1、當(dāng)前位置：生物幫 實(shí)驗(yàn)技 巧 生物化學(xué)技術(shù) 正文創(chuàng)作：歐陽計(jì)時(shí)間：2021.02. 11蛋白酶及蛋白酶抑制劑大全日期：2012-06-13 來源：互聯(lián)網(wǎng)標(biāo)簽：相關(guān)專題：解析蛋白酶活性測定聚焦蛋白酶研究新進(jìn)展摘要：破碎細(xì)胞提取蛋白質(zhì)的同時(shí)可釋放岀蛋白酶，這些蛋 白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白質(zhì)不被降解。在蛋白質(zhì)提 取過程中，需要加入蛋白酶抑制劑以防止蛋白水解。以下列 舉了 5種常用的蛋白酶抑制劑和他們各自的作用特點(diǎn)，因?yàn)?各種蛋白酶對(duì)不同蛋白質(zhì)的敏感性各不相同，因此需要調(diào)整 各種蛋白酶的濃度恩必美生物新一輪2-5折生物試劑大促銷！ Ibidi細(xì)胞灌流培 養(yǎng)系統(tǒng)模擬血管血液流動(dòng)狀態(tài)下的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)

2、廣州賽誠 生物基因表達(dá)調(diào)控專題蛋白酶抑制劑破碎細(xì)胞提取蛋白質(zhì)的同時(shí)可釋放出蛋白酶，這些蛋白 酶需要迅速的被抑制以保持蛋白質(zhì)不被降解。在蛋白質(zhì)提取 過程中，需要加入蛋白酶抑制劑以防止蛋白水解。以下列舉 了 5種常用的蛋白酶抑制劑和他們各自的作用特點(diǎn)，因?yàn)楦?種蛋白酶對(duì)不同蛋白質(zhì)的敏感性各不相同，因此需要調(diào)整各 種蛋白酶的濃度。由于蛋白酶抑制劑在液體中的溶解度極 低，尤其應(yīng)注意在緩沖液中加人蛋白酶抑制劑時(shí)應(yīng)充分混勻 以減少蛋白酶抑制劑的沉淀。在寶靈曼公司的目錄上可查到 更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制劑表。常用抑制劑PMSF2）抑制絲氨酸蛋白酶（如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血 酶）和疏基蛋S酶（如木瓜蛋

3、白酶）；2）10mg/ml溶于異丙醇中；3）在室溫下可保存一年；4）工作濃度:17：174ug/nil（0.：l20mmol/L）;5）在水液體溶液中不穩(wěn)定，必須在每一分離和純化步驟中 加入新鮮的PMSFoEDTA2）抑制金屬蛋白水解酶；2）0.5mol/L 水溶液，pH89;3) 溶液在4C穩(wěn)定六個(gè)月以上；4) 工作濃度:0.51.5mmol/L. (0.20.5mg/ml);5) 加入NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值，否則EDTA不溶解。胃蛋白酶抑制劑(pepstantin)1) 抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血管緊張肽原酶，組織蛋 白酶D和凝乳酶；2) lmg/ml溶于甲醇中；3儲(chǔ)存液在4工一周內(nèi)穩(wěn)

4、定，20工穩(wěn)定6個(gè)月；4) 1 作濃度:07u g/ml(lumol/L)5) 在水中不溶解。亮抑蛋白酶肽(leupeptin)1) 抑制絲氨酸和毓基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血漿酶和組 織蛋白酶B;2) IOmg/ml 溶于水；3) 儲(chǔ)存液4C穩(wěn)定一周，20C穩(wěn)定6個(gè)月；4) 工作濃度0.5mg/mlo胰蛋白酶抑制劑(aprotinin)2)抑制絲氨酸蛋白酶，如血漿酶，血管舒緩素，胰蛋白酶 和胰凝乳蛋白酶；2)IOmg/ml 溶于水,pH783儲(chǔ)存液4C穩(wěn)定一周，20C穩(wěn)定6個(gè)月；4) 工作濃度:0.062.0ug/ml(0.010.3umol/L);5) 避免反復(fù)凍融：6) 在pH12.8時(shí)失

5、活。蛋白酶抑制劑混合使用35ug/ml PMSF絲氨酸蛋白酶抑制劑0.3mg/ml EDTA金屬蛋白酶抑制劑07ug/ml胃蛋白酶抑制劑(Pepstatin)酸性蛋白酶抑制劑0.5ug/ml亮抑蛋白肽酶(Leupeptin)廣譜蛋白酶抑制劑常用蛋白酶抑制劑表抑制劑靶蛋白酶有效濃度儲(chǔ)藏溶液注解An 廿 pain木瓜酶和胰酶50jig/mllmg/ml水溶液對(duì)胰凝蛋白酶，胃 液素，纖溶酶無影響APMSF胰蛋白酶樣幺攵氨酸蛋白酶10-40pg/ml 或10-20pM100mmol/L水溶液毒性比PMSF低，不 能抑制胰凝蛋白酶 或乙酰膽堿酯酶抑肽酶絲氨酸蛋白酶0.06-2ng/ml10mg/mlPB

6、S 溶液避免反復(fù)動(dòng)凍融抑氨肽酶B氨基肽酶40jig/ml溶于甲醇不能抑制竣肽酶Calpain抑制劑I、nCalpain (鈣依賴性 半胱氨酸蛋白酶)1:17|ig/mln：7pg/ml溶于乙醇可滲透薄膜抑糜阮酶素胰凝乳蛋白酶6-60ng/ml溶于DMSOB.M.綜合酶片線氨酸，半胱氨酸 和金屬蛋白酶每10-50ml細(xì)胞提 取液內(nèi)加一片不含EDTAEDTA金屬蛋白酶0.2-0.5mg/ml 或0.5-1.3pmol/L500mmol/L水溶液 pH=8.0抑蛋白酶醛肽線氨酸蛋白酶，疣 基蛋白酶0.5-2ng/ml10mg/ml水溶液a2-巨球蛋白廣譜lU/ml100 U/ml PBS 溶液避免接

7、觸還原劑Pefabloc SC(boe- hringer Mannheim)線氨酸蛋白酶0.1-1.0mg/ml 或0.4-4mmol/LlOOmM水溶液無毒，在中性pH下 較PMSF穩(wěn)泄胃蛋白酶抑制劑酸性蛋白酶0.7ng/mllmg/ml甲醇溶液PMSF絲氨酸蛋白酶17-170pg/ml10mg/ml異丙醇溶液每一操作步驟時(shí)新 鮮加入TLCK胰蛋白酶37-50pg/mllmg/ml溶于 50mMmol/L醋酸鹽 溶液,pH=5.0對(duì)胰凝蛋白酶無影響TPCK胰凝乳蛋白酶70-100pg/ml3mg/ml乙醇溶液對(duì)胰蛋白酶無影響作者：青嵐點(diǎn)擊：次 來源于生物秀知道首頁實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)中心常用蛋白酶抑制劑

8、(protease inhibitor)和磷酸酶抑制劑的貯存與工作液濃度常用蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)和磷酸酶抑制劑的貯存與工作液濃度2014-06-09 23:01:02來源:瀏覽次數(shù)：口9網(wǎng)友評(píng)論0條 常用蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)和磷酸酶抑制劑的貯 存與工作液濃度在與蛋白相關(guān)的檢測中，首先最關(guān)鍵的一 步便是蛋白質(zhì)的提取。蛋白質(zhì)的提取過程中，我們要經(jīng)常加 和蛋白酶抑制/flj(protease inhibitor)以防止蛋白質(zhì)的降解。另 外在磷酸化蛋白的研究過程中，磷酸酶抑制劑也是必不可少 的，本文總結(jié)了常用的蛋白酶抑制劑 (protea

9、se inhibitor)PMSF, Leupeptin 亮肽素，Aprotinin 扌卬肽 酶，Pepstatin胃蛋白酶抑制劑(proteas 蛋白酶抑制劑分子 量溶解性磷酸酶抑制劑工作濃度貯存液胰蛋白酶絲氨酸 在與蛋白相關(guān)的檢測中，首先最關(guān)鍵的一步便是蛋白質(zhì)的提 取。蛋白質(zhì)的提取過程中，我們要經(jīng)常加和蛋白酶抑制劑(p otease inhibitor)以防止蛋白質(zhì)的降解。另外在磷酸化蛋白的 研究過程中，磷酸酶抑制劑也是必不可少的，本文總結(jié)了常 用的蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)PMSF, Leupeptin 亮肽 素，Aprotinin抑肽酶，Pepstatin胃蛋

10、白酶抑制劑(protease i nhibitor), EDTA-Na2等以及磷酸酶抑制劑NaF氟化鈉，Na3V 04 原磯酸鈉，BETA-glycerophosphate 甘油磷酸鈉，Na2P2O 4焦磷酸鈉等。對(duì)這些蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)的溶 解配制，貯存液與工作液濃度，保存都做了詳細(xì)的說明。蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)PMSF：特性:絲氨酸蛋白酶抑制/flj(protease inhibitor),如胰凝乳蛋 白酶，胰蛋白酶和凝血酶，也抑制半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋 白酶(可逆的地面處理)。溶解性：溶于異丙醇，乙醇，甲醇和丙二醇果10mg

11、/mlo在 水溶液中不穩(wěn)定。在100%異丙醇，+25C時(shí)穩(wěn)定至少9個(gè) 月分子量：174.2使用：貯存濃度：200mM,工作濃度：ImMLeupeptin亮肽素特性：抑制絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶，木瓜蛋白 酶，纖溶酶，和組織蛋白酶B溶解性：高度溶于水(lmg/ml)o 4C一周穩(wěn)定，分成小份冷 凍在20C至少6個(gè)月分子量：C20H38N6O4 x 2/2 H2SO4:4756C20H38N6O4 x 2/2 H2SO4 x H2O:4936使用：貯存濃度：lmg/ml,工作濃度0.5 ug/ml (ImM)Aprotinin抑肽酶特性：絲氨酸蛋白酶抑制劑(protease inhibit

12、or),抑制纖維蛋 白溶酶，激肽釋放酶，胰蛋白酶，糜蛋白酶的高活性。不抑 制凝血酶或因子X。溶解性：易溶于水(10mg/ml)或緩沖液(例如,tris, 0.1M, pH8.0)o pH約78的溶液在4C可保存1周，分裝保存在2 0C可至少保存6個(gè)月。避免反復(fù)凍融，pH12.8的堿性環(huán)境 可使其滅活。分子量：6,512使用：貯存濃度:lmg/ml,匸作濃度：0.06-2.0 ug/ml(0.01-0.3 uM)Pepstatin Vj 蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)特性：抑制天冬氨酸(酸)蛋白酶如胃蛋白酶，腎素，組織 蛋白酶D,凝乳酶，許多微生物酸性蛋白酶溶解性：溶于甲醇

13、約lmg/ml；可溶于乙醇，過夜溶解可達(dá) 到1 mg/ml；在6當(dāng)量乙酸中溶解度為300ug/mlo 4C穩(wěn)定 一周，分裝儲(chǔ)存于20C時(shí)可保存1個(gè)月分子量：685.9使用：貯存濃度：lmg/ml,使用濃度：0.7 ng/ml(l M)EDTA-Na2特性：金屬蛋白酶抑制protease inhibitor)溶解性：溶于水至0.5M,在pH89的條件下，4C穩(wěn)定至少 6個(gè)月分子量:372.24使用：工作濃度:0.2-0.5 mg/ml(0.5-1.3 mM),不需現(xiàn)用現(xiàn)配，在溶液pH值調(diào)至89時(shí)再加入。磷酸酶抑制劑NaF氟化鈉溶解性：溶于水分子量：41.99使用：貯存液：5M工作濃度：10-20mMNa3VO4原磯酸鈉分子量：183.91溶解性：溶于水，我們購買過來的是原磯酸鈉原磯酸鈉需要 經(jīng)過處理以后才能成為激活的磯酸鈉,激活的磯酸鈉才具有 抑制去磷酸化的作用原磯酸鈉變成激活的磯酸鈉的過程是: 100mM原磯酸鈉激活儲(chǔ)存液配制(1) 取0.183克的原磯酸鈉溶解于10ml的雙蒸水中，加酸調(diào)節(jié)PH至10(顏色變黃)(2) 煮至無色(3) 室溫冷卻(4) 重調(diào)PH至10重復(fù)(1 ) ( 2 ) ( 3 ) ( 4 )直至溶液保持無色，并且P H穩(wěn)定于20,分裝lOOul/管，