1、手把手教你做出仿制藥四條溶出曲線原創(chuàng)2021-03-09書立讀完本文大約需要8分鐘2021年3月5日,國(guó)務(wù)院辦公廳印發(fā)了?關(guān)于開展仿制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)的意見?,仿制藥一致性評(píng)價(jià)工作正式展開.仿制藥一致性評(píng)價(jià)工作中,首先需要評(píng)價(jià)的是仿制制劑與參比制劑在體外溶出曲線要一致.然而,將仿制制劑與參比制劑做到體外四條溶出曲線一致,并不是一件容易的工作.作者將平日的工作經(jīng)驗(yàn)總結(jié)出來,欲與大家交流分享.開始前的準(zhǔn)備將BCS再次分類生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)BCSbiopharmaceuticsclassificationsystem是1995年由Amidon提出的基于藥物溶解性質(zhì)和滲透性差異的分類系統(tǒng),分為四

2、類.對(duì)于體外四條溶出曲線而言,溶解性性質(zhì)比滲透性更實(shí)用,因此根據(jù)溶解性質(zhì)的差異將BCS再次分類,分為A類I和田和B類II和IV.之所以這樣二次分類,是由于I和田、II和IV分別在體外呈現(xiàn)出相同的溶解度性質(zhì).將化合物根據(jù)pH-溶解度差異來分類?仿制藥質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)口服固體制劑溶出曲線測(cè)定與比擬指導(dǎo)原那么?中提出,在進(jìn)行溶出度實(shí)驗(yàn)之前,建議繪制化合物pH-溶解度圖.那么根據(jù)pH-溶解度的差異性,也可以將化合物分為兩類：一類是溶解度不存在pH依賴性或差異性.暫且將飽和溶解度無pH依賴性的原料藥分為a類.另一類是溶解度存在pH依賴性或差異性,其飽和溶解度隨pH值增加而增加,或隨pH值增加而降低.將這類

3、化合物分為b類,比方NAISD類的布洛芬、雙氯芬酸鈉等.這樣分類如何應(yīng)用呢舉個(gè)例子.如表1所示,雙氯芬酸鈉在不同介質(zhì)中的飽和溶解度差異性較大,再結(jié)合根據(jù)上述BCS的二次分類,那么可將雙氯芬酸鈉可定義為Bb類化合物.之所以這樣區(qū)分,是為了建立自我工作模型,以后在工作遇到相同的化合物,直接進(jìn)行套用,從而降低工作量.如何快速有效地做出四條溶出曲線根據(jù)化合物性質(zhì)不同,其溶出曲線難易程度也是各有差異.一Aa類一首先,最簡(jiǎn)單的化合物模型屬于Aa類,即高溶解性無pH依賴性藥物.如果Aa類藥物的參比制劑RLD呈現(xiàn)出四條溶出曲線如圖1,那么在處方篩選工作中可選擇任意一種介質(zhì)作為區(qū)分介質(zhì).當(dāng)然,如果是速釋制劑,建

4、議選擇低pH介質(zhì),如pH1.0或pH1.2,由于其更好的能更好的模擬體內(nèi)溶出環(huán)境.如果參比制劑的四條溶出曲線不一致,即呈現(xiàn)出pH依賴性如圖2,這說明參比制劑中存在一種或幾種pH依賴性輔料,而自制處方和參比處方的輔料用量不一致.如圖2和圖3例如中,在pH1.0介質(zhì)中,仿制制劑與參比制劑的f2值為80;然而在pH6.8和水中,f2值為35和23.之所以差異較大,原因在于參比制劑中pH依賴型輔料的用量,遠(yuǎn)大于參比制劑的用量.這種情況需要將這些輔料用量調(diào)至跟參比一致或接近.常見存在pH依賴性的輔料有海藻酸鈉、卡波姆、尤特奇EPO等等.一Ab類一對(duì)于Ab類化合物,具參比制劑的溶出或釋放曲線呈現(xiàn)出pH依賴

5、性一般是由于化合物的pH-溶解度性質(zhì).如果參比制劑的四條曲線呈現(xiàn)出一致,那可能是由于輔料抵消了原料藥的pH-溶解度性質(zhì).對(duì)于A類化合物,尤其是BCS3類化合物,除了在較高轉(zhuǎn)速下考察溶出度或釋放度,建議也要比照不同轉(zhuǎn)速的溶出度差異,由于原料藥的高溶解度可能掩蓋制劑工藝過程中參數(shù)的不一致或者崩解劑用量的差異.總體而言,A類化合物相比照擬容易調(diào)整至四條曲線與參比制劑一致.B類一根據(jù)BCS定義,BCSn和IV類原料藥在pH1.07.4中,最高劑量不能溶于250ml的介質(zhì)中.由于溶解度較低這一特質(zhì),溶出度釋放也會(huì)偏慢,會(huì)造成處方或制備工藝細(xì)節(jié)在溶出曲線中被放大,因而增加了體外四條溶出曲線一致性的難度.除

6、了共性的問題,對(duì)于B類原料藥,做溶出曲線時(shí)還可能存在個(gè)性問題：每一條溶出曲線都比RLD快通過處方篩選,優(yōu)化崩解劑用量0%規(guī)用量、親水性/疏水性輔料比例、原料藥粒徑增大粒徑后,每一種介質(zhì)中仿制制劑的溶出仍然比參比制劑快.這種現(xiàn)象說明影響參比制劑的溶出行為的關(guān)鍵因素不是處方因素,而是制備工藝參數(shù).如果制粒時(shí)間過短,那么制得的顆粒就會(huì)比擬疏松、孔隙率比擬大.對(duì)于易溶解的A類化合物來說,溶解后可以形成新的孔道,有利于整體藥物的溶出.但對(duì)于B類化合物來說,由于低溶解性,其對(duì)工藝參數(shù)會(huì)更為敏感.如果制粒時(shí)間過長(zhǎng),也會(huì)存在問題.我在之前工作中,就碰到過兩個(gè)BCSn類化合物過度制粒的例子.一個(gè)例子是,先在處方

7、篩選時(shí)采用手工制粒,此后在放大處方時(shí)采用625所的濕法制粒機(jī)進(jìn)行制粒.結(jié)果是,小試處方跟參比制劑一致,但放大時(shí)仿制制劑在四種介質(zhì)中均比參比制劑溶出度慢如圖4o另一個(gè)例子是這樣的：處方篩選時(shí),無論如何仿制制劑的溶出度均比參比制劑快,而采用濕法制粒機(jī)制粒后,只有在固定參數(shù)、固定時(shí)間1525min下,溶出曲線才一致如圖40以上兩個(gè)例子中的溶出曲線不一致,均是由于存在制粒參數(shù)引起的,也就是說,制粒是關(guān)鍵參數(shù).遇到類似情況,建議采用DOE的實(shí)驗(yàn)方案,設(shè)計(jì)出合理的參數(shù)空間.但是,基于目前的審批現(xiàn)狀,找出關(guān)鍵參數(shù)是不夠的,還需要保證工藝是受控的.三條溶出曲線對(duì)上,一條快于或慢于RLD這是制劑工作者最糾結(jié)的情

8、況之一,常常出現(xiàn)在Bb類化合物上.例如,在pH1.0、pH4.0、pH6.8中f2伯>50或者甚至是80,但在pH5.0中的f2值慘得可憐.原因是：pH1.0和pH4.0條件下,溶解度較低,累計(jì)溶出度會(huì)受到本身溶解度的影響pH6.8中屬于易溶,15min>85%pH5.0條件剛好是最有區(qū)分的時(shí)候這種情況下,應(yīng)該按?仿制藥質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)口服固體制劑溶出度曲線測(cè)定與比較指導(dǎo)原那么?的建議進(jìn)行操作：對(duì)于溶出度受pH值影響較大的藥物,需要在多種pH介質(zhì)中進(jìn)行考察,必要時(shí)可細(xì)分至0.5.如何選擇外表活性劑的最正確用量對(duì)于B類化合物,pH水平、膽鹽或其他外表活性劑的共存等因素,都能很大程度上影

9、響藥物的溶解性,從而影響吸收的速度和程度.在體外實(shí)驗(yàn)中,常常需要添加一定量的外表活性劑來增加溶解度,以到達(dá)漏槽條件.但如何選擇外表活性劑的最正確用量卻是一個(gè)難題：如果用量太高,那么溶出太快,不存在區(qū)分性；如果用量太低,那么溶出太慢.中國(guó)、美國(guó)、日本的規(guī)定是這樣的：CFDAg布的?仿制藥質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)口服固體制劑溶出度曲線測(cè)定與比擬指導(dǎo)原那么?建議,外表活性劑的濃度在0.01%1.0(w/v)依次增加；FDA的?(1092)溶出度試驗(yàn)的開發(fā)和驗(yàn)證?中提到,外表活性劑的用量,首先應(yīng)滿足外表活性劑的CMC其次是能夠滿足漏槽條件；日本規(guī)定的用量也是一個(gè)用量篩選過程,與CFDA一致.鑒于仿制藥一致性評(píng)價(jià)

10、工作的初衷是通過體外溶出實(shí)驗(yàn)減低體內(nèi)生物等效的風(fēng)險(xiǎn)這一點(diǎn),建議使用體內(nèi)相關(guān)的生物介質(zhì)來測(cè)定原料藥的飽和溶解度,然后測(cè)定化合物在不同濃度外表活性劑中的飽和溶解度,選擇兩者相接近.生物相關(guān)介質(zhì)如下：這里采用一個(gè)FDA的QbD案例作為說明.案例中,測(cè)定了原料藥在生物相關(guān)介質(zhì)和不同濃度SLS中的濃度,結(jié)果如表3:表3.原料藥在生物相關(guān)介質(zhì)和不同濃度SLS中的濃度如表3,化合物在1.0%SLS介質(zhì)中與生物相關(guān)介質(zhì)中的飽和溶解度比擬接近,所以選取1.0%SLS介質(zhì)以及藥典中的規(guī)定的2.0%SLS作為溶出介質(zhì).如圖5所示,化合物在2.0%SLS中仿制制劑與參比制劑的溶出度一致,但是在體內(nèi)并不等效.如圖6所示

11、,化合物在1.0%的介質(zhì)中,能夠檢測(cè)到成心變更的工藝參數(shù)原料藥粒徑,并且得到的結(jié)果,能夠判斷是否生物等效.圖6.不同粒徑樣品在1%中的?§出SDS體外一致,體內(nèi)未必一致需觀察現(xiàn)象結(jié)果有時(shí)候,體外四條曲線一致,但在體內(nèi)卻未必一致,可能是由于選擇的溶出方法沒有區(qū)分力,或者說溶出度的結(jié)果沒有區(qū)分力.對(duì)于A類化合物來說,其體外溶出現(xiàn)象與參比制劑并不一致.可能存在這樣的情況,雖然仿制制劑和參比制劑在四條溶出曲線一致,但屬于兩種不同的機(jī)理,參比制劑為崩解溶出,而仿制制劑為溶蝕溶出,這樣可能會(huì)增加體內(nèi)生物不等效的風(fēng)險(xiǎn).由于不同的溶出機(jī)理,所以處方篩選時(shí)溶出后的可能現(xiàn)象結(jié)果比數(shù)據(jù)結(jié)果還要重要.例如：

12、o普通片崩解時(shí),需要注意觀察：oRLD崩解為顆粒還是粉末,是崩解還是溶蝕仿制制劑的崩解時(shí)間與參比制劑的崩解時(shí)間是否會(huì)有差異仿制制劑衣膜溶解的時(shí)間與參比制劑溶解的時(shí)間是否有差異o腸溶微丸溶出時(shí),需要觀察：o耐酸過程中RLD是否變色拉唾類耐酸過程中常常變色腸溶層是被溶解還是被撐破o對(duì)于膜控系統(tǒng)的緩釋微丸,需要觀察：oRLD釋放后微丸是否變大不溶物殘留情況如何仿制藥膠囊殼與參比制劑膠囊殼溶解的時(shí)間是否有差異基于溶出過程中觀察到的現(xiàn)象,有助于判斷參比制劑與自制制粒釋藥機(jī)制是否一致,也有助于為處方調(diào)整提供方向.四條溶出曲線弁不難四條溶出曲線并不難,通過理解原料藥性質(zhì)、pH-溶解度關(guān)系、輔料是否有依賴性,

13、然后再通過DOE實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),細(xì)致的觀察實(shí)驗(yàn)過程中的現(xiàn)象,對(duì)存在不符合邏輯的現(xiàn)象、結(jié)果進(jìn)行探索和驗(yàn)證,你就可以輕松搞定仿制藥一致性評(píng)價(jià)中的溶出曲線.你學(xué)會(huì)了嗎參考文獻(xiàn)1GordonL.Amidon,VinodP.Shah,JohnR.Crison;ATheoreticalBasisforaBiopharmaceuticDrugClassification:TheCorrelationofinVitroDrugProductDissolutionandinVivoBioavailability,PharmRes,1995,12(3):413-420.【2】?仿制藥質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)口服固體制劑溶出曲線測(cè)定與比擬指導(dǎo)原那么?【3】(1092)溶出度試驗(yàn)的開發(fā)和驗(yàn)證4Dr