53 浙 江 省 地 方 標 準 623 2006 動物尿液中特布他林、克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺殘留量的測定 氣相色譜 of of in 006布 2007施 浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布 623 2006 I 前 言 本標準是在參閱了國內(nèi)外文獻的基礎(chǔ)上，根據(jù)我國技術(shù)發(fā)展水平研究制定的，建立了氣相色譜 倫特羅、沙丁胺醇 和 萊克多巴胺等 4種 2方法 。 本標準附錄 為資料性附錄。 本標準由浙江省農(nóng)業(yè)廳提出并歸口。 本標準 起草單位： 浙江省畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心 、 浙江省疾病預防控制中心。 本標準主要起草人： 朱聰英、吳平谷、應(yīng)永飛、陸春波、任玉琴、陳勇、林仙軍、周文海、趙永信。 623 2006 1 動物尿液中特布他林、克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺 殘留量的測定 氣相色譜 1 范圍 本標準規(guī)定了氣相色譜質(zhì)譜（ 測 定 動物尿液中特布他林、克倫特羅、沙丁胺醇 和 萊克多巴胺等 4種 2 的方法。 本標準適用于 豬、牛、羊等 動物尿液中特布他林、克倫特羅、沙丁胺醇 和 萊克多巴胺等 4種 2測定 。 本 方法檢 測 限 為： 特布他林 、克倫特羅 、沙丁胺醇 、 萊克多巴胺 。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或 修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法 3 方法原理 試樣 加入內(nèi)標 物 ，調(diào)節(jié) 陽離子交換固相萃取柱， 氮氣吹 干， 與 N， 進行 衍生 化反應(yīng)， 于氣相色譜質(zhì)譜儀上進行測定。內(nèi)標法定量。 4 試劑和溶液 所有試劑，如未注明規(guī)格，均指分析純；所有實驗室用水 為去離子水， 應(yīng) 符合 6682二級水的規(guī)定 。 醇 。 酸乙酯：色譜純 。 水 。 酸 。 鹽酸溶液：取鹽酸（ 18水至 100勻，即得。 0 鹽酸溶液：取 2 鹽酸溶液（ 3水至 200勻，即得。 水硫酸鈉： 450 干燥 12h， 備用 。 苯：色譜純 生劑： N， 。 氨水 /乙酸乙酯溶液：取氨水 （ 4乙酸乙酯 （ 至 100超聲 15充分混勻，即配即用。 離子交換 固相萃取柱 1） ：每根柱填料量為 400體積 5 準品 ： 特布他林、 克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺，純度 98%。 位素 內(nèi)標物溶液： 00 g/00 g/ 2特布他林、克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺標準品（ 10密稱定，分別 置 100量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，其濃度 均 為 以下冰箱中 保存 ， 有效 期為 6 個月。 1） 離子交換固相萃取柱 是由杭州富?？萍挤?wù)有限公司提供的產(chǎn)品的商品名稱，給出 這一信息是為了給本標準的使用者提供方便，而不是主管部門對這一產(chǎn)品的認可。 623 2006 2 2分別準確 吸取適量的 2于同一容量瓶中 ，用甲醇稀釋成 含 特布他林、克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺 均為 混合 標準工作液，置 4 8 冰箱中 保存 ， 有效 期為 1 個月。 2分別準確 吸取適量的 2位素內(nèi)標物 （ 于同一容量瓶中 ，用甲醇稀釋成 含 為 合內(nèi)標工作液，置 4 8 冰箱中 保存 ，有效 期為 1 個月。 5 儀器設(shè)備 相色譜 配有電子轟擊（ 。 心機 ：最大轉(zhuǎn)速 5000r/以上。 相萃取裝置 。 旋混合器 。 析天平 ：感量 箱 。 心管 ： 10 吹儀 。 5.9 。 塞 玻璃 試管 ： 510 液器：量程 20L 200L， 100L 1000L。 6 測定步驟 樣制備 采集的尿液應(yīng)保存于 4 8 冰箱中 ，尿液有如有混濁，應(yīng)經(jīng)離心處理，備用。 樣凈化 準確 量取試樣 50加 250L，用 2鹽酸溶液（ 節(jié) 5000r/試樣液 備用。 依次用甲醇 5 530鹽酸溶液（ 5 離子交換固相萃取柱（ ； 取試 樣液 上 柱， 并依次 用水 5甲醇 5柱子， 抽干； 用 4氨水 /乙酸乙酯溶液（ 10 ，收集洗脫液 ，經(jīng) 無水硫酸鈉（ 脫水， 50 氮 氣 吹干 ；殘余物中 加乙酸乙酯 5置于 超聲波清洗器中超聲 55000r/取 上清液至 550 氮 氣 吹干 ，吹 干 物備用 。 生 化 吹 干 物 加入甲苯（ 100生劑 （ 100L，加 塞 后于渦旋混合器 充分 混勻， 在 80 5的烘箱中 恒溫衍生 60氮氣吹干， 加甲苯 另取 2量，加 250L，加乙酸乙酯 5氣吹干， 與試樣 同步進行衍生化。 定 譜條件 色譜柱： 5%苯基 甲基聚硅氧烷彈性石英毛細管柱 (30 m或 具同等性能的色譜柱 ； 進樣口溫度： 280 ； 柱溫程序 ：初溫 120 ，保持 3 后以 10 30 ，保持 5以 10 保持 3 載氣：高純氦氣（ ； 流速： 分流進樣 ； 進樣量： 623 2006 3 譜條件 溫 230 ； 電子能量： 70 接口溫度： 280 ； 電子倍增器電壓： 高于調(diào)諧電壓 200V； 質(zhì)量掃描范圍： 30 550U； 溶劑延遲： 10 選擇離子監(jiān)測方式（ 。 監(jiān)測離子（ m/z）：特布他林 86、 356*、 426；克 倫特羅 86*、 262、 243；沙丁胺醇 369*、 440、 207；萊克多巴胺 179、 250*、 502； 5*、 262； 72*、 443；其中帶 *離子為定量離子 。分三段進行采集， 特布他林 、 克倫特羅 、 第 階段， 沙丁胺醇 、 第 階段萊克多巴胺 第 階段， 詳見 表 1。 在上述色譜條件下， 標準物質(zhì)總離子流圖參見附錄 A；標準物質(zhì)質(zhì)譜圖參見附錄 B。 表 1 4 種 2 種內(nèi)標物的采集階段和質(zhì)譜條件 藥物名稱 采集階段 選擇離子 （ m/z） 定量離子 （ m/z） 特布 他林 356， 86， 426 356 克倫特羅 86, 243, 262 86 95， 262 95 沙丁胺醇 369， 207， 440 369 372， 443 372 萊克多巴胺 250, 179, 502 250 相色譜 性測定 在相同試驗條件下，試樣中待測物與同時檢測的標準物質(zhì)的保留時間 之差在 2并且所選擇的離子相對豐度比符合表 2要求，可判定為試樣中存在該藥物殘留。 表 2 試樣離子豐度比與標 準物質(zhì)離子豐度比的允許偏差范圍 占基峰相對豐度（） 最大 允許偏差（） 50 10 20 50 15 10 20 20 10 50 量測定 以峰面積按內(nèi)標法 進行單點或多點校準 定量 ，標準工作液和試樣液中藥物響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測線性范圍內(nèi)。 以 m/z 95） 作為 計算克倫特羅（ m/z 86）和萊克多巴胺（ m/z 250）濃度 的內(nèi)標物 ，以 m/z 372） 作為 計算特布他林（ m/z 356）和沙丁胺醇（ m/z 369）濃度 的內(nèi)標物 。 7 結(jié)果計算 按內(nèi)標法單點或多點校準計算試樣中 4種 2 試樣中 4 種 2 623 2006 4 A X D V 式 中： X 試樣 中 2組分 的含量 ， g/L ； A 試樣 色譜峰對應(yīng)的 2組分 的質(zhì)量 ， V 試樣 體積， D 稀釋倍數(shù)。 計算結(jié)果保留 3 位有效數(shù)字。 8 精密度 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值與算 術(shù)平均值之比應(yīng)不大于 20。 9 回收率 本方法回收率在 60 130之間。 623 2006 5 圖 2 1. 特布他林（ , 2. , 3. 克倫特羅（ , , 1 3 1 4 1 5 1 6 1 7 1 8 1 9 2 0 2 1 2 2 2 3 2 4 2 5 100002000030000400005000060000700008000090000100000110000T i m e - - A b u n d a n c C : s 4,5 6 3 附錄 A (資料性附錄 ) 標準物質(zhì)總離子流圖 623 2006 6 附錄 B (資料性附錄 ) 標準物質(zhì)質(zhì)譜圖 圖 2） A. B. 40 60 80 1 0 0 1 2 0 1 4 0 1 6 0 1 8 0 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 6 0 2 8 0 3 0 0 3 2 0 3 4 0 3 6 005 0 0 0 01 0 0 0 0 01 5 0 0 0 02 0 0 0 0 02 5 0 0 0 03 0 0 0 0 03 5 0 0 0 04 0 0 0 0 04 5 0 0 0 05 0 0 0 0 05 5 0 0 0 06 0 0 0 0 0m / z - - A b u n d a n c 83 (m 21 8 7 2 1 2 2 7 82 4 61 3 3 1 6 71 1 7 3 4 21 5 159 2 3 2 3 5 73 2 32 9 440 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 34002 0 0 0 04 0 0 0 06 0 0 0 08 0 0 0 01 0 0 0 0 01 2 0 0 0 01 4 0 0 0 01 6 0 0 0 01 8 0 0 0 02 0 0 0 0 0m / z - - A b u n d a n c 03 (m 51117102 226 333291 35031750 100 150 200 250 300 350 400 450 500020000400006000080000100000120000140000160000180000200000220000240000260000280000300000m / z - - A b u n d a n c eS ca n 6 6 6 (13 6 m : n 2 94 440177117 339232317 490 535396 46540 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 44002 0 0 0 04 0 0 0 06 0 0 0 08 0 0 0 01 0 0 0 0 01 2 0 0 0 01 4 0 0 0 01 6 0 0 0 01 8 0 0 0 02 0 0 0 0 02 2 0 0 0 02 4 0 0 0 0m / z - - A b u n d a n c eS 37 (m 81251193 223 299115 165 319 373 40850 1 0 0 1 5 0 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 5 0 0 5 5 002 0 0 0 0 04 0 0 0 0 06 0 0 0 08 0 0 0 0 01 0 0 0 0 0 01 2 0 0 0 0 01 4 0 0 0 01 6 0 0 0 0 01 8 0 0 0 0 0m / z - - A b u n d a n c eS ca n 16 4 9 (19 4 m : n 6 71 7 95 0 22 3 41 4 9 2 0 53 9 991 1 1 7 3 4 02 9 74 2 83 7 2 4 5 74 7 93 1 8 5 3 340 60 80 1 0 0 1 2 0 1 4 0 1 6 0 1 8 0 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 6 0 2 8 0 3 0 0 3 2 0 3 4 0 3 6 0 3 8 0 4 0 0 4 2 0 4 4 0 4 6 001 0 0 0 0 02 0 0 0