C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,1,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,2,ProteinStructureCRP結(jié)構(gòu),C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,3,C反應(yīng)蛋白的生理和生化,在細(xì)胞因子IL-6家族誘導(dǎo)下，CRP在肝中合成迅速。正常合成率為l10mgd，急性炎癥時每天合成超過lg/d。在急性相反應(yīng)高峰時肝大量合成蛋白，其中20是合成CRP。當(dāng)IL-6刺激物缺乏時，在24h內(nèi)合成率降至正常。循環(huán)中CRP半衰期約19h，但一旦它與配體結(jié)合，可快速的被清除。肝外合成對血清水平影響作用很小。,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,4,CRP的生物學(xué)功能,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,5,CRP的生物學(xué)功能-機理,結(jié)合壞死的內(nèi)源性物質(zhì)在鈣離子存在的情況下，CRP能結(jié)合壞死的內(nèi)源性物質(zhì)和效應(yīng)細(xì)胞,當(dāng)正常的脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)被破壞致使內(nèi)部磷脂暴露時，CRP可發(fā)生與宿主細(xì)胞的結(jié)合。在系統(tǒng)性紅斑狼瘡的鼠模型中，注射CRP可改善SLE的狀況。人CRP基因的多態(tài)性導(dǎo)致的低基礎(chǔ)水平表達增加了發(fā)生系統(tǒng)性狼瘡的風(fēng)險。CRP量的減少可能與SLE發(fā)病機理有關(guān)。CRP量的減少使結(jié)合的細(xì)胞碎片減少。,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,6,CRP的生物學(xué)功能-機理,結(jié)合外源性物質(zhì)細(xì)菌、真菌、寄生蟲中的細(xì)胞壁磷酸膽堿。CRP具有保護機體抗細(xì)菌感染的能力。CRP保護機體抵抗致命性的細(xì)菌脂多糖和各種炎癥介子的能力。,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,7,CRP的生物學(xué)功能-機理,結(jié)合配體的CRP激活下列生物系統(tǒng)，導(dǎo)致配體的消除：CRP對補體系統(tǒng)的激活.CRP結(jié)合IgGFcR，增強自然殺傷細(xì)胞的活性。CRP的調(diào)理性質(zhì)，調(diào)理即刺激細(xì)胞吞噬作用。CRP和血小板激活因子(PAF)結(jié)合抑制PAF刺激的血小板聚集。,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,8,CRP的生物學(xué)功能-機理,CRP具有多效性的作用。當(dāng)抑制干擾素的合成時，CRP可誘導(dǎo)IL-1受體拮抗劑而增加抗炎細(xì)胞因子IL-10的釋放.CRP也可誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)。CRP向上-調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子的表達，刺激許多細(xì)胞釋放IL-8，增加血漿纖維蛋白酶原催化劑抑制劑-1的表達和活性、增加IL-1,IL-6,IL-18,和腫瘤壞死因子的釋放.CRP誘導(dǎo)或抑制炎癥反應(yīng)依賴于環(huán)境。,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,9,CRP功能,識別和啟動靶效應(yīng)細(xì)胞及其產(chǎn)物并將其從組織中清除。吞噬溶解入侵微生物。,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,10,急性相蛋白CRP合成的生物調(diào)控,CRP基因位于1號染色體短臂，只有一個內(nèi)含子，其分離編碼信號肽的區(qū)域。肝臟CRP合成的調(diào)節(jié)主要發(fā)生在轉(zhuǎn)錄階段。由IL-6誘導(dǎo)，IL-1可增加此作用。CRP啟動子最近區(qū)為STAT3和Rel蛋白的結(jié)合部位。這些因子的相互作用增加DNA結(jié)合C/EBP家屬成員的穩(wěn)定性，從而有效地誘導(dǎo)了CRP基因的表達。神經(jīng)元細(xì)胞、動脈硬化斑塊、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞也可以合成CRP。在這些部位的調(diào)節(jié)機制還不清楚。,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,11,修飾的CRP(m-CRP)-ModifiedCRP,目前認(rèn)為m-CRP是原CRP的單體。與天然CRP不同,表現(xiàn)在分子大小,溶解度,抗原性,帶電荷數(shù)等方面的差別.m-CRP具抗菌作用。m-CRP具有強大地誘發(fā)炎癥的作用。,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,12,方法靈敏度參考獻試管內(nèi)沉淀試驗-JExpMed1930;52561毛細(xì)管內(nèi)沉淀試驗1020mg/LAmJMed1950;8445改良平板雙擴散法1020mg/LIntArchAllergy1962改良瓊脂柱擴散法3.0mg/LProcSocExpBiol1955改良單擴散法1.0mg/LActaPatholMicrobiolScand瓊脂糖凝膠電泳法1.0mg/LClinChimActa1969放射電免疫擴散法10g/LJClinLabInvest1973補體結(jié)合試驗0.6mg/LProcSocExpBiol1954膠乳凝集試驗1.0mg/LNature(London)1961高敏乳膠增強濁度0.35mg/mlDadeGermany2000熒光抗體法Nature(London)1961放射免疫測定法3g/LJLabClinMed1976,檢測方法,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,13,CRP檢測方法-免疫沉淀試驗,檢測CRP原始方法.將兔抗CRP血清吸入毛細(xì)管內(nèi)。把它浸入被測血漿或血清內(nèi),因毛細(xì)管虹吸作用被吸入,與抗CRP血清形成接觸界面。這種方法較粗糙,取得結(jié)果時間較長,也不太正確可靠.,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,14,CRP檢測方法-免疫濁度法,可溶性CRP-Ag與可溶性抗CRP-Ab反應(yīng),形成可見的網(wǎng)絡(luò)狀沉淀性IC復(fù)合物點.IC復(fù)合物對光具有散射作用,使溶液具有肉眼尚不可見的濁度。在被測樣品中加抗血清后一定時間,測定反應(yīng)系統(tǒng)散射光強度或濁度變化,可對被檢物及其濁度加以檢測。根據(jù)儀器的光學(xué)系統(tǒng),濁度法分為散射濁度法和透射濁度法兩類。許多自動化生化分析儀和自動化免疫測定儀都可CRP測定項目。,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,15,CRP檢測方法-膠乳凝集試驗(LAT),將強化的兔抗CRP抗體固定于膠乳微粒上。加入被測樣品后與CRP在3分鐘內(nèi)形成肉眼可見的凝集物。膠乳強化濁度法的靈敏度優(yōu)于傳統(tǒng)濁度法,試劑穩(wěn)定性佳。,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,16,檢測方法-標(biāo)記免疫測定,ELISA和免疫發(fā)光法和化學(xué)發(fā)光法等都可用于CRP的測定?；瘜W(xué)發(fā)光法的靈敏度和定量精確度可與RIA媲美,而無同位素污染,試劑穩(wěn)定,分析速度快。CRP-POCT(床邊試驗)法ELISA干片法。把磷脂酰膽堿(PC)化學(xué)交聯(lián)固定于載體。被測CRP與載體的PC結(jié)合。被酶標(biāo)記的抗CRP單抗結(jié)合?？伸`敏、特異性檢測CRP,約5分鐘可得結(jié)果.。,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,17,檢測方法-膠乳增強試驗（shCRP）：,常規(guī)CRP檢驗方法可在感染或組織損傷時檢測出CRP10mg/L。該檢測方法具有較高的靈敏度。這個水平（0.110mg/L）的C反應(yīng)蛋白又被稱為超敏C反應(yīng)蛋白（hsCRP）。,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,18,CRP檢測的評估,1、半定量：膠乳凝集試驗等已棄用。2、定量：散射免疫比濁法、透射免疫比濁法：是目前常用方法。檢測限度為5150mgL，CV5%。膠乳增強試驗-shCRP檢測：很大程度提高了敏感度。酶免疫分析和熒光免疫分析：有潛在的靈敏度優(yōu)勢。膠乳增強試驗-shCRP檢測方法很大程度提高了敏感度。CRP檢測對標(biāo)本的采集也無特殊要求。高濃度的類風(fēng)濕因子可產(chǎn)生CRP假性升高。CRP篩查的費用遠(yuǎn)小于其他心血管檢查的費用。,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,19,臨床應(yīng)用_參考范圍,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,20,臨床意義,器質(zhì)性疾病的篩選急性或慢性炎癥如伴有細(xì)菌感染。自身免疫或免疫復(fù)合物病。組織壞死和惡性腫瘤。,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,21,臨床意義感染的診斷與鑒別,CRP在細(xì)菌感染發(fā)生后68h即開始升高，2448h達到高峰，在感染消除后其含量急驟下降，一周內(nèi)可恢復(fù)正常。CRP在病毒感染時無顯著升高。革蘭陰性感染：可發(fā)生最高水平的CRP，有時高達500mgL。革蘭陽性菌感染和寄生蟲感染：通常引起中等程度的反應(yīng)，典型的是在100mgL左右。病毒感染：引起的反應(yīng)最輕，通常不超過50mgL，極少超過100mgL。在細(xì)菌感染的急性期，CRP顯著升高，寡聚腺苷合成酶正常；在病毒感染時CRP水平正常或輕微升高，寡聚腺苷合酶水平升高。,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,22,臨床意義,C反應(yīng)蛋白是心血管疾病最強的危險指標(biāo)，C反應(yīng)蛋白水平可預(yù)測將來心肌梗塞及中風(fēng)的危險性。C反應(yīng)蛋白含量2.1mg/L的人與100mgL表示嚴(yán)重的疾病過程并常表示細(xì)菌感染的存在。,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,26,臨床意義-抗生素的治療監(jiān)測,系列血漿CRP的測定，可用來作為下列情況的治療監(jiān)測：在許多感染時最有效使用抗生素治療。根據(jù)CRP水平的變化來決定抗炎藥物的劑量。在CRP下降至正常時，中斷抗菌素治療。在高危人群缺少微生物學(xué)診斷時，為抗生素治療的指引。,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,27,臨床意義-抗生素的治療監(jiān)測,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,28,臨床意義-外科,患者施行手術(shù)后2472h,血中CRP水平明顯升高,約在第57天恢復(fù)正常。凡驟升后持續(xù)高水平多預(yù)示合并感染。對中、大手術(shù)患者,在術(shù)前和術(shù)后37天各作常規(guī)檢測一次。凡術(shù)后57天CRP仍持續(xù)高水平者,理應(yīng)懷疑合并感染,并配合治療作隨訪監(jiān)測。,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,29,臨床意義-內(nèi)科,肺炎:CRP100mg/L，強烈提示細(xì)菌感染，如化膿性支氣管炎或肺炎;典型的病毒性肺炎不會超過50mg/L。心血管病，在痛疼開始后數(shù)小時內(nèi)，CRP升高，3-4d達高峰，在CK-MB回到正常后7-10d也降至正常。代謝綜合征代謝綜合征分組，根據(jù)CRP水平可將為低危險組，3mg/,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,30,臨床意義-婦產(chǎn)科,盆腔炎和子宮附件炎.CRP值升高盆腔腫塊和子宮肌瘤通常多為陰性。診斷胎膜早破宮內(nèi)感染.胎膜早破時，如母親CRP在產(chǎn)前6-19h超過50mg/L可作為出現(xiàn)AIS的標(biāo)準(zhǔn)；產(chǎn)后第一天出現(xiàn)的AIS的CRP將比正常分娩時高出2-3倍。無并發(fā)癥的CT和NG感染不會引起CRP升高。但擴散到盆腔可引起急時相反應(yīng)。,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,31,臨床意義-兒科,新生兒濃毒血癥:出生3天前CRP10mg/L表示感染.如果CRP在24h內(nèi)沒有超過10mg/L，多無新生兒感染.小兒發(fā)熱:患病超過12h，CRP顯著40mg/L，ESR顯著30mm/h應(yīng)關(guān)注為細(xì)菌性感染。腦膜炎:CRP20mg/L提示為細(xì)菌感染的可能；100mg/L時具有細(xì)菌感染診斷價值。結(jié)腦CRP在20-60mg/L。成功的治療可使CRP在一周內(nèi)降至正常。,C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,32,小結(jié),CRP是一五球體結(jié)構(gòu)的高度保守的急時相蛋白。CRP為一模式識別分子，與特殊的分子結(jié)構(gòu)結(jié)合而發(fā)揮作用。為宿主先天性免疫應(yīng)答的一部分，在機體平衡和自