1、維生素C各種劑型的鑒別與含量測定方法研究單華(2010102227)（大理學院藥學與化學學院 云南大理下關 671000）摘要 目前研究維生素C各種劑型的鑒別與測定方法的報道較多，如硝酸銀反應、二氯靛酚鈉反應、薄層色譜法等鑒別方法。如滴定法、光度分析法、高效液相色譜法等測定方法。各種方法各有特點，本文通過2010版中國藥典維生素C各種劑型的鑒別與含量測定方法和其他鑒別和含量測定的查詢，對維生素C各種劑型鑒別和含量測定方法進行了綜述。關鍵字 維生素C片劑、注射液、顆粒；鑒別；含量測定Vitamin C research various dosage forms of identification

2、 and content determination methodShanhua(2010102227)(yunnan Dali Dali college school of medicine and chemical shimonoseki 671000)Abstract The present study of determination method of vitamin C in the identification of various dosage forms and reports, such as silver nitrate, second indophenol sodium

3、 chloride reaction, such as thin layer chromatography (TLC) identification method. Such as titration, photometric analysis, measurement methods, such as high performance liquid chromatography (HPLC) method. All sorts of methods have different characteristics, this paper through the 2010 edition of p

4、harmacopoeia of the People's Republic of China or less vitamin C or higher in various dosage forms of identification and content determination method queries, regarding the determination methods of vitamin C are reviewed.Key words Vitamin C tablets, injection and granule; Identification; Content

5、 determination引言維生素C是可溶于水的無色結(jié)晶，是一種分子結(jié)構最簡單的維生素。維生素C有防治壞血病的功能。維生素C能保持巰基酶的活性和谷胱甘肽的還原狀態(tài)，起解毒作用，同時還制成各種劑型；維生素C注射液為無色至微黃色的澄明液體。維生素C泡騰顆粒為淡黃色顆粒;氣芳香，味酸甜。維生素C片為白色至略帶淡黃色片。維生素C泡騰片為白色或著色片， 片面可有散在的著色小點。準確鑒別和測定維生素C的含量，對飲食健康、醫(yī)療保健都具有十分重要的意義。如今的鑒別和測定方法主要有硝酸銀反應、薄層色譜、滴定法、光度法、高效液相色譜法等。1維生素C各種劑型的藥典上常用的鑒別和含量測定1.1共性鑒別1.1.1

6、薄層色譜法 1.1.1.1 維生素C泡騰顆粒：取本品細粉適量（約相當于維生素C 0. 2g),加水10ml使維生素C溶解，濾過，濾液照維生素C鑒別（1)項試驗，顯相同的反應。( 2 ) 取本品細粉適量（ 約相當于維生素C lOmg)，加水10ml，振搖使維生素C溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液；另取維生素C 對照品， 加水溶解并稀釋制成l m l 中約含l m g 的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2fxl，分別點于同一珪膠GF2 5 <薄層板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（5 4 1 )為展開劑，展開，晾干，立即（1小時內(nèi)）置紫外光燈（254nm)下檢視。供試品溶液

7、所顯主斑點的位置和顏色應與對照品溶液的主斑點相同。.2 維生素C注射液：取本品， 用水稀釋制成l m l 中含維生素ClOmg的溶液，取4ml，加0. lmol/L的鹽酸溶液4ml，混勻，加0. 0 5 %亞甲藍乙醇溶液4滴，置4 0 ° C水浴中加熱，3分鐘內(nèi)溶液應由深藍色變?yōu)闇\藍色或完全褪色。( 2 ) 取本品， 用水稀釋制成l m l 中含維生素C l m g 的溶液，作為供試品溶液；另取維生素C對照品，加水溶解并稀釋制成l m l 中約含l m g 的溶液， 作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄V B )試驗，吸取上述兩種溶液各2jJ，分別點于同一硅膠GF2 5 4薄層板上，以

8、乙酸乙酯-乙醇-水（5 4 1 )為展開劑，展開，晾干，立即（1小時內(nèi)）置紫外光燈（254nm)下檢視。供試品溶液所顯主斑點的位置和顏色應與對照品溶液的主斑點相同。.3 維生素c泡騰片：取本品細粉適量（約相當于維生素C 0. 5g)加無水乙醇25ml，振搖約5分鐘使維生素C溶解，濾過，濾液照維生素C鑒別（1)項試驗，顯相同的反應。( 2 ) 取本品細粉適量（ 約相當于維生素C lOmg)，加水10ml，振搖使維生素C溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液；另取維生素C 對照品， 加水溶解并稀釋制成l m l 中約含l m g 的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄V B)試驗，吸取上述兩種溶液各

9、2 y l ，分別點于同一硅膠GF2 5 <薄層板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（5 4 1 )為展開劑，展開，晾干，立即（1小時內(nèi)）置紫外光燈（254nm)下檢視。供試品溶液所顯主斑點的位置和顏色應與對照品溶液的主斑點相同。.4 維生素c 片：取本品細粉適量（約相當于維生素C 0. 2g)加水10ml，振搖使維生素C溶解，濾過，濾液照維生素C鑒別(1)項試驗，顯相同的反應。( 2 ) 取本品細粉適量（ 約相當于維生索C lOmg)，加水10ml,振搖使維生素C溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液；另取維生素C 對照品， 加水溶解并稀釋制成l m l 中約含l m g 的溶液，作為對照品溶液。照薄

10、層色譜法（附錄V B)試驗，吸取上述兩種溶液各2fxl ，分別點于同一硅膠0&5 <薄層板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（5 4 1)為展開劑，展開，晾干，立即（1小時內(nèi)）置紫外光燈（254nm)下檢視。供試品溶液所顯主斑點的位置和顏色應與對照品溶液的主斑點相同。.5 維生素C：取本品細粉適量（約相當于維生素C總量10mg)，加 水10ml，振搖使維生素C與維生素C鈉溶解，濾過，取濾液作 為供試品溶液；另取維生素C對照品，加水溶解并稀釋制成每 lml中約含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附 錄V B)試驗，吸取上述兩種溶液各21，分別點于同一硅膠 GF?,薄層板上，以乙酸乙

11、酯-乙醇-水（5 ： 4 ： 1)為展開劑，展 開，晾干，立即（1小時內(nèi)）置紫外光燈下檢視。供試品溶液所 顯主斑點的位置和顏色應與對照品溶液的主斑點相同。1.1.2硝酸銀反應(維生素C注射液除外)：.1 維生素C:取本品細粉適量（約相當于維生素C總量 0. 2g),加水10ml,振搖使維生素C與維生素C鈉溶解，濾過， 取濾液5ml,加硝酸銀試液0. 5ml,即生成銀的黑色沉淀。.2 維生素c顆粒:取本品4 g , 加水10m l 溶解后， 照維生素C鑒別（1)項試驗，顯相同的反應。.3 維生素c泡騰顆粒：取本品細粉適量（約相當于維生素C 0. 2g),加水10ml使維生素C溶解，濾過，濾液照維

12、生素C鑒別（1)項試驗，顯相同的反應。.4.維生素c泡騰片：取本品細粉適量（約相當于維生素C 0. 5g)加無水乙醇25ml，振搖約5分鐘使維生素C溶解，濾過，濾液照維生素C鑒別（1)項試驗，顯相同的反應。1.2共性含量測定碘量法 .1維生素C：取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適 量（約相當于維生素C總量0. 3g),置100ml量瓶中，加新沸 過的冷水100ml與稀醋酸10ml的混合液適量，振搖使維生素 C與維生素C鈉溶解并稀釋至刻度，搖勻，迅速濾過，精密量 取續(xù)濾液5 0 m l ， 加淀粉指示液l m l , 立即用碘滴定液 (0.05mol/L)滴定， 至溶液顯藍色并持續(xù)30秒鐘

13、不褪。每 lml 碘滴定液（0. 05mol/L)相當于 8. 806mg 的C6H8O6.2 維生素c顆粒: 取裝量差異項下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量（ 約相當于維生素C 0. 2 g ) ， 加新沸過的冷水1 0 0 m l與稀醋酸1 0 m l使溶解，加淀粉指示液l m l，立即用碘滴定液（O . 0 5 m o l / L )滴定，至溶液顯藍色并在3 0秒鐘內(nèi)不褪。每l ml 碘滴定液（ 0 .0 5 m o l / L ) 相當于8 . 806mg的 C6H8O6 .3 維生素c泡騰顆粒：取裝量差異項下的內(nèi)容物， 混合均勻，精密稱取適量（ 約相當于維生素C O . 2g)，加新

14、沸過的冷水1 0 0 m l 與稀醋酸1 0 m l 使維生素C 溶解， 加淀粉指示液l m l ，立即用碘滴定液（0. 0 5 m o l / L )滴定，至溶液顯藍色并持續(xù)3 0 秒鐘不褪。每l m l 碘滴定液（ 0 . 0 5 m o l / L )相當于8 . 8 0 6 m g 的 C6H8O6.4 維生素c泡騰片：本品10片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于維生素C 0. 2g)，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸1 0 m l 使維生素C 溶解， 加淀粉指示液l m l ，立即用碘滴定液（0. 0 5 m o l / L )滴定，至溶液顯藍色并持續(xù)3 0秒鐘不褪。每lml碘

15、滴定液（0. 05mol/L)相當于8. 8 0 6 m g 的 C6H8O6.5 維生素C注射液：精密量取本品適量（ 約相當于維生素C0 . 2 g )，加水1 5 m l與丙酮2 m l ，搖勻，放置5分鐘，加稀醋酸4ml與淀粉指示液lml，用碘滴定液（0. 05mol/L)滴定，至溶液顯藍色并持續(xù)3 0秒鐘不褪。每l m l碘滴定液（0 . 05mol/L)相當于8. 8 0 6 m g 的 C6H8O6 。1.2.2高效液相色譜法.1HYPERSILC8色譜柱法：采用HYPERSILC 8色譜柱，用01低濃度的草酸作流動相，陳昌云等采用005 molL磷酸二氫鉀緩沖液：甲醇=80：20

16、 (vv)作流動相。流速為10mLmin，二極管陣列檢測器，檢測波長為254 nm。.2 VenusilXBPC18柱法：系統(tǒng)采用VenusilXBPC18柱(46x250 mm，5g)，用02的偏磷酸的水溶液作為流動相，流速1 mlmin，檢測波長240 nm；維生素C濃度在01-10 mgmL范圍內(nèi)有良好的線性關系。該方法回收率9989，標準偏差091，操作簡便、靈敏、可靠 。2維生素C各種劑型的鑒別與測定的其他方法2.1鑒別方法 2.1.1 與二氯靛酚鈉反應：染料2，6-二氯靛酚，該染料在酸性中呈紅色，在堿性介質(zhì)中為藍色，與維生素C作用后生成無色的酚亞胺。取相當于維生素C 0.2克，加水

17、10ml溶解。取該溶液5ml，加二氯靛酚鈉試液12滴，試液的顏色即消失。2.1.2 與氧化劑反應： 維生素C可被亞甲藍、高錳酸鉀、堿性酒石酸銅等氧化劑氧化為去氫抗壞血酸，同時抗壞血酸克可使其試劑褪色，產(chǎn)生沉淀或呈現(xiàn)顏色。如維生素C注射液鑒別取本品， 用水稀釋制成l m l 中含維生素ClOmg的溶液，取4ml，加0. lmol/L的鹽酸溶液4ml，混勻，加0. 0 5 %亞甲藍乙醇溶液4滴，置4 0 ° C水浴中加熱，3分鐘內(nèi)溶液應由深藍色變?yōu)闇\藍色或完全褪色。2.1.3 糖類反應：在三氯醋酸或鹽，酸存在下水解、脫羧、生成戊糖，再失水轉(zhuǎn)化成糠醛，加入吡咯，加熱至50產(chǎn)生藍色。2.1.

18、4 紫外光譜法；在243 nm波長下有唯一的最大吸收，可用此特征進行鑒別。2.2 含量測定2.2.1 2,6-二氯酚靛酚滴定法：取本品適量（約相當于Vc50mg），用適量水溶解，置100ml量瓶中，加偏磷酸-醋酸試液20ml,再用水稀釋置刻度，搖勻；精密量取稀釋液適量（約相當于Vc2mg）置50ml的錐形瓶中,加偏磷酸-醋酸試液5ml,用2,6-二氯靛酚滴定液滴定,至溶液顯玫瑰紅色,并持續(xù)5s不褪；空白試驗：取偏磷酸-醋酸試液5.5ml，加水15ml，用2，6-二氯靛酚滴定液滴定。2.2.2 電位滴定法：隨著滴定劑的加入，由于發(fā)生化學反應，待測離子濃度將不斷變化；從而指示電極電位發(fā)生相應變化；

19、導致電池電動勢發(fā)生相應變化；計量點附近離子濃度發(fā)生突變；引起電位的突變，因此由測量工作電池電動勢的變化就能確定終點。2.2.3 分光光度法（1）2，4一二硝基苯肼分光光度法：脫氫抗壞血酸，二酮古洛糖酸均能和2，4二硝基苯肼生成可溶于硫酸的脎在500nm波長有最大吸收。（2）鉬藍比色法：逯家輝等提出了一種測定維生素C的新方法，它是基于Folin B試劑與抗壞血酸在pH=3的三氯乙酸酸性介質(zhì)中反應生成脫氫抗壞血酸，反應產(chǎn)物在910 nm波長處有最大吸光度進行定量分析。2.2.4 差示旋光法 維生素C片在不同PH值的溶液中旋光度有顯著差異，而片劑輔料旋光度保持不變，差示旋光法消除輔料的影響，直接測出

20、該制劑的含量。薄層掃描法 維生素C具有 較強還原性，可使藍色染料2，6-二氯靛酚鈉定量地還原成無色的酚亞胺，而本身被氧化成去氫抗壞血酸，利用此特征進行薄層掃描法測定含量。如取維生素 C片10片，研細，精密稱取平均片重一片的粉末，放入100ml容量瓶中，加入緩沖液至刻度，振搖，使維生 素 C溶解，放置、澄清，用吸液管取3ml 移至10ml容量瓶中，用緩沖液稀釋至刻度。用 5 ml定量毛細管點樣品溶液與不同濃度的標準液于同一試紙上 ，然后掃描 測定峰面積，由工作曲線法計算維生素C片中的維生素C含量。結(jié)語維生素C各種劑型的鑒別與測定方法很多，各種方法各有特點，常用的鑒別方法有薄層色譜法。常用的碘滴定法方法簡單，但在滴定有色物質(zhì)終點不易判斷；分光光度法操作費時，高效液相色譜法是目前發(fā)展較快的一種方法，方法靈敏，選擇性好，有較好的發(fā)展前景。毛細管電泳n51是近幾年新興的分析方法，具有效率高、分析時間短、樣品處理簡單等特點，但有待于進一步完善。 參考文獻：12010版中華人民共和國藥典；2王元秀，莊海燕微量滴定法測定獼猴桃中維生素C的含量J1濟南大學學報(自然科學版，2001，15(4)：374，3張穎，等不同產(chǎn)地枸杞子中維生素C含量測定J中國醫(yī)院藥學雜志，2004，24(8)