具有較寬的白邊，流動(dòng)性強(qiáng)，中心呈粉紅色或淺紅色稀液狀，這是致病性強(qiáng)的野生型菌轉(zhuǎn) 枯雷爾氏菌無(wú)致病力 菌株 對(duì)青枯病防治效果 的研究 2 株，（ b）菌落為圓形，干燥而較扁平，菌落白邊很窄，中心呈玫瑰紅色，這是致病性弱或喪失致病力的變異型菌株 12。 枯雷爾氏菌的保存 青枯雷爾氏菌菌系的分化十分復(fù)雜，很容易發(fā)生變異，研究需要穩(wěn)定的菌株，所以研究青枯菌的保存是一項(xiàng)重要的任務(wù)。張長(zhǎng)齡等 13對(duì)青枯雷爾氏菌的保存作了詳細(xì)的研究。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，斜面菌苔灌水可保存 1 年，斜面菌苔灌蠟可保存 10 年， 4溫度對(duì)保存無(wú)影響。經(jīng)常移植，對(duì)青枯雷爾 氏菌的致病力影響很大，連續(xù)移植 5 次后，青枯雷爾氏菌的致病力 100%的喪失。斜面菌苔灌水在常溫下保存 10 年，青枯雷爾氏菌的致病力喪失 50%，但是其生化型則無(wú)任何變化。 葛蕓英等用不同 滅菌水常溫保存不同濃度的番茄青枯雷爾氏菌， 6 年后檢測(cè)存活情況，結(jié)果表明滅菌水常溫保存番茄青枯雷爾氏菌效果與初始菌濃度和無(wú)菌水 關(guān)，用無(wú)菌水保存青枯雷爾氏菌是一種保存時(shí)間長(zhǎng)，保存性狀穩(wěn)定的方法 14。 菌性青枯病的發(fā)生 枯雷爾氏菌的 致害特性 青枯雷爾氏菌對(duì)植株危害極大，以番茄為例，在菌侵染番茄苗后，苗期一般不表現(xiàn)癥狀， 往往植株高 30 厘米左右開(kāi)始發(fā)病。植株先是頂端葉片開(kāi)始下垂，然后下部葉片萎蔫，最后中部葉片至全株萎蔫。發(fā)病初期，病株僅在白天萎蔫，傍晚以后回復(fù)正常，發(fā)病后期，萎蔫的葉子無(wú)法恢復(fù)。發(fā)病后 2全株即凋萎。如氣溫較低，連陰雨或土壤含水量較高時(shí)，病株可維持一周后酷死，但葉片仍保持路色。病株表皮粗糙，莖部可見(jiàn)到維管束變褐，用手?jǐn)D壓，有白色菌膿從切口處溢出，此法可作為田間快速診斷青枯病的方法之一 15。 枯病發(fā)生的土壤條件 當(dāng)土壤溫度為 22，含水量超過(guò) 25%， ，發(fā)病最重，高溫、高濕易誘發(fā)青枯病 16。 每年初次降雨來(lái)的早或晚，降雨天數(shù)的多少和降雨量的大小，都影響病情的發(fā)展。南方菜區(qū)進(jìn)入高溫季節(jié)，連陰雨天或降大雨之后，氣溫突然增高，溫濕度適宜于病原菌的生長(zhǎng)，隨后就是一個(gè)發(fā)病高峰 15。 此外，植株幼苗生長(zhǎng)不壯，多年連作，中耕傷根，低洼積水，土壤偏酸等，均可促進(jìn)發(fā)病，加重危害 17。廖泳梅自 5 個(gè)縣（市）采到 26 個(gè)土壤樣品，發(fā)現(xiàn)所在土壤對(duì)青枯雷爾氏菌均有一定的抑制作用，青枯雷爾氏菌在土壤中 3 天后的檢出率在 20%以下 18。袁立和等人研究發(fā)現(xiàn)沙壤土不利于番茄青枯病的發(fā)生，而沙質(zhì)土及粘質(zhì)土有利于青枯病 的發(fā)生 19。 枯雷爾氏菌傳染途徑 青枯雷爾氏菌主要在土壤及遺落在土壤中的病株殘?bào)w上越冬，亦能潛伏于種子中或生長(zhǎng)在各種寄主體內(nèi) 17。越冬作物的營(yíng)養(yǎng)體和繁殖體可將病菌進(jìn)行遠(yuǎn)距轉(zhuǎn) 枯雷爾氏菌無(wú)致病力 菌株 對(duì)青枯病防治效果 的研究 3 離傳播。青枯病的初侵染來(lái)源主要為土壤、病殘組織和未漚熟的農(nóng)家肥料。這些病原菌借灌溉水、帶菌肥料、帶病菌的種子或附著在幼苗上的病土以及人畜和生產(chǎn)工具而傳播 20。附生于作物表面的菌源可由雨水傳播，雨水將表面的菌源洗落于地，可使土壤表面的病原菌濃度增高。雨水中的病源體被認(rèn)為是地面上的一個(gè)重要侵染來(lái)源，在大風(fēng)雨情況下青枯雷爾氏菌可在鄰 近的健株上廣泛傳播 21。傳播到葉上的病原菌在 95%生存期可超過(guò) 15 天 13。 曾東方等 22從湖北紅安花生青枯病病地采集的花生種子，未經(jīng)晾曬直接播于溫室，青枯病發(fā)病率分別為 對(duì)種子進(jìn)行青枯雷爾氏菌分離，帶菌率 但風(fēng)干 2 個(gè)月后播種，未見(jiàn)傳病現(xiàn)象。將花生種子用病菌懸浮液浸泡 24 小時(shí)后，經(jīng)烘，晾，曬干燥處理 3 天，當(dāng)含水量降到 10%左右時(shí)，分離不到青枯雷爾氏菌。說(shuō)明花生青枯病可通過(guò)種子傳播，但病原菌的發(fā)病與濕度的關(guān)系較大。 枯雷爾氏菌致病侵染方式 青枯雷爾氏菌在一般條件下是 從植株根部傷口侵入 23。幼苗移栽時(shí)造成的根部傷口比成苗傷口更易引起青枯雷爾氏菌侵入。傷根后立即接種，植株感病受害嚴(yán)重，而 24 小時(shí)后再接種植株則幾乎不受傷害 24。接種量大時(shí)，就是沒(méi)有傷口也能侵入，此時(shí)病菌一般從次生根萌發(fā)處或根毛與皮層連接處侵入，但侵入率較低 25。 研究發(fā)現(xiàn)病菌侵入番茄植株后可以迅速地（ 4h 內(nèi)）侵入到根部皮層的細(xì)胞間隙內(nèi)， 2后便可在內(nèi)皮層細(xì)胞間隙和導(dǎo)管薄壁組織看到有病菌的存在， 4后細(xì)菌進(jìn)入并且塞滿木質(zhì)部導(dǎo)管， 6 天后，在整段莖桿都可以輕易的檢查到菌 體，到第 8 天植株呈現(xiàn)出極度萎蔫狀，隨著導(dǎo)管及其周圍組織功能的進(jìn)一步衰褪，植株迅速倒伏并死亡。在植株體內(nèi)形成的、從根部及倒伏在地面的莖桿釋放出來(lái)的 病菌， 開(kāi)始在土壤中營(yíng)腐生生活，等待著入侵新的寄主 26。 菌性青枯病的流行規(guī)律與預(yù)測(cè)預(yù)報(bào) 青枯病的預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)目前一般采用綜合法，即根據(jù)病蟲(chóng)形態(tài)、生理、生態(tài)等特點(diǎn)，綜合氣象變化、作物長(zhǎng)勢(shì)發(fā)育、農(nóng)事活動(dòng)等，預(yù)測(cè)病害的發(fā)生期，并與歷史上病害的發(fā)生進(jìn)行比較，綜合起來(lái)進(jìn)行分析。 番茄在 5月份進(jìn)入發(fā)病高峰，此時(shí)10厘米地溫平均 25 ，氣溫 23 左右 17。 煙草青枯病是福建煙草 的主要病害，一般在每年 4月下旬或 5月上旬由南向北開(kāi)始發(fā)生， 5月中、下旬遇上適宜的氣候可發(fā)生大流行，春煙區(qū)發(fā)生危害較重。該病發(fā)生危害與品種、耕作類型、栽培管理、地形地勢(shì)等有密切關(guān)系 27。孫曉揚(yáng)等報(bào)道南部地區(qū)姜青枯腐敗病的始發(fā)病期是 5月中下旬， 7月中旬至 9月中旬為主發(fā)病期，此階段土溫在 28 左右，土壤高溫，病害易發(fā)生流行， 9月中旬后病勢(shì)下降， 10月中旬停止，發(fā)病期達(dá) 140用抗病良好的姜種及種姜消毒處理、輪作換茬、凈土種植、健身栽培、藥劑防治等系列系統(tǒng)控制技術(shù)，可有效地控制病害的嚴(yán)重發(fā)生，減少損失 28。 轉(zhuǎn) 枯雷爾氏菌無(wú)致病力 菌株 對(duì)青枯病防治效果 的研究 4 菌性青枯病防治方法 物防治 致病力菌株 的利用 在 80 年代和 90 年代，用青枯雷爾氏菌無(wú)致病力菌株防治植物青枯病在國(guó)內(nèi)外青枯病的生物防治研究和應(yīng)用方面發(fā)表論文最多。臺(tái)灣 9用無(wú)致病力產(chǎn)細(xì)菌素的青枯雷爾氏菌（ 稱 121菌株、 30用 株及其噬菌體、 1用 欣正等 32用 株 治番茄青枯病，均在溫 室或小區(qū)試驗(yàn)取得良好的防效，但普遍出現(xiàn)后期防效降低的現(xiàn)象，大田試驗(yàn)尚未取得成功，可能是由于 株在大田土壤中不能大量繁殖，缺乏與其它微生物的競(jìng)爭(zhēng)力所致。鄭繼法等 33研究發(fā)現(xiàn)三個(gè)煙草細(xì)菌性青枯雷爾氏菌的無(wú)毒產(chǎn)細(xì)菌素菌株 煙草青枯雷爾氏菌 4有 免疫抗病效果 。 康耀衛(wèi)等 34將青枯菌無(wú)毒突變株 種于花生植株，發(fā)現(xiàn)其體內(nèi)過(guò)氧化物酶的活性增強(qiáng)，接種植株的葉片組織粗提液對(duì)致病力菌株有很強(qiáng)烈的體外抗菌作用，將這種粗提液與致病菌株同時(shí)注入花生葉片內(nèi)，亦表現(xiàn)出抑制發(fā)病的作用， 而且這種抑病作用隨著粗提液濃度下降而減弱。 株 細(xì)菌素敏感的毒性菌株 免疫抗病效果 明顯高于不敏感菌，說(shuō)明細(xì)菌素在生防中起著重要的作用，此后從 純出具生物活性的細(xì)菌素，分子量為 19000D，該細(xì)菌素具有蛋白質(zhì)性質(zhì)，含 16 種氨基酸 35。陳慶河等 36用紫外誘變法獲得的青枯無(wú)致病力菌株誘導(dǎo)番茄，發(fā)現(xiàn)植株產(chǎn)生了對(duì)青枯病的抗性反應(yīng)，該菌株對(duì)致病菌沒(méi)有直接的抑制作用，且對(duì)番茄不能致病，番茄經(jīng)無(wú)致病力菌株處理后，體內(nèi)與抗病反應(yīng)相關(guān)的苯丙氨酸解氨酶(過(guò)氧化物 酶 (多酚氧化酶 (性顯著增強(qiáng)；酚類物質(zhì)和木質(zhì)素含量也顯著提高；病程相關(guān)蛋白 (量也提高。日本 37在研究中發(fā)現(xiàn)一株無(wú)致病力 R. 株 其接番茄，可誘導(dǎo)植株產(chǎn)生一種比對(duì)照濃度高很多的細(xì)菌生長(zhǎng)抑制物番茄素（ 孢桿菌的利用 芽孢桿菌屬是生防菌研究中的重點(diǎn)，原因是其分離頻率高、易培養(yǎng)、易保存、有效期長(zhǎng)等特性。印度 8用 36菌株防治香蕉、茄子和番茄青枯病，分別取得了溫室試驗(yàn) 50%、 61%和 95%，田間試驗(yàn) 50%、 49%和 36%的防效，同時(shí)植株鮮重和生物產(chǎn)值也得到提高。南京農(nóng)業(yè)大學(xué)植保系與山東生物研究所合作，用芽胞桿菌 00%的防病效果，增產(chǎn) 39。 羅寬等 40,41從煙草根際和根表土壤分離鑒定了七株抗青枯病生防菌，并用其中三株 (一株屬不動(dòng)桿菌屬，兩株屬芽孢桿菌屬 )進(jìn)行了抑制煙草青枯病的試驗(yàn)，并初步研究了轉(zhuǎn) 枯雷爾氏菌無(wú)致病力 菌株 對(duì)青枯病防治效果 的研究 5 抗菌物質(zhì)的理化性質(zhì)。結(jié)果表明芽孢桿菌對(duì)多個(gè)煙草 青枯病菌株有廣譜性抑制作用，但效果有一定著異。 42將 株的懸浮液撒入有嚴(yán)重病害的土壤中，染病植株的死亡率明顯下降。 對(duì)于芽孢桿菌的防病機(jī)理，邱清華等 43的試驗(yàn)表明其抗菌物質(zhì)可能為蛋白質(zhì)性質(zhì)的物質(zhì)。楊合同通過(guò)用巨大芽孢桿菌菌株 明 39。 單胞桿菌的利用 從土壤中分離到的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌如芽孢桿菌和鏈霉菌菌株，往往很少能夠在植物的根區(qū)定殖并形成一個(gè)龐大的群體 44，而 細(xì)菌常能在植物根圍土壤中大量增殖，許多菌株對(duì)植物有抑制病害、促進(jìn)生長(zhǎng)的作用，可能是因?yàn)?禮遠(yuǎn)和康耀衛(wèi) 45用熒光假單孢菌（ P. 液具有明顯保護(hù)免受土壤青枯雷爾氏菌侵染的能力。靳紹菊等 46報(bào)道，通過(guò)分析研究，番茄青枯雷爾氏菌的拮抗菌多數(shù)屬于熒光假單孢菌屬，經(jīng)多次分離篩選，從土壤中分離出了對(duì)作物無(wú)不良影響而對(duì)番茄青枯雷爾氏菌有拮抗作用的菌株 104 個(gè)，經(jīng)試驗(yàn)，利用這種拮抗菌防治番茄青枯病，當(dāng)發(fā)病株率在 25%以下時(shí)，免疫抗病效果 可達(dá) 100%；但當(dāng)發(fā)病株率達(dá) 45%時(shí)， 免疫抗病效果 僅為 50%左右。 日本 47從洋蔥假單孢桿菌（ 株中提取出一種抗青枯雷爾氏菌的物質(zhì) 2少量該物質(zhì)加入含 R. 土壤懸浮液中可殺死病原菌。 根真菌的利用 菌根真菌由于一部分在根外，一部分在根內(nèi)，而占有獨(dú)特的生態(tài)位。它們從寄主得到營(yíng)養(yǎng)成分供應(yīng)，這一優(yōu)勢(shì)使它在與根系更緊密的聯(lián)系中，獲得更大的更有功能的總生物量， 并以此增加對(duì)植物的作用（與僅限于根際的其它微生物相比）。因此菌根真菌作為根際群落的組成，其重要作用受到越來(lái)越廣泛的承認(rèn)。一些學(xué)者研究了桉樹(shù) 現(xiàn) 種 的桉樹(shù)可以不發(fā)病或者發(fā)病較輕，死亡率較低，而且還對(duì)桉樹(shù)生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用 48。 枯拮抗菌的利用 黎定軍等 49對(duì)來(lái)自湖南嘉禾、郴縣、永州、永興、桂陽(yáng)和湘西等 23 個(gè)煙區(qū)青枯病發(fā)病較輕的煙地根際土壤進(jìn)行了室內(nèi)細(xì)菌分離，獲得 317 個(gè)菌株。測(cè)定了這些菌株對(duì)青枯雷爾氏菌拮抗性，篩選出有明顯抑菌作 用的菌株 48 個(gè)，其中最有效的拮抗菌株 10 個(gè)。對(duì)該 10 個(gè)菌株相互之間的拮抗性測(cè)定結(jié)果表明，有 6個(gè)菌株相互之間無(wú)拮抗作用，可在煙草青枯病的生物防治中應(yīng)用。丁愛(ài)云等 50從山東滕州、臨沂等縣（市）的煙草、番茄和辣椒根際采集土壤樣本 15 份，經(jīng)內(nèi)分離純化獲得細(xì)菌 102 株、放線菌 55 株。以煙草赤星病菌、野火病菌和青枯轉(zhuǎn) 枯雷爾氏菌無(wú)致病力 菌株 對(duì)青枯病防治效果 的研究 6 雷爾氏菌等為對(duì)象，對(duì) 157 個(gè)菌株進(jìn)行平板對(duì)峙培養(yǎng)法抑菌測(cè)定，分別篩選出有拮抗活性的細(xì)菌 33 株和放線菌 22 株。鄭福慶等 51從廣東省不同地方、不同作物的根圍及根際土壤中，篩選到對(duì)番茄青枯病病菌具抑菌效果的 菌株 20 個(gè)，盆栽試驗(yàn)表明，這些菌株可推遲番茄青枯病發(fā)生 10， 免疫抗病效果 高達(dá) 80%。 因工程生防菌的利用 康耀衛(wèi)等 52采用轉(zhuǎn)座子 變青枯雷爾氏菌，獲得了世界首例植物青枯雷爾氏菌胞外蛋白輸出缺失突變體（簡(jiǎn)稱 變體）。該突變體 在缺失了多種胞外蛋白外輸功能后，也失去了對(duì)寄主的致病力。 變體接種到植物體內(nèi)后，在局部范圍內(nèi)有一定的定殖能力。 業(yè)防治 壤添加劑的施用 帶菌土壤是青枯病最主要的初侵染源，如果能消除或減少土壤中的菌源，則能避免或減少病害的發(fā)生，因此施用有機(jī)物和無(wú)機(jī)物于土壤，可以降低土壤病菌濃度，這已成為防治土傳病害的一種措施。姚革等 53于 1992在四川用一種土壤添加劑對(duì)煙草和番茄青枯病進(jìn)行了小區(qū)防治試驗(yàn)，盆栽試驗(yàn)結(jié)果顯示：添加劑的防病機(jī)制主要是通過(guò)促進(jìn)土壤中有益微生物群體增長(zhǎng)實(shí)現(xiàn)的，施用添加劑的土壤 比對(duì)照土壤中放線菌和芽孢桿菌的數(shù)量增加 10。竹內(nèi)妙子等使用不帶土壤的營(yíng)養(yǎng)液栽培番茄也可防除番茄青枯病，通過(guò)防止原菌帶入現(xiàn)場(chǎng)，營(yíng)養(yǎng)液經(jīng) 60 5分鐘加熱消毒， 制在 下，在栽培結(jié)束時(shí)對(duì)發(fā)病現(xiàn)場(chǎng)用氯劑進(jìn)行消毒等均能有效防止番茄青枯病的發(fā)生 54。 物輪作和套種 除了引入有益微生物來(lái)防治青枯病以外，作物輪作和套種亦不失為經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便、有效的防病措施。 55發(fā)現(xiàn)，在青枯病發(fā)病 2 年以上時(shí)間的田塊上種植，非寄主植物可使 青枯雷爾氏菌 的種群密度降至一個(gè)很低的水平。國(guó)內(nèi)呂成寬等用番茄 套種洋蔥防治番茄青枯病，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：套種洋蔥的番茄青枯病發(fā)生遲、傳播慢，主要表現(xiàn)在首先抑制或殺死病菌，使發(fā)病推遲，其次是發(fā)病后能控制病害的迅速蔓延 56。 性砧木嫁接苗 由于番茄的抗青枯病基因遺傳是隱性或多基因的，以雜交遺傳育種方式選育抗病新品種，機(jī)率小，難度大，目前尚未見(jiàn)有成功的報(bào)道。而通過(guò)篩選抗病砧木，以嫁接方式培育抗病嫁接苗，是一條效果顯著方法簡(jiǎn)便的途徑 57。生產(chǎn)實(shí)踐證明，采用嫁接技術(shù)，將 “紅寶石 “、 “益農(nóng) 101”等優(yōu)質(zhì)番茄品種與抗性高、親合力強(qiáng)的砧木品種進(jìn)行嫁接，培育出的嫁接苗，可以有效地抵抗 青枯病的侵染、危害，從而達(dá)到高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)之目的 58。 學(xué)防治 生素防治 轉(zhuǎn) 枯雷爾氏菌無(wú)致病力 菌株 對(duì)青枯病防治效果 的研究 7 常用的有鏈霉素，四環(huán)素及有效霉素等。在印度的一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中，用 現(xiàn)青枯菌對(duì)鏈霉素、氯霉素、利福平、萬(wàn)占霉素、螺旋霉素和四環(huán)素有敏感性，其中四環(huán)素是最有效的一種 59。 除單獨(dú)使用外，抗生素也有復(fù)配或合用的例子。如使用鏈霉環(huán)素 (鏈霉素與四環(huán)