第一部分茶多酚注射液在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究碩士生姓名付婷指導(dǎo)教師韓國(guó)柱教授專業(yè)名稱藥理學(xué)茶多酚注射液在大鼠的血漿藥代動(dòng)力學(xué)摘要目的建立反相高效液相色譜RPHPLC法同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中茶多酚TEAPOLYPHENOLS。TP主要抗氧活性成分表沒食子兒茶素沒食子酸酯EGCG和表兒茶素沒食子酸酯ECG的濃度，進(jìn)而研究其藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)，為TP的新藥開發(fā)及臨床合理用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法采用RPHPLC法測(cè)定血漿樣品中EGCG和ECG的濃度。固定相采用KROMASILCI8色譜柱46150MM，5PM，預(yù)柱為KROMASILCI8保護(hù)柱4620MMID，LOIM，流動(dòng)相為乙腈01枸櫞酸溶液，梯度洗脫，UV檢測(cè)波長(zhǎng)280NM。血漿樣品200PL，加20維生素C水溶液20UL，30LAGML一香草醛內(nèi)標(biāo)，IS溶液20L，乙酸乙酯ETOAC500LLL提取2次，合并上層有機(jī)相，N2流下37水浴揮干，加20乙腈CH3CN水溶液100UL復(fù)溶，漩混1MIN，4低溫離心7500RMIN叫10RAIN后，取上清液60L進(jìn)樣，以峰面積比內(nèi)標(biāo)法定量。最低定量限和標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍、日內(nèi)精密度、日間精密度、準(zhǔn)確度、萃取回收率、穩(wěn)定性按藥監(jiān)局指導(dǎo)原則進(jìn)行測(cè)定。雄性SD大鼠15只，隨機(jī)分為三組N5，即高劑量組150MGKG。1、中劑量組100MGKG一和低劑量組50MGKG一，各動(dòng)物自尾靜脈注射給予TP后，于給藥前和給藥后不同時(shí)間點(diǎn)從內(nèi)眥靜脈收集血漿樣品，應(yīng)用上述方法測(cè)定血藥濃度，經(jīng)3P97程序處理擬合房室模型，并計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果EGCG和ECG的保留時(shí)間TR分別為112RAIN和L83RAIN，IS的保留時(shí)間為L(zhǎng)64RAIN，三者之間達(dá)到基線分離，并不受空白血漿和代謝物以及TP中其他成分的干擾。EGCG和ECG標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍分別為O25300LAGMLJ和0160LAGML一，線性方程分別為Y01404X0005059R2O9996，N3和Y01393X00007530R2O9997，N3，日內(nèi)精密度RSD均小于797，日間精密度RSD均小于1299，準(zhǔn)確度為861211242。EGCG和ECG的萃取回收率分別為79808464和76598727。血漿樣品一20保存至少一個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定；室溫保存至少8H內(nèi)穩(wěn)定；對(duì)照品儲(chǔ)備液20保存至少兩個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定；血漿樣品經(jīng)ETOAC萃取后24保存至少24H內(nèi)穩(wěn)定。EGCG和ECG的血藥濃度時(shí)程符合二室模型線性動(dòng)力學(xué)過(guò)程。主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為EGCG和ECG的TL28分別為1115614482MIN和46276118MIN，說(shuō)明消除快速EGCG的AUC分別為29316060926LAGMLMIN高劑量AGMLMIN中劑量和8250110311LAGMLMIN低劑量，ECG的AUC分別為10679811997LAGMLMIN高劑量，5L056L0302LAGMLMIN中劑量和257216769LAGML一MIN低劑量EGCG和ECG的VD分別為459595LKG。1和201275LKG；EGCG和ECG的CL分別為00250033LKG。MIN叫和O024“。0034LKGMIN一。三劑量組間AUC隨劑量的增加成比例增加P005。結(jié)論本文建立的RPHPLC法同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中TP主要活性成分EGCG和ECG的濃度，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證表明特異性高、精密度好、回收率高。血藥濃度數(shù)據(jù)表明EGCG和ECG在本研究的劑量范圍內(nèi)呈線性動(dòng)力學(xué)，且消除快速，分布廣泛VD值遠(yuǎn)超過(guò)總體水體積；與ECG相比，EGCG相對(duì)消除較慢，分布更廣，但清除率基本相同。關(guān)鍵詞藥代動(dòng)力學(xué)高效液相色譜茶多酚表沒食子兒茶素沒食子酸酯表兒茶素沒食子酸酯第二部分茶多酚注射液在大鼠組織中的分布摘要目的建立RPHPLC法同時(shí)測(cè)定大鼠心臟、肝臟、腎臟和腦組織中2TP主要活性成分EGCG和ECG的含量，研究其在組織中的分布特點(diǎn)，為TP的新藥開發(fā)及臨床合理用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法采用RPHPLC法測(cè)定大鼠心、肝、腎和腦組織中EGCG和ECG的含量。色譜條件與前述血漿藥動(dòng)學(xué)研究相同。上述組織以飽和生理鹽水按1G4ML心臟、肝臟和腦組織和1G9ML腎臟的比例制成勻漿。取組織勻漿樣品1ML，加20維生素C水溶液20“L，20GGML1香草醛IS溶液20UL，乙酸乙酯ETOAC2ML，漩混1RAIN，4低溫離心7500RMIN一10MIN后取上層有機(jī)相，置于另一離心管中，如此共萃取2次，合并2次萃取液，N2流下37水浴揮干，加20乙腈CH3CN水溶液200LAL復(fù)溶，漩混LMIN，4低溫離心7500RMIN以10MIN后，取上清液60UL進(jìn)樣，以峰面積比內(nèi)標(biāo)法定量。最低定量限和標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍、同內(nèi)精密度、F1間精密度、萃取回收率、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性按藥監(jiān)局指導(dǎo)原則進(jìn)行測(cè)定。健康雄性SD大鼠15只，隨機(jī)分為三組N5。每組動(dòng)物均按L00MGK91的劑量自尾靜脈注射給藥。三組受試大鼠分別于給藥后20MIN，60MIN和120MIN取血后處死，立即解剖采集心臟、肝臟、。腎臟和腦組織，應(yīng)用前述方法測(cè)定血藥濃度和上述方法測(cè)定各組織中的藥物含量。結(jié)果EGCG和ECG的保留時(shí)間分別為112MIN和183MIN，IS的保留時(shí)間為164MIN三者之間達(dá)到基線分離，并不受各空白組織勻漿和代謝物以及茶多酚中其他成分的干擾。各組織勻漿中EGCG和ECG標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍均分別為O2520LAGML1和012510GGML。心臟、肝臟、腎臟和腦組織勻漿中EGCG線性方程分別為Y07252X0001502R2O9995，N3，Y07609X006228R209996，N3，Y11210XO004801R2O9989，N3和Y08366X一002721R209999，N3；ECG線性方程分別為Y07170XO001043R209988，N3，Y0605IXO02370R2O9990，N3，YI1852XO05L44R209959，N3和Y08303X一002856R2O9999，N3。日內(nèi)和同間精密度RSD均小于15，準(zhǔn)確度為961310419。EGCG和ECG的萃取回收率分別為51907554和5313一8065。各組織勻漿樣品一20保存至少一個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定，室溫保存至少8H內(nèi)穩(wěn)定。EGCG在各組織中濃度的順序?yàn)槟I臟6869PGG。1血漿1979LAGML1肝臟900“GG1心臟791LAGG_藥后20MIN；血漿752LAGML一腎臟637LAGG一心臟233LAGG1肝臟110LAGG1藥后60RAIN血漿330LAGML。腎臟23LGG。心臟074LAGG一肝臟0193PGG。1藥后120MIN。ECG在各組織中濃度的順序?yàn)?。腎臟4212GG叫肝臟1067PGG叫血漿717LAGML。1心臟215PGG一藥后20RAIN；腎臟305“GG。1血漿261LAG。ML。肝臟136“GG一心臟069LAGG。1藥后60MIN；腎臟115PGG“血漿O85GGML“肝臟037PGG。1心臟025LAGG。1藥后120MIN。腦組織中二者均未測(cè)得。結(jié)論本文建立的RPHPLC法同時(shí)測(cè)定大鼠心臟、肝臟、腎臟和腦組織勻漿中TP主要活性成分EGCG和ECG的含量，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證表明特異性高，精密度好。各組織數(shù)據(jù)表明EGCG和ECG在腎臟中含量最高，肝臟和心臟次之，腦組織中含量甚微，提示EGCG和ECG不易透過(guò)血腦屏障。關(guān)鍵詞組織分布高效液相色譜茶多酚表沒食子兒茶素沒食子酸酯表兒茶素沒食子酸酯第三部分茶多酚注射液自大鼠尿、膽汁和糞中的排泄摘要目的建立RPHPLC法同時(shí)測(cè)定大鼠尿、膽汁和糞中茶多酚TP主要抗氧活性成分EGCG，ECG，EGC和EC的濃度，研究其排泄特點(diǎn)，為TP的新藥開發(fā)及臨床合理用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法采用RPHPLC法分別測(cè)定大鼠靜脈注射100MGKG叫的TP后，不同時(shí)間段內(nèi)上述4種兒茶素類化合物在尿、膽汁和糞中的濃度含量。尿、膽汁樣品的色譜條件與前述血漿藥動(dòng)學(xué)研究相同，但對(duì)糞樣品的色譜條件有所改進(jìn)。尿樣和膽汁以生理赫水適當(dāng)稀釋，糞樣以甲醇制成1O的勻漿。各樣品以10TAGML卅香草醛VAN溶液作為內(nèi)標(biāo)IS，經(jīng)乙酸乙酯ETOAC液液萃取后N2流下37水浴揮干，加20乙腈CH3CN水溶液復(fù)溶，4低溫離心后，取上清液60L進(jìn)樣，以峰面積比內(nèi)標(biāo)法定量。最低定量限和標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍、同內(nèi)精密度、日間精密度、準(zhǔn)確度、萃取回收率和穩(wěn)定性按藥監(jiān)局指導(dǎo)原則進(jìn)行測(cè)定。健康雄性SD大鼠1O只，隨機(jī)分為兩組N5。每組動(dòng)物均按100MGKG一的劑量自尾靜脈注射4給藥。一組受試大鼠自膽管插管收集空白膽汁后給藥，收集不同時(shí)間段膽汁樣品；另一組收集空白尿樣和糞樣后，給藥，收集不同時(shí)間段尿樣和糞樣。分別應(yīng)用上述方法測(cè)定膽汁濃度和尿樣、糞樣中的藥物濃度含量。結(jié)果尿和膽汁色譜條件下EGCG、ECG、EGC和EC的保留時(shí)間分別為112MIN、183RAIN、60RAIN和96RAIN，IS的保留時(shí)間為164MIN；糞色譜條件下EGCG、ECG、EGC和EC的保留時(shí)間分別為1525RAIN、2163MIN、772RAIN和L377RAIN，IS的保留時(shí)間為1769RAIN。相互之間達(dá)到基線分離，并不受各空白樣品和代謝物以及茶多酚中其他成分的干擾。4種兒茶素類化合物的尿標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍為050L0“GML1EGCG，0125250LAG。ML叫ECG，25050LAGML叫EGC和1OO20PGML。1EC；膽汁標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍為O25GGML一EGCG，025I,TGMLECG，O820GGML1EGC_；11041OP,GML。1EC；糞勻漿標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍為125GGML。1EGCG，O820GGML。1ECG，4100I,TGMLJEGC和250ITGML。EC。尿、膽汁和糞勻漿中EGCG線性方程分別為Y04505X00485R209972，N3，YO4347XO03650F209985，N3和YO1475X005908R209997，N3；ECG線性方程分別為YO3839X一00489R209962，N3，YO3512X003819R2O9994，N3和Y02209X01219R2O9986，N3；EGC線性方程分別為Y00587X01084R209954，N3，Y004993X002456R209990，N3和YO01933X007218R209975，N3；EC線性方程分別為Y0207X02283R2O9972，N3，YO2220X007966R209988，N3和YO07538XO04321R2O9982，N3。日內(nèi)和日間精密度RSD均小于L0，準(zhǔn)確度為9007“10917。EGCG、ECG、EGC和EC的萃取回收率分別為65849160，82539956，59749300和778810162。尿、膽汁和糞樣品一20保存至少一個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定，室溫保存至少8H內(nèi)穩(wěn)定。大鼠IVTPI00MGKG。后，上述4種兒茶素類化合物在尿8H的累積排泄分?jǐn)?shù)分別為145，084，788和L073；在膽汁8H的累積排泄分?jǐn)?shù)分別為012，116，045和0053糞中EGCG和EGC的24H累積排泄分?jǐn)?shù)分別為007和999，但ECG和EC未檢測(cè)到。結(jié)論本文建立的RPHPLC法同時(shí)測(cè)定大鼠尿、膽汁和糞樣中TP主要活性成分EGCG、ECG、EGC和EC的濃度，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證表明特異性高、精密度好、回收率高。EGCG、ECG、EGC和EC在大鼠體內(nèi)僅很5少一部分以原型從尿、膽汁和糞中排出。其中以尿排泄為主，其次為膽汁排泄，經(jīng)糞排泄最差，提示這4種兒茶素類化合物體內(nèi)代謝十分旺盛。關(guān)鍵詞排泄高效液相色譜茶多酚表沒食子兒茶素沒食子酸酯表兒茶素沒食子酸酯表沒食子兒茶素表兒茶素6STUDYONTHEPHARMACOKINETICSOFTEAPOLYPHENOLSINJECTIONINRATSPART1MASTERDEGREECANDIDATEFUTING妯PERVISORPROFESSORHANGUOZHUMAJORPHARMACOLOGYNE脅SMAPH姍瞥。廿吵SSTUDY。FTEAP0LYPHENOLSLNJECTIONINRATSABSTRACT。O，JCVET。DEVEL。PASIMPLEANDSPECIFICREVERSEDPHASEHPLCUV竺翼、如R8JMUNANEOUSDETERMINATIONOFEPIGALLOCATEC也一EGCAND。EPICATECHIN3一GALLATEECGASTHEMAINAN,T,I,。VXUIUDLANOTGAACLTLIAVTEEGRDLENS。FEAPOLYPHEN。LSTP，ANDTHEREBYT。STUDYTHEIRPLASMAMETHODSEGCGANDECGINPLASMAWEREELUTED。NAKR。MASILCI8三N，ANLYTICALC。O。LUMN46150MM，5“MPR。TECTEDBYACI8PREC。LUMN4苫；2URI1O“MWIHA1INEARGRADIENTM。BIIEPHASEC。MP。SED。F，、，、，A，。0N1CIRICACIDBANDAGRADIENTF1。WRATETHEUV二ETECT二WLALIS3KSEIXT砒28M舢ALIQUOT200“L。FPLASMASAMPLESPIKEDWITHII,1S1。二冀RESENCEOF。ASMALLV。1UME。F20VITCS。LUTI。NWASPREPAREDBYIQUID。LIQU1DEX2RACI。NPROCEDUREWITHM。RETHAND。UBLEV。LUMES。FETOAC三LCEANDMENEVAPORATIONOFORGANICPHASEUNDERN2STREAMT。DRY，2燮OWE帥YRECONSTITUTIONWJTH100PL。F20CH3CNAQUEOUSSOIUTI。N，磊“LSUPERNAANWASINJECTEDONTOCHROMAT。GRAPHTHEPEAKAREARATI。SOFANALYTESTOVANIJIINASINTERNALSTANDARDVSCONCENTRATIONOFANALYTEST。|ONSTRUCH引泊RANONCURVESTHEMETH。DVAJIDATJONINCLUDINGSPECIFICITY,IINEARITY，PRECISI。N，ACCURACY，RECOVERYANDSTABILITYWASCONDUCTEDBVR。U1NEPRO，CEDURESASDESCRIBEDINGUIDINGPRINCIPLES。FPKSTUDYISSUEDBSFDAFJFEENRATSWERERAND。MLYDIVIDEDINT。3GR。UPSA二二三CONTAINING5ANIMALSRECEJVINGJVADMINISTRATI。NVIACAUDAJVEIN。FT彳15I100AND50MG。KGL，RESPECTIVELYPLASMASAMPLESWERECOLLECTEDFROMO伯馴SLNUSPRLORTODOSINGANDDIFFERENTTIME2，5，10，20，40，60，90，120180，240，300RAINPOSTDOSINGRESULTSUNDERTHESPECIFIEDHPLCANDPLASMASAMPLESPREPARATIONCONDITIONS,THECHROMATOGRAPHICPEAKSOFEGCG，ECGANDISWERERESOLVEDWELLFROMEACHOTHERWITHRETENTIONTIMETROF112MIN，183ANDL64MIN螂PECTIVELY；THEREWASNOINTERFERENCEFROMENDOGENOUSSUBSTANCES，METABOLLTESAND1MPURITIESOFTPRAWMATERIALTHECALIBRATIONCURVESHADGOOD11NEARLTYOVERTHERANGEOF025“300PGMLFOREGCGAND0I60I,TGMLIFORECG,WITHWEIGHEDLINEARREGRESSIONEQUATIONOFYPEAKAREARATLOOFANALYTEIS01404XANALYTECONCENTRATION，PGML一1O005059R209996，N23ANDY01393X00007530R2O。9997，N3RESPECTIVELY；。IMEINTRA。ANDINTERDAYPRECISIONRSD，OBTAINEDBVMEASUNNGQCSAMPLESATHIGH，MIDDLEANDLOWCONCENTRATIONSINASETOF5REPLLCATESONASINGLEASSAYDAYAND5SEPARATEDAYS，WASBETTERTHAN797ANDL299，RESPECTIVELY，ANDTHEAVERAGEACCURACY，EXPRESTEDASREIATIVERECOVERYCALCULATEDBASED011LINEARREGRESSIONEQUATIONOFCALIBRATIONCURVEWASBETWEEN86121I242THEEXTRACTIONRECOVERYOFEGCGANDECGWAS79808464AND76598727，RESPECTIVELYTHEPLASMASAMPLESWERE吼ABLEFORATLEAST30DAYSAT20AND8HATROOMTEMPERATURE；EGCG,ECGANDISSTOCKSOLUTIONS2MONTHSAT20，ANDTHEETOACEXTRACTEDPLASMASAMPLES24HAT4THEPKBEHAVIOROFEGCGANDECGINPLASMAAFTERIVADMINISTRATIONCOULDBEDESCRIBEDBVTWOCOMPARTMENTMODELANDFIRST。ORDERKINETICS，WITHT唧1123914520MINAND46636L48MIN，VD459595LKGAND201275LKG，CLO0250033LKGMINAND00240034LKGMIN一FOREGCGANDCONCLUSIONTHEMETHODDEVELOPEDINTHEPRESENTSTUDYISVALIDATEDTO川YMEEREQUIREMENTSFORPKSTUDYOFTPINJECTIONINRATSTHEPLASMADATADEMONSTRATEDARAPIDELIMINATIONFROMBODYOFEGCGANDECGEVIDENCEDBYASHORTTT2OF1“2H，ANDFOLLOWLINEARPHARMACOKINETICSINRATSIHETWOTEACATECHINSAREDISTRIBUTEDWILDLYINTHEBODY，REFLEETEDBVMUCHLARGERVDTH柚TOTALBODYWATERWHENTHECOMPARISONISMADEBETWEENTHETWO，EGCGELIMINATESLESSRAPIDLYANDDISTRIBUTESWIDERTHAN8ECGBUTHASALMOSTSAMECLASTHATOFECGKEYWORDSPHARMACOKINETICSHPLCTEAPOLYPHENOLSEGCGECGPART2THETISSUEDISTRIBUTIONSTUDYOFTEAPOLYPHENOLSINJECTIONINRATSABSTRACTOBJECTIVETODEVELOPASIMPLEANDSPECIFICREVERSEDPHASEHPLCUVMETHODFORSIMULTANEOUSDETERMINATIONOFEGCGANDECGTHEMAINACTIVEINGREDIENTSOFTEAPOLYPHENOLSTP，ANDTHEREBYTOSTUDYTHEIRTISSUEDISTRIBUTJONINRATSMETHODSTHESEPARATIONOFTEACATECHINSWASACHIEVEDUSINGTHESAMECHROMATOGRAPHICCONDITIONSASTHATDESCRIBEDUNDERSECTION1PLASMAPHARMACOKINETICSSTUDY”APREPARATIVEPROCEDURECONSISTINGOFHOMOGENIZATIONOFTISSUESWITHSATURATEDSALINEATARATIOOF1G4MLHEART，LIVER，BRAINAND1G9MLKIDNEYANDSUBSEQUENTLYLIQUIDLIQUIDEXTRACTIONWITHDOUBLEVOLUMESOFETOAC，F(xiàn)OLLOWEDBYEVAPORATIONOFORGANICPHASETODRY，THENRECONSTITUTIONASDESCRIBEDUNDERSECTION1WASDEVELOPEDTHEPEAKAREARATIOSOFANALYTESTOVANILLINASINTERNALSTANDARDYSCONCENTRATIONOFANALYTESTOCONSTRUCTCALIBRATIONCURVESTHEVALIDATIONOFTHEMETHODINCLUDINGSPECIFICITY，LINEARITY，PRECISION，ACCURACY，RECOVERYANDSTABILITYWASCONDUCTEDBYROUTINEPROCEDURESASDESCRIBEDINGUIDINGPRINCIPLESOFPKSTUDYISSUEDBYSFDAFIFTEENRATSWERERANDOMLYDIVIDEDINTO3GROUPSEACHGROUPCONTAINING5ANIMALS，BASEDON3DIFFERENTTIMEPOINTOFTISSUESCOLLECTIONPOSTDOSINGANDRECEIVEDIVADMINISTRATIONOFTP100MG。KGRESULTSUNDERTHEABOVESPECIFIEDHPLCCONDITIONSANDPREPARATIVEPROCEDURE，THECHROMATOGRAPHICPEAKSOFEGCG，ECGANDISWERERESOLVEDWELLFROMEACHOTHERWITHRETENTIONTIMET0OF112MIN，183AND164MIN，RESPECTIVELY；THEREWASNOINTERFERENCEFROMENDOGENOUSSUBSTANCES，METABOLITESANDIMPURITIESOFTPRAWMATERIALTHECALIBRATIONCURVESHAD9GOODLINEARITYOVERTHERANGEO2520GMLFOREGCGAND012510UGMLFORECGTHEHEART，LIVER，KIDNEYANDBRAINTISSUESHOMOGENATESAMPLESWEIGHEDLINEARREGRESSIONEQUATIONOFEGCGANDECGAREASFOLLOWSYPEAKAREARATIOOFANALYTEIS2O7252XANALYTECONCENTRATION，“GML。10001502R209995，N23，Y07170X一0001043R2O9988，N3；Y07609X006228RZ09996，113，Y06051XO02370R2O9990，N3；Y11210X0004801R209989，N3，Y11852X一005144R2O9959，N3ANDY08366X一002721R209999，N3，Y08303X一002856RL09999，N23，RESPECTIVELYTHEINTRAANDINTERDAYPRECISIONRSDWASBETTERTHAN15THEAVERAGEACCURACYWASBETWEEN961310419THEEXTRACTIONRECOVERYOFEGCGANDECGWAS51907554AND53138065，RESPECTIVELYTHETISSUESHOMOGENATESAMPLESWERESTABLEFORATLEAST30DAYSAT20AND8HATROOMTEMPERATURETHETISSUEDISTRIBUTIONOFTPWASINVESTIGATEDAT20，60AND120MINPOSTDOSINGINRATSWHEN100MGKGOFTPWASADMINISTEREDIVTORATS，EGCGANDECGWERERAPIDLYDISTRIBUTEDINTOTHEMOSTOFTISSUES，ANDKIDNEYTISSUEEXHIBITEDTHEHIGHESTEXPOSURE，WHILETHETISSUEWITHTHELOWESTEXPOSUREWASBRAINCONCLUSIONTHEMETHODDEVELOPEDINTHEPRESENTSTUDYISVALIDATEDTOFULLYMEETREQUIREMENTSFORTPINJECTIONTISSUEDISTRIBUTIONSTUDYINRATSTHETISSUESDATAINDICATEARAPIDDISTRIBUTIONOFEGCGANDECGINRATSINTOTHEMOSTOFTISSUES，ANDKIDNEYTISSUEEXHIBITEDTHEHIGHESTEXPOSURE，WHILEBRAINWITHTHE】OWESTKEYWORDSTISSUEDISTRIBUTIONHPLCTEAPOLYPHENOLSEGCGECGPART3THEEXCRETIONOFTEAFROMURINE，BILEPOLYPHENOLSINJECTIONANDFECESOFRATSABSTRACTOBJECTIVETODEVELOPASIMPLEANDSPECIFICREVERSEDPHASEHPLCUVMETHODFORSIMULTANEOUSDETERMINATIONOFEGCG，ECG，EGCANDEC，DERIVEDFROMTEAPOLYPHENOLSTP，ANDTHEREBYTOSTUDYTHEIREXCRETIONFROMURINE，BILEANDFECESOFRATSAFTERIVADMINISTRATIONOFTPMETHODSTHEURINEANDBILELEVELSOFTHEABOVESTATED4TEACATECHINSWEREQUANTIFIEDBYHPLCUVMETHODSBASEDONTHESAMECHROMATOGRAPHICCONDITIONSASDESCRIBEDUNDERSECTION1，BUTFECESLEVELSBASEDONAMILDMODIFIEDCHROMATOGRAPHICCONDITIONSTHEPEAKAREARATIOSOFANALYTESTOVANILLINASINTERNALSTANDARDVSCONCENTRATIONOFANALYTESTOCONSTRUCTCALIBRATIONCURVESTHEMETHODVALIDATIONINCLUDINGSPECIFICITY，LINEARITY，PRECISION，ACCURACY，RECOVERYANDSTABILITYWASCONDUCTEDBYROUTINEPROCEDURESASDESCRIBEDINGUIDINGPRINCIPLESOFPKSTUDYISSUEDBYSFDAFIVEFOLDDILUTEDURINE，BILESAMPLESAND1G9MLFECESHOMOGENATESAMPLESSPIKEDWITHISEXTRACTEDTWICEINPRESENCEOFASMALLVOLUMEOF20VITCSOLUTIONWITHETOACTHECOLLECTEDETOACFRACTIONWASEVAPORATEDUNDERN2STREAMTODRY，F(xiàn)OLLOWEDBYRECONSTITUTIONWITH20CH3CNAQUEOUSSOLUTIONTENRATSWERERANDOMLYASSIGNEDINTO2GROUPS5ANIMALSEACH，ANDGIVENTP100MGKGASAIVBOLUSINJECTIONBILESAMPLESWERECOLLECTEDATDIFFERENTTIMEOFPERIODPOSTDOSINGINONEGROUPOFRATS；URINEANDFECESSAMPLESWEREFROMTHEOTHERRESULTSTHECHROMATOGRAPHICPEAKSOFEGCG，ECG，EGC，ECANDISWERERESOLVEDWELLFROMEACHOTHERWITHRETENTIONTIMETROF112，L83，60，96AND164MIN，F(xiàn)ORURINE，BILERESPECTIVELY，ANDWITH1525，2163，772，1377AND1769MINFORFECESRESPECTIVELY；THEREWASNOINTERFERENCEFROMENDOGENOUSSUBSTANCES，METABOLITESANDIMPURITIESOFTPRAWMATERIALTHECALIBRATIONCURVESOFURINEHADGOODLINEARITYOVERTHERANGE05010LAGML1FOREGCG，0125250GGML。FORECG,250“50LAGML叫FOREGCAND100一20LAGML。1FORECTHECALIBRATIONCURVESOFBILEHADGOODLINEARITYOVERTHERANGE025LAGMLFOREGCGO25LAGMLFORECG，0820LAGML。1FOREGCANDO410LAG。ML。FORECTHECALIBRATIONCURVESOFFECESHOMOGENA,TEHADGOODLINEARITYOVERTHERANGE125LAGML“FOREGCG,O820LAGMLFORECG，4100LAG。ML叫FOREGCAND250LAGML1FORECTHEURINE，BILEANDFECESHOMOGENATESAMPLESWEIGHEDLINEARREGRESSIONEQUATIONOFEGCGAREASFOLLOWSYPEAKAREARATIOOFANALYTEIS04505XANALYTECONCENTRATION，LAG。ML叫00485R209972，N3，YO4347XO03650R2O9985，N3ANDY01475X005908RL09997，N3；ECGAREY03839X一00489R209962，N。3，Y03512XO03819R2O9994，N3ANDY02209X01219FRL09986，N3；EGCAREYO0587X01084R209954，N23，Y2004993X002456R209990，N3ANDY001933X007218FR2。09975，N3,ANDECAREYO207X02283R209972，N53，YO2220XO07966R2O9988，N3ANDY007538X004321FR2J09982，N3，RESPECTIVELYTHEINTRAANDINTERDAYPRECISIONRSDWASBETTERTHAN10THEAVERAGEACCURACYWASBETWEEN900710917THEEXTRACTIONRECOVERYOFEGCG,ECG，EGCANDECWAS65849160，82539956，59749300AND77881O162RESPECTIVELYTHEURINE，BILEANDFECESHOMOGENATESAMPLESWERESTABLEFORATLEAST30DAYSAT20AND8HATROOMTEMPERATURETHEEXCRETIONEXPERIMENTSSHOWEDTHATONLYABOUT145，084，788AND1073OFADMINISTRATEDDOSEFORUNCHANGEDEGCG，ECG，EGCANDECWEREEXCRETEDINURINEWITHIN8H，RESPECTIVELY，ONLY012，116,045AND0053OFADMINISTEREDDOSEWASEXCRETEDINBILEWITHIN8H，RESPECTIVELY，ONLY007AND999FOREGCGANDEGCINFECESWITHIN24H，NOECGANDECWEREFOUNDINFECESCONCLUSIONTHEMETHODDEVELOPEDINTHEPRESENTSTUDYISVALIDATEDTOSUFFICIENTLYMEETREQUIREMENTSFORTPEXCRETIONSTUDYINRATSTHEEGCG,ECGEGCANDECWEREEXCRETEDASUNCHANGEDFORMONLYINAVERYSMALLPERCENTAGEOFADMINISTEREDDOSEFROMURINE，BILEANDFECES；AMONGTHE3EXCRETORVROUTESURINARYEXCRETIONPREDOMINATED，BILIARYEXCRETLONWASPOOR，F(xiàn)ECESEXCRETIONWASNEGLIGIBLEEXCEPTFOREGCTHESEFINDINGSSUGGESTTHEAFORESAID4TEACATECHINSUNDERGOEXTENSIVEMETABOLISMINBODYOFRATSKEYWORDSEXCRETIONHPLCTEAPOLYPHEN。LSEGCGECGEGCEC關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的說(shuō)明茶多酚注射液在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究系本人在大連醫(yī)科大學(xué)攻讀辟士、碩士學(xué)位期間在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的學(xué)位論文。本人及指導(dǎo)教師完全了解大連醫(yī)科大學(xué)關(guān)于保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子版本，允許論文被查閱和借閱，同意學(xué)校將本論文加入1中國(guó)學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)、中國(guó)優(yōu)秀碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)及CNKI相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)。2中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)3國(guó)家圖書館本人授權(quán)大連醫(yī)科大學(xué)，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文，可以公布論文的全部或部分內(nèi)容。論文作者簽名互主璉指導(dǎo)教師簽名墮疊魚垂至，簽字日期乃2年二月竺日獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得大連醫(yī)科大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名童盎簽字日期塑2年_5_,9OET綜述茶多酚的藥代動(dòng)力學(xué)研究進(jìn)展付婷綜述韓國(guó)柱審校茶多酚TEAPOLYPHENOLS，TP是自綠茶CAMELLIASINENSIS，LOKTZE中提取得到的一類多羥基酚類化合物的總稱，其主要抗氧活性成分兒茶素類化合物約占總量的65一80。主要包括表沒食子兒茶素沒食子酸酯EPIGALLOCATECHIN3一GALLATE，EGCG】、表兒茶素沒食子酸酯一EPICATECHIN一3一GALLATE，ECG】、表沒食子兒茶素EPIGALLOCATECHIN，EGC】和表兒茶素【EPICATECHIN，EC等，其化學(xué)結(jié)構(gòu)特征為B環(huán)上有兩或三個(gè)羥基取代和A環(huán)上5，7間位羥基取代的黃酮醇類化合物。4種兒茶素類活性成分中，以EGCG含量最高，抗氧化活性最強(qiáng)，ECG則次之，EC最低】。TP由于其本身的化學(xué)結(jié)構(gòu)與生物學(xué)活性以及在醫(yī)療保健中的獨(dú)特功能，己成為近幾十年來(lái)醫(yī)學(xué)界研究的熱點(diǎn)。上個(gè)世紀(jì)七十年代以來(lái)，許多國(guó)家的學(xué)者對(duì)綠茶的藥理作用進(jìn)行了廣泛的研究，越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)室研究證實(shí)綠茶對(duì)多種疾病均有明顯的治療或緩解作用。隨之，對(duì)綠茶中的TP及其主要抗氧活性成分EGCG、ECG、EGC和EC等的定性和定量分析也展開了大量的研究。由于TP中組分眾多，分離上有很大困難，迄今為止，國(guó)內(nèi)仍未見TP的藥代動(dòng)力學(xué)報(bào)道。本文就國(guó)外文獻(xiàn)中TP的藥代動(dòng)力學(xué)研究進(jìn)行綜述，并對(duì)其今后研究和應(yīng)用提出展望。一TP的體內(nèi)過(guò)程特點(diǎn)一吸收TP的口服吸收較差。CHENT3】等人研究發(fā)現(xiàn)，大鼠灌胃給予DGT去咖啡因的綠茶提取物200MGKG一后，EGCG、EGC年DEC的生物利用度分別為O1、137和312。單獨(dú)灌胃給予EGCG75MGKG叫后，其生物利用度增加至16，提示DGT中其它的成分可能對(duì)EGCG的吸收有影響。為查明茶兒茶素類口服生物利用度低的原因，CAI等【4J分別從大鼠門靜脈和外周靜脈給予DGT后進(jìn)行比較性研究發(fā)現(xiàn)，EGCG、EGC和EC的肝臟生物利用度FLJV。，分別高達(dá)870、1083和949，且所得的PK參數(shù)基本類似單獨(dú)自門靜脈給予EGCG后FLIVER辦高達(dá)870，這些說(shuō)明兒茶素類化合物的肝首關(guān)效應(yīng)很低，提示兒茶素類化合物13服的體循環(huán)前消除與肝臟首關(guān)效應(yīng)沒有很大的聯(lián)系。研究表明轉(zhuǎn)運(yùn)體介導(dǎo)的腸細(xì)胞外排，也可能在茶兒茶素的體循環(huán)前丟失中起著一定的作用。采用CACO2細(xì)胞系進(jìn)行的研究表明，EC不能自頂側(cè)向基底側(cè)吸收，反而自基底側(cè)向頂側(cè)被外排，且表觀滲透系數(shù)較高。這種外排能被MRP2轉(zhuǎn)運(yùn)體競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑MK571所抑制，但PGP抑制劑維拉帕米卻不能抑制這種外排14J。近來(lái)有關(guān)EGCG在MDCKII細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)的研究表明，吲哚美辛MRP抑制劑增加了EGCG及其甲基化代謝物的胞內(nèi)蓄積。同樣，用MK571處理MRP2過(guò)表達(dá)的MDCKII細(xì)胞導(dǎo)致胞內(nèi)EGCG及其甲基化代謝物1012倍的增加，但用PGP抑制劑處理PGP過(guò)表達(dá)的MDCKII細(xì)胞則未見明顯影響，而用吲哚美辛處理HT29人結(jié)腸癌細(xì)胞導(dǎo)致胞內(nèi)EGCG及其甲基化和葡萄糖醛酸結(jié)合物水平的明顯增加。這些提示MRPS而不是PGP在EGCG的低生物利用度中發(fā)揮一定作用【5J。研究還表明，盡管位于腸細(xì)胞基底側(cè)的MRPI起著與位于腸細(xì)胞頂側(cè)的MRP2不同的作用，預(yù)期能夠增加EGCG的生物利用度，但由于在人的空腸MRP2MRNA水平高于MRPI1O倍以上，故MRP2對(duì)EGCG的外排作用在人的腸道占主導(dǎo)，并導(dǎo)致EGCG生物利用度降低。還有學(xué)者認(rèn)為茶兒茶素類在腸道的不穩(wěn)定亦是其生物利用度低的原因之一。它們通常在PH1864的低弱酸性環(huán)境中穩(wěn)定，而腸道的PH為58，EGCG及EGC將可能發(fā)生降解14。有文獻(xiàn)報(bào)道，用L0EGCG的親水性軟膏于人和小鼠皮膚，導(dǎo)致顯著地皮內(nèi)攝取【6】，其攝取量可達(dá)給藥劑量的L20。僅在小鼠可見很少量的EGCG透皮吸收進(jìn)人體循環(huán)，而在人則透皮吸收量極微，人的皮膚具有更為有效的屏障作用，從而防止局部應(yīng)用的EGCG進(jìn)入體循環(huán)。10EGCG丙酮溶液外用于小鼠皮膚，其吸收更快。當(dāng)劑量為10MGCM2和50MGCM。2時(shí)所達(dá)到的穩(wěn)念皮內(nèi)濃度分別為O5和O9MGCM，相當(dāng)于劑量的5和18。當(dāng)EGCG作為1O軟膏外用于小鼠皮肽時(shí)，其皮內(nèi)吸收速率較慢，但較完全。24H孵育，其皮內(nèi)濃度達(dá)33MGCM，相當(dāng)于19的給藥劑量被皮內(nèi)攝取。體外透皮吸收實(shí)驗(yàn)表明，L0EGCG軟膏外用于人的皮膚后，其皮內(nèi)穩(wěn)念濃度為015MGCM。二分布KIM7】等人給予大鼠O6WVGTPP綠茶多酚，固體粉末中分別含有EGCG，EGC和EC590，76和86MGG。1溶液作為飲用水，連續(xù)8天自由飲用，于第9天處死動(dòng)物，測(cè)定其組織中EGCG，EGC和EC的含量，發(fā)現(xiàn)三者在大腸4878，3032和9250NGG。1組織和食管2799，185914和1928NGG一組織中含量都較高；EGCG的含量順序?yàn)榇竽c食管膀胱腎、前列腺脾；EGC為膀胱腎大腸FILL列腺脾食管、肺；EC為大腸膀胱。腎前列腺、肺食管脾。三者在肝、心和甲狀腺中水平低。直接接觸兒茶素或涉及到消除的器官如食管，大腸，膀胱和L腎等，其含量明顯高于肝和心。三代謝早期的研究主要指向微生物代謝和甲基化代謝。晚近，4種主要兒茶素類化合物生物轉(zhuǎn)化的基礎(chǔ)研究取得了重大進(jìn)展。酶系統(tǒng)的檢測(cè)包括小鼠肝和小腸微粒體，大鼠的肝勻漿和胞液以及微粒體，人的肝微粒體、胎盤胞液、空腸胞液、CACO2胞液、唾液以及磺基轉(zhuǎn)移酶同功酶SULTLAL，SULTLA3和尿苷酸轉(zhuǎn)移酶同功酶UGTLAL，UGTLA3，UGTLA8，UGTLA9的CDNA的表達(dá)等等。已發(fā)現(xiàn)兒茶素類化合物的代謝轉(zhuǎn)化主要包括以下幾個(gè)方面LII相代謝由于茶兒茶素類化合物分子中含有多個(gè)酚羥基，故易發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，包括甲基化，硫酸結(jié)合，葡萄糖醛酸結(jié)合乃至半胱氨酸結(jié)合。分子中4和4”羥基在結(jié)合反應(yīng)中顯得尤為重要。甲基化的同時(shí)分子中其他羥基可發(fā)生硫酸葡萄糖醛酸化的結(jié)合。1甲基化這是TP代謝的一條重要的途徑814J。如從C得到的3和40甲基C和O甲基C一葡醛酸結(jié)合物，從EC得到的3和4O甲基EC和O甲基一EC一葡醛酸結(jié)合物，從ECG得到的4”O(jiān)甲基ECG，從EGC得到的4O甲基EGC，從EGCG得到的4”O(jiān)甲基EGCG和4，4_二O甲基E