密級(jí)： 論文編號(hào)： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 學(xué)位論文 奶牛日糧中粗蛋白與中性洗滌纖維間 組合效應(yīng)的研究 n n I 摘 要 組 合效應(yīng)理論的出現(xiàn)對(duì)現(xiàn)行的反 芻 動(dòng)物飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)提出了巨大的挑戰(zhàn)，舊有的將各養(yǎng)分進(jìn)行簡(jiǎn)單的加權(quán)來(lái)進(jìn)行飼料配比的方式己不再適應(yīng)客觀發(fā)展要求 。 本研究通過(guò) 外產(chǎn)氣試驗(yàn) ，從營(yíng)養(yǎng)素角度研究了奶牛飼料間中性洗滌纖維 （ 粗蛋白（ 組合效應(yīng)，并通過(guò)奶牛生產(chǎn)性能試驗(yàn)，探討組合效應(yīng)理論與實(shí)踐問(wèn)題。 試驗(yàn)一 將 羊草 蓿 玉米青貯 豆粕按照 P 比例為 個(gè)處理 6個(gè)重復(fù)。用 記錄不同組合 2， 4， 6， 8，12， 24， 36， 48， 72和 96究其組合效應(yīng)，并測(cè)定瘤胃液 度和 外評(píng)價(jià)時(shí)，所有的組合均發(fā)生正的組合效應(yīng) 。羊草 豆粕組合時(shí)，當(dāng) P 現(xiàn)顯著的正組合效應(yīng)， 在 P 為 有最大正效應(yīng)值發(fā)生；苜蓿 豆粕組合時(shí)，當(dāng) P 為 現(xiàn)顯著的正組合效應(yīng)，最大正效應(yīng)值發(fā)生在 P 為 玉米青貯 P 為 出現(xiàn)顯著的正組合效應(yīng)，最大正效應(yīng)發(fā)生在 P 為 效應(yīng)隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)不斷減弱，培養(yǎng) 12h 組合效應(yīng)值最大，培養(yǎng) 96h 組合效應(yīng)值最小。當(dāng)粗飼料 豆粕組合，以 P 值較大時(shí)（ 蛋白比例較小時(shí)就出現(xiàn)正效應(yīng)，隨著蛋白比例的提高，正效應(yīng)也提高，在一定的 P 比例值（ 到 最大值，隨著蛋白比例的再次提高，正效應(yīng)又有下降。 試驗(yàn)二 將 羊草 豆粕、菜粕 和 棉粕按照 個(gè)處理 6 個(gè)重復(fù)。用 記錄不同組合 2， 4， 6， 8， 12， 24， 36， 48，72和 96究其組合效應(yīng)，并測(cè)定瘤胃液 度和 度。體外評(píng)價(jià)時(shí)，所有的組合均發(fā)生正 效應(yīng)，組合效應(yīng)值隨著粗蛋白比例的上升而增高 ,但當(dāng)粗蛋白含量很高時(shí)，正效應(yīng)值又有下 降的趨勢(shì) 。 豆粕與羊草 合時(shí)， P 比例在 有最 大的正效應(yīng)；菜粕與羊草 合時(shí)， P 比例在 有最大正效應(yīng)；棉粕與羊草 合時(shí)，P 比例在 有最大正效應(yīng)。 當(dāng)粗蛋白來(lái)源不同時(shí)，產(chǎn)生的組合效應(yīng)差異不顯著。 試驗(yàn)三 選擇了 16 頭處于中產(chǎn)水平（平均產(chǎn)奶量 17kg/d）的荷斯坦奶牛，根據(jù)產(chǎn)奶量、胎次和泌乳日齡按配對(duì)法隨機(jī)分為四組，調(diào)整奶牛日糧中 比例（ ，研究了不同 P 比例對(duì)泌乳奶牛的產(chǎn)奶性能和乳成分的影響。結(jié)果顯示 ， 奶牛日糧中不同的（中低產(chǎn)水平）的產(chǎn)奶性能有顯著影響（ P of .4,a P of .8,. of DF P on in P of .2,M 、 DF ,為負(fù)組合效應(yīng)； 絕對(duì)值則反映組合效應(yīng)的程度大小。 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率 當(dāng)組合效應(yīng)出現(xiàn)時(shí) ,往往伴隨著飼料中某種營(yíng) 養(yǎng)物質(zhì)消化率的變化。 1988）觀察到在飼喂氨化秸稈時(shí)綿羊的瘤胃內(nèi)干物質(zhì)降解率比飼喂未處理秸稈時(shí)大得多 ,這是典型的對(duì)消化率影響的正組合效應(yīng)。 1988） 把飼料的可利用能值或消化率作為衡量飼料間組合效應(yīng)的唯一指標(biāo) ,認(rèn)為日糧中各個(gè)單一飼料的消化率加權(quán)求和即可以作為日糧消化率的期望估算值 ,將日糧消化率的實(shí)測(cè)值與期望估算值進(jìn)行比較 ,即可得出日糧組合效應(yīng)的程度。 國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 3 利用率 在反芻動(dòng)物中 ,由于飼料間可吸收養(yǎng)分的差異對(duì)代謝能利用率的影響很大 ,表現(xiàn)出明顯的組合效應(yīng)。 同時(shí) ,在采食量和消化率同樣的條件下 ,由于飼料種類和配合比例的不同 ,使得反芻動(dòng)物對(duì)某種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用率出現(xiàn)不同。薛白（ 2001）實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn) ,牦牛和黑白花牛在采食低精料 （ 20%） 日糧時(shí)對(duì)氮的利用率顯著高于其在采食其它兩種日糧（精料 50%和 80%）時(shí)對(duì)氮的利用率。同時(shí) ,黑白花牛對(duì)日糧 P 的利用率隨精料水平升高而直線上升 （ 極顯著高于 此 , 霍鮮鮮（ 2004）認(rèn)為 ,在反芻動(dòng)物日糧中有一個(gè)理想的精粗比例 ， 或更精確地說(shuō)有一個(gè)比例 ， 在此比例狀況下纖維物質(zhì)的消化率會(huì)達(dá)到最高。譚支良等（ 1999） 實(shí)驗(yàn)證實(shí)，綿羊日糧中 整個(gè)碳水化合物的 （即日糧中 例為 日糧中纖維物質(zhì)的利用率達(dá)到最高。 他們認(rèn)為 ,在日糧中保持一定水平的易發(fā)酵碳水化合物 ， 不僅有助于纖維物質(zhì)在瘤胃內(nèi)的降解發(fā)酵 ， 而且有利于在后腸道的發(fā)酵消化 ， 從而提高了纖維物質(zhì)在整個(gè)消化道的消化率。王星凌等（ 2002）研究表明 ， 在麥秸日糧中適量添加不同易降解碳水化合物顯著提高降解有機(jī)物的日產(chǎn)量。大豆殼和果膠均能提高麥秸 解率。 碳水化合物效應(yīng)主要是由于瘤胃微生物具有優(yōu)先利用易發(fā)酵可溶性碳水化合物的特性。當(dāng)飼料富含可溶性碳水化合物時(shí) ， 瘤 胃內(nèi)非纖維分解菌將優(yōu)先從可溶性碳水化合物中獲取能量 ， 從而競(jìng)爭(zhēng)性地抑制了纖維分解菌的生長(zhǎng) ,或者是利用纖維分解產(chǎn)物的纖毛蟲從其它途徑獲取了所需能量 ， 不再與纖維分解菌協(xié)同作用之故。此時(shí)如果增加優(yōu)質(zhì)粗飼料的比例以稀釋糖類 ,將可以消除這種負(fù)組合效應(yīng)（盧德勛 ， 2000）。 飼料添加劑的相互作用 為了使反芻動(dòng)物最大限度的發(fā)揮生產(chǎn)性能 ， 人們常常在飼料中使用添加劑。但是隨之出現(xiàn)的是飼料添加劑之間或添加劑與飼料中營(yíng)養(yǎng)成分之間的組合效應(yīng)。 離子載體和酵母 目前 ,在反芻動(dòng)物中 應(yīng)用較廣泛 的 離子載體是 瘤胃素（莫能菌素）。 莫能霉素能抑制革蘭氏陽(yáng)性菌 ， 包括產(chǎn)乙酸、丁酸、氫離子 、 乳酸鹽和甲酸鹽的細(xì)菌 ， 但不影響產(chǎn)丙酸的革蘭氏陰性菌 ,以及乳酸發(fā)酵菌。體內(nèi)法試驗(yàn)結(jié)果表明 ， 莫能霉素能使甲烷產(chǎn)量降低 31%。因而通過(guò)飼喂莫能霉素可增加瘤胃丙酸含量和降低產(chǎn)甲烷作用 ， 提高飼料可消化能的利用效率 （ 984） 。此外， 1995） 等報(bào)道 ,莫能霉素可降低瘤胃氨濃度 ,減少飼料蛋白在瘤胃的降解。 酵母可影響細(xì)菌和原蟲的數(shù)量 ， 改善瘤胃生態(tài)環(huán)境 ， 刺激瘤胃中利用乳酸和消化纖維的細(xì)菌生長(zhǎng) ， 增 加了纖維素消化的起始速度 ， 能顯著增加瘤胃中乙酸、丙酸以及總揮發(fā)性脂肪酸的濃度 ， 從而使得瘤胃中揮發(fā)性脂肪酸含量上升。 1990）證實(shí)同時(shí)使用酵母和 莫能菌素 比單獨(dú)使用 莫能菌素 能使 公牛 增重 12% 具有正組合效應(yīng)。同時(shí) ， 酵母與離子載體的組合效應(yīng)還表現(xiàn)在酵母可以抵消添加離子載體所引起的 乳脂率的下降 ， 并且由于酵母能刺激乳酸的利用 ， 離子載體能抑制產(chǎn)乳酸細(xì)菌的生長(zhǎng) ， 所以同時(shí)添加酵母和離子載體能減少反芻動(dòng)物酸中毒的發(fā)生。 脂肪和煙酸 為了彌補(bǔ)反芻動(dòng)物能量 的 不足 ， 我們常 常會(huì)在日糧中添加一定量的脂肪 ， 可以提高反芻家畜能量進(jìn)食量 ,改善反芻 家畜 的生產(chǎn)性能。但是 ， 由于瘤胃微生物的特殊功能 ， 使得反芻家畜的脂肪中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 7 代謝與非反芻家畜有著明顯的不同。日糧中添加脂肪能抑制瘤胃微生物的活動(dòng) ， 影響其它營(yíng)養(yǎng)成分的消化吸收 ， 降低乳蛋白含量 （ 鄭曉中和馮仰廉 ,1996） 。 （ 1996）研究表明 ， 在日糧中添加煙酸可以消除添加脂肪產(chǎn)生的負(fù)面作用。 外產(chǎn)氣技術(shù) 粗飼料的采食量和消化率會(huì)極大影響反芻動(dòng)物的奶量和生產(chǎn)性能（ 990），長(zhǎng)久以來(lái)，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)家一直很關(guān)注這些 指標(biāo)。但通過(guò)體內(nèi)法測(cè)定飼料的采食量和消化率費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、價(jià)格昂貴、需要大量的飼料品而且不能大量地測(cè)定（ ， 1998； ， 1994），所以，科學(xué)家一直在嘗試通過(guò)實(shí)驗(yàn)室方法來(lái)測(cè)定采食量和消化率。曾有研究試圖建立起飼料化學(xué)成分與消化率之間的回歸關(guān)系，但尚未有廣泛適用的關(guān)系（ 1971； 1994）。 體外技術(shù)的發(fā)展 二十世紀(jì)五十年代以來(lái)建立的體外法，包括英國(guó)學(xué)者 1963 年）建立的兩 階段 法， 1983 年） 、 德國(guó)荷恩海姆大學(xué)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究所 1979） 等人發(fā)展的產(chǎn)氣法（ 、 真菌纖維素酶法和尼龍袋法。 因?yàn)樯飳W(xué)方法中所利用的微生物和酶對(duì)各種影響因素非常敏感而且具有針對(duì)性，所以該方法較化學(xué)方法更有意義（ 1994）。但需要重視的是，有效適用的實(shí)驗(yàn)室體外方法應(yīng)該重復(fù)性好，而且能和通過(guò)體內(nèi)測(cè)定得到的參數(shù)建立起關(guān)系。另外，體外方法不僅僅只是便宜而且還應(yīng)該比體內(nèi)方法所得到的數(shù)據(jù)更為精確。 1963） 所建立的技術(shù)由于其方便性，特別是需要測(cè)定大量樣品時(shí)的可操作性已在飼料價(jià)值評(píng)定中得到廣泛的應(yīng)用。該方法又稱兩 階段 法，飼料先在緩沖的瘤胃液中培養(yǎng) 48h，然后再在胃蛋白酶的酸性緩沖液中培養(yǎng) 48h。 1970） 對(duì)該方法進(jìn)行了改進(jìn)，即在瘤胃液中培養(yǎng)后測(cè)定中性洗滌纖維的量，從而估計(jì)飼料干物質(zhì)的真消化率。該方法與體內(nèi)法有很高的相 關(guān)關(guān)系 （ 1994），但仍然有一些缺陷；由于該方法是終點(diǎn)測(cè)定法，所以在經(jīng)過(guò)費(fèi)時(shí)費(fèi)力的培養(yǎng)之后，仍不能得到飼料的消化動(dòng)力學(xué)參數(shù)，另外 殘留物的測(cè)定會(huì)破壞樣品，故在試驗(yàn)中需要大量的重復(fù)。所以該方法很難應(yīng)用于植物組織或細(xì)胞壁的評(píng)價(jià)。 酶法（ 975； 1982； 1986）是利用酶取代兩 階段 法中的微生物，該方法同兩 階段 法一樣是終點(diǎn)法，具有兩 階段 法所具有的一些不足。該方法最大的優(yōu)點(diǎn)在于其不需要瘺管動(dòng) 物作為接種物的來(lái)源。與兩 階段 法不同，酶法所得到的結(jié)果不能很真實(shí) 地 反應(yīng)體內(nèi)的情況。 尼龍袋法可以測(cè)定飼料的降解速度及降解率，已經(jīng)應(yīng)用多年（ 1977）。該技術(shù)能有效地測(cè)定飼料的降解速度、降解率以及潛在降解率，其不足在于每個(gè)時(shí)間點(diǎn)只能測(cè)定少量的飼料樣本，而且至少需要三頭瘺管動(dòng)物來(lái)消除動(dòng)物的個(gè)體差異。這些不足限制了利用該技術(shù)在實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)大量的樣本，另外應(yīng)用該技術(shù)時(shí)，消化初期階段樣本的流失以及微生物對(duì)品質(zhì)不同的粗飼料的附著情況會(huì)使試驗(yàn)結(jié)果失真。 （ 1995） 比較了尼龍袋法和兩 階段 法，發(fā)現(xiàn)前者會(huì)高估飼料的消化率，這是因?yàn)槔媚猃埓〞r(shí)，飼料中快速降解的碳水化合物成份在降解之前已經(jīng)消失?；谙瘹埩粑锓治龅膬?階段 法和尼龍袋法在評(píng)價(jià)富含單寧的飼 料樣本中都會(huì)高中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 8 估飼料的干物質(zhì)降解率，因?yàn)樵谶@兩個(gè)體系中，單寧能溶解，但不能被消化（ ， 1993）。 瘤胃降解與氣體產(chǎn)量之間的關(guān)系很早就被關(guān)注（ 1984） ，但直到上世紀(jì) 40 年代才開始測(cè)定瘤胃的氣體產(chǎn)量（ 1943）。 （ 1979）通過(guò)體外產(chǎn)氣的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)體外產(chǎn)氣量與體內(nèi)的消化參數(shù)具有很高的相關(guān)性。在此之后，產(chǎn)氣技術(shù)才被確定為評(píng)價(jià)飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的有效方法之一。 體外產(chǎn)氣技術(shù)的原理 體外產(chǎn)氣技術(shù)的原理 當(dāng)體外利用緩沖瘤胃液消化 飼料時(shí)，碳水化合物會(huì)降解成短鏈的脂肪酸（ 氣體（主要是二氧化碳和甲烷）和微生物的細(xì)胞成份。氣體主要是碳水化合物在降解為乙、丙、丁酸的過(guò)程中產(chǎn)生的，與碳水化合物相比，蛋白質(zhì)降解時(shí)的產(chǎn)氣量要低（ 1960） ， 脂肪的產(chǎn)氣量可以忽略不計(jì)。 2000可可油、棕桐油或豆油的產(chǎn)氣量為 而同等質(zhì)量的纖維素和酶蛋白的產(chǎn)氣量分別為 80 988； 997） 。 體外產(chǎn)氣技術(shù)中的氣體成份主要是發(fā)酵產(chǎn)生的二氧化碳、甲烷以及緩 沖液緩沖短鏈脂肪所釋放的二氧化碳。當(dāng)利用碳酸鹽緩沖液培養(yǎng)粗飼料時(shí)，約 50%的氣體為緩沖液緩沖短脂肪酸時(shí)所產(chǎn)生，其余的則為發(fā)酵產(chǎn)生（ 993） ， 當(dāng)所產(chǎn)生的丙酸比例較高時(shí)（精料），緩沖液釋放的二氧化碳可達(dá)總產(chǎn)量的 60%。利用磷酸鹽緩沖液時(shí)，每 1短鏈脂肪酸能使緩沖液釋放 二氧化碳 （ 1992； 993） 。短鏈脂肪酸的產(chǎn)氣量具有高度相關(guān)性 （ 1992； 1993；1995） 。 氣體主要是在底物發(fā)酵為乙酸和丁酸時(shí)產(chǎn)生，而降解為丙酸時(shí)的氣體產(chǎn)量?jī)H僅來(lái)源于緩沖液緩沖酸所釋放的二氧化碳，所以，相對(duì)較低的產(chǎn)氣量往往意味丙酸的產(chǎn)量較低（ 960；1966； 1994）。底物發(fā)酵時(shí)產(chǎn)生的短鏈脂肪酸中丙酸的摩爾比取決于底物的種類 （ 1992； 1993） 。所以乙丙酸的比例可以用來(lái)評(píng)價(jià)各種飼料的差異?？焖侔l(fā)酵的碳水化合 物所產(chǎn)生的丙酸要比乙酸多，慢速發(fā)酵的碳水化合物則相反。很多學(xué)者已經(jīng)報(bào)道，當(dāng)飼喂富含谷物類飼料時(shí)，丙酸的產(chǎn)量會(huì)很高，乙丙酸的比例則較低（ 990）。如果體外培養(yǎng)過(guò)程中乙酸的比例很高，那么此時(shí)發(fā)酵的產(chǎn)氣量要高于高比例丙酸的發(fā)酵，換言之，產(chǎn)氣量的變化會(huì)影響丙酸占短鏈脂肪酸的比例。 體外發(fā)酵時(shí)微生物會(huì)受到很多因素的影響，從而影響到產(chǎn)氣量，如厭氧程度、溫度、 及緩沖能力。 （ 1970）發(fā)現(xiàn)，體外培養(yǎng) 3h 時(shí)，當(dāng)?shù)孜锏牧繌?1g 增加到 3g 時(shí)，產(chǎn)氣量會(huì)遞減，這可能是由于緩沖液的緩沖能力下降 而且微生物附著在底物的比例減少的原因，尚未發(fā)現(xiàn)關(guān)于當(dāng)?shù)孜锪吭黾佣黾泳彌_瘤胃液體積的報(bào)道。 （ 1983）報(bào)道， 24h 的產(chǎn)氣量與底物量有 很高的線性相關(guān)性，但產(chǎn)氣量超過(guò) 90，相關(guān)性則不再存在，這可能是由于培養(yǎng)時(shí)產(chǎn)生的短鏈脂肪酸超過(guò)緩沖液的緩沖能力造成的。 1992）建議，在體外培養(yǎng)時(shí)為了避免因?yàn)楫a(chǎn)生的酸過(guò)多超過(guò)緩沖能力而造成 降、瘤胃微生物活性降低，短鏈脂肪酸的產(chǎn)量不能超過(guò) 使碳酸緩沖液釋放 1體，其體積在 39 時(shí)為 。 （ 1996） 利用同樣的緩沖液（ 992）培養(yǎng)粉碎的玉米，發(fā)現(xiàn)當(dāng)?shù)孜锍^(guò) ，會(huì)超過(guò)緩沖液的緩沖能力。所以。體外培養(yǎng)時(shí)，底物的量一定要根據(jù)緩中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 9 沖液的緩沖能力而定。試驗(yàn)動(dòng)物（ ， 1970）及瘤胃液（ 992）也會(huì)影響產(chǎn)氣量， 1992）利用不同時(shí)間采集的瘤胃液培養(yǎng)葡萄糖、大米淀粉和纖維素，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)氣量 有 顯著差異，但這種差異能通過(guò)適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行校正。 產(chǎn)氣量的理論計(jì)算 若體外培養(yǎng)的產(chǎn)物能進(jìn)行測(cè)定，可以通過(guò)這些數(shù)據(jù)計(jì)算體外的產(chǎn)氣量，理想的計(jì)算值與實(shí)際觀測(cè)值之間具有高度的相關(guān)性（ 992），另外，還可以通過(guò)短鏈脂肪酸的摩爾比以及總量計(jì)算出發(fā)酵時(shí)二氧化碳和甲烷的產(chǎn)量。 體外產(chǎn)氣技術(shù)的用途 消化參數(shù)的預(yù)測(cè) 研究者很早就利用回歸公式通過(guò)飼料的化學(xué)成分來(lái)預(yù)測(cè)其體內(nèi)的消化率（ 971； 1994）。 （ 1979）對(duì)體外產(chǎn)氣量和各種化學(xué)成份進(jìn) 行多元回歸（數(shù)據(jù)來(lái)源 89 個(gè)試驗(yàn)），建立了飼料體內(nèi)有機(jī)物消化率與這些因素的回歸方程（ R=該研究小組作了進(jìn)一步的研究，通過(guò) 400 個(gè)體外試驗(yàn)來(lái)建立體外產(chǎn)氣量和飼料化學(xué)成份與體內(nèi)代謝能的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，基于產(chǎn)氣量和化學(xué)成份的預(yù)測(cè)要比僅僅基于化學(xué)成份的預(yù)測(cè)更為精確。其他學(xué)者們（ ， 1997； 1997； ， 1997； ，1997）也報(bào) 導(dǎo) 了體外產(chǎn)氣量與體內(nèi)消化率具有顯著的相關(guān)性，若考慮飼料中蛋白對(duì)產(chǎn)氣量的影響則 能進(jìn)一步提高對(duì)體內(nèi)消化率的預(yù)測(cè)。 （ 1996）通過(guò)預(yù)測(cè)飼料的凈能比較了酶法、化學(xué)成份法和體外產(chǎn)氣法，發(fā)現(xiàn)在評(píng)價(jià)單個(gè)飼料凈能時(shí)，體外產(chǎn)氣法較另外兩種方法更接近體內(nèi)的結(jié)果。 （ 1983）在 （ 1979）的注射器式產(chǎn)氣技術(shù)和氨測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上，提出了測(cè)定瘤胃蛋白降解率的方法。飼料在缺乏或存在碳水化合物的體外體系中培養(yǎng)，由于產(chǎn)氣量與培養(yǎng)液中氨的濃度是呈負(fù)相關(guān)的，這樣就能夠計(jì)算出在沒(méi)有可發(fā)酵碳水化合物時(shí)氨氮的釋放量，飼料所釋放的凈的氨氮量就可以用總氨氮量減去通過(guò)計(jì)算得到的空白氨氮量（不含 底物培養(yǎng)時(shí)的氨氮）而得，這樣就可以計(jì)算出飼料蛋白的體外降解率。該方法曾被用來(lái)研究各種工農(nóng)業(yè)副產(chǎn)品（ 1987）、油籽餅粕（ ， 1990）的蛋白降解率，得到的結(jié)果與通過(guò)其他方法測(cè)定的結(jié)果比較接近（ ， 1983）。 （ 1997）改進(jìn)了該技術(shù)用來(lái)測(cè)定粗飼料中的體外降解率。 發(fā)酵的動(dòng)力學(xué)研究及產(chǎn)氣的數(shù)學(xué)模型 由于粗飼料主要是由瘤胃微生物降解的，如果能掌握其降解特性，對(duì)評(píng)價(jià)粗飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值是很有幫助的 （ ， 1986）。飼料發(fā)酵的動(dòng)力學(xué)參數(shù)可以通過(guò)發(fā)酵產(chǎn)氣量和緩沖液緩沖短鏈脂肪酸所釋放的氣體計(jì)算得到 ，這些參數(shù)主要與飼料中可溶、不可溶但能降解和不能降解的部分所占的比例有關(guān)，通過(guò)對(duì)產(chǎn)氣特性的數(shù)學(xué)描述可以分析數(shù)據(jù)、評(píng)價(jià)底物和培養(yǎng)液造成的差異和飼料溶解成份及慢速發(fā)酵成份的降解率。研究者們已經(jīng)建立了很多模型來(lái)描述體外產(chǎn)氣。 1979）基于尼龍袋法所建立的指數(shù)模型已被廣泛的用來(lái)評(píng)價(jià)飼料的降解動(dòng)力學(xué)參數(shù)。該方法也可用作體外產(chǎn)氣法時(shí)的動(dòng)力學(xué)描述（ ， 1990； ， 1993； ，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 10 1993），該模型假定飼料的降解速度是恒定的，即描述的是動(dòng)力學(xué)的第一級(jí)參數(shù)（ ， 1996）。但由于有一些飼料顆粒的發(fā)酵速度并不一致，所以該模型不能試用所有飼料。 1993）比較了多種產(chǎn)氣模型，發(fā)現(xiàn)與 S 型模型相比，指數(shù)模型會(huì)導(dǎo)致比較大的殘余平均方差。（ 1996）建立了“三段”模型來(lái)區(qū)分飼料中可溶、不可溶但能降解和不能降解的部分，從理論上來(lái)說(shuō)，該模型能夠提供非常有用的數(shù)據(jù)，但利用該模型時(shí)，需要非常復(fù)雜的設(shè)備來(lái)記錄各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的產(chǎn)氣量，此外，研究者發(fā)現(xiàn)在 預(yù)測(cè) 24h 產(chǎn)氣量時(shí)不是很準(zhǔn)確（ ， 1998）。 隨意采食量的預(yù)測(cè) 隨意采食量是限制反芻動(dòng)物利用粗飼料的一個(gè)重要因素（ 1990），所以預(yù)測(cè)采食量特別是纖維類物質(zhì)的采食量，是反芻動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)的一個(gè)重要研究領(lǐng)域（ 1990）。眾多學(xué)者均報(bào)道體外產(chǎn)氣量與干物質(zhì)采食量有顯著性的相關(guān)性（ 1997； 1997； 997;），利用體外產(chǎn)氣量可以預(yù)測(cè)動(dòng)物的采食量。粗飼料的細(xì)胞壁 會(huì)由于瘤胃的填充原理影響隨意采食量（ 1994），與全飼料的產(chǎn)氣量相比，從飼料中提取的中性洗滌纖維的產(chǎn)氣量與隨意采食量的相關(guān)性更高，中性洗滌纖維的產(chǎn)氣量較全飼料的產(chǎn)氣量更能準(zhǔn)確的預(yù)測(cè)采食量（ 82%（ 1997）。目前已有很多模型來(lái)預(yù)測(cè)隨意采食量，從試驗(yàn)結(jié)果看，既考慮發(fā)酵初期的產(chǎn)氣量（ 4考慮到整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程的降解（ 24h）的模型要比只考慮產(chǎn)氣的動(dòng)力學(xué)模型更為合理些（ ， 1997； 997）。 抗?fàn)I養(yǎng)因子的研究 與原位技術(shù)和其他基于殘留物分析的體外技術(shù)相比，體外產(chǎn)氣法更具有優(yōu)勢(shì)研究飼料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子。基于殘留物分析的體外技術(shù)會(huì)忽視掉可溶性的抗?fàn)I養(yǎng)因子，認(rèn)為其不會(huì)對(duì)能量的消化和代謝起作用，這樣會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果，而在體外產(chǎn)氣技術(shù)中，這些抗?fàn)I養(yǎng)因子會(huì)對(duì)產(chǎn)氣量產(chǎn)生影響，從而被檢測(cè)到。 此外，產(chǎn)氣技術(shù)可能還比化學(xué)分析法更能準(zhǔn)確地定量飼料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子?；瘜W(xué)方法只是根據(jù)某一個(gè)抗?fàn)I養(yǎng)因子的理化特性來(lái)測(cè)定其含量，但抗?fàn)I養(yǎng)因子在動(dòng)物體內(nèi)表現(xiàn)的是其生物學(xué)上的特性，而且同一個(gè)抗?fàn)I養(yǎng)因子在不同的飼料中可能 會(huì)再現(xiàn)出不同的特性，而體外產(chǎn)氣技術(shù)則是綜合地體現(xiàn)出營(yíng)養(yǎng)因子在生物層面上對(duì)發(fā)酵的影響。此外，體外產(chǎn)氣技術(shù)還能反映出各種不同抗?fàn)I養(yǎng)因子在發(fā)酵時(shí)的互作效應(yīng)。 科學(xué)家已利用體外產(chǎn)氣法研究地中海地區(qū)（ ， 1993）和非洲地區(qū)牧草中的抗?fàn)I養(yǎng)因子（ ， 1993； ， 1994； ， 1995）。 （ 1995）利用體外產(chǎn)氣技術(shù)研究了單寧和茶皂素的作用，并測(cè)定了它們對(duì)微生物蛋白合成的影響，發(fā)現(xiàn)單寧和茶皂素的作用是累加的，相互不會(huì)抵消對(duì)方的作用。飼料中的酚類物質(zhì)對(duì)消化有負(fù)面 作用，而且通過(guò)體外產(chǎn)氣技術(shù)得到的影響比尼龍袋法得到的更為顯著（ ， 1993）。 （ 1995） 報(bào)道飼料中單寧的濃度與體外產(chǎn)氣量具有顯著的負(fù)相關(guān)。 結(jié)合化學(xué)方法，可以通過(guò)體外產(chǎn)氣技術(shù)評(píng)估單寧對(duì)飼料的結(jié)合力（ ， 1995； 1993）， 從而研究單寧對(duì)飼料發(fā)酵的負(fù)面影響以及如何提高富含單寧的飼料的消化率（ 1995； ， 1993； 1993）。 1996）利用單寧的中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 11 生物學(xué)特性， 在體外培養(yǎng)時(shí)加入聚乙烯乙二醇 6000（ 研究單寧的活性，該配體能與單寧結(jié)合為 寧對(duì)瘤胃微生物的影響越大，產(chǎn)氣量的升高幅度就越大。然后根據(jù)產(chǎn)氣量和 立的公式計(jì)算出代謝能和有機(jī)物的消化率，從而評(píng)價(jià)含有單寧的飼料中單寧對(duì)飼料代謝能和有機(jī)物消化率可能的影響。 評(píng)價(jià)飼料間組合效應(yīng) 在配制反芻動(dòng)物日糧時(shí) ,我們假設(shè)配合日糧中總的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等于單個(gè)飼料組分的加權(quán)和值。然而有時(shí)配合日糧的表觀消化率并不等于日糧中各單個(gè)飼料組分表觀 消化率的加權(quán)和值。 （ 1995）利用體外產(chǎn)氣技術(shù)測(cè)定了基礎(chǔ)日糧與補(bǔ)充料混合物的產(chǎn)氣量，從而研究基礎(chǔ)日糧與補(bǔ)充料之間的組合效應(yīng)，該試驗(yàn)顯示，易發(fā)酵的飼料補(bǔ)充料能提高瘤胃微生物的活性，從而促進(jìn)粗飼料的降解。 花生餅與 稻草之間存在正組合效應(yīng)，而與稻糠之間則出現(xiàn)負(fù)組合效應(yīng)。他們還發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)的早期（ 12h）的組合效應(yīng)比培養(yǎng)末期（ 52h 和 166h）要強(qiáng)得多。 蘇海涯（ 2002）利用體外產(chǎn)氣技術(shù)研究了桑葉與各種餅粕類飼料間的組合效應(yīng)，并從能氮平衡上解釋了組合效應(yīng)產(chǎn)生的機(jī)制 ， 發(fā)現(xiàn)用產(chǎn)氣量評(píng)定的結(jié)果同用消化率評(píng) 定的結(jié)果在趨勢(shì)上高度一致 ， 他認(rèn)為可以 以直接用氣體產(chǎn)量評(píng)定飼料間的組合效應(yīng) 。 （ 2002）采用體外產(chǎn)氣法研究了 未處理稻稈和化學(xué)處理稻稈中添加黑麥草 (桑樹葉時(shí)也發(fā)現(xiàn)了正組合效應(yīng)。他們認(rèn)為這是由于添加的牧草或蛋白質(zhì)類飼料 (如花生餅、棉餅 )增加了組合料中的易發(fā)酵物質(zhì) (如能量、氨基酸或縮氨酸 ),從而促進(jìn)了瘤胃微生物的生長(zhǎng) ,使組合料在體外培養(yǎng)時(shí)產(chǎn)生了組合效應(yīng)。 使用這種方法， （ 2002）研究?jī)煞N粗飼料（ 精料或干草之間的組合效應(yīng)，以總產(chǎn)氣量為衡量發(fā)現(xiàn)粗飼料與精料間存在組合效應(yīng)而與干草之間卻不出現(xiàn)組合效應(yīng)。 （ 2003）研究了玉米青貯、大麥、豆粕和苜蓿干草之間的組合效應(yīng)。發(fā)現(xiàn)超過(guò) 10%的正組合效應(yīng)發(fā)生在體外培養(yǎng)的早期階段（例如 6h），但是，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，這些效應(yīng)則逐漸消失。同時(shí)，使用三種原料的混合在 6h 時(shí)組合效應(yīng)值為 7%而到了 24h 時(shí)，下降到 3%在 72h 時(shí)則為 1% 在體外產(chǎn)氣法中，組合效應(yīng)發(fā)生的程度隨著飼料的種類和不同比例而變化，特別是隨著培養(yǎng)時(shí)間 而變化，因此，在某些情況下應(yīng)用體內(nèi)法來(lái)驗(yàn)證體外法的結(jié)果是必需的。 飼料的加工處理 最近， （ 2003）應(yīng)用產(chǎn)氣法評(píng)價(jià)了不同加工處理的玉米對(duì)體外瘤胃發(fā)酵的影響。盡管整粒玉米（ 蒸汽壓片玉米（ 被粉碎相同的顆粒大小，但是在體外發(fā)酵特性上兩者處在差異。 8h 累積產(chǎn)氣量上要高于 24h 和 72h 則沒(méi)有差異。同時(shí)，達(dá)到全部產(chǎn)氣量的 25%、 50%、 75%和 90%的時(shí)間 短于 此，體外產(chǎn)氣法能被應(yīng)用到谷物加工廠檢測(cè)谷物的加工處理情況，同時(shí)能比較不同 加工廠的處理程度。 甲烷的測(cè)定 甲烷是導(dǎo)致溫室效應(yīng)的主要因素之一（ 989）。反芻動(dòng)物是主要的甲烷排放源，地球上反芻動(dòng)物年產(chǎn)甲烷量約 07 噸，占散發(fā)到大氣中的甲烷總量的 15%,而且還以每年 1%的速度遞增（ ， 1988）。同時(shí)甲烷是瘤胃發(fā)酵能量損失的主要原因，約有 6%飼料能量以甲烷的形式被損耗（ ， 1994； ， 1991），因此對(duì)瘤胃甲烷產(chǎn)量調(diào)控、測(cè)定甲烷中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 12 含量是必要的。使用體外技術(shù)被認(rèn)為是比較可行的測(cè)定甲烷含量的有效方法（ ， 2003；， 2004）。 （ 2005）利用體外產(chǎn)氣法評(píng)價(jià) 7 種 糧的總產(chǎn)氣量和甲烷產(chǎn)量。結(jié)果表明，甲烷含量在 6 和 24h 時(shí)沒(méi)有差異，但在 48 和 72h 則有差異。 （ 2003）應(yīng)用產(chǎn)氣法測(cè)定了24h 甲烷產(chǎn)量。谷物的甲烷產(chǎn)量范圍為 34粗飼料的甲烷含量范圍在 12多應(yīng)用產(chǎn)氣法測(cè)定甲烷產(chǎn)量與體內(nèi)法測(cè)定的結(jié)果是相似的（ ， 2002），表明這種方法在測(cè)定甲烷產(chǎn)量變化是可行的。 小結(jié) 反芻動(dòng)物飼料組合效 應(yīng)是普遍存在的 ， 但是由于動(dòng)物種類、飼養(yǎng)水平、飼料種類和加工水平等因素 ， 組合效應(yīng)發(fā)生的機(jī)制不會(huì)是單一的 ， 往往是多種機(jī)制同時(shí)存在。認(rèn)識(shí)到飼料組合效應(yīng)的重要性 ， 了解組合效應(yīng)發(fā)生機(jī)制 ， 從而在生產(chǎn)實(shí)踐中避免負(fù)組合效應(yīng)出現(xiàn) ， 有意識(shí) 地 利用正組合效應(yīng)來(lái)提高動(dòng)物對(duì)飼料的采食量和利用率 ， 提高動(dòng)物生產(chǎn)性能 ， 完善飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)定理論和技術(shù) ， 進(jìn)一步促進(jìn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)理論的發(fā)展。 研究 目的、意義、 內(nèi)容和技術(shù)路線 究 目的和意義 本研究旨在揭示奶牛日糧組合效應(yīng)發(fā)生機(jī)制及其對(duì)瘤胃環(huán)境、粗飼料利用率及對(duì)奶牛生產(chǎn)性能的影響， 確定正組合效應(yīng)出現(xiàn)時(shí)各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的最佳比例，建立產(chǎn)氣量為主要指標(biāo)的評(píng)估反芻動(dòng)物飼料間組合效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室體系 。 通過(guò)本 試驗(yàn) 研究， 探討 產(chǎn)生組合效應(yīng)的原因 ， 有助于通過(guò)日糧組合和營(yíng)養(yǎng) 調(diào)控 達(dá)到瘤胃發(fā)酵的最佳 效果 ， 將為進(jìn)一步系統(tǒng)研究反芻動(dòng)物中不同種類飼料間的組合效應(yīng) 提供理論依據(jù) ，為更合理配制反芻動(dòng)物日糧提供理論指導(dǎo)，從而有效地提高現(xiàn)有飼料資源的利用率。 究?jī)?nèi)容 試驗(yàn)一 不同來(lái)源 粗蛋白間組合效應(yīng) 試驗(yàn)二 不同來(lái)源粗蛋白與 組合效應(yīng) 試驗(yàn)三 日糧粗蛋白與 組合效應(yīng)對(duì)奶牛生產(chǎn)性能的影響 試驗(yàn)四 日糧粗蛋白與 組合效應(yīng)對(duì)日糧表觀消化率的影響 術(shù)路線 本試驗(yàn) 通過(guò)體外和體內(nèi)相結(jié)合的方法，研究日糧 粗蛋白組合效應(yīng)及對(duì)泌乳奶牛生產(chǎn)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 13 性能和消化率的影響，其技術(shù)路線見下圖： 實(shí)驗(yàn)室研究 動(dòng)物試驗(yàn) 外產(chǎn)氣法 不同 P 比例混合日糧的組合效應(yīng)對(duì)奶牛生產(chǎn)性能的影響 不同來(lái)源 豆粕蛋白間的組合效應(yīng) 不同來(lái)源蛋白質(zhì)與羊草 的組合效應(yīng) 不同來(lái)源 不同來(lái)源蛋白質(zhì)與 確定 調(diào)整日糧中 P 比例 不同 P 比例混合日糧的組合效應(yīng)對(duì)奶牛日糧表觀消化率的影響 產(chǎn)奶量測(cè)定 乳成分測(cè)定 各種養(yǎng)分表觀消化率測(cè)定 產(chǎn)氣量 國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第二章 不同來(lái)源 粗蛋白間組合效應(yīng) 14 第二章 不同 來(lái)源 粗蛋白間組合效應(yīng) 粗飼料是反芻動(dòng)物 日糧的主要組成部分 ，但是由于其粗纖維含量豐富，粗蛋白含量較少，導(dǎo)致采食量和消化率都 比較低 。因此，在低質(zhì)量粗飼料中添加蛋白，可以提高反芻動(dòng)物對(duì)粗飼料的利用率，從而提 高生產(chǎn)性能，即有正組合效應(yīng)。可是過(guò)多添加蛋白則是不經(jīng)濟(jì)，而且易造成環(huán)境污染，還會(huì)影響纖維消化率，導(dǎo)致乳脂率下降，并引起代謝疾病。因此，確定合適的蛋白供給量是非常重要的。本試驗(yàn)的主要目的是確定蛋白源與粗飼料 組合效應(yīng)發(fā)生時(shí)的最佳比例及瘤胃發(fā)酵特性，為配制奶牛日糧提供參數(shù)。本試驗(yàn)選取 3 種常見奶牛粗飼料 用 粗蛋白間組合效應(yīng)，旨在尋找當(dāng)正組合效應(yīng)發(fā)生時(shí)最佳比例及對(duì)瘤胃發(fā)酵的影響。 材料與方法 驗(yàn)材料 蛋白源：豆粕 經(jīng) 65 干燥，粉碎，過(guò) 40 目篩，密封， 4 保存。 ：羊草、苜蓿、玉米青貯提取 以下方法制備： 飼料原料經(jīng) 65 干燥，粉碎，過(guò) 40 目篩，稱取 燒杯中 ， 加入 100性洗滌液 ， 105 恒溫 1h， 用 37龍布過(guò)濾 ，并用熱蒸餾水反復(fù)洗滌過(guò)濾 ， 最后用丙酮和乙醇各 100滌 1 次 ， 自然干燥后 ， 再用100 硫酸銨溶液浸泡過(guò)夜 ， 以除去微量的以離子鍵結(jié)合的洗滌劑，然后用熱蒸餾水反復(fù)洗滌過(guò)濾 ， 最后在 50 烘干，密封， 4 保存。 原料主要成分見表 2 2料主要成分 of 羊草 米青貯 蓿干草 源：以玉米淀粉作為主要非結(jié)構(gòu)性碳水化合物 （ 來(lái)源。由于淀粉是瘤胃微生物的主要底物之一，大部分能分解淀粉的細(xì)菌不能利用纖維素，且淀粉是中度發(fā)酵成分，能彌補(bǔ)發(fā)酵緩慢的纖維素對(duì)快速降解的 N 源提供碳源的不足。 驗(yàn)動(dòng)物及其飼養(yǎng)管理 采 用兩頭 2 周歲、體況良好、體重約 400 公斤、安裝有永久性瘤胃瘺管的荷斯坦閹公牛作為中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第二章 不同來(lái)源 粗蛋白間組合效應(yīng) 15 瘤胃微生物的供體動(dòng)物。試驗(yàn)牛按 維持水平飼喂，每天分 2 次 8:00 和 14:00） 飼喂混合精料 2精料配方見表 2，羊草 2玉米秸自由采食，自由飲水。 表 2驗(yàn)用瘺管牛精料配方 of 料 百分比 （ %） 玉米 粕 24 豆皮 15 石粉 酸氫鈣 1 食鹽 混料 養(yǎng)成分 粗蛋白 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 將 蛋白 源 按以下 比例 （ P） 混合， 采用 氣法進(jìn)行體外培養(yǎng)試 驗(yàn)，每個(gè)處理 6 個(gè)重復(fù)。 例為： 1， 1， 1， 1， 1， 1（見表 2 表 2養(yǎng)底物原料組成 （ of 項(xiàng)目 組成比例（ P） 粕 米淀粉 體外培養(yǎng)系統(tǒng) 工瘤胃裝置 具塞注射器狀培養(yǎng)器 （ 100具有 1度 ）、 恒溫 水浴搖床。 胃液 試驗(yàn)用瘤胃液取自兩只裝有永久性瘤胃瘺管的荷斯坦閹公牛，在早飼前采集瘤胃食糜，采集中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第二章 不同來(lái)源 粗蛋白間組合效應(yīng) 16 部位為瘤胃的后背盲囊。采集到的瘤胃液立即放入 39左右的水浴中保存，以防止瘤胃液中微生物死亡。然后，將瘤胃食糜用四層紗布兩次過(guò)濾于接收瓶中，置于 39恒溫水浴箱中保存，通入二氧化碳，待用。 工唾液 人工唾液的調(diào)制 ： 400餾水 +量元素溶液 （ A） + 200沖液 （ B） + 200 C） +天青溶液 （ D） ，用 于培養(yǎng) 前 1h 加入加還原劑 （ E）直至溶液由淡蘭色轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)色。置于恒溫水浴中預(yù)熱至 39待用。 調(diào)制成人工唾液的各溶液分別組成 : A、微量元素溶液 : 蒸餾水至 100B、緩沖液 : 蒸餾水至 1000C、常量元素溶液 :無(wú)水 ） 、 無(wú)水 ） 、 7蒸餾水至 1000D、刃天青溶液 : W/V） ; E、還原劑溶液 （ 現(xiàn)配現(xiàn)用 ） :l l） ， 蒸餾水 95 作步驟 準(zhǔn)確稱取經(jīng)粉碎過(guò) 40 目篩的試驗(yàn)原料 200DM 小心地放入培養(yǎng)器內(nèi)腔，然后用少量液體石蠟或凡士林涂在活塞筒的四周，以防漏氣，而且消除培養(yǎng)器內(nèi)腔和內(nèi)塞之間的摩擦，盡量減小氣體產(chǎn)生過(guò)程中活塞向上移動(dòng)的阻力。然后準(zhǔn)確量取用二氧化碳飽和的微生物培養(yǎng)液30出培養(yǎng)器中的氣泡，密封， 記錄初始刻度后，將其置于 39 水浴搖床中進(jìn)行體外發(fā)酵培養(yǎng)。每次產(chǎn)氣試驗(yàn)至少 有三個(gè)空白對(duì)照作校正用，至少在不同時(shí)間重復(fù)測(cè)定二次。 定指標(biāo) 分別記錄 培養(yǎng)液 發(fā)酵 2， 4， 6， 8， 12， 24， 36， 48， 72和 968h的 品 制備與 分析 體外培養(yǎng) 48注射器取出，迅速放入冰水浴中終止發(fā)酵，并將注射器中發(fā)酵液 排出至50刻用酸度計(jì)測(cè)定 后將發(fā)酵液離心（ 10,000 g， 15，保存于 用于揮發(fā)性脂肪酸（ 氨態(tài)氮的測(cè)定 酵液 定： 瘤胃液中 度計(jì)測(cè)定，測(cè)定前，使用 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第二章 不同來(lái)源 粗蛋白間組合效應(yīng) 17 量測(cè)定： 采用 離子色譜分析儀， 子色譜柱，電導(dǎo)檢測(cè)器，流動(dòng)相由 洗液在線發(fā)生器產(chǎn)生（ 1%氫氧化鉀溶液），流速 動(dòng)進(jìn)樣器，進(jìn)樣量 10，室溫下進(jìn)行測(cè)試。進(jìn)樣前樣品稀釋 1025 倍， 45 m 濾膜過(guò)濾。（傅彤等， 2005） 準(zhǔn)液的制備 A： 去蛋白溶液