1、第二章 藥物的鑒別試驗第一節(jié) 概 述依據(jù)藥典進行的藥物分析主要有三大項： 鑒別、檢查和含量測定。 藥物的鑒別試藥典所收驗（ identification test ）是用于鑒別藥物的真?zhèn)危谒幬锓治鲋袑偈醉椆ぷ鳎?只有證實被分析的藥物是真的，才有必要接著進行檢查、含量測定。載的藥物項下的鑒別試驗方法， 僅適用于貯藏在有標簽容器中的藥物， 用以證實 是否為其所標示的藥物。 它與分析化學中的定性鑒別有所區(qū)別。 這些試驗方法不證。能賴以鑒別未知物。 原料藥：鑒別試驗結(jié)合性狀項下的外觀和物理常數(shù)進行確、鑒別的項目 （一）性狀 藥物的性狀反映了藥物特有的物理性質(zhì)， 般包括外觀、嗅、味、溶解度以及物理常數(shù)

2、等。 （二）一般鑒別試驗（ general identification test ） *以藥物的化學結(jié)構(gòu)及其物理化學性質(zhì)為依據(jù)，通過化學反應(yīng)來鑒別藥物真?zhèn)蔚摹?*無機藥物：根據(jù)其組成的陰離子和陽離子的特殊反應(yīng)，并以藥典附錄 III 項下的一般鑒別試驗為依據(jù)， * 有機藥物：采用典型的官能團 反應(yīng)。 *一般鑒別試驗的項目： 丙二酰脲類、托烷生物堿類、芳香第一胺類、 有機氟化物類、 無機金屬鹽類（鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、鈣鹽、鋇鹽、銨鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋁鹽、鋅 鹽、銅鹽、銀鹽、汞鹽、鉍鹽、銻鹽、亞錫鹽）、 有機酸鹽（水楊酸鹽、枸櫞酸鹽、乳酸鹽、苯甲酸鹽、酒石酸鹽）、 無機酸鹽（亞硫酸鹽或亞硫酸氫鹽、硫酸

3、鹽、硝酸鹽、硼酸鹽、碳酸鹽與碳酸氫 鹽、醋酸鹽、磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物）。*一般鑒別試驗僅供確認單一的化學藥物，如為數(shù)種化學藥物的混合物或有干擾物質(zhì)存在時，除另有規(guī)定外，應(yīng)不適用。 * 通過一般鑒別試驗只能證實是某一類 藥物，而不能證實是哪一種藥物。例如，經(jīng)一般鑒別反應(yīng)的鈉鹽試驗，證實某一 藥物為鈉鹽， 但不能辨認是氯化鈉、 苯甲酸鈉或者是其它某一種鈉鹽藥物。 要想 最后證實被鑒別的物質(zhì)到底是哪一種藥物， 必須在一般鑒別試驗的基礎(chǔ)上， 再進行專屬鑒別試驗，方可確認。（三）專屬鑒別試驗（specific identification test）*根據(jù)每一種藥物化學結(jié)構(gòu)的差異及其所引起的物

4、理化學特性的不同，選用某些綜上所特有的靈敏定性反應(yīng)，來鑒別藥物真?zhèn)蔚?。是證實某一種藥物的依據(jù)。述，一般鑒別試驗是以某些類別藥物的共同化學結(jié)構(gòu)為依據(jù)，根據(jù)其相同的物理 化學性質(zhì)進行藥物真?zhèn)蔚蔫b別，以區(qū)別不同類別的藥物。而專屬鑒別試驗，則是 在一般鑒別試驗的基礎(chǔ)上，利用各種藥物的化學結(jié)構(gòu)差異， 來鑒別藥物，以區(qū)別同類藥物或具有相同化學結(jié)構(gòu)部分的各個藥物單體，達到最終確證藥物真?zhèn)蔚哪康?。、鑒別試驗條件 鑒別試驗是以所采用的化學反應(yīng)或物理特性產(chǎn)生的明顯 的易于覺察的特征變化為依據(jù)。因此，能影響鑒別試驗判定結(jié)果的特征變化的因 素都是應(yīng)當精心選擇和嚴格控制的。 也就是說，鑒別試驗應(yīng)該是在規(guī)定條件下完成的，

5、否則鑒別試驗的結(jié)果是不可信的。（一）溶液的濃度 主要指被鑒別藥物的濃度，及所用試劑的濃度。由于鑒別試驗多采用觀測沉淀、 顏色或各種光學參數(shù)（41K、 4仇、A、馬口等）的變化，來判定結(jié)果，而藥物和有關(guān)試劑的濃度（二）溶液的溫度溫會直接影響上述的各種變化，必須嚴格規(guī)定溶液的濃度。度對化學反應(yīng)的影響很大，一般溫度每升高 10C,可使反應(yīng)速度增加2-4倍。（三）溶液的酸堿度 許多鑒別反應(yīng)都需要在一定酸堿度的條件下才能進行。溶使反應(yīng)生液酸堿度的作用，在于能使各反應(yīng)物有足夠的濃度處于反應(yīng)活化狀態(tài),成物處于穩(wěn)定和易于觀測的狀態(tài)。（四）干擾成分的存在 在鑒別試驗中，如藥物結(jié)構(gòu)中的其它部分或藥物制劑中的其它組

6、分也可參加鑒別反應(yīng)，產(chǎn)生干擾，應(yīng)選擇專屬性更高的鑒別反應(yīng)將其消除或?qū)⑵浞蛛x。（五）試驗時間 有機化合物 的化學反應(yīng)和無機化合物不同，一般反應(yīng)速度較慢，達到預(yù)期試驗結(jié)果需要較長 的時間。這是因為有機化合物是以共價鍵相結(jié)合， 化學反應(yīng)能否進行，依賴于共 價鍵的斷裂和新價鍵形成的難易，這些價鍵的更替需要一定的反應(yīng)時間和條件。同時在化學反應(yīng)過程中，有時存在著許多中間階段，甚至需加入催化劑才能啟動反應(yīng)。因此，使鑒別反應(yīng)完成，需要一定時間。三、鑒別試驗的靈敏度反應(yīng)靈敏度和空白試驗反應(yīng)的靈敏度（sensitivity ）:在一定條件下，能在盡可能稀的溶液中觀測出盡可能少量的供試品， 反應(yīng)對這一要求所能滿足的

7、程度。它以兩個相互有關(guān)的量，即最低檢出量（minimum detectable quantity）（又稱檢出限量）和最低檢出濃度（ mi nimum detectable concen tratio n）（又稱界限濃度）來表示。最低檢出量（以m表示），就是應(yīng)用某一反應(yīng)，在一定的條件下，能夠觀測出的供試品的最小量，其單位通常用微克（“ g）表示（1 g=10-6g ）。最低檢出濃度就是應(yīng)用某一反應(yīng)，在一定條件下，能夠觀測出供試品的最低濃度，通常以1 : G （或1 : V）表示，其中G （V）表示含有1g重某供試品的溶液的g （ml ）數(shù)。最低檢出量和最低檢出濃度之間的關(guān)系可以用下式表示,式中V

8、為鑒別試驗時，所取供試溶液的最小體積（ml ）。如果選用鑒別反應(yīng)的靈敏度愈高，則產(chǎn)生可被觀測的結(jié)果所需要的藥物愈少。白試驗（blank test ）:所謂空白試驗，就是在與供試品鑒別試驗完全相同的條件下，除不加供試品外，其它試劑同樣加入進行的試驗。在選用靈敏度很高的反應(yīng)時，必須采用高純度的試劑和非常潔凈的器皿，才能保證鑒別試驗結(jié)果的可靠性。為了消除試劑和器皿可能帶來的影響，應(yīng)同時進行空白試驗，以供對照。（二）提高反應(yīng)靈敏度的方法在實際工作中，常采用以下措施來提高反應(yīng)的靈敏度。1 .加入與水互不相溶的有機溶劑 在鑒別試驗中，如生成物具有顏 色并顏色很淺時，可利用加入少量與水互不相溶的有機溶劑，濃

9、集有色生成物,使有機溶劑中顏色變深，易于觀測。2 .改進觀測方法 例如，將目視觀測溶液 的顏色，改為可見分光光度法；將觀測生成沉淀改為比濁度法等。第二節(jié)藥物的一般鑒別試驗、鑒別方法 （一）化學鑒別法1 .干法 將供試品加適當試劑在規(guī)定的溫度條件下（一般是高溫）進行試驗，觀測此時所發(fā)生的特異現(xiàn)象。（1 ）焰色試驗:常用干法，利用某些元素所具有的特異焰色，可鑒別它們 為哪一類鹽類藥物。方法為：取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒,使火焰顯出特殊的顏色。（2）加熱分解:在適當?shù)臏囟葪l件下，加熱使供試品分解，生成有特殊氣味的氣體。2.濕法系指將供試品和試劑在適當?shù)娜軇┲校谝欢l件下進行

10、反應(yīng)，發(fā)生易于觀測的化學變化，如顏色、沉淀、氣體、熒光等。（1）呈色反應(yīng)鑒別法:系指供試品溶液中加入適當?shù)脑噭┤芤海?在一定條件下進行反應(yīng)，生成易于觀測的有色產(chǎn)物。在鑒別試驗中最為常用的反應(yīng)類型有:1）三氯化鐵呈色反應(yīng)-酚羥基或水解后產(chǎn)生酚羥基；2 ）異羥肟酸鐵反應(yīng)-多為芳酸及其酯類、酰胺 類；3 ）茚三酮呈色反應(yīng)-脂肪氨基；4 ）重氮化-偶合顯色反應(yīng)-芳伯氨基或（2）沉淀生成反能產(chǎn)生芳伯氨基；5 ）氧化還原顯色反應(yīng)及其它顏色反應(yīng)。應(yīng)鑒別法:常用的這類反應(yīng)有:1）與重金屬離子的沉淀反應(yīng) 在一定條件下,藥物和重金屬離子反應(yīng)，生成不同形式的沉淀;2）與硫氰化鉻銨（雷氏鹽）的沉淀反應(yīng)多為生物堿及其鹽

11、，具有芳香環(huán)的有機堿及其鹽；3）其它沉淀反應(yīng)。光反應(yīng)鑒別法:常用的熒光發(fā)射形式有以下類型：1）藥物本身可在可見光下發(fā)射熒光；2）藥物溶液加硫酸使呈酸性后，在可見光（4）氣體生成反應(yīng)下發(fā)射熒光；3 ）藥物和溴反應(yīng)后，于可見光下發(fā)射出熒光；4）藥物和間苯二酚反應(yīng)后，發(fā)射出熒光及藥物經(jīng)其它反應(yīng)后，發(fā)射熒光。鑒別法:1）大多數(shù)的胺（銨）類藥物、酰脲類藥物以及某些酰胺類藥物，可經(jīng)強堿處理后，加熱，產(chǎn)生氨（胺）氣;2 ）化學結(jié)構(gòu)中含硫的藥物，可經(jīng)強酸處理后，加熱，發(fā)生硫化氫氣體;3）含碘有機藥物經(jīng)直火加熱，可生成紫色碘蒸氣；含醋酸酯和乙酰胺類藥物,經(jīng)硫酸水解后，加乙醇可產(chǎn)生乙酸乙酯的香味。（二）光譜鑒別法

12、1 .紫外光譜鑒別法 常用的方法有:1 ）標準品對照法；2）規(guī)定吸收波長法；3）規(guī)定吸收波長和相應(yīng)的吸收度法；4）規(guī)定吸收波長和吸收系數(shù)法；5）規(guī)定吸收波長和吸收度比值法。2 .紅外光譜鑒 別法紅外光譜法是一種專屬性很強、應(yīng)用較廣（固體、液體、氣體樣品）的鑒 別方法。1.標準圖譜對照法：中國藥典（1995年版）和BP （1993）2.對照品法：USP （23）。（三）色譜鑒別法 利用不同物質(zhì)在不同色譜條件下，產(chǎn)生各自的特征色譜行為Rf值應(yīng)與（Rf值或保留時間）進行鑒別試驗。常用的方法有：1.薄層色譜鑒別法 在實 際工作中，一般采用對照品（或標準品）比較法，要求供試品斑點的 對照品斑點一致。2.

13、高效液相色譜鑒別法一般規(guī)定按供試品含量測定項下的高 效液相色譜條件進行試驗。要求供試品和對照品色譜峰的保留時間應(yīng)一致。 含量 測定方法為內(nèi)標法時，可要求供試品溶液和對照品溶液色譜圖中藥物峰保留時間與內(nèi)標物峰的保留時間比值應(yīng)相同。3.氣相色譜鑒別法 方法同高效液相色譜法。4.紙色譜鑒別法 紙色譜法存在分離效能低、分析時間長等缺點，在藥物鑒別試驗中逐漸被薄層色譜法所取代。、鑒別試驗與原理（一）有機氟化物1 .鑒別試驗取供試品約7mg，照氧瓶燃燒法（附錄 VII C ）進行有機破壞, 用水20ml與0.01mol/L 氫氧化鈉溶液6.5ml為吸收液，俟燃燒完全后，充分 振搖；取吸收液2ml，加茜素氟

14、藍試液0.5ml，再加12%醋酸鈉的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀釋至4ml，加硝酸亞鈰試液0.5mI ,即顯藍紫色；同時做空白對 照試驗。2 .試驗原理有機氟化物經(jīng)氧瓶燃燒法破壞，為堿性溶液吸收成為無 機氟化物后，與茜素氟藍、硝酸亞鈰形成藍紫色絡(luò)合物。（二）有機酸鹽1 .水楊酸鹽鑒別試驗一 取供試品的稀溶液，加三氯 化鐵試液1滴，即顯紫色。 原理本品在中性或弱酸性條件下，和三氯化鐵試液生成配位化合物，在中性時呈紅色，弱酸性時呈紫色；若在強酸性中，配位化合物分解生成游離水楊酸。本反應(yīng)極為靈敏，只需取稀溶液進行試驗，如取用量大，產(chǎn)生顏色過深時，可加水稀釋后觀察。鑒別試驗二取供試品溶液，加稀鹽酸，即

15、析出白色水楊酸沉淀；分離，沉淀在醋酸銨試液中溶解。理水楊酸不溶于水（0 E時溶解度為g/1500L ），故供試液加酸即析出游離水 楊酸。由于水楊酸的酸性（K = 1.06 X 103，25 C）大于醋酸（K = 1.85 X 105， 25 E），故能與醋酸銨作用釋出醋酸，而本身形成銨鹽溶解。析出的水楊酸亦可 經(jīng)冷水洗滌、干燥后測定熔點（158 C-161 E） 0 2 .苯甲酸鹽3 .乳酸鹽4 .枸櫞酸鹽5 .酒石酸鹽6 .醋酸鹽鑒別試驗取供試品，加硫酸和乙醇后加熱,即產(chǎn)生乙酸乙酯的香氣。（三）無機金屬鹽1 .鈉鹽 鑒別試驗一 取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯鮮黃

16、色。原理 鈉的火 焰光譜在可見光區(qū)，有589.0nm、589.6nm 主要譜線，故其燃燒火焰顯黃色。本焰色反應(yīng)極為靈敏（最低檢出限量為 0.1 ng鈉離子）。因此，對所用儀器和試劑要求必須很嚴格。在檢測前應(yīng)將鉑絲燒紅，趁熱浸入鹽酸中，如此反復數(shù)次, 直至火焰不染黃色后，再蘸取供試品進行測定。只有當強烈的黃色火焰持續(xù)數(shù)秒 鐘不退，才能確認為鈉鹽。 鑒別試驗二 取供試品的中性溶液，加醋酸氧鈾鋅試 液，即生成黃色沉淀。 原理 其反應(yīng)式為:Na+ Zn+ mrof 斗 gCHgCOO 十 9HQ本試驗中，供試品溶液應(yīng)為中性；有些有機酸鹽（如水楊酸鈉）遇醋酸氧鈾鋅試 液能生成有色配位化合物，故在試驗前應(yīng)

17、對供試液進行預(yù)處理。其處理方法是， 在供試液中加入稀鹽酸，濾過，取濾液蒸干，加水溶解后，再供試驗用；試驗中, 醋酸氧鈾鋅試液要加多過量；必要時，還需用玻璃棒摩擦試管壁，以促進黃色沉淀的析出。2 .鉀鹽鑒別試液一 焰色反應(yīng)顯紫色，但有少量鈉鹽混存時,須隔色玻璃透視，方能辨認。原理鉀的火焰光譜在可見光區(qū)有766.49nm769.90nm與404.4nm幾條譜線，其中以766.49nm與769.90nm兩條譜線最強。由于人眼在此波長附近敏感度較差，故鉀鹽的燃燒火焰顯紫色。如有鈉鹽混存, 因鈉焰靈敏度很高，需透過藍色鉆玻璃將鈉焰黃色濾去，此時火焰顯粉紅色。 鑒 別試驗二取供試品，加熱熾灼，除去可能含有

18、的銨鹽，放冷后，加水溶解，再加0.1%四苯硼鈉溶液與醋酸，即生成白色沉淀。原理 其反應(yīng)式為：若有NH+存在，顯相同反應(yīng)，故必須預(yù)先加熱熾灼除去，以免干擾試驗結(jié)果的 辨認。3 .銨鹽 鑒別試驗一 取供試品，加過量氫氧化鈉試液后，加熱，即分解, 發(fā)生氨臭；遇濕潤的紅色石蕊試紙，能使之變藍，并能使硝酸亞汞試液濕潤的濾紙顯黑色。原理 其反應(yīng)式為：nhZ + oe-一NHm怙吒O 足 10二-NG 十亜I十 miliNOsL理/ J試驗原理其反應(yīng)式為:+ 61 十 10 + EQ2Hgl4f'4MH3+2OH鑒別試驗一焰色反應(yīng)顯磚紅色（622nm。鑒別試驗二取供試品溶液（1-20）, 加甲基紅指

19、示液2滴，用氨試液中和，再滴加鹽酸至呈酸性，加草酸銨試液，即 生成白色沉淀；分離，沉淀不溶于醋酸，但可溶于鹽酸。 試驗原理 其反應(yīng)式為:C尹 + Cap? 陽三 4. CaC2O4（白色）5鎂鹽 鑒別試驗一 取供試品溶液，加氨試液，即生成白色沉淀；滴加氯化銨試液，沉淀溶解；再加磷酸氫二鈉試液 1滴，振搖，即生成白色沉淀。沉淀在氨試液中不溶。 試驗原理 其反應(yīng)式為:陞工+ 2NH 護3； + 2 曲盹（OH57 + 2NH羊Mg" + 2NH；t屁*+ 2NH5*Hi 0 + HP04'' =砸1巫疋04 + 氏0鑒別試驗一焰色試驗顯黃綠色（553.56nm ，500n

20、m ），通過綠色玻璃透視, 火焰顯藍色（488nm ）。鑒別試驗二 取供試品溶液，加稀硫酸，即生成白色沉淀；分離，沉淀在鹽酸或 硝酸中均不溶解。鑒別試驗一 取供試品溶液，加氫氧化鈉試液堿化后，加入碳酸鈉試液，煮沸, 即生成白色沉淀（Li 20）;分離，沉淀能在氯化銨試液中溶解（NH3）。鑒別試驗二焰色試驗顯胭脂紅色。（670.78nm）鑒別試驗三取供試品適量，加入稀硫 酸或可溶性硫酸鹽溶液，不生成沉淀（與鍶鹽區(qū)別） 試驗原理 鋰鹽和稀硫酸或 可溶性硫酸鹽溶液不發(fā)生沉淀反應(yīng)，而鍶鹽則相反，以此可區(qū)別鋰鹽和鍶鹽。 &鐵鹽（1）亞鐵鹽： 鑒別試驗一 取供試品溶液，加鐵氰化鉀試液，即生成深藍色

21、沉淀，分離，沉淀在稀鹽酸中不溶，但加氫氧化鈉試液，即分解成棕色沉 淀。試驗原理其反應(yīng)式為:（深藍色藤氏藍）3F 尹+ 2Fe<CN>F F 電FHCNd 訂Ft2Fe(CK)d2 + '6KaC'H 口21?1狛斤(0舟匕+ 3Fe(QH)21 4Fe(OH)2 + Q2 + 2H3O 4氏(0巴貞(棕色)試驗原理其反應(yīng)式為:（深紅色）鑒別試驗一 取供試品溶液，加亞鐵氰化鉀試液,即生成深藍色沉淀，分離,沉淀在稀鹽酸中不溶，但加氫氧化鈉試液，即分解成棕色沉淀。 試驗原理 其反 應(yīng)式為:4F + 3Fe（CN>*'珂昭賦匚聞訂"（深藍色普魯士藍）

22、Fe(F<FeC；Ciq)6B3 + IZtdOH >3N7c(CN)fc + 4Fi：(6Q：4F已珥nSC*M試驗原理其反應(yīng)式為:（血紅色）本試驗一般應(yīng)在鹽酸溶液中進行；不能用硝酸，因硝酸中可能含有亞硝酸，干 擾試驗結(jié)果。HNOi + 3CN + H * NO *S'CM + HO (紅色)（1）亞汞鹽 鑒別試驗一 取供試品，加氨試液或氫氧化鈉試液，即變?yōu)楹谏?。試驗原理其反?yīng)式為:色尹+戈OH =：1電QIt+IIQ （黑色）鞋0越空氏a + Hsl （黑色）試驗原理其反應(yīng)式為:Hg尹+2熾 HgdH化b (黃色)層此+ 21<1 41琢孑+IIg丄（黑色）鑒別試

23、驗一 取供試品溶液，加氫氧化鈉試液，即生成黃色沉淀 （HgO）。鑒別試驗二 取供試品的中性溶液，加碘化鉀試液，即生成猩紅色沉淀，能在過量碘化 鉀試液中溶解；再以氫氧化鈉堿化，加銨鹽即生成紅棕色沉淀。試驗原理其反 應(yīng)式為:時+丞I 一略（猩紅色）3-H企十 2K1I Hgif + 2K0二十71+3氐0HT鑒別試驗一 取供試品溶液，加稀鹽酸，即生成凝乳狀沉淀，分離，沉淀能在氨試液中溶解，加硝酸沉淀又重新出現(xiàn)。試驗原理 其反應(yīng)式為:屋+Cr +2HNO5> AgCl；+NHtNO3鉻酸銀沉淀能溶于硝酸中，也可和氨試液作用生成 Ag（NH3）2+而溶解，但不溶 于酸性較弱的醋酸中。11 .銅鹽

24、 鑒別試驗一 取供試品溶液，滴加氨試液，即 生成淡藍色沉淀，再加過量氨試液，沉淀即溶解，生成深藍色溶液。試驗原理 其 反應(yīng)式為:Ci?+ 2KH7f H2O 亍C«(OH) 2； + 2NH4*3十-CuQH)2 + 4NH 3 HiO * Cu(NH+ 30H + 4H £試驗原理其反應(yīng)式為:陰哄從H （紅棕色）鑒別試驗一 取供試品溶液，加碘化鉀試液，即生成紅棕色溶液或暗棕色沉淀，分離，沉淀能在過量碘化鉀試液中溶解成黃棕色的溶液，再加水稀釋，又生成橙色沉淀。試驗原理其反應(yīng)式為：Rd爼I頂川3K鉍鹽量少時，則形成紅棕色溶液。Bilm + Kl 一 K印I*（紅棕色溶液）加水

25、稀釋，即形成橙色的碘化氧鉍沉淀。KBil斗 + 耳 0因0耳+ 2HI + KI（橙色）如鉍鹽濃度較小時，這一反應(yīng)現(xiàn)象不明顯。鑒別試驗二取供試品溶液，用稀硫酸酸化，加10%硫脲溶液，即顯深黃色。試驗原理鉍鹽和硫脲在酸性條件下,具有特別靈敏的顏色反應(yīng)（），其顏色取決于生成沉淀的組成，沉淀的組成取決于反應(yīng)的條件，Bi3+與SC（NH 2）2的比例為1 ：1時為黃褐色；1 :時為黃色；1 ：3時為黃褐色。硫脲和多數(shù)金屬離子都可發(fā)生顏色反應(yīng)。13 .鋅鹽鑒 別試驗一 取供試品溶液，加亞鐵氰化鉀試液，即生成白色沉淀，分離，沉淀在 稀鹽酸中不溶解。 試驗原理 其反應(yīng)式為：（白色） 亞鐵氰化鉀試劑過量時則生成溶解度更小的亞鐵氰化鋅鉀白色沉淀。3 弧FHCN% + K 斗F