廣西工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)課題（論文）名稱冰淇淋廠中心化驗(yàn)室設(shè)計(jì)姓名李建學(xué)專業(yè)食品藥品監(jiān)督管理班級(jí)藥監(jiān)1031班姓名李建學(xué)起止日期指導(dǎo)教師潘寧目錄一、冰淇淋原料、半成品及成品的檢測(cè)項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn)4（一）原料的檢測(cè)項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn)4（二）成品檢測(cè)項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn)6（三）半成品檢測(cè)項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn)7二、冰淇淋原料、半成品及成品的檢測(cè)方法8（一）感官檢測(cè)8（二）總砷的測(cè)定8（三）鉛的檢驗(yàn)10（四）銅的檢測(cè)12（五）脂肪的測(cè)定13（六）冰淇淋蛋白質(zhì)的測(cè)定14（七）大腸菌群測(cè)定15（八）霉菌計(jì)數(shù)20（九）志賀氏菌檢驗(yàn)22（十）沙門氏菌檢驗(yàn)25（十一）金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)28（十二）菌落總數(shù)測(cè)定29三、試劑和儀器清單31（一）儀器清單31（二）試劑清單32（三）玻璃儀器清單34四、化驗(yàn)室的平面布置圖及設(shè)計(jì)說(shuō)明35五、化驗(yàn)室人員配制和組織管理36六、化驗(yàn)室的崗位責(zé)任制40七、參考文獻(xiàn)42八、謝辭43設(shè)計(jì)摘要對(duì)于食品專業(yè)質(zhì)量檢驗(yàn)的重要性是不言而寓的。本分析化驗(yàn)室主要擔(dān)任本廠所有原料、半成品及成品的檢測(cè),起到控制和管理生產(chǎn),保證和監(jiān)督本廠生產(chǎn)的味精的質(zhì)量和衛(wèi)生指標(biāo)的作用,也為開(kāi)發(fā)新產(chǎn)品、制定合理的工藝參數(shù)提供數(shù)據(jù)依據(jù)本分析化驗(yàn)室主要包括辦公室、儀器室、試劑室、理化實(shí)驗(yàn)室、準(zhǔn)備室、微生物檢驗(yàn)室冰淇淋廠分析化驗(yàn)室的主要任務(wù)是對(duì)原材料分析、半成品化驗(yàn)分析、成品化驗(yàn)分析起到控制和管理生產(chǎn)，保證和監(jiān)督食品質(zhì)量和衛(wèi)生指標(biāo)作用。在成品成廠時(shí)，必須對(duì)出廠的各規(guī)格啤酒，經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)，各理化指標(biāo)、技術(shù)質(zhì)量均要符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，以保證人民健康和商品信譽(yù)。前言東莞市新凱冷凍食品廠，生產(chǎn)冰淇淋的品種超6種，年生產(chǎn)達(dá)到2440噸，設(shè)計(jì)化驗(yàn)室的目的在于對(duì)冰淇淋原料及成品進(jìn)行檢驗(yàn)，確保冰淇淋的質(zhì)量與安全，全面控制和管理生產(chǎn)，保證冰淇淋的質(zhì)量和衛(wèi)生指標(biāo)，提高質(zhì)量安全和達(dá)到食品可接受水平，保證其質(zhì)量，維護(hù)消費(fèi)者的利益，為企業(yè)提供強(qiáng)有力的銷售保障，使企業(yè)強(qiáng)有力的立足于世界市場(chǎng)?；?yàn)室基本任務(wù)是對(duì)冰淇淋原輔料，半成品及成品進(jìn)行檢測(cè)，確保冰淇淋的質(zhì)量與安全，全面控制和管理生產(chǎn)?；?yàn)室通過(guò)工作人員運(yùn)用精密的檢測(cè)儀器設(shè)備對(duì)冰淇淋進(jìn)行檢測(cè)與驗(yàn)證，以合格的身份進(jìn)入銷售市場(chǎng)，讓消費(fèi)者買得放心，吃得開(kāi)心。（一）冰淇淋原料檢測(cè)項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn)（二）蔗糖的測(cè)定依據(jù)國(guó)標(biāo)GB/T5009820031原理試樣經(jīng)除去蛋白質(zhì)后，其中蔗枯經(jīng)鹽酸水解轉(zhuǎn)化為還原糖，再按還原糖測(cè)定水解前后還原梢的差值為蔗糖含量反應(yīng)原理一定量的堿性酒石酸銅甲、乙液等體積混合后，生成天藍(lán)色的氫氧化銅沉淀，這種沉淀很快與酒石酸鈉反應(yīng)，生成深藍(lán)色的酒石酸鈉銅的絡(luò)合物再加熱條件下，以次甲基蘭作指示劑，用樣液直接滴定經(jīng)標(biāo)定的堿性酒石酸銅溶液，還原將二價(jià)銅還原為氧化亞銅待二價(jià)銅全部被還原后，稍過(guò)量的還原糖將次甲基蘭還原，溶液由蘭色變?yōu)闊o(wú)色，即為終點(diǎn)2H次甲基蘭藍(lán)色L，一一還原型次甲基蘭無(wú)色十HCI202、試劑11HCI11量取50M1鹽酸注入少量水中，用水稀釋至100M1121乙酸鋅溶液稱取219G乙酸鋅，加入3M1冰乙酸，加蒸餾水溶解并稀釋至LOOMI1106G八亞鐵氰化鉀溶液稱取106G亞鐵氛化鉀，加水溶解并稀釋至100MI堿性酒石酸銅溶液甲液稱取15G硫酸銅CUS04“5H,0和005G次甲基蘭，加水溶解并稀釋至1000M1乙液稱取50G酒石酸鉀鈉和75GNAOH溶于水中，加入4G亞鐵氰化鉀，加水溶解并稀釋至1000M12、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制精確稱取10000G經(jīng)過(guò)96士2干澡2小時(shí)的純葡萄糖，加水溶解后，再加入5M1鹽酸，并以水稀釋至L000ML，注入滴定管備用3、標(biāo)定酒石酸銅溶液預(yù)測(cè)精確吸取甲液，乙液各5ML置于150M1三角瓶中，加水10ML,加入玻璃珠23粒，置于電爐上，控制在2分鐘內(nèi)加熱至沸騰，在沸騰狀態(tài)下沸騰15秒后，以先快后慢的速度從滴定管中滴加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，待溶液顏色變淺時(shí)，以每?jī)擅胍坏蔚乃俣鹊味ㄖ敝寥芤核{(lán)色消失即為終點(diǎn)，記錄消耗葡萄槍標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積數(shù)標(biāo)定精確吸取堿性酒石酸銅甲液，乙液各5ML，置于150ML錐形瓶中，加水10ML，加玻璃珠23粒，從滴定管中加入比預(yù)測(cè)體積少M(fèi)L的葡萄糖標(biāo)液，將此錐形瓶置于電爐上，控制在2MIN內(nèi)加熱至沸騰沸騰2分鐘后，趁沸以每?jī)擅胍坏蔚乃俣壤^續(xù)加溶液直至藍(lán)色消失即為終點(diǎn)，記錄消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，同法平行操作三次，取其平均值，按下式計(jì)算A值式中A一一L0ML酒石酸銅溶液甲、乙各5M1相當(dāng)于葡萄糖溶液的質(zhì)量，GM一一葡萄糖的質(zhì)量，GV1一一消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積的平均值，ML1000。一一配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ML3沉淀稱取固體試樣2505OOG，液體試樣25005000M1冰淇淋稱250500G花色奶稱取10G15G，置于250M1容量瓶中，加入50M1蒸餾水，稀釋混勻，慢慢加入5ML乙酸鋅及5ML亞鐵氛化鉀溶液，加燕餾水至刻度，搖勻靜置30MIN，用干燥濾紙過(guò)濾，棄去初濾液后備用4轉(zhuǎn)化吸取50ML濾液于100ML容量瓶中，加入5ML鹽酸，在6870度恒沒(méi)水浴中水浴15MIN，立刻取出冷卻至35度，加兩滴LG/L乙醉甲基紅指示劑，用NAOH200G/L溶液中和置中性即溶液由紅色變?yōu)槌壬铀每潭?，混勻，即為轉(zhuǎn)化液5滴定將試樣濾液及轉(zhuǎn)化液分別置于滴定管中滴定，記錄消耗試樣的體積，滴定方法與標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液方法相同6分析結(jié)果的計(jì)算式蔗糖總糖一還原糖095式中A一一100ML酒石酸銅溶液甲、乙各5ML相當(dāng)于葡萄糖溶液的質(zhì)量SV1一一消耗試樣糖液的體積，MLV2一一消耗試樣轉(zhuǎn)化液的體積，耐095一一還原糖以葡萄糖計(jì)換算成蔗糖的系數(shù)M一一樣品的質(zhì)量，G允許誤差同一樣品兩次測(cè)定結(jié)果之差不得超過(guò)平均值的5。7、注意示項(xiàng)加入乙酸鋅一亞鐵氰化鉀目的是為沉淀蛋白質(zhì)，濾出，轉(zhuǎn)化時(shí)，溫度不易太高，同時(shí)，時(shí)間不易太長(zhǎng)，原因在于，糖液的轉(zhuǎn)化屬于水解反應(yīng)，蔗糖分解為果梢和葡萄糖，果糖不穩(wěn)定，若溫度過(guò)高，或時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，果糖會(huì)分解為C02和水，影響滴定結(jié)果。8、滴定時(shí)必須在沸騰狀態(tài)下進(jìn)行滴定時(shí)，所發(fā)生的反應(yīng)屬氧化一還原反應(yīng)，反應(yīng)速度慢且需要能量具有氧化性，若反應(yīng)速度慢，會(huì)使酒石酸銅溶液與0發(fā)生氧化一還原反應(yīng)當(dāng)沸騰時(shí)，蒸氣將瓶口氣封隔絕空氣的進(jìn)入，防止氧化。（四）成品檢測(cè)項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn)表1感官要求要求項(xiàng)目清型組合型色澤具有品種應(yīng)有的色澤形態(tài)形態(tài)完整，大小一致，不變型，不軟塌，不收縮表2理化指標(biāo)（三）半成品檢測(cè)項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目指標(biāo)全乳脂半乳脂植脂組合型清型組合型清型組合型總固形物/300脂肪/80605，06。050蛋白質(zhì)/252225222522膨脹率/10140A組合型產(chǎn)品的各項(xiàng)指標(biāo)均指冰淇淋主體部分B非脂乳固體含量按原始配料計(jì)算微生物指標(biāo)微生物指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定。表3微生物指標(biāo)指標(biāo)項(xiàng)目熱加工冷加工菌落總數(shù)/（CFU/G）150010000大腸菌群/（MPN/100G）30300霉菌計(jì)數(shù)/（CFU/G）100150致病菌（沙門氏菌志賀氏菌金黃色葡萄球菌）不得檢出組織細(xì)膩滑潤(rùn)，無(wú)明顯粗糙的冰晶，無(wú)氣孔具有品種應(yīng)有的特征滋味氣味滋味協(xié)調(diào)，有乳脂或植脂香味，香味純正具有品種應(yīng)有滋味和氣味，無(wú)異味雜質(zhì)無(wú)肉眼可見(jiàn)外來(lái)雜質(zhì)總砷（以AS計(jì)）/（MG/L）02鉛（PB）/（MG/L）03銅CU/MG/L50二、冰淇淋成品、半成品檢測(cè)方法7二、冰淇淋成品、半成品檢測(cè)方法（一）感官檢測(cè)1感官要求應(yīng)具有糕點(diǎn)的正常色澤氣味滋味及組織狀態(tài)，不得有酸敗發(fā)霉等異味，食品內(nèi)外不得有霉變生蟲及其他外來(lái)污染物。2理化指標(biāo)理化指標(biāo)應(yīng)符合的規(guī)定。感官檢查1色澤鑒別進(jìn)行冰淇淋色澤的感官鑒別時(shí)，先取樣品開(kāi)啟包裝后直接觀察，接著再用刀將樣品縱切成兩瓣進(jìn)行觀察。良質(zhì)冰淇淋呈均勻一致的乳白色或與本花色品種相一致的均勻色澤。次質(zhì)冰淇淋尚具有與本品種相適應(yīng)的色澤。劣質(zhì)冰淇淋色澤灰暗而異樣，與各品種應(yīng)該具有的正常色澤不相符。2組織狀態(tài)鑒別進(jìn)行冰淇淋組織狀態(tài)的感官鑒別時(shí)，也是先打開(kāi)包裝直接觀察，然后用刀將其切分或若干塊再仔細(xì)觀察其內(nèi)部質(zhì)地。良質(zhì)冰淇淋形態(tài)完整，組織細(xì)膩滑潤(rùn)，沒(méi)有乳糖、冰晶及乳酪粗粒存在，無(wú)直徑超過(guò)05厘米的孔洞，無(wú)肉眼可見(jiàn)的外來(lái)雜質(zhì)。次質(zhì)冰淇淋外觀稍有變形，凍結(jié)不堅(jiān)實(shí)，帶有較大冰晶，有脂肪、蛋白質(zhì)等淤積，只有一般原、輔料帶進(jìn)的雜質(zhì)。劣質(zhì)冰淇淋外觀嚴(yán)重變形，癱軟或溶化，凍結(jié)不堅(jiān)實(shí)并有嚴(yán)重的冰結(jié)晶和較多的脂肪、蛋白質(zhì)淤積塊，有頭發(fā)、金屬、玻璃、昆蟲等惡性雜質(zhì)。3氣味鑒別感官鑒別冰淇淋的氣味時(shí)，可打開(kāi)杯蓋或就蛋托上直接嗅聞。良質(zhì)冰淇淋具有各香型品種特有的香氣。次質(zhì)冰淇淋香氣過(guò)濃或過(guò)淡。劣質(zhì)冰淇淋香氣不正?；蛴型鈦?lái)異常氣味4滋味鑒別取樣品少許置口中，直接品味。良質(zhì)冰淇淋清涼細(xì)膩，綿甜適口，給人愉悅感。次質(zhì)冰淇淋稍感不適口，可嚼到冰晶粒。劣質(zhì)冰淇淋有苦味、金屬味或其他不良滋味。（二）總砷的測(cè)定1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了各類食品中總砷的硼定方法本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類食品中總砷的測(cè)定本方法檢出限氫化物原子熒光光度法001MG/KG,線性范圍為0NG/ML200NG/ML銀鹽法02MG/KG,砷斑法025MG/KG硼氫化物還原比色法005MG/KG氫化物原子熒光光度法2原理食品試樣經(jīng)濕消解或干灰化后，加入硫脲使五價(jià)砷預(yù)還原為三價(jià)砷，再加入硼氫化鈉或硼氫化鉀使還原生成砷化氫，由氮?dú)廨d人石英原子化器中分解為原子態(tài)砷，在特制砷空心陰極燈的發(fā)射光激發(fā)下產(chǎn)生原子熒光，其熒光強(qiáng)度在固定條件下與被測(cè)液中的砷濃度成正比，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。3試劑31氫氧化鈉溶液2G/L32硼氫化鈉NABH溶液10G/L稱取硼氫化鈉100G,溶于2G/L氫氧化鈉溶液1000ML中，混勻。此液于冰箱可保存10天，取出后應(yīng)當(dāng)日使用也可稱取14G硼氫化鉀代替10G硼氫化鈉。33硫脲溶液50G/L。34硫酸溶液1十9量取硫酸100ML，小心倒人水900ML中，混勻35氫氧化鈉溶液100G/L供配制砷標(biāo)準(zhǔn)溶液用，少量即夠36砷標(biāo)準(zhǔn)溶液361砷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液含砷01MG/ML,精確稱取于100于燥2H以上的三氧化二砷01320G。加100G/L氫氧化鈉10ML榕解，用適量水轉(zhuǎn)人1000ML容量瓶中，加19硫酸25ML,用水定容至刻度。362砷使用標(biāo)準(zhǔn)液含砷1G/ML,吸取100ML砷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于100ML容量瓶中，用水稀釋至刻度。此液應(yīng)當(dāng)日配制使用。37濕消解試劑硝酸、硫酸、高氯酸38干灰化試劑六水硝酸鎂150G/L,氯化鎂、鹽酸114儀器原子熒光光度計(jì)。5分析步驟51試樣消解511濕消解固體試樣稱樣1G25G，液體試樣稱樣5G10G或ML精確至小數(shù)點(diǎn)后第二位置人50ML100ML錐形瓶中，同時(shí)做兩份試劑空白。加硝酸20ML40ML,硫酸125RNL,搖勻后放置過(guò)夜，置于電熱板上加熱消解，若消解液處理至10ML左右時(shí)仍有未分解物質(zhì)或色澤變深，取下放冷，補(bǔ)加硝酸5ML10ML，再消解至10ML左右觀察，如此反復(fù)兩三次，注意避免炭化。如仍不能消解完全，則加入高氯酸1ML2ML，繼續(xù)加熱至消解完全后，再持續(xù)蒸發(fā)至高氯酸的白煙散盡，硫酸的白煙開(kāi)始冒出冷卻，加水25ML，再蒸發(fā)至冒硫酸白煙。冷卻，用水將內(nèi)容物轉(zhuǎn)人25ML容量瓶或比色管中，加入50G/L硫睬25ML，補(bǔ)水至刻度并混勻，備測(cè)。512干灰化一般應(yīng)用于固體試樣。稱取1G25G精確至小數(shù)點(diǎn)后第二位于50ML100ML坩渦中，同時(shí)做兩份試劑空白。加150G/L硝酸鎂10ML混勻，低熱蒸干，將氧化鎂1G仔細(xì)覆蓋在干渣上，于電爐上炭化至無(wú)黑煙，移入550高溫爐灰化4H。取出放冷，小心加入11鹽酸10ML以中和氧化鎂并溶解灰分，轉(zhuǎn)人25ML容量瓶或比色管中，向容量瓶或比色管中加入50G/L硫脲25ML,另用19硫酸分次測(cè)洗琳垠后轉(zhuǎn)出合并。直至25ML刻度，混勻備測(cè)。52標(biāo)準(zhǔn)系列制備取25ML容量瓶或比色管6支，依次準(zhǔn)確加入1G/ML砷使用標(biāo)準(zhǔn)液0,005,02,05,20,50ML各相當(dāng)于砷濃度。,20,80,200,800,2000NG/ML各加19硫酸125ML,50G/L硫脲25ML，補(bǔ)加水至刻度，混勻備測(cè)。53測(cè)定531儀器參考條件光電倍增管電壓400V。砷空心陰極燈電流35MA原子化器溫度820850C高度7MM氬氣流速載氣600ML/MIN測(cè)量方式熒光強(qiáng)度或濃度直讀，讀數(shù)方式峰面積，讀數(shù)延遲時(shí)間1S讀數(shù)時(shí)間15S，硼氫化鈉溶液加入時(shí)間5S，標(biāo)液或樣液加入體積2ML,5,32濃度方式測(cè)量如直接測(cè)熒光強(qiáng)度，則在開(kāi)機(jī)并設(shè)定好儀器條件后，預(yù)熱穩(wěn)定約20MIN,按“B“鍵進(jìn)人空白值測(cè)量狀態(tài)，連續(xù)用標(biāo)準(zhǔn)系列的“0”管進(jìn)樣，待讀數(shù)穩(wěn)定后，按空檔鍵記錄下空白值即讓儀器自動(dòng)扣底即可開(kāi)始測(cè)量先依次測(cè)標(biāo)準(zhǔn)系列可不再測(cè)“0”管標(biāo)準(zhǔn)系列測(cè)完后應(yīng)仔細(xì)清洗進(jìn)樣器或更換一支，并再用“0“管測(cè)試使讀數(shù)基本回零后，才能測(cè)試劑空白和試樣，每測(cè)不同的試樣前都應(yīng)清洗進(jìn)樣器，記錄或打印下測(cè)量數(shù)據(jù)。533儀器自動(dòng)方式利用儀器提供的軟件功能可進(jìn)行濃度直讀測(cè)定。為此在開(kāi)機(jī)、設(shè)定條件和預(yù)熱后，還需輸人必要的參數(shù)，即試樣量G或ML稀釋體積ML進(jìn)樣體積ML，結(jié)果的濃度單位標(biāo)準(zhǔn)系列各點(diǎn)的重復(fù)測(cè)量次數(shù)標(biāo)準(zhǔn)系列的點(diǎn)數(shù)不計(jì)零點(diǎn)，及各點(diǎn)的濃度值。首先進(jìn)人空白值測(cè)量狀態(tài)，連續(xù)用標(biāo)準(zhǔn)系列的“0“管進(jìn)樣以獲得穩(wěn)定的空白值并執(zhí)行自動(dòng)扣底后，再依次測(cè)標(biāo)準(zhǔn)系列此時(shí)“0”管需再測(cè)一次在測(cè)樣液前，需再進(jìn)人空白值測(cè)量狀態(tài)，先用標(biāo)準(zhǔn)系列“0“管測(cè)試使讀數(shù)復(fù)原并穩(wěn)定后，再用兩個(gè)試劑空白各進(jìn)一次樣，讓儀器取其均值作為扣底的空白值，隨后即可依次測(cè)試樣。測(cè)定完畢后退回主菜單，選擇“打印報(bào)告”即可將測(cè)定結(jié)果打出。6結(jié)果計(jì)算如果采用熒光強(qiáng)度測(cè)量方式，則需先對(duì)標(biāo)準(zhǔn)系列的結(jié)果進(jìn)行回歸運(yùn)算由于測(cè)量時(shí)“0”管強(qiáng)制為0，故零點(diǎn)位應(yīng)該輸人以占據(jù)一個(gè)點(diǎn)位，然后根據(jù)回歸方程求出試劑空白液和試樣被測(cè)液的砷濃度，再按式1計(jì)算試樣的砷含量X（1）式中X試樣的砷含量，單位為毫克每千克或毫克每升MG/KG或MG/L試樣被測(cè)液的濃度，單位為納克每毫升NG/ML試劑空白液的濃度，單位為納克每毫升NG/MLM試樣的質(zhì)量或體積，單位為克或毫升G或ML計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。7精密度濕消解法在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10。干灰化法在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的15。8準(zhǔn)確度濕消解法測(cè)定的回收率為90105干灰化法測(cè)定的回收率為85100。（三）鉛的檢驗(yàn)氫化物原子熒光光譜法1試劑和材料A峭酸高氯酸混合酸（91）分別量取硝酸900ML，高氯酸100ML，混勻。B鹽酸11量取250ML鹽酸倒入250ML水中，混勻。C草酸溶液10G/L稱取10G草酸，加入溶解至100ML,混勻。D鐵氰化鉀FE溶液100G/L稱取100G鐵氰化鉀加水溶解并稀釋至100ML,混勻。E氫氧化鈉溶液2G/L稱取20G氫氧化鈉，溶于1L水中，混勻。F硼氫化鈉溶液10G/L稱取50G硼氫化鈉溶于500ML氫氧化鈉溶液2G/L中，混勻。臨用前配制。2鉛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液10MG/ML21鉛標(biāo)準(zhǔn)使用液10G/ML精確吸取鉛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液107,逐級(jí)稀釋至10G/ML。3儀器和設(shè)備31原子熒光光度計(jì)32鉛空心陰極燈33電熱板。34天平感量為1MG。4分析步驟41試樣消化濕消解稱取固體試樣02G2G或液體試樣2OOG或ML1000G或ML均精確到0001G置于50ML100ML消化容器中錐形瓶，然后加入硝酸高氯酸混合酸5ML10ML搖勻浸泡，放置過(guò)夜，次日置于電熱板上加熱消解，全消化液呈淡黃色或無(wú)色如消解過(guò)程色澤較深，稍冷補(bǔ)加少量硝酸，繼續(xù)消解，稍冷加入20ML水再繼續(xù)加熱趕酸，至消解液05ML10ML止，冷卻后用少量水轉(zhuǎn)入25ML容量瓶中，并加入鹽酸05ML，草酸溶液05ML,搖勻，再加入鐵氰化鉀溶液1OOML,用水準(zhǔn)確稀釋定容至25ML,搖勻，放置30MIN后測(cè)定。同時(shí)做試劑空白。42標(biāo)準(zhǔn)系列制備在25ML容量瓶中，依飲準(zhǔn)確加入鉛標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液000ML0125ML025ML,050ML,075ML100ML,125ML各相當(dāng)于鉛濃度00NG/ML,50NG/ML,100NG/ML,200NG/ML,300NG/ML,400NG/ML,500NG/ML,用少量水稀釋后，加入05ML鹽酸和05ML草酸溶液搖勻，再加入鐵氰化鉀溶液1OML,用水稀釋至刻度，搖勻。放置30MIN后待側(cè)。43測(cè)定431儀器參考條件負(fù)高壓323V鉛空心陰極燈燈電流75MA原子化券爐溫750800，爐高8MM氬氣流速載氣800ML/MIN；屏蔽氣1000ML/MIN加還原劑時(shí)間70S讀數(shù)時(shí)間150S延遲時(shí)問(wèn)00S測(cè)量方式標(biāo)準(zhǔn)曲線法讀數(shù)方式峰面積進(jìn)樣體積20ML432測(cè)量方式設(shè)定好儀器的最佳條件，逐步將爐溫升至所需溫度，穩(wěn)定10MIN20MIN后開(kāi)始測(cè)量連續(xù)用標(biāo)準(zhǔn)系列的零管進(jìn)樣，待讀數(shù)穩(wěn)定之后，轉(zhuǎn)入標(biāo)準(zhǔn)系列的測(cè)量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，轉(zhuǎn)入試樣測(cè)量，分別測(cè)定試樣空白和試樣消化液試樣測(cè)定結(jié)果按式2計(jì)算。433分析結(jié)果的表述試樣中鉛含量按式1進(jìn)行計(jì)算。1試中X一試樣中鉛含最，單位為毫克每千克或毫克每升MG/KG或MG/L試樣消化液測(cè)定濃度，單位為納克每毫升NG/ML一試劑空白液側(cè)定濃度，單位為納克每毫升NG/MLV一試樣消化液定量總體積。單位為毫升MLM一試樣質(zhì)量或體積，單位為克或毫開(kāi)G或ML以重復(fù)性條們下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留兩位有效數(shù)字5精密度在重復(fù)性條們下獲的的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)勻術(shù)平均值的10。（四）銅的檢測(cè)原理樣品處理后，導(dǎo)入原子吸收分光光度計(jì)中，原子化以后，吸收3248NM共振線，其吸收量與銅量成正比，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。二、試劑儀器要求使用去離子水，優(yōu)級(jí)純或高級(jí)純?cè)噭?、銅標(biāo)準(zhǔn)溶液同二乙胺基二硫代甲酸鈉法。2、銅標(biāo)準(zhǔn)使用液吸收10OML銅標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于L0OML容量瓶中，加05硝酸稀釋至刻度。如此多次稀釋至每毫升相當(dāng)于1UG銅。3、硝酸4、6N硝酸量取38ML硝酸，加水稀釋至LOOML。5、05硝酸量取1ML硝酸、加水稀釋至200ML。6、10硝酸量取105ML硝酸，加水稀釋至LOOML。7、過(guò)硫酸銨8、05硫酸鈉溶液。9、石油醚。L0、原子吸收分光光度計(jì)三、操作方法1、樣品處理稱取2克樣品，置于瓷坩堝中，加熱炭化后，置高溫爐，420灰化3小時(shí)，放冷后加水少許，稍加熱，然后加1ML11硝酸，加熱溶解后移入LOML容量瓶中，加水稀釋至刻度，備用。2、測(cè)定吸取0、1、2、4、6、8ML銅標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別置于LOOML容量瓶中，加05硝酸稀釋至刻度，混勻。容量瓶中每毫升分別相當(dāng)于0、10、20、40、80MG銅。將處理后的樣液，試劑空白液和各容量瓶中銅標(biāo)準(zhǔn)液導(dǎo)入火焰進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定條件燈電流6MA，波長(zhǎng)3248NM,狹縫019NM，空氣流量9升/分，乙炔流量2升/分，燈頭高度3MM，燈背景校正（液克根據(jù)儀器型號(hào)，調(diào)至最佳條件）以銅含量對(duì)應(yīng)濃度吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線比較。計(jì)算XA1A2V1000/M10001000X樣品中銅的含量，MGKG；AL測(cè)定用樣品中銅的含量，UGML；A2試劑空白液中銅的含量，UGML；V樣品總體積，MLM樣品質(zhì)量，GML。（五）脂肪的測(cè)定依據(jù)國(guó)標(biāo)GB/T500962003酸水解法一原理試樣經(jīng)酸水解后用乙醚提取，除去溶劑即得總脂肪含量酸水解法測(cè)得的為游離及結(jié)合脂肪的總量，二試劑1鹽酸2乙醉953乙醚4石油醚306010沸程一儀器100ML具塞刻度量筒四分析步驟1樣品處理將均勻的樣品稱取1000克，置于50ML燒杯中，加入10ML濃盆酸，放于7080水浴中，每隔510分鐘攪拌1次，至試樣消化完全為止，約4050分鐘2取出加入10ML95乙醇，混合，冷卻后移入L00ML具塞量筒中，以25ML乙醚分次洗燒杯，一并倒入量筒中，待乙醚全部倒入量筒后，加塞振搖1分鐘，小心開(kāi)賽，放出氣體，再塞好，靜置12MIN，小瓶開(kāi)塞，并用石油醚一乙醚等量混合液沖洗塞及筒口附著的脂肪，靜置1020MIN，待上部液體清晰，吸出上清液于已恒重的錐型瓶?jī)?nèi)，再加5M1乙醚于具塞量筒內(nèi)，振搖，靜置后，仍將上層乙醚吸出，放入原錐形瓶?jī)?nèi)，將錐形瓶置水浴中蒸干，置10015C烘箱中干燥2小時(shí)，取出放干澡器內(nèi)冷卻05小時(shí)后稱量，重復(fù)以上操作至恒重X一試樣脂肪含量，G/100GM14形瓶和脂肪的質(zhì)量，GM。一錐形瓶的質(zhì)量，GM2一試樣的質(zhì)量，G三、總固形物的測(cè)定依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)SB/T100091999精確稱取經(jīng)融化均勻的試樣23克精確至。0001G，于已烘干至恒重的稱量皿中，置于水浴上蒸干，移入100105電烘箱或水洛烘箱中烘三個(gè)半小時(shí)，取出加蓋置于干燥器中冷卻約2530分鐘后，稱量，重復(fù)干澡，冷卻稱量至恒重，計(jì)算式為W一一稱量皿的質(zhì)量，GW1一一試樣和稱量皿的質(zhì)量，GW2一一烘干后試樣和稱量皿的質(zhì)量，G四、酸度的測(cè)定一試劑1酚酞指示劑稱取LG酚酸溶入100M195的乙醇中01MOL/LNAOH依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制方法進(jìn)行配制二方法精確稱取融化均勻的樣品45G于250M1三角瓶中，加入12OM1煮沸冷卻后的燕餾水，加入23滴1的酚酞指示劑，用01MOL/LNAOH滴定至溶液呈粉色，并保特30秒鐘不褪色，即為終點(diǎn)計(jì)算式中W一一樣品重GV一一NAOH溶液滴定的體積數(shù)009一一乳酸的系數(shù)（六）冰淇淋蛋白質(zhì)的測(cè)定依據(jù)國(guó)標(biāo)CB/T500952010本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定。1原理蛋白質(zhì)是含氮的有機(jī)化合物。食品與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質(zhì)分解，分解的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨。然后堿化蒸餾使氨游離，用硼酸吸收后再以硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，根據(jù)酸的消耗量乘以換算系數(shù)，即為蛋白質(zhì)含量。2試劑所有試劑均用不含氨的蒸餾水配制。21硫酸銅。22硫酸鉀。23硫酸。242硼酸溶液。25混合指示液1份01甲基紅乙醇溶液與5份01溴甲酚綠乙醇溶液臨用時(shí)混合。也可用2份01甲基紅乙醇溶液與1份01次甲基藍(lán)乙醇溶液臨用時(shí)混合。2640氫氧化鈉溶液。27005N硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液或005N鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。3儀器定氮蒸餾裝置如圖所示。（圖略）4操作方法41樣品處理精密稱取0220G固體樣品或25G半固體樣品或吸取1020ML液體樣品約相當(dāng)?shù)?040MG，移入干燥的100ML或500ML定氮瓶中，加入02G硫酸銅，3G硫酸鉀及20ML硫酸，稍搖勻后于瓶口放一小漏斗，將瓶以45角斜支于有小孔的石棉網(wǎng)上。小心加熱，待內(nèi)容物全部炭化，泡沫完全停止后，加強(qiáng)火力，并保持瓶?jī)?nèi)液體微沸，至液體呈藍(lán)綠色澄清透明后，再繼續(xù)加熱05H。取下放冷，小心加20ML水。放冷后，移入100ML容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混勻備用。取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸按同一方法做試劑空白試驗(yàn)。42按圖裝好定氮裝置，于水蒸氣發(fā)生瓶?jī)?nèi)裝水至約2/3處，加甲基紅指示液數(shù)滴及數(shù)毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入數(shù)粒玻璃珠以防暴沸，用調(diào)壓器控制，加熱煮沸水蒸氣發(fā)生瓶?jī)?nèi)的水。43向接收瓶?jī)?nèi)加入10ML2硼酸溶液及混合指示液1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取100ML樣品消化稀釋液由小玻杯流入反應(yīng)室，并以10ML水洗滌小燒杯使流入反應(yīng)室內(nèi)，塞緊小玻杯的棒狀玻塞。將10ML40氫氧化鈉溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其緩緩流入反應(yīng)室，立即將玻塞蓋緊，并加水于小玻杯以防漏氣。夾緊螺旋夾，開(kāi)始蒸餾。蒸氣通入反應(yīng)室使氨通過(guò)冷凝管而進(jìn)入接收瓶?jī)?nèi)，蒸餾5MIN。移動(dòng)接受瓶，使冷凝管下端離開(kāi)液面，再蒸餾1MIN。然后用少量水沖洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以005MOL/L硫酸或005MOL/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至灰色或藍(lán)紫色為終點(diǎn)。同時(shí)吸取100ML試劑空白消化液按43操作。44計(jì)算式中X樣品中蛋白質(zhì)的含量，；V1樣品消耗硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積，ML；V2試劑空白消耗硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積，ML；N硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的當(dāng)量濃度；00141N硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1ML相當(dāng)于氮克數(shù)；M樣品的質(zhì)量體積，GML；F氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)。蛋白質(zhì)中的氮含量一般為15176，按16計(jì)算乘以625即為蛋白質(zhì)，乳制品為638，面粉為570，玉米、高粱為624，花生為546，米為595，大豆及其制品為571，肉與肉制品為625，大麥、小米、燕麥、裸麥為583，芝麻、向日葵為530。4注意事項(xiàng)1消化開(kāi)始溫度不宜過(guò)高，以防泡沫沖出2消化時(shí)打開(kāi)水閥，以利于廢氣導(dǎo)出3消化完畢不得用冷水冷卻，應(yīng)自然冷卻4若需用H2O2水沖，必須在冷卻后5蒸餾時(shí)要打開(kāi)水間，作冷卻水用6吸收時(shí)必須伸入液面以下5、備注加入硫酸鉀的作用提高硫酸的沸點(diǎn)338C,增進(jìn)反應(yīng)速度加入定量的硫酸鉀將硫酸沸點(diǎn)提高到4000，但過(guò)多的硫酸鉀會(huì)造成沸點(diǎn)太高。生成的硫酸銨在513會(huì)分解，故此加入硫酸鉀量一定要準(zhǔn)確加入硫酸銅的作用催化劑，使氧化作用加速（七）大腸菌群測(cè)定1范圍木標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中大腸菌群的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類食品中大腸菌群的測(cè)定。21冰箱04。22恒溫培養(yǎng)箱36士1。23恒溫水浴鍋46士124顯微鏡10X100X。25均質(zhì)器或滅菌乳缽。26架盤藥物天平0G500G,精確至05G27滅菌吸管1ML具001ML刻度,10ML具01ML刻度。28滅菌錐形瓶500ML29滅苗玻璃珠直徑約5MM210滅菌培養(yǎng)皿直徑90MM211滅苗試管16MM160MM212滅菌刀剪子、攝子等。3培養(yǎng)基和試劑31乳糖膽鹽發(fā)酵管。32伊紅美藍(lán)瓊脂平板。33乳糖發(fā)酵管。34EC肉湯。35磷酸鹽緩沖液36085滅菌生理鹽水37革蘭氏染色液。4操作步驟41檢樣稀釋411以無(wú)菌操作將檢樣25G（ML放于含有225ML，滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅茵玻璃瓶?jī)?nèi)瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成110的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質(zhì)器，以8000R/MIN10000R/MIN的速度處理1MIN，做成110的均勻稀釋液。412用1ML滅菌吸管吸取110稀釋液1ML，注人含有9ML滅菌內(nèi)，振搖試管混勻，做成1100的稀釋液。413另取1ML滅菌吸管，按上條操作依次做10倍遞增稀釋液，每遞一次，換用1支1ML滅菌吸管。414根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情漢的估計(jì)，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度，接種三管。42乳糖發(fā)酵試驗(yàn)將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在1ML以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，1ML以及1ML以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種三管，置36士1溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24H士2H，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為人腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣省，則按下列程序進(jìn)行。43分離培養(yǎng)將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置36士1溫箱內(nèi)，培養(yǎng)18H24H，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實(shí)試驗(yàn)。44證實(shí)試驗(yàn)在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1個(gè)2個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，置36士1培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24H士2H，觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽胞桿菌，即可報(bào)告為大腸菌群陽(yáng)性。45報(bào)告根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽(yáng)性的管數(shù)，查MPN檢索表，報(bào)告每100MLG大腸菌群的MPN值5糞大腸菌群FAECALCOLIFORM51用接種環(huán)將所有產(chǎn)氣的乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)物見(jiàn)42轉(zhuǎn)種于EC肉湯管內(nèi)，置445士02水浴箱內(nèi)水浴箱內(nèi)的水面應(yīng)高于EC肉湯液面，培養(yǎng)24H士2H，經(jīng)培養(yǎng)后，如所有EC肉湯管均不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為陰性；如有產(chǎn)氣者，則將所有產(chǎn)氣的EC肉湯管分別轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置培養(yǎng)18H24H，凡平板上有典型菌落者，則證實(shí)為糞大腸菌群陽(yáng)性。82結(jié)果報(bào)告根據(jù)證實(shí)為糞大腸菌群的陽(yáng)性管數(shù)，查MPN檢索表，報(bào)告每100ML（G）糞大腸菌群的MPN值（見(jiàn)表1）。表1大腸菌群最可能數(shù)（MPN）檢索表陽(yáng)性管數(shù)95可信限1ML（G）301ML（G）3001ML（G）3MPN100ML（G）下限上限000000000123303060905900000111101233060901205130000022220123609012016000003333012390130160190111100000123407011015051020021011111111012370110150190103023036011112222012311015020024030360111133330123160200240190222200000123901402002601030360370222222220123210280350420401004701500230290222333123360440530333300000123230390640950407015012001300380033332222012343075012001600701403002100230038003333222201239301500210029001503003503800440047003333333301232400460011000240003607101500130002400048000注1本表采用3個(gè)稀釋度1MLG、01MLG和001MLG，每稀釋度三管。注2表內(nèi)所列檢樣量如改用10MLG、1MLG和01MLG時(shí)，表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低10倍；如改用01ML、001ML（G）和0001MLG時(shí)，其余可類推。操作步A8I樣品的稀釋611固體和半固體樣品稱取25G樣品，放入盛有22,5ML研酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)角均質(zhì)杯內(nèi)，8000R/MINIT1000R/MIN均質(zhì)MIN2MIN,或放入盛有225ML磷險(xiǎn)鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)仙均質(zhì)袋中。用拍擊式均質(zhì)器拍打IMIN2MIN制成110的樣品勻液62液體樣品以無(wú)菌吸管吸取25ML樣品史盛有225ML磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌錐形瓶吸瓶?jī)?nèi)頂置適當(dāng)數(shù)峨的無(wú)曲玻功珠中，充分棍勻，制成ITO的樣品勻液63樣品勻液的PHF宋內(nèi)氏菌和痢疾志賀氏菌1型，鮑氏志賀氏菌13型的半乳糖苷酶為陽(yáng)性以外，其余生化試驗(yàn)志賀氏菌屬的培養(yǎng)物均為陰性結(jié)果。另外由于福氏志賀氏菌6型的生化特性和痢疾志賀氏菌或鮑氏志賀氏菌相似，必要時(shí)還需加做靛基質(zhì)、甘露醇、棉子糖、甘油試驗(yàn)，也可做革蘭氏染色檢查和氧化酶試驗(yàn)，應(yīng)為氧化酶陰性的革蘭氏陰性桿菌。生化反應(yīng)不符合的菌株，即使能與某種志賀氏菌分型血清發(fā)生凝集，仍不得判定為志賀氏菌屬。志賀氏菌屬生化特性見(jiàn)表2。表2志賀氏菌屬四個(gè)群的生化特征生化反應(yīng)A群痢疾志賀氏菌B群福氏志賀氏菌C群鮑氏志賀氏菌D群宋內(nèi)氏志賀氏菌半乳糖苷酶AA尿素賴氨酸脫羧酶鳥(niǎo)氨酸脫羧酶B水楊苷七葉苷靛基質(zhì)/甘露醇C棉子糖甘油D注表示陽(yáng)性；表示陰性；/表示多數(shù)陰性；/表示多數(shù)陽(yáng)性；（）表示遲緩陽(yáng)性；D表示有不同生化型。A痢疾志賀1型和鮑氏13型為陽(yáng)性。B鮑氏13型為鳥(niǎo)氨酸陽(yáng)性。C福氏4型和6型常見(jiàn)甘露醇陰性變種。442附加生化實(shí)驗(yàn)由于某些不活潑的大腸埃希氏菌（ANAEROGENICECOLI）、AD（ALKALESCENSDISPARBIOTYPES堿性異型）菌的部分生化特征與志賀氏菌相似，并能與某種志賀氏菌分型血清發(fā)生凝集；因此前面生化實(shí)驗(yàn)符合志賀氏菌屬生化特性的培養(yǎng)物還需另加葡萄糖胺、西蒙氏檸檬酸鹽、粘液酸鹽試驗(yàn)36培養(yǎng)24H48H。志賀氏菌屬和不活潑大腸埃希氏菌、AD菌的生化特性區(qū)別見(jiàn)表3。表3志賀氏菌屬和不活潑大腸埃希氏菌、AD菌的生化特性區(qū)別生化反應(yīng)A群痢疾志賀氏菌B群福氏志賀氏菌C群鮑氏志賀氏菌D群宋內(nèi)氏志賀氏菌大腸埃希氏菌AD菌葡萄糖銨西蒙氏檸檬酸鹽DD粘液酸鹽DD注1表示陽(yáng)性；表示陰性；D表示有不同生化型。注2在葡萄糖銨、西蒙氏檸檬酸鹽、粘液酸鹽試驗(yàn)三項(xiàng)反應(yīng)中志賀氏菌一般為陰性，而不活潑的大腸埃希氏菌、AD（堿性異型）菌至少有一項(xiàng)反應(yīng)為陽(yáng)性。443如選擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)，可根據(jù)532的初步判斷結(jié)果，用431中已培養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上生長(zhǎng)的菌苔，使用生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。45結(jié)果報(bào)告綜合以上生化試驗(yàn)的結(jié)果，報(bào)告25G（ML）樣品中檢出或未檢出志賀氏菌。（十）沙門氏菌檢驗(yàn)1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中沙門氏菌（SALMONELLA）的檢驗(yàn)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中沙門氏菌的檢驗(yàn)。2設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下21冰箱25。22恒溫培養(yǎng)箱361，421。23均質(zhì)器。24振蕩器。25電子天平感量01G。26無(wú)菌錐形瓶容量500ML，250ML。27無(wú)菌吸管1ML（具001ML刻度）、10ML（具01ML刻度）或微量移液器及吸頭。28無(wú)菌培養(yǎng)皿直徑90MM。29無(wú)菌試管3MM50MM、10MM75MM。210無(wú)菌毛細(xì)管。211PH計(jì)或PH比色管或精密PH試紙。212全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)。3培養(yǎng)基和試劑31緩沖蛋白胨水（BPW）。32四硫磺酸鈉煌綠（TTB）增菌液。33亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液。34亞硫酸鉍（BS）瓊脂。35HE瓊脂。36木糖賴氨酸脫氧膽鹽（XLD）瓊脂。37沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基。38三糖鐵（TSI）瓊脂。39蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑。310尿素瓊脂（PH72）。311氰化鉀（KCN）培養(yǎng)基。312賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基。313糖發(fā)酵管。314鄰硝基酚D半乳糖苷（ONG）培養(yǎng)基。315半固體瓊脂。316丙二酸鈉培養(yǎng)基。317沙門氏菌O和H診斷血清。318生化鑒定試劑盒。4操作步驟41前增菌稱取25G（ML）樣品放入盛有225MLBPW的無(wú)菌均質(zhì)杯中，以8000R/MIN10000R/MIN均質(zhì)1MIN2MIN，或置于盛有225MLBPW的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1MIN2MIN。若樣品為液態(tài)，不需要均質(zhì)，振蕩混勻。如需測(cè)定PH值，用1MOL/ML無(wú)菌NAOH或HCL調(diào)PH至6802。無(wú)菌操作將樣品轉(zhuǎn)至500ML錐形瓶中，如使用均質(zhì)袋，可直接進(jìn)行培養(yǎng)，于361培養(yǎng)8H18H。如為冷凍產(chǎn)品,應(yīng)在45以下不超過(guò)15MIN,或25不超過(guò)18H解凍。42增菌輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)過(guò)的樣品混合物，移取1ML，轉(zhuǎn)種于10MLTTB內(nèi)，于421培養(yǎng)18H24H。同時(shí)，另取1ML，轉(zhuǎn)種于10MLSC內(nèi)，于361培養(yǎng)18H24H。43分離分別用接種環(huán)取增菌液1環(huán)，劃線接種于一個(gè)BS瓊脂平板和一個(gè)XLD瓊脂平板（或HE瓊脂平板或沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）。于361分別培養(yǎng)18H24H（XLD瓊脂平板、HE瓊脂平板、沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）或40H48H（BS瓊脂平板），觀察各個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落,各個(gè)平板上的菌落特征見(jiàn)表1。表1沙門氏菌屬在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征選擇性瓊脂平板沙門氏菌BS瓊脂菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變。HE瓊脂藍(lán)綠色或藍(lán)色，多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑色；有些菌株為黃色，中心黑色或幾乎全黑色。XLD瓊脂菌落呈粉紅色，帶或不帶黑色中心，有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心，或呈現(xiàn)全部黑色的菌落；有些菌株為黃色菌落，帶或不帶黑色中心。沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基按照顯色培養(yǎng)基的說(shuō)明進(jìn)行判定。44生化試驗(yàn)441自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個(gè)以上典型或可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂，先在斜面劃線，再于底層穿刺；接種針不要滅菌,直接接種賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，于361培養(yǎng)18H24H，必要時(shí)可延長(zhǎng)至48H。在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基內(nèi)，沙門氏菌屬的反應(yīng)結(jié)果見(jiàn)表2。表2沙門氏菌屬在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基內(nèi)的反應(yīng)結(jié)果三糖鐵瓊脂斜面底層產(chǎn)氣硫化氫賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基初步判斷KA（）（）可疑沙門氏菌屬KA（）（）可疑沙門氏菌屬AA（）（）可疑沙門氏菌屬AA/非沙門氏菌KK/非沙門氏菌注K產(chǎn)堿，A產(chǎn)酸；陽(yáng)性，陰性；（）多數(shù)陽(yáng)性，少數(shù)陰性；/陽(yáng)性或陰性。442接種三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基的同時(shí),可直接接種蛋白胨水（供做靛基質(zhì)試驗(yàn)）、尿素瓊脂（PH72）、氰化鉀（KCN）培養(yǎng)基，也可在初步判斷結(jié)果后從營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落接種。于361培養(yǎng)18H24H，必要時(shí)可延長(zhǎng)至48H，按表3判定結(jié)果。將已挑菌落的平板儲(chǔ)存于25或室溫至少保留24H，以備必要時(shí)復(fù)查。表3沙門氏菌屬生化反應(yīng)初步鑒別表反應(yīng)序號(hào)硫化氫（H2S）靛基質(zhì)PH72尿素氰化鉀（KCN）賴氨酸脫羧酶A1A2A3/注陽(yáng)性；陰性；/陽(yáng)性或陰性。4421反應(yīng)序號(hào)A1典型反應(yīng)判定為沙門氏菌屬。如尿素、KCN和賴氨酸脫羧酶3項(xiàng)中有1項(xiàng)異常，按表4可判定為沙門氏菌。如有2項(xiàng)異常為非沙門氏菌。表4沙門氏菌屬生化反應(yīng)初步鑒別表PH72尿素氰化鉀（KCN）賴氨酸脫羧酶判定結(jié)果甲型副傷寒沙門氏菌（要求血清學(xué)鑒定結(jié)果）沙門氏菌或（要求符合本群生化特性）沙門氏菌個(gè)別變體（要求血清學(xué)鑒定結(jié)果）注表示陽(yáng)性；表示陰性。4422反應(yīng)序號(hào)A2補(bǔ)做甘露醇和山梨醇試驗(yàn)，沙門氏菌靛基質(zhì)陽(yáng)性變體兩項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性，但需要結(jié)合血清學(xué)鑒定結(jié)果進(jìn)行判定。4423反應(yīng)序號(hào)A3補(bǔ)做ONG。ONG陰性為沙門氏菌，同時(shí)賴氨酸脫羧酶陽(yáng)性,甲型副傷寒沙門氏菌為賴氨酸脫羧酶陰性。4424必要時(shí)按表5進(jìn)行沙門氏菌生化群的鑒別。表5沙門氏菌屬各生化群的鑒別項(xiàng)目衛(wèi)矛醇山梨醇水楊苷ONG丙二酸鹽KCN注表示陽(yáng)性表示陰性。443如選擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)，可根據(jù)541的初步判斷結(jié)果，從營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落，用生理鹽水制備成濁度適當(dāng)?shù)木鷳乙?，使用生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。5結(jié)果與報(bào)告綜合以上生化試驗(yàn)的結(jié)果，報(bào)告25G（ML）樣品中檢出或未檢出沙門氏菌。（十一）金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)1設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下11恒溫培養(yǎng)箱361。12冰箱25。13恒溫水浴箱3765。14天平感量01G。15均質(zhì)器。16振蕩器。17無(wú)菌吸管1ML（具001ML刻度）、10ML（具01ML刻度）或微量移液器及吸頭。18無(wú)菌錐形瓶容量100ML、500ML。19無(wú)菌培養(yǎng)皿直徑90MM。110注射器05ML。111PH計(jì)或PH比色管或精密PH試紙。2培養(yǎng)基和試劑2110氯化鈉胰酪胨大豆肉湯。2275氯化鈉肉湯。23血瓊脂平板。24BAIRDPARKER瓊脂平板25腦心浸出液肉湯BHI。26兔血漿。27稀釋液磷酸鹽緩沖液。28營(yíng)養(yǎng)瓊脂小斜面。29革蘭氏染色液。210無(wú)菌生理鹽水3操作步驟31樣品的處理稱取25G樣品至盛有225ML75氯化鈉肉湯或10氯化鈉胰酪胨大豆肉湯的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000R/MIN10000R/MIN均質(zhì)1MIN2MIN，或放入盛有225ML75氯化鈉肉湯或10氯化鈉胰酪胨大豆肉湯的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1MIN2MIN。若樣品為液態(tài)，吸取25ML樣品至盛有225ML75氯化鈉肉湯或10氯化鈉胰酪胨大豆肉湯的無(wú)菌錐形瓶瓶?jī)?nèi)可預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠中，振蕩混勻。52增菌和分離培養(yǎng)521將上述樣品勻液于361培養(yǎng)18H24H。金黃色葡萄球菌在75氯化鈉肉湯中呈混濁生長(zhǎng)，污染嚴(yán)重時(shí)在10氯化鈉胰酪胨大豆肉湯內(nèi)呈混濁生長(zhǎng)。322將上述培養(yǎng)物，分別劃線接種到BAIRDPARKER平板和血平板，血平板361培養(yǎng)18H24H。BAIRDPARKER平板361培養(yǎng)18H24H或45H48H。323金黃色葡萄球菌在BAIRDPARKER平板上，菌落直徑為2MM3MM，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落有似奶油至樹(shù)膠樣的硬度，偶然會(huì)遇到非脂肪溶解的類似菌落；但無(wú)混濁帶及透明圈。長(zhǎng)期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產(chǎn)生的黑色較淡些，外觀可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤(rùn)、金黃色（有時(shí)為白色），菌落周圍可見(jiàn)完全透明溶血圈。挑取上述菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗(yàn)。33鑒定331染色鏡檢金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽(yáng)性球菌，排列呈葡萄球狀，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，直徑約為05M1M。332血漿凝固酶試驗(yàn)挑取、BAIRDPARKER平板或血平板上可疑菌落1個(gè)或以上，分別接種到5MLBHI和營(yíng)養(yǎng)瓊脂小斜面，361培養(yǎng)18H24H。取新鮮配置兔血漿05ML，放入小試管中，再加入BHI培養(yǎng)物02ML03ML，振蕩搖勻，置361溫箱或水浴箱內(nèi)，每半小時(shí)觀察一次，觀察6H，如呈現(xiàn)凝固（即將試管傾斜或倒置時(shí)，呈現(xiàn)凝塊）或凝固體積大于原體積的一半，被判定為陽(yáng)性結(jié)果。同時(shí)以血漿凝固酶試驗(yàn)陽(yáng)性和陰性葡萄球菌菌株的肉湯培養(yǎng)物作為對(duì)照。也可用商品化的試劑，按說(shuō)明書操作，進(jìn)行血漿凝固酶試驗(yàn)。結(jié)果如可疑，挑取營(yíng)養(yǎng)瓊脂小斜面的菌落到5MLBHI，361培養(yǎng)18H48H，重復(fù)試驗(yàn)。34葡萄球菌腸毒素的檢驗(yàn)可疑食物中毒樣品或產(chǎn)生葡萄球菌腸毒素的金黃色葡萄球菌菌株的鑒定，應(yīng)按附錄B檢測(cè)葡萄球菌腸毒素。4結(jié)果與報(bào)告41結(jié)果判定符合523、53，可判定為金黃色葡萄球菌。42結(jié)果報(bào)告在25G（ML）樣品中檢出或未檢出金黃色葡萄球菌。（十二）菌落總數(shù)測(cè)定1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中菌落總數(shù)（AEROBICLATECOUNT）的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中菌落總數(shù)的測(cè)定。2設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下21恒溫培養(yǎng)箱361，301。22冰箱25。23恒溫水浴箱461。24天平感量為01G。25均質(zhì)器。26振蕩器。27無(wú)菌吸管1ML（具001ML刻度）、10ML（具01ML刻度）或微量移液器及吸頭。28無(wú)菌錐形瓶容量250ML、500ML。29無(wú)菌培養(yǎng)皿直徑90MM。210PH計(jì)或PH比色管或精密PH試紙。211放大鏡或/和菌落計(jì)數(shù)器。3培養(yǎng)基和試劑31平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基。32磷酸鹽緩沖液。33無(wú)菌生理鹽水。4操作步驟41樣品的稀釋411固體和半固體樣品稱取25G樣品置盛有225ML磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000R/MIN10000R/MIN均質(zhì)1MIN2MIN，或放入盛有225ML稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1MIN2MIN，制成110的樣品勻液。412液體樣品以無(wú)菌吸管吸取25ML樣品置盛有225ML磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌錐形瓶（瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠）中，充分混勻，制成110的樣品勻液。413用1ML無(wú)菌吸管或微量移液器吸取110樣品勻液1ML，沿管壁緩慢注于盛有9ML稀釋液的無(wú)菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支無(wú)菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1100的樣品勻液。414按613操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1ML無(wú)菌吸管或吸頭。415根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇2個(gè)3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí)，吸取1ML樣品勻液于無(wú)菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí)，分別吸取1ML空白稀釋液加入兩個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。416及時(shí)將15ML20ML冷卻至46的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于4