1、    中藥調(diào)整性早熟兒童青春發(fā)育進(jìn)程的機(jī)制研究(1)     目的：從神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)及基因表達(dá)的角度，探討調(diào)整性早熟兒童青春發(fā)育進(jìn)程的滋陰瀉火中藥和益腎填精中藥有效調(diào)節(jié)下丘腦垂體促性腺機(jī)能、促生長(zhǎng)機(jī)能的作用機(jī)制。方法：青春期大鼠分別予以喂飼滋陰瀉火中藥或益腎填精中藥。采用神經(jīng)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法（下丘腦推挽灌流、組織勻漿、腦片孵育及免疫組化法）檢測(cè)下丘腦促性腺區(qū)促性腺激素釋放激素（gonadotropinreleasing hormone, GnRH）的含量、脈沖釋放頻率與幅度，以及中樞氨基酸遞質(zhì)、神經(jīng)肽Y及內(nèi)啡肽釋放

2、的變化；采用定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)下丘腦GnRH、生長(zhǎng)激素釋放激素（growth hormone releasing hormone, GHRH）、生長(zhǎng)抑素（somatostatin, SS）、腺垂體卵泡刺激素（follicular stimulating hormone, FSH）、黃體生成素（luteinizing hormone, LH）、生長(zhǎng)激素（growth hormone, GH）、長(zhǎng)骨干骺端胰島素樣生長(zhǎng)因子（insulinlike growth factor, IGF）基因及蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果：滋陰瀉火中藥可明顯抑制下丘腦促性腺區(qū)興奮性氨基酸遞質(zhì)的釋放，促進(jìn)抑制性氨基酸遞質(zhì)

3、、神經(jīng)肽Y和內(nèi)啡肽的釋放，使下丘腦GnRH神經(jīng)元的功能活動(dòng)降低，下調(diào)GnRH、FSH及LH基因的表達(dá)水平，上調(diào)下丘腦SS基因的表達(dá)，并下調(diào)垂體GH及長(zhǎng)骨干骺端IGF基因的表達(dá)，從而明顯抑制下丘腦垂體的促性腺機(jī)能及促生長(zhǎng)機(jī)能。益腎填精中藥則可明顯抑制下丘腦促性腺區(qū)神經(jīng)肽Y的釋放，使下丘腦GnRH神經(jīng)元的功能活躍，上調(diào)GnRH、FSH及LH基因的表達(dá)，下調(diào)下丘腦SS基因的表達(dá)，上調(diào)垂體GH及長(zhǎng)骨干骺端IGF基因的表達(dá)，從而明顯促進(jìn)下丘腦垂體的促性腺機(jī)能及促生長(zhǎng)機(jī)能。結(jié)論：滋陰瀉火中藥和益腎填精中藥可通過調(diào)整機(jī)體的神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)機(jī)制，調(diào)整下丘腦GnRH、SS，腺垂體FSH、LH、GH及長(zhǎng)骨干骺端IG

4、F基因的轉(zhuǎn)錄，有效調(diào)節(jié)下丘腦垂體的促性腺機(jī)能及促生長(zhǎng)機(jī)能。這可能是滋陰瀉火中藥和益腎填精中藥可有效調(diào)整性早熟患兒青春發(fā)育進(jìn)程及改善骨骼發(fā)育的主作用機(jī)制。關(guān)鍵詞 中藥; 青春期，早熟; 神經(jīng)遞質(zhì); 神經(jīng)肽Y; 內(nèi)啡肽; 下丘腦垂體性腺軸; 生長(zhǎng)抑素生長(zhǎng)激素胰島素樣生長(zhǎng)因子軸Effects of Chinese herbal medicine on modulating the course of puberty development in children with precocious pubertyABSTRACT Objective: To explore the therapeutic

5、 effects of Ziyin Xiehuo Recipe (ZYXHR) for nourishing yin and lowering fire and Yishen Tianjing Recipe (YSTJR) for nourishing kidney and replenishing essence on regulating the gonadotrophic and somatotrophic functions of hypothalamicpituitary axis, and to reveal the mechanisms of ZYXHR and YSTJR in

6、 modulating the course of pubertal development of children with precocious puberty. Methods: The pubertal rats were fed with ZYXHR or YSTJR for 30 days, and the parameters of rats were monitored as the followings: The content of gonadotropinreleasing hormone（GnRH）, the frequency and amplit

7、ude of GnRH impulse releasing, the releasing amounts of aminoacid neurotransmitters, and neuropeptide Y (NPY) and endorphin (END) in the gonadotrophic area of the hypothalamus were detected with neurobiological methods (pushpull perfusion, homogenate, incubation of brain slices, and immunohistochemi

8、cal staining). The levels of gene and protein expressions of GnRH, growth hormone releasing hormone (GHRH) and somatostatin (SS) in hypothalamus, and follicular stimulating hormone (FSH), luteinizing hormone (LH) and growth hormone (GH) in adenohypophysis as well as insulinlike growth factor (IGF) i

9、n metaphysis were determined with real time reverse transcriptionpolymerase chain reaction (RTPCR). Results: The ZYXHR could reduce the activity of GnRH neurons in hypothalamus through inhibiting the release of central exciting aminoacid neurotransmitters, whereas promoting the release of central in

10、hibiting aminoacid neurotransmitters, NPY and END in gonadotrophic area of hypothalamus. The expression levels of GnRH, FSH and LH mRNAs were downregulated while the expression level of SS mRNA in hypothalamus was upregulated in the ZYXHRtreated group. The GH mRNA in hypophysis and the IGF mRNA in m

11、etaphysis were both downregulated by ZYXHR. The YSTJR could promote the activity of GnRH neurons in hypothalamus through inhibiting the release of NPY in gonadotrophic area of hypothalamus, upregulating the expression levels of GnRH, FSH, LH and GH mRNAs in hypophysis, and IGF mRNA in metaphysis, wh

12、ile downregulating the expression level of SS mRNA in hypothalamus. Conclusion: The ZYXHR and YSTJR could both regulate the gonadotrophic and somatotrophic functions of hypothalamicpituitary axis through modulating the neuroendocrine regulation and the gene expressions of GnRH and SS in hypothalamus

13、, GH, FSH and LH in hypophysis, and IGF in metaphysis. These may be the chief mechanisms of ZYXHR and YSTJR in modulating the course of pubertal development and ameliorating the skeletal development in children with precocious puberty.KEY WORDS Chinese materia medica; puberty, precocious; neurotrans

14、mitters; neuropeptide Y; endorphin; hypothalamicpituitarygonadal axis; somatostatingrowth hormoneIGF axis復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)院兒科醫(yī)院近十余年來(lái)對(duì)兒童特發(fā)性性早熟的發(fā)病規(guī)律、診斷及治療進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，制定了一套調(diào)整其青春發(fā)育進(jìn)程的中藥治療方案，包括在起病時(shí)誘導(dǎo)其緩解，緩解后鞏固并維持療效，待至正常青春期年齡時(shí)，則促使其更好地青春發(fā)育。臨床研究已證實(shí)該中藥治療方案能有效地調(diào)整患兒的青春發(fā)育進(jìn)程并改善其骨骼發(fā)育1。本研究系在臨床已取得療效的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步從神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)及基因表達(dá)的角度研究該中藥治療

15、方案的作用機(jī)制。            作者：蔡德培，陳伯英，張煒，李嬪【關(guān)鍵詞】,中藥摘目的：從神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)及基因表達(dá)的角度，探討調(diào)整性早熟         本篇論文是由3COME文檔頻道的網(wǎng)友為您在網(wǎng)絡(luò)上收集整理餅投稿至本站的，論文版權(quán)屬原作者，請(qǐng)不用于商業(yè)用途或者抄襲，僅供參考學(xué)習(xí)之用，否者后果自負(fù)，如果此文侵犯您的合法權(quán)益，請(qǐng)聯(lián)系我們。1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 同窩SD雌性大鼠24

16、0只，1.5月齡（相當(dāng)于青春期），體質(zhì)量160180 g，飼養(yǎng)于自然光照環(huán)境中。1.2 動(dòng)物分組及藥物處理 240只大鼠隨機(jī)分為3組：（1）滋陰瀉火中藥組80只，喂飼滋陰瀉火中藥；（2）益腎填精中藥組80只，喂飼益腎填精中藥；（3）正常對(duì)照組80只，喂飼等量生理鹽水。滋陰瀉火中藥（Zhiyin Xiehuo Recipe, ZYXHR）由生地黃15 g、炙龜板12 g、黃柏9 g、知母9 g、牡丹皮9 g等組成；益腎填精中藥（Yishen Tianjing Recipe, YSTJR）由熟地黃15 g、龜板膠9 g、仙靈脾9 g、鹿角膠9 g、肉蓯蓉9 g、菟絲子9 g等組成。由復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)院

17、兒科醫(yī)院中藥制劑室煎制成濃縮合劑，約含生藥3 g/ml。每組大鼠均予以灌胃給藥，1次/d，5 ml/d，治療30 d為1個(gè)療程。1.3 檢測(cè)指標(biāo)1.3.1 下丘腦促性腺區(qū)神經(jīng)遞質(zhì)及神經(jīng)肽的含量 興奮性氨基酸遞質(zhì)谷氨酸（glutamic acid, Glu）、天門冬氨酸（aspartic acid, Asp）及抑制性氨基酸遞質(zhì)氨基丁酸（aminobutyric acid, GABA）采用推挽灌流及高效液相色譜法檢測(cè)；內(nèi)啡肽（endorphin, END）采用推挽灌流及放射免疫法檢測(cè)；神經(jīng)肽Y（neuropeptide Y, NPY）采用免疫組化法檢測(cè)。1.3.2 下丘腦促性腺區(qū)促性腺激素釋放激素

18、（gonadotropinreleasing hormone, GnRH）的釋放方式及含量 （1）GnRH周期性分泌中心下丘腦內(nèi)側(cè)視前區(qū)（medial preoptic area, MPOA）：采用推挽灌流及放射免疫法測(cè)定GnRH脈沖釋放的頻率與幅度；組織勻漿、放射免疫法及免疫組化法測(cè)定GnRH的含量。（2）GnRH緊張性分泌中心內(nèi)側(cè)基底下丘腦弓狀核（arcuate nucleus, ARC）及正中隆起（median eminence, ME）：采用腦片孵育、放射免疫法及免疫組化法測(cè)定GnRH的含量。1.3.3 下丘腦GnRH mRNA、腺垂體卵泡刺激素（follicular stimulat

19、ing hormone, FSH）mRNA、黃體生成素（leuteinizing hormone, LH）mRNA的表達(dá)水平 采用定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)（reverse transcriptionpolymerase chain reaction, RTPCR）方法進(jìn)行檢測(cè)2。1.3.4 下丘腦生長(zhǎng)激素釋放激素（growth hormone releasing hormone, GHRH）mRNA、生長(zhǎng)抑素（somatostatin, SS）mRNA的表達(dá)水平 采用漂浮法原位雜交技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。1.3.5 腺垂體生長(zhǎng)激素（growth hormone, GH）mRNA、肝臟胰島素樣生長(zhǎng)因子（in

20、sulinlike growth factor, IGF）mRNA及長(zhǎng)骨干骺端IGF mRNA的表達(dá)水平 采用實(shí)時(shí)熒光定量RTPCR方法進(jìn)行檢測(cè)。1.3.6 下丘腦SS蛋白及腺垂體GH蛋白的表達(dá)水平 采用免疫組化法進(jìn)行檢測(cè)。1.4 神經(jīng)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法1.4.1 推挽灌流 用0.35% 戊巴比妥按10 ml/kg予以大鼠腹腔注射麻醉后，采用腦立體定位儀固定大鼠頭部，將推挽套管插至視前區(qū)（含視前內(nèi)側(cè)核）。在大鼠處于清醒狀態(tài)時(shí)予以灌流，用恒流泵推動(dòng)人工腦脊液，以50 l/min的速度注入視前區(qū), 穩(wěn)定30 min后開始收集灌流液，每10 min收集1管，連續(xù)收集2 h。灌流結(jié)束后，在灌流套管內(nèi)注入2

21、0 l繪圖墨水后取出全腦，10% 多聚甲醛固定1周后，切片觀察套管位置，定位準(zhǔn)確者其灌流液可用于樣品檢測(cè)。收集的樣品置于70 保存，備GnRH、NPY及氨基酸類遞質(zhì)的測(cè)定。1.4.2 組織勻漿 大鼠斷頭，迅速取出全腦，置于冰浴上，分離視前區(qū)。組織用冰酸性丙酮溶液抽提，2次超聲勻漿，4 離心5 000 r/min，10 min，合并上清液，真空抽干后置20 保存，稀釋后備GnRH的測(cè)定。1.4.3 腦片孵育 大鼠斷頭，迅速取出全腦，置于冰浴上，分離內(nèi)側(cè)基底下丘腦（含弓狀核及腹內(nèi)側(cè)核），垂直切成2片，迅速移入0.5 ml人工腦脊液（預(yù)先置于37 水浴中，并通以95% O2和5% CO2）中孵育。平

22、衡30 min后，更換新的人工腦脊液0.5 ml，再孵育30 min后，收集孵育液。收集的樣品置于70 保存，備氨基酸類遞質(zhì)的測(cè)定。1.4.4 免疫組化 大鼠在乙醚吸入麻醉下，開胸暴露心臟，從其左心尖向左心室插入11號(hào)注射針頭。先以溫生理鹽水200 ml快速?zèng)_凈組織內(nèi)血液，繼以冰凍的4%多聚甲醛磷酸緩沖液（pH 7.4）250300 ml予以灌注，取出大鼠全腦，先后移入20%蔗糖多聚甲醛液及30%蔗糖磷酸緩沖液中，待下沉后進(jìn)行冰凍切片，切成30 m厚的冠狀腦片，采用抗生物素蛋白生物素過氧化物酶復(fù)合物（avidinbiotinperoxidase complex, ABC）法進(jìn)行常規(guī)免疫組化染色

23、后，用Leica圖像分析處理系統(tǒng)測(cè)定陽(yáng)性物質(zhì)的積分光密度值。1.4.5 高效液相色譜熒光法 采用高效液相色譜熒光法檢測(cè)灌流液樣品中的興奮性氨基酸遞質(zhì)（Glu, Asp）及抑制性氨基酸遞質(zhì)（GABA）的含量，用Beckman公司的System gold軟件進(jìn)行梯度控制及色譜數(shù)據(jù)處理，以外標(biāo)法計(jì)算樣品濃度。1.4.6 GnRH、END及NPY的放射免疫法測(cè)定 上述收集的孵育液及灌流液樣品中的GnRH、END及NPY含量均按常規(guī)放射免疫法測(cè)定。1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS 11.0軟件予以統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料均數(shù)用x±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)及單因素方差分析。2 結(jié)果2

24、.1 滋陰瀉火中藥對(duì)下丘腦促性腺區(qū)神經(jīng)遞質(zhì)及END釋放的影響 滋陰瀉火中藥組下丘腦內(nèi)側(cè)視前區(qū)Asp及Glu的釋放量較正常對(duì)照組明顯減少，而GABA及END的釋放量則明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示滋陰瀉火中藥可使下丘腦內(nèi)側(cè)視前區(qū)興奮性氨基酸遞質(zhì)的釋放明顯減少，抑制性氨基酸遞質(zhì)及內(nèi)啡肽的釋放明顯增加。見表1。2.2 滋陰瀉火中藥及益腎填精中藥對(duì)下丘腦促性腺區(qū)NPY釋放及含量的影響 滋陰瀉火中藥組下丘腦NPY含量較正常對(duì)照組明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示滋陰瀉火中藥可促進(jìn)下丘腦NPY蛋白的表達(dá)；而益腎填精中藥組ARC及ME處NPY的含量較正常對(duì)照組則有明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示益腎填精中藥

25、可以抑制內(nèi)側(cè)基底下丘腦NPY蛋白的表達(dá)。見表2。2.3 滋陰瀉火中藥對(duì)下丘腦促性腺區(qū)GnRH釋放及含量的影響2.3.1 滋陰瀉火中藥對(duì)下丘腦視前區(qū)GnRH脈沖釋放方式的影響 檢測(cè)一系列按時(shí)間順序收集的灌流液樣品，可以反映下丘腦視前內(nèi)側(cè)核GnRH脈沖釋放的頻率與幅度。滋陰瀉火中藥組GnRH脈沖釋放的幅度比正常對(duì)照組明顯降低，其脈沖釋放頻率也明顯減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示滋陰瀉火中藥可以明顯抑制下丘腦視前內(nèi)側(cè)核GnRH的脈沖分泌。見表3。            作者：蔡德培，陳

26、伯英，張煒，李嬪【關(guān)鍵詞】,中藥摘目的：從神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)及基因表達(dá)的角度，探討調(diào)整性早熟         本篇論文是由3COME文檔頻道的網(wǎng)友為您在網(wǎng)絡(luò)上收集整理餅投稿至本站的，論文版權(quán)屬原作者，請(qǐng)不用于商業(yè)用途或者抄襲，僅供參考學(xué)習(xí)之用，否者后果自負(fù)，如果此文侵犯您的合法權(quán)益，請(qǐng)聯(lián)系我們。表1 滋陰瀉火中藥對(duì)下丘腦視前區(qū)氨基酸遞質(zhì)及END釋放的影響（略）Table 1 Effects of ZYXHR on releasing contents of aminoacid transmitters and END

27、in preoptic area of hypothalamus*P0.05, *P0.01, vs normal control group.表2 滋陰瀉火與益腎填精中藥對(duì)下丘腦NPY含量的影響（略）Table 2 Effects of ZYXHR and YSTJR on NPY contents in hypothalamus*P0.05, vs normal control group.表3 滋陰瀉火中藥對(duì)下丘腦視前區(qū)GnRH脈沖釋放方式的影響（略）Table 3 Effects of ZYXHR on impulse releasing of GnRH in preoptic are

28、a of hypothalamus*P0.05, *P0.01, vs normal control group.2.3.2 滋陰瀉火中藥及益腎填精中藥對(duì)下丘腦視前區(qū)組織勻漿GnRH含量的影響 益腎填精中藥組下丘腦視前區(qū)GnRH的含量較正常對(duì)照組明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示益腎填精中藥可以明顯增加下丘腦視前區(qū)GnRH的含量。見表4。表4 滋陰瀉火與益腎填精中藥對(duì)下丘腦視前區(qū)組織勻漿GnRH含量的影響（略）Table 4 Effects of ZYXHR and YSTJR on GnRH contents in homogenate of preoptic area of hypothal

29、amus*P0.05, vs normal control group.2.3.3 滋陰瀉火中藥對(duì)內(nèi)側(cè)基底下丘腦GnRH釋放的影響 孵育液中GnRH的含量，尤其是用KCl激活釋放后孵育液中GnRH的含量代表下丘腦ARC及腹內(nèi)側(cè)核GnRH的儲(chǔ)備狀況，可以反映該部位GnRH合成的水平。滋陰瀉火中藥組GnRH的激活釋放量較正常對(duì)照組明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示滋陰瀉火中藥可抑制下丘腦GnRH的合成。見表5。表5 滋陰瀉火中藥對(duì)內(nèi)側(cè)基底下丘腦GnRH釋放的影響（略）Table 5 Effects of ZYXHR on GnRH releasing in medial basal hypothal

30、amus*P0.05, vs normal control group.    2.3.4 滋陰瀉火中藥及益腎填精中藥對(duì)下丘腦GnRH含量的影響 滋陰瀉火中藥組下丘腦GnRH含量較正常對(duì)照組明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示滋陰瀉火中藥可以抑制下丘腦GnRH的蛋白表達(dá)；益腎填精中藥組下丘腦GnRH的含量較正常對(duì)照組則有明顯增加，提示益腎填精中藥可以促進(jìn)下丘腦GnRH的蛋白表達(dá)。見表6、圖1。2.4 滋陰瀉火中藥及益腎填精中藥對(duì)下丘腦GnRH，腺垂體FSH、LH基因表達(dá)的影響 滋陰瀉火中藥組GnRH、FSH及LH cDNA擴(kuò)增產(chǎn)物含量均較正常對(duì)照組明顯降低，

31、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示滋陰瀉火中藥可以下調(diào)下丘腦GnRH及腺垂體FSH、LH mRNA的表達(dá)水平；益腎填精中藥組GnRH、FSH及LH cDNA擴(kuò)增產(chǎn)物含量均較正常對(duì)照組明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示益腎填精中藥可以上調(diào)下丘腦GnRH及腺垂體FSH、LH mRNA的表達(dá)水平。見表7。表6 滋陰瀉火與益腎填精中藥對(duì)下丘腦GnRH含量的影響（略）Table 6 Effects of ZYXHR and YSTJR on GnRH contents in hypothalamus*P0.01, vs normal control group.圖1 滋陰瀉火與益腎填精中藥對(duì)下丘腦GnRH含量的影響（

32、略）Figure 1 Effects of ZYXHR and YSTJR on GnRH contents in hypothalamusA: Positive expression of GnRH in MPOA in normal control group (×100); B: Positive expression of GnRH in ARC in normal control group (×200); C: Positive expression of GnRH in ME in normal control group (×200); D: Po

33、sitive expression of GnRH in MPOA in ZYXHRtreated group (×100); E: Positive expression of GnRH in ARC in ZYXHRtreated group (×200); F: Positive expression of GnRH in ME in ZYXHRtreated group (×200); G: Positive expression of GnRH in MPOA in YSTJRtreated group (×100); H: Positive

34、expression of GnRH in ARC in YSTJRtreated group (×200); I: Positive expression of GnRH in ME in YSTJRtreated group (×200).表7 滋陰瀉火及益腎填精中藥對(duì)下丘腦GnRH和垂體FSH、LH基因表達(dá)的影響（略）Table 7 Effects of ZYXHR and YSTJR on expressions of GnRH gene in hypothalamus, and FSH and LH genes in hypophysis*P0.01, vs no

35、rmal control group.2.5 滋陰瀉火中藥及益腎填精中藥對(duì)下丘腦SS基因及蛋白表達(dá)的影響 滋陰瀉火中藥組下丘腦室周核SS mRNA及蛋白的陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)、單位面積陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)及陽(yáng)性細(xì)胞面積光密度明顯高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；益腎填精中藥組與之相反，其陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)、單位面積陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)及陽(yáng)性細(xì)胞面積光密度均明顯低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示滋陰瀉火中藥可以上調(diào)下丘腦室周核SS基因及蛋白的表達(dá)水平，而益腎填精中藥則可下調(diào)其表達(dá)水平。見表8、9和圖2、3。2.6 滋陰瀉火中藥及益腎填精中藥對(duì)下丘腦ARC GHRH基因表達(dá)的影響 滋陰瀉火中藥組及益腎填精中藥組ARC GH

36、RH mRNA陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)及陽(yáng)性細(xì)胞光密度與正常對(duì)照組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示滋陰瀉火中藥及益腎填精中藥對(duì)大鼠下丘腦ARC GHRH mRNA的表達(dá)無(wú)明顯影響。見表10、圖4。2.7 滋陰瀉火中藥及益腎填精中藥對(duì)腺垂體GH及肝臟、長(zhǎng)骨干骺端IGF基因表達(dá)的影響 滋陰瀉火中藥組腺垂體GH、肝臟及長(zhǎng)骨干骺端IGF cDNA復(fù)制數(shù)明顯低于正常對(duì)照組；益腎填精中藥組肝臟及長(zhǎng)骨干骺端IGF cDNA復(fù)制數(shù)則明顯高于正常對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示滋陰瀉火中藥可以明顯下調(diào)腺垂體GH、肝臟及長(zhǎng)骨干骺端軟骨細(xì)胞IGF基因的表達(dá)水平；而益腎填精中藥則明顯上調(diào)腺垂體GH、肝臟及長(zhǎng)骨干骺端軟骨細(xì)胞IGF基因的表

37、達(dá)水平。見表11。2.8 滋陰瀉火中藥及益腎填精中藥對(duì)腺垂體GH蛋白表達(dá)的影響 滋陰瀉火中藥組腺垂體GH單個(gè)細(xì)胞面積、每個(gè)視野陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及陽(yáng)性細(xì)胞面積均低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；益腎填精中藥組每個(gè)視野陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及陽(yáng)性細(xì)胞面積均明顯高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但單個(gè)細(xì)胞面積與正常對(duì)照組比較則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示滋陰瀉火中藥可以抑制腺垂體生長(zhǎng)激素細(xì)胞合成GH；而益腎填精中藥則促進(jìn)其合成GH。見表12、圖5。            作者：蔡德培，陳伯英，張煒，李嬪【關(guān)鍵

38、詞】,中藥摘目的：從神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)及基因表達(dá)的角度，探討調(diào)整性早熟         本篇論文是由3COME文檔頻道的網(wǎng)友為您在網(wǎng)絡(luò)上收集整理餅投稿至本站的，論文版權(quán)屬原作者，請(qǐng)不用于商業(yè)用途或者抄襲，僅供參考學(xué)習(xí)之用，否者后果自負(fù)，如果此文侵犯您的合法權(quán)益，請(qǐng)聯(lián)系我們。表8 滋陰瀉火與益腎填精中藥對(duì)下丘腦室周核SS mRNA表達(dá)水平的影響（略）Table 8 Effects of ZYXHR and YSTJR on expression level of SS mRNA in periventricular nu

39、cleus of hypothalamus*P0.05, vs normal control group.表9 滋陰瀉火與益腎填精中藥對(duì)下丘腦室周核SS蛋白表達(dá)水平的影響（略）Table 9 Effects of ZYXHR and YSTJR on expression level of SS protein in periventricular nucleus of hypothalamus*P0.05, vs normal control group.圖2 下丘腦室周核SS mRNA陽(yáng)性神經(jīng)元（略）Figure 2 Positive neurons of SS mRNA in periv

40、entricular nucleus of hypothalamus in three groupsA: Normal control group; B： ZYXHRtreated group; C: YSTJRtreated group.圖3 下丘腦室周核SS陽(yáng)性神經(jīng)元（略）Figure 3 Positive neurons of SS protein in periventricular nucleus of hypothalamus in three groupsA: Normal control group; B： ZYXHRtreated group; C: YSTJRtreated

41、 group.表10 滋陰瀉火與益腎填精中藥對(duì)下丘腦ARC GHRH mRNA表達(dá)水平的影響（略）Table 10 Effects of ZYXHR and YSTJR on expression level of GHRH mRNA in ARC of hypothalamus圖4 下丘腦ARC GHRH mRNA陽(yáng)性神經(jīng)元（略）Figure 4 Positive neurons of GHRH mRNA in ARC of hypothalamus in three groupsA: Normal control group： B; ZYXHRtreated group; C: YSTJR

42、treated group.表11 滋陰瀉火與益腎填精中藥對(duì)腺垂體GH cDNA及肝臟、長(zhǎng)骨干骺端IGF cDNA復(fù)制數(shù)的影響（略）Table 11 Effects of ZYXHR and YSTJR on gene copy number of GH cDNA in hypophysis and IGF cDNA in liver and metaphysis*P0.05, vs normal control group.表12 滋陰瀉火與益腎填精中藥對(duì)腺垂體GH細(xì)胞的影響（略）Table 12 Effects of ZYXHR and YSTJR on GH cells in adeno

43、hypophysis*P0.05, vs normal control group.圖5 腺垂體GH陽(yáng)性細(xì)胞（略）Figure 5 GHpositive cells in adenohypophysis in three groupsA: Normal control group; B： ZYXHRtreated group; C: YSTJRtreated group.3 討論內(nèi)側(cè)基底下丘腦（包括ARC和腹內(nèi)側(cè)核）是GnRH的緊張性分泌中心，維持GnRH分泌的基礎(chǔ)水平；下丘腦內(nèi)側(cè)視前區(qū)（視前內(nèi)側(cè)核）是GnRH的周期性分泌中心，其功能活動(dòng)與GnRH的周期性脈沖式分泌有關(guān)，是誘發(fā)排卵前LH峰的重

44、部位3,4。青春發(fā)育的顯著標(biāo)志不僅是下丘腦GnRH基礎(chǔ)分泌的增加，更重的是GnRH脈沖分泌的頻率和幅度增加5。女性在青春期的后期，當(dāng)血中雌二醇濃度升至一個(gè)臨界水平并持續(xù)一定時(shí)間后，會(huì)引起下丘腦GnRH的脈沖分泌突然劇增，導(dǎo)致腺垂體LH分泌劇增達(dá)到峰值，從而誘發(fā)卵巢排卵6。多種中樞神經(jīng)遞質(zhì)及神經(jīng)肽參與下丘腦GnRH合成與分泌的調(diào)節(jié)。興奮性氨基酸遞質(zhì)（Glu和Asp）可促進(jìn)GnRH的釋放，引起垂體LH分泌的增加，并參與雌性大鼠排卵前LH峰的形成7；抑制性氨基酸遞質(zhì)（GABA）則可抑制GnRH的釋放，GnRH神經(jīng)元受到GABA的緊張性抑制，在青春期開始前及垂體LH分泌峰值出現(xiàn)前，均可出現(xiàn)GABA水平

45、的下降8。END亦可明顯抑制GnRH的釋放。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，滋陰瀉火中藥可明顯抑制中樞興奮性氨基酸遞質(zhì)的釋放，促進(jìn)抑制性氨基酸遞質(zhì)、NPY及END的釋放，對(duì)下丘腦GnRH周期性及緊張性分泌中心均可產(chǎn)生顯著的抑制作用，使下丘腦GnRH神經(jīng)元的功能活動(dòng)明顯降低、GnRH的基因表達(dá)水平明顯下調(diào)、GnRH的合成及分泌明顯減少，從而抑制下丘腦垂體的促性腺機(jī)能。益腎填精中藥則可明顯抑制NPY的釋放，對(duì)下丘腦GnRH周期性及緊張性分泌中心均可產(chǎn)生明顯的促進(jìn)作用，使下丘腦GnRH神經(jīng)元功能活躍，上調(diào)GnRH基因的表達(dá)水平，促進(jìn)GnRH的合成及分泌，從而明顯增強(qiáng)下丘腦垂體的促性腺機(jī)能。青春期的長(zhǎng)骨線性生長(zhǎng)加速是

46、由于下丘腦垂體生長(zhǎng)軸及下丘腦垂體性腺軸功能活躍并協(xié)同調(diào)控的結(jié)果。垂體GH合成及分泌的顯著增加，通過血液循環(huán)分別作用于肝細(xì)胞及長(zhǎng)骨干骺端軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞上的GH受體，合成及釋放大量IGF。IGF作為細(xì)胞分裂原，可刺激長(zhǎng)骨干骺端軟骨細(xì)胞分裂增殖，同時(shí)IGF又具有自分泌及旁分泌作用，可促使局部IGF進(jìn)一步增加。GH可直接作用也可經(jīng)IGF介導(dǎo)，促進(jìn)軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞的分裂增殖，使膠原及硫酸黏多糖增多，并促進(jìn)骨基質(zhì)內(nèi)礦物質(zhì)的沉積，加速骨的形成，從而加速長(zhǎng)骨的線性生長(zhǎng)。GH的合成和釋放受下丘腦GHRH及SS的調(diào)控。GHRH神經(jīng)元位于下丘腦ARC及腹內(nèi)側(cè)核，其神經(jīng)纖維伸入ME，分泌的GHRH通過垂體門脈系

47、統(tǒng)，作用于垂體GH細(xì)胞，促進(jìn)GH的合成和分泌。SS神經(jīng)元在下丘腦內(nèi)分布廣泛，對(duì)骨骼生長(zhǎng)起調(diào)節(jié)作用的主是位于下丘腦室周核的SS神經(jīng)元，其軸突伸入ARC，抑制GHRH神經(jīng)元，從而抑制垂體GH的合成。此外，SS纖維亦伸入ME，分泌的SS經(jīng)垂體門脈系統(tǒng)作用于垂體GH細(xì)胞，抑制GH的釋放9,10。滋陰瀉火中藥可顯著上調(diào)下丘腦室周核SS基因及蛋白的表達(dá)水平，顯著下調(diào)腺垂體GH基因及蛋白的表達(dá)水平，使肝臟及長(zhǎng)骨干骺端軟骨細(xì)胞IGF基因的表達(dá)亦相應(yīng)下調(diào)，從而明顯抑制下丘腦垂體生長(zhǎng)軸的功能；益腎填精中藥則可顯著下調(diào)下丘腦室周核SS基因及蛋白的表達(dá)水平，顯著上調(diào)腺垂體GH基因及蛋白的表達(dá)水平，使肝臟及長(zhǎng)骨干骺端軟

48、骨細(xì)胞IGF基因的表達(dá)亦相應(yīng)上調(diào)，從而明顯促進(jìn)下丘腦垂體生長(zhǎng)軸的功能。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，滋陰瀉火中藥及益腎填精中藥可通過調(diào)整機(jī)體的神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)機(jī)制，調(diào)整下丘腦GnRH、SS，腺垂體FSH、LH、GH及長(zhǎng)骨干骺端IGF基因的轉(zhuǎn)錄，有效調(diào)節(jié)下丘腦垂體的促性腺機(jī)能及促生長(zhǎng)機(jī)能。這可能是滋陰瀉火中藥及益腎填精中藥可有效調(diào)整性早熟患兒青春發(fā)育進(jìn)程及改善骨骼發(fā)育的主作用機(jī)制。參考文獻(xiàn)1 Cai DP, Ji ZY, Chen BY, et al. Pathogenetic regularity of female precocious puberty and the mechanism of therap

49、y with TCM. Chin J Integr Med, 2001, 7(2): 132134.            作者：蔡德培，陳伯英，張煒，李嬪【關(guān)鍵詞】,中藥摘目的：從神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)及基因表達(dá)的角度，探討調(diào)整性早熟         本篇論文是由3COME文檔頻道的網(wǎng)友為您在網(wǎng)絡(luò)上收集整理餅投稿至本站的，論文版權(quán)屬原作者，請(qǐng)不用于商業(yè)用途或者抄襲，僅供參考學(xué)習(xí)之用，否者后果自負(fù)，如果此文侵犯您的合法權(quán)益，請(qǐng)