1、1第第4章章 中藥安全性質量控制中藥安全性質量控制技術研究及應用實例技術研究及應用實例23一、毒的涵義一、毒的涵義 在本草中是一個廣義的概念，有毒無毒在本草中是一個廣義的概念，有毒無毒是指藥物對人體有無毒性而言。是指藥物對人體有無毒性而言。周禮周禮謂：謂：“聚毒藥以共醫(yī)事聚毒藥以共醫(yī)事”，這里，這里的毒藥為中藥的總稱。的毒藥為中藥的總稱。 明代張景岳認為：明代張景岳認為：“藥以治病，因毒為藥以治病，因毒為能，所謂毒者，因氣味之偏也能，所謂毒者，因氣味之偏也”。 4中藥毒性的含義：中藥毒性的含義：毒性即為偏性（藥性）毒性即為偏性（藥性）以偏糾偏是中藥治療疾病的基本原則以偏糾偏是中藥治療疾病的基本

2、原則用之得當即可發(fā)揮治療作用用之得當即可發(fā)揮治療作用用之不當則可毒害機體用之不當則可毒害機體 5兩種誤解兩種誤解正確理解正確理解中藥安全無毒，無不良反應中藥安全無毒，無不良反應中藥有毒，全面禁用中藥有毒，全面禁用中藥西藥都有不良反應中藥西藥都有不良反應利大于弊者，應用利大于弊者，應用弊大于利者，禁用弊大于利者，禁用二、二、 中藥安全性的觀點中藥安全性的觀點6國家食品藥品監(jiān)督管理局公布國家食品藥品監(jiān)督管理局公布20092009年全國不良反應年全國不良反應/ /事件報告事件報告638996638996例。例。1 1、不良反應病例中：、不良反應病例中：化學藥占化學藥占86.7%86.7%，涉及，涉及

3、31003100多個品種。多個品種。中藥占中藥占13.3%13.3%，涉及，涉及26002600多個品種多個品種化學藥不良反應中，注射劑占化學藥不良反應中，注射劑占61%61%。中藥不良反應中，注射劑占中藥不良反應中，注射劑占52%52%。2 2、說明：、說明：化學藥（西藥）的不良反應超過中藥?；瘜W藥（西藥）的不良反應超過中藥。 注射劑的不良反應超過口服藥注射劑的不良反應超過口服藥 西藥注射劑的不良反應超過中藥注射劑西藥注射劑的不良反應超過中藥注射劑7例例1 1 反應停反應停不良反應近不良反應近1000010000例（海豹兒）例（海豹兒）死亡近死亡近50005000例例三、舉例說明三、舉例說明

4、8例例2 20072 2007年美國年美國FDAFDA對十大藥品發(fā)出最嚴重的對十大藥品發(fā)出最嚴重的“黑框警告黑框警告”9小柴胡湯“肺炎”馬兜鈴酸“腎衰”魚腥草注射劑“過敏性休克”雙黃連注射液“中毒死亡”活血破血中藥臟器出血臨床嚴重毒性報道頻頻 中藥不良反應事件10關于中藥毒性的熱點問題關于中藥毒性的熱點問題“馬兜鈴馬兜鈴”的震撼的震撼“小柴胡湯小柴胡湯”事件的反思事件的反思“魚腥草注射液魚腥草注射液”的風波的風波11“馬兜鈴馬兜鈴”的震撼的震撼n1993年比利時學者首先發(fā)現年比利時學者首先發(fā)現2例女性服例女性服中草藥減肥治療后，出現進行性腎間中草藥減肥治療后，出現進行性腎間質纖維化，經調查發(fā)現

5、該減肥藥中加質纖維化，經調查發(fā)現該減肥藥中加入了防己，患者服用后血肌酐于入了防己，患者服用后血肌酐于3個月個月內升高一倍，腎活檢顯示廣泛間質纖內升高一倍，腎活檢顯示廣泛間質纖維化。維化。n經藥物成分分析發(fā)現，減肥膠囊中含經藥物成分分析發(fā)現，減肥膠囊中含有馬兜鈴酸。至有馬兜鈴酸。至1998年在比利時有年在比利時有100人患馬兜鈴酸腎病。人患馬兜鈴酸腎病。 12“馬兜鈴馬兜鈴”的震撼的震撼n比利時學者報告了服用含有馬兜鈴酸比利時學者報告了服用含有馬兜鈴酸的中草藥致急進性腎功能衰竭，并稱的中草藥致急進性腎功能衰竭，并稱這種腎臟損害為這種腎臟損害為“中草藥腎病中草藥腎病(Chinese Herb Ne

6、phropathy, CHN)”。n此后，有關馬兜鈴酸引起腎臟損害的此后，有關馬兜鈴酸引起腎臟損害的問題，引起了國內外學者的廣泛關注問題，引起了國內外學者的廣泛關注并陸續(xù)發(fā)表有關研究報告。并陸續(xù)發(fā)表有關研究報告。 13“馬兜鈴馬兜鈴”的震撼的震撼l國內學者認為，不宜籠統地將馬兜鈴國內學者認為，不宜籠統地將馬兜鈴類植物引起的腎臟損害稱作類植物引起的腎臟損害稱作“中草藥中草藥腎病腎病”。l馬兜鈴酸馬兜鈴酸(aristolochicacid，AA)是引起是引起CHN的一類藥物的主要毒性成分之一，的一類藥物的主要毒性成分之一，故稱為故稱為“馬兜鈴酸腎病馬兜鈴酸腎病”(AAN)較為合較為合適，適，l目前

7、國外學者也應用了這一病名。目前國外學者也應用了這一病名。 14“馬兜鈴馬兜鈴”的連鎖反應的連鎖反應n 中藥馬兜鈴是馬兜鈴科多年生中藥馬兜鈴是馬兜鈴科多年生植物馬兜鈴的成熟果實。植物馬兜鈴的成熟果實。n 苦、微辛，寒，歸肺、大腸經。苦、微辛，寒，歸肺、大腸經。n清肺化痰，止咳平喘。清肺化痰，止咳平喘。n用量不宜過大，以免引起嘔吐。用量不宜過大，以免引起嘔吐。15中藥馬兜鈴中藥馬兜鈴16“馬兜鈴馬兜鈴”的連鎖反應的連鎖反應nAA是馬兜鈴科馬兜鈴屬植物中所含的是馬兜鈴科馬兜鈴屬植物中所含的共同成分，含有或可能含有馬兜鈴酸共同成分，含有或可能含有馬兜鈴酸的常用中藥品種為的常用中藥品種為馬兜鈴、天仙藤、

8、馬兜鈴、天仙藤、青木香、廣防己、關木通、尋骨風、青木香、廣防己、關木通、尋骨風、朱砂蓮、細辛朱砂蓮、細辛等。等。 17“馬兜鈴馬兜鈴”的連鎖反應的連鎖反應n含馬兜鈴酸的常見中成藥有：含馬兜鈴酸的常見中成藥有：n龍膽瀉肝丸、耳聾丸、八正丸、純陽龍膽瀉肝丸、耳聾丸、八正丸、純陽正氣丸、大黃清胃丸、當歸四逆丸、正氣丸、大黃清胃丸、當歸四逆丸、導赤散、甘露消毒丹、排石顆粒、跌導赤散、甘露消毒丹、排石顆粒、跌打丸、婦科分清丸、冠心蘇合丸、蘇打丸、婦科分清丸、冠心蘇合丸、蘇合丸、辛荑丸、十香返生丸、濟生桔合丸、辛荑丸、十香返生丸、濟生桔核丸、止嗽化痰丸等。核丸、止嗽化痰丸等。 18“馬兜鈴馬兜鈴”的連鎖反

9、應的連鎖反應u我國發(fā)生了龍膽瀉肝丸的我國發(fā)生了龍膽瀉肝丸的“馬兜鈴酸馬兜鈴酸事件事件” u原因是用關木通替代木通原因是用關木通替代木通 u2003年年2月月28日國家藥品監(jiān)管局發(fā)出日國家藥品監(jiān)管局發(fā)出關于加強對龍膽瀉肝丸監(jiān)督管理的關于加強對龍膽瀉肝丸監(jiān)督管理的通知通知 19木通木通 為木通科植物為木通科植物三葉木通三葉木通Akebia trifoliata (Thunb.) Koidz.的木質莖藤。的木質莖藤。功效：瀉火行水功效：瀉火行水 通血脈。通血脈。 20關木通關木通為馬兜鈴科植物東北為馬兜鈴科植物東北馬兜鈴馬兜鈴Aristolochia mandshuriensis Kom.的莖藤。的

10、莖藤。功效：清心火，利小功效：清心火，利小便，通經下乳。便，通經下乳。 21“馬兜鈴馬兜鈴”的連鎖反應的連鎖反應u2002年年6月，美國食品藥品管理局宣布月，美國食品藥品管理局宣布禁售禁售70多種含馬兜鈴酸的中成藥。多種含馬兜鈴酸的中成藥。u 香港衛(wèi)生署發(fā)言人宣布：將從香港衛(wèi)生署發(fā)言人宣布：將從2004年年6月月1日起，停止進口和銷售含有馬兜日起，停止進口和銷售含有馬兜鈴酸的中藥材及其制劑。鈴酸的中藥材及其制劑。 u歐盟、澳洲等國也禁止含馬兜鈴的中歐盟、澳洲等國也禁止含馬兜鈴的中藥材及中成藥進口。藥材及中成藥進口。22“小柴胡湯小柴胡湯”事件事件23“小柴胡湯小柴胡湯”事件事件v小柴胡湯出自張

11、仲景小柴胡湯出自張仲景傷寒論傷寒論v組方：柴胡、人參、黃芩、大棗、半組方：柴胡、人參、黃芩、大棗、半 夏、生姜、甘草，共七味藥夏、生姜、甘草，共七味藥v功效：疏暢氣機、調和胃腸、和解表里功效：疏暢氣機、調和胃腸、和解表里v 主治：傷寒少陽證。往來寒熱、胸脅主治：傷寒少陽證。往來寒熱、胸脅 苦滿，苔白，脈弦苦滿，苔白，脈弦24“小柴胡湯小柴胡湯”事件事件v常用于感冒、慢性肝炎、肝硬化、急常用于感冒、慢性肝炎、肝硬化、急 慢性膽囊炎、膽結石、急性胰腺炎、慢性膽囊炎、膽結石、急性胰腺炎、胸膜炎、淋巴腺炎、胃炎、胃潰瘍等胸膜炎、淋巴腺炎、胃炎、胃潰瘍等v國內外研究證明，小柴胡湯對肝癌、國內外研究證明，

12、小柴胡湯對肝癌、肺癌、結腸癌等腫瘤，預防其惡性轉肺癌、結腸癌等腫瘤，預防其惡性轉化具有一定作用化具有一定作用 25“小柴胡湯小柴胡湯”曾風靡日本曾風靡日本 20 世紀世紀70年代初期，日本的津村順天年代初期，日本的津村順天堂制成了小柴胡湯顆粒制劑堂制成了小柴胡湯顆粒制劑。1976年，日本京畿大學東洋醫(yī)學研究年，日本京畿大學東洋醫(yī)學研究所主任有地滋教授通過年研究，在所主任有地滋教授通過年研究，在和漢藥研討會上發(fā)表了和漢藥研討會上發(fā)表了“津村小柴胡津村小柴胡湯顆粒對慢性肝炎有治療效果湯顆粒對慢性肝炎有治療效果”的報的報告，在日本引起不同凡響。告，在日本引起不同凡響。26“小柴胡湯小柴胡湯”曾風靡日

13、本曾風靡日本 此后有此后有21家漢方廠家加入生產開發(fā)小家漢方廠家加入生產開發(fā)小柴胡湯行列，對小柴胡湯進行多方面柴胡湯行列，對小柴胡湯進行多方面的研究，呈現了空前的小柴胡湯熱。的研究，呈現了空前的小柴胡湯熱。20 世紀世紀70-90年代年代小柴胡湯在日本是使小柴胡湯在日本是使用最多的藥物，廣泛地應用于治療慢用最多的藥物，廣泛地應用于治療慢性肝炎。估計每年服用小柴胡湯者有性肝炎。估計每年服用小柴胡湯者有100萬人，消費金額約萬人，消費金額約90億億130億日億日元。元。 27“小柴胡湯小柴胡湯”事件事件u1989年年12月月日本胸部疾患學會雜志日本胸部疾患學會雜志首次報道了小柴胡湯引起藥物性肺炎首

14、次報道了小柴胡湯引起藥物性肺炎例，之后其他報刊也陸續(xù)刊登了小例，之后其他報刊也陸續(xù)刊登了小柴胡湯引起肝功損傷之類的報道，對柴胡湯引起肝功損傷之類的報道，對間質性肺炎尤為重視。間質性肺炎尤為重視。u至至1999年底，因服小柴胡湯造成間質年底，因服小柴胡湯造成間質性肺炎已升為性肺炎已升為188例，死亡例，死亡22例。例。 28“小柴胡湯小柴胡湯”事件事件u1996年年3月，日本厚生省在月，日本厚生省在“緊急安全緊急安全情報情報”中發(fā)出了中發(fā)出了“關于小柴胡湯嚴重關于小柴胡湯嚴重的副作用的副作用間質性肺炎的警告間質性肺炎的警告”。 u日本厚生省日本厚生省2000年年1月月14日發(fā)出日發(fā)出“醫(yī)藥醫(yī)藥品

15、醫(yī)療用具等安全性情報品醫(yī)療用具等安全性情報”通令：全通令：全面禁止肝炎、肝硬化、肝癌患者使用面禁止肝炎、肝硬化、肝癌患者使用小柴胡湯。小柴胡湯。 29“小柴胡湯小柴胡湯”事件的反思事件的反思u藥方無錯藥方無錯 辨證有誤。辨證有誤。 u濫用小柴胡湯是造成悲劇的主因。濫用小柴胡湯是造成悲劇的主因。 u中醫(yī)治病強調辨證論治。中醫(yī)治病強調辨證論治。u不根據癥狀反應使用小柴胡湯，又長不根據癥狀反應使用小柴胡湯，又長期服用一個方藥，脫離了中醫(yī)辨證論期服用一個方藥，脫離了中醫(yī)辨證論治理論。治理論。 30“小柴胡湯小柴胡湯”事件的反思事件的反思中藥必須在中醫(yī)理論指導下應用。中藥必須在中醫(yī)理論指導下應用。 日本

16、的日本的“小柴胡湯副作用死亡事件小柴胡湯副作用死亡事件”實質，是違反了中醫(yī)辨證論治的原則，實質，是違反了中醫(yī)辨證論治的原則，違反了中醫(yī)治病必辨方證的原則。違反了中醫(yī)治病必辨方證的原則。 31“魚腥草注射液魚腥草注射液”風波風波32目前上市的含魚腥草的注射劑目前上市的含魚腥草的注射劑l 魚腥草注射液魚腥草注射液l 新魚腥草素鈉氯化鈉注射液新魚腥草素鈉氯化鈉注射液l 新魚腥草素鈉注射液新魚腥草素鈉注射液l 注射用新魚腥草素鈉注射用新魚腥草素鈉l 復方蒲公英注射液復方蒲公英注射液l 炎毒清注射液炎毒清注射液l 魚金注射液魚金注射液 目前在我國有目前在我國有100多家多家生產企業(yè)生產這類產品生產企業(yè)生

17、產這類產品 臨床使用主要是抗感染治療臨床使用主要是抗感染治療33魚腥草注射液不良反應魚腥草注射液不良反應 魚腥草注射液等魚腥草注射液等7個注射劑在臨床應個注射劑在臨床應用中出現了過敏性休克、全身過敏用中出現了過敏性休克、全身過敏反應、胸悶、心急、呼吸困難和重反應、胸悶、心急、呼吸困難和重癥藥疹等嚴重不良反應，甚至有引癥藥疹等嚴重不良反應，甚至有引起死亡病例報告。起死亡病例報告。 34魚腥草注射液不良反應魚腥草注射液不良反應n 從目前收到的病例報告和文獻資料分析從目前收到的病例報告和文獻資料分析 表明，含魚腥草的注射劑與其所引起的過表明，含魚腥草的注射劑與其所引起的過敏性不良反應，存在較明確的關

18、聯性。敏性不良反應，存在較明確的關聯性。n 過敏性休克的病例報告來源和涉及企業(yè)、過敏性休克的病例報告來源和涉及企業(yè)、批號無明顯集中現象，說明過敏反應可能批號無明顯集中現象，說明過敏反應可能是該類品種的共性問題。是該類品種的共性問題。 35l2006年年6月月6日，國家食品藥品監(jiān)管局發(fā)日，國家食品藥品監(jiān)管局發(fā)出的出的關于暫停使用和審批魚腥草注射關于暫停使用和審批魚腥草注射液等液等7個注射劑的通告?zhèn)€注射劑的通告l2006年年9月：國家藥監(jiān)局發(fā)出月：國家藥監(jiān)局發(fā)出關于肌注關于肌注用魚腥草注射液等注射劑恢復使用申報用魚腥草注射液等注射劑恢復使用申報資料和程序的通知（急件）資料和程序的通知（急件）（國食

19、藥（國食藥監(jiān)辦監(jiān)辦2006461號）號）36 1. 劑量過大或長期持續(xù)服用。劑量過大或長期持續(xù)服用。 2. 用法不當，沒有按中藥的正確用法使用。用法不當，沒有按中藥的正確用法使用。 3. 炮制不充分，有毒成分含量過高。炮制不充分，有毒成分含量過高。 4. 患者不遵醫(yī)囑，自行服藥?；颊卟蛔襻t(yī)囑，自行服藥。 5. 中藥品種混亂、有毒藥物管理不善。中藥品種混亂、有毒藥物管理不善。37四、中藥中的有害物質（一）外源性污染：包括重金屬和農藥殘留；（二）內源性毒性物質：一般是指中藥自身的一些毒性次生代謝產物。38（一）中藥材中重金屬元素含量測定技術中國藥典2010年版（一部）要求，在中藥中通常監(jiān)控的有害重

20、金屬主要包括鉛、鎘、汞、銅、砷等。1.前處理方法1.1 濕法消解所謂濕法，是指借助化學反應使固體試樣轉化為溶液的分解方法。通常是采用單一或混合強酸，在適當的溫度下，將樣品中的有機成分氧化破壞，使金屬化合物轉變?yōu)殡x子狀態(tài)。391.2 干法消解（灰化法）該法是通過高溫方法將試樣中的重金屬元素游離。一般是將樣品先于小火炭化至無煙，再移入馬弗爐中高溫灰化完全，冷卻，用稀酸溶解灰分，定量轉移至量瓶中。401.3 壓力消解罐消解法（高壓密封溶樣法）樣品仍采用強酸消解，與濕法消解不同的是樣品要置于聚四氟乙烯罐內密封，置于烘箱內在一定溫度下保持一定時間。411.4 微波消解法將樣品和相應的試劑放置于高溫，高壓

21、密閉樣品罐或敞口容器中。利用微波加熱容器中的消解液，使各樣品快速溶解的濕法消化。422. 測定方法2.1 原子吸收光譜法（AAS）該法已被中國藥典2010年版收載為測定中藥材中重金屬的法定方法之一。根據各種元素的性質及原子化的方法不同，該法又可分為火焰原子化法、非火焰原子化法和低溫原子化法。（1）火焰原子化法：該法是利用化學火焰使物質分解并原子化的方法?？捎糜阢~、鐵、鋅、錳、鈣等常量元素的檢測，缺點是原子化效率不高， 火焰中自由原子濃度很低，靈敏度低。43（2）非火焰原子化法 該法是利用石墨管高溫下使樣品原子化通過爐內光路產生吸收 的原理來測定的。 與火焰原子化法相比，石墨爐原子化法樣品消耗少

22、，特別適用于分析非常少量的試樣，靈敏度高；缺點是石墨管昂貴，不能同時測定多個元素。該法可用于除汞以外的重金屬元素測定。44（3）低溫原子化法 該法是利用化學反應方法預處理試樣，在室溫至攝氏幾百度的條件下使其原子化，因此又稱為化學原子化法。冷原子化法：該法專用于汞元素汞元素的測定。 將樣品消解后還原生成汞，在汞蒸氣發(fā)生器中，用載氣將汞蒸氣吹出，通過石英吸收池的汞蒸氣對汞空心陰極燈的輻射產生吸收，從而進行定量分析。氫化物原子化法：一般用于鉛、砷、汞等元素的測定。將氣態(tài)分析物引入石英爐內在較低溫度下實現原子化的一種方法。它主要是與蒸氣發(fā)生法配合使用。 452.2 原子熒光光譜法（AFS） 原子熒光光

23、譜是介于原子發(fā)射光譜和原子吸收光譜之間的光譜分析技術。它的基本原理是基態(tài)原子（一般蒸汽狀態(tài)）吸收合適的特定頻率的輻射而被激發(fā)至高能態(tài)，而后激發(fā)過程中以光輻射的形式發(fā)射出特征波長的熒光，通過測定原子熒光的強度即可求得樣品中該待測元素的含量。462.3 電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法（ICP-AES） 本法為中國藥典2010年版附錄新收載的方法。 基本原理是樣品由載氣引入霧化系統進行霧化后，以氣溶膠形式進入等離子體的中心通道，在高溫和惰性氣氛中被充分蒸發(fā)、原子化、電離和激發(fā)，使所含元素發(fā)射各自的特征譜線。根據各元素特征譜線的存在與否，鑒別樣品中是否含有某種元素（定性分析定性分析）；由特征譜線的強度

24、測定樣品中相應元素的含量（定量分析定量分析）。 472.4 電感耦合等離子體質譜法（ICP-MS） 與ICP-AES相比，該法最大的優(yōu)點是檢出限極低，達到了pg.ml-1級的水平。其次分析精密度高、分析速度快、可同時測定含量差別較大的各組分，可用于絕大多數重金屬元素的定性分析和定量分析，同時進行多種元素及多種元素及同位素同位素的測定，是目前痕量元素分析領域中最先進的方法。 482.5 其他方法（1）比色法：主要用于重金屬總量和總砷重金屬總量和總砷的測定。（2）紫外分光光度法：該法是利用重金屬元素與試劑反應后顯色，在紫外光下有吸收的原理來測定重金屬的含量。多用于鉛、汞的測定。（3）高效液相色譜法

25、（4）極譜法（5）免疫學方法（6）激光誘導擊穿光譜法 49第二節(jié)第二節(jié) 中藥中農藥殘留測定技術中藥中農藥殘留測定技術 50一一.前處理技術前處理技術 中藥材的提取與凈化中藥材的提取與凈化：目的是將中藥材中殘留的微量農藥殘留物提取出來，又不能引入新的溶劑污染。實際上是分離與凈化技術的綜合應用。1.超臨界流體萃取技術（SFE） 超臨界流體，是指溫度和壓力處于臨界溫度和臨界壓力之上的流體。常用的萃取劑是二氧化碳，適宜非極性和非極性和極性較小的物質極性較小的物質的提取。若要提取極性大的成分，可以加入適宜的夾帶劑夾帶劑（如甲醇、乙醇和水等）。 512. 固相萃?。ü滔噍腿。⊿PE）和固相微萃取技術（）和

26、固相微萃取技術（SPME） 固相萃取固相萃?。菏抢霉腆w吸附劑將液體樣品中的目標化合物吸附，使其與樣品的基體和干擾化合物分離，然后再用洗脫液洗脫或加熱解吸附，達到分離和富集目標化合物的目的。 5253固相微萃取法固相微萃取法：根據吸附-解吸原理，在進樣器的針頭部分涂一層固定液或鍵合一層固定相，直接將其插入液體樣品或樣品的頂空，萃取、濃縮有機化合物后，將進樣器直接插入GC進樣口加熱，使被測物質進入分析器進行測定。主要和氣相色譜以及液相色譜聯用。 5455563. 加速溶劑萃取（加速溶劑萃?。ˋSE） 加速溶劑萃取是在較高的溫度（50200）和壓力（10003000psi或10.320.6MPa）

27、下用溶劑萃取溶劑萃取固體或半固體樣品的新穎樣品前處理方法。 優(yōu)點優(yōu)點：有機溶劑用量少，10g樣品一般僅需15ml溶劑；快速，完成一次萃取全過程的時間一般僅需15min；基體影響??；萃取效率高，選擇性好，已進入美國EPA標準方法；且使用方便、安全性好，自動化程度高。 574. 凝膠滲透色譜（凝膠滲透色譜（GPC） 凝膠滲透色譜基于體積排阻的分離機制，是利用有機溶劑和疏水凝膠大分子從樣品中提取分離不同分子量干擾物的一種常用有效分離技術。被測量的高聚物溶液通過一根內裝不同孔徑的色譜柱，柱中可供分子通行的路徑有粒子間的間隙（較大）和粒子內的通孔（較?。?。當聚合物溶液流經色譜柱時，較大的分子被排除在粒子

28、的小孔之外，只能從粒子間的間隙通過，速率較快；而較小的分子可以進入粒子中的小孔，通過的速率要慢得多。經過一定長度的色譜柱，分子根據相對分子質量被分開，相對分子質量大的在前面（即淋洗時間短），相對分子質量小的在后面（即淋洗時間長）。 58二、定量技術二、定量技術氣相色譜法氣相色譜法 定義定義：以惰性氣體惰性氣體為流動相，以固定液或固體吸附劑作為固定相的色譜法稱為氣相色譜法。 以固定液作為固定相的色譜稱為氣液色譜氣液色譜，以固體吸附劑作為固定相的色譜稱為氣固色譜氣固色譜。 原理：原理：使混合物中各組分在兩相間進行分配,其中一相是不動的(固定相),另一相(流動相)攜帶混合物流過此固定相,與固定相發(fā)生

29、作用,在同一推動力下,不同組分在固定相中滯留的時間不同,依次從固定相中流出。通常采用的檢測器有：熱導檢測器，火焰離子化檢測器，氦離子化檢測器，超聲波檢測器，光離子化檢測器，電子捕獲檢測器，火焰光度檢測器，電化學檢測器，質譜檢測器等。 5960中國藥典2010年版一部附錄收載氣相色譜法用來測定農藥殘留量，包含了3中有機氯類、12種有機磷類和3種擬除蟲菊酯類農藥。616263定量分析與方法學驗證定量分析與方法學驗證 生藥中化學成分的定量分析是評價生藥質量的重要手段。常用：分光光度法和色譜法。 用于生藥定量分析的方法必須進行驗證，以證明采用的含量測定符合相應的分析要求。驗證內容：準確度、精密度、專屬

30、性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性。64（一）準確度（一）準確度 指用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度，指用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度，一般用回收率表示。應在規(guī)定的范圍內測試。一般用回收率表示。應在規(guī)定的范圍內測試。 測定方法的準確度用已知純度的對照品做加樣回收率測定，加入對照品的用已知純度的對照品做加樣回收率測定，加入對照品的量要適當量要適當對照品的加入量與供試品中已知含有量之和必須在標準對照品的加入量與供試品中已知含有量之和必須在標準曲線線性范圍之內。曲線線性范圍之內。 數據要求同一濃度供試品溶液，同一濃度供試品溶液，6 6個測定結果或個測定結果或3 3不同濃

31、度分別制不同濃度分別制備備3 3份不同溶液。份不同溶液。一般中間濃度為所取供試品含量的一般中間濃度為所取供試品含量的100%100%水平，水平， 80% 120% 80% 120%65（二）精密度 一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差表示。 重復性（批內精密度） 系指同一分析人員在同一條件下對同一批樣品至少制備6份以上或3個不同濃度分別制備3粉供試品溶液（9份），進行測定，計算相對標準偏差（RSD），RSD值一般要求不大于5。中間精密度 系指在同一個實驗室，在不同時間由不同分析人員用不同設備測定結果之間的精密度。考察隨機變動因素對精密度的影響。66 3.重現性 系指在不同實驗室由不同分析人員測定

32、結果之間的精密度。（三）專屬性 又稱為 選擇性。通常以不含被測成分的供試品作為空白樣品進行試驗來說明。（四）檢測限 供試品中被測成分能被檢出的最低濃度或最小量，無需準備定量。67（五）定量限 指供試品中被測成分能被定量測定的最低量，反應分析方法是否具備靈敏的定量檢測能力。（六）線性范圍（八）耐用性 系指在測定條件有小的變動時，測定結果不受影響的承受程度。68二、定量技術二、定量技術2. 高效液相色譜法（高效液相色譜法（HPLC） 定義定義：高效液相色譜是以液體為流動相，采用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進

33、入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。 特點：特點：高壓、高效、高速。 尤其適合于高沸點、受熱不穩(wěn)定易分解的農藥殘留檢測，如取代脲、氨基甲酸酯、黃酰脲類農藥。 69 根據流動相和固定相的相對極性的不同可以將HPLC分為2種類型，即正相正相和反相反相色譜。在正相液相色譜中，流動相的極性小，通常為非極性的烷烴，固定相的極性大，通常為硅膠、纖維素等；在反相液相色譜中，流動相的極性大，通常為水一甲醇溶液、水一乙氰溶液等，固定相通常為鍵合的C18、C4等,極性較弱。反相液相色譜的應用相對廣泛。 70 液相色譜的定性依據是保留時間的相對性，通常相對誤差不能大于5。定量參數常常采用峰高、峰面積、相對峰高、

34、相對峰面積等。定量方法通常采用外標法、內標法和面積歸一化法。外標法可分為外標一點法、標準曲線法等。71l、外標一點法(直接比較法)用與樣品類似的濃度的標準溶液，等量進樣，比較它們的峰高或峰面積。 Cx一未知樣濃度 Cd標樣濃度 Ax未知樣峰面積 A標樣峰面積ddxxCAAC722、外標法(工作曲線法) Cx一未知樣濃度Ax未知樣峰面積 Kx一直接斜率 xxxAKC173（1 1）柱切換高效液相色譜技術）柱切換高效液相色譜技術 柱切換技術是指用閥來改變流動相走向和流動相系統，從而使洗脫液在一特定時間內從預處理柱進入到分析柱 的在線固相分離技術。優(yōu)點：提高色譜系統的分辨率和選擇性； 使待測組分富集

35、，提高靈敏度； 在一個網絡系統中實現多個分離目標； 在線衍生化，提高靈敏度和重現性； 在線凈化樣品，樣本不需預處理或預處理大大簡化，可直接進樣分析。74（2 2）高效液相色譜柱后衍生熒光法）高效液相色譜柱后衍生熒光法 該方法主要是針對氨基甲酸酯類農藥。該方法主要是針對氨基甲酸酯類農藥。 衍生化是藥物分析中常用的一種分析手段。其原理是衍生化是藥物分析中常用的一種分析手段。其原理是待測樣品與衍生化試劑定量快速反應，并加入特定的功能待測樣品與衍生化試劑定量快速反應，并加入特定的功能的基團生成符合檢測要求的衍生化物，通過檢測生成衍生的基團生成符合檢測要求的衍生化物，通過檢測生成衍生化物的量間接測定待測

36、樣品的量?；锏牧块g接測定待測樣品的量。75通過合適的化學反應通過合適的化學反應, ,生成特殊衍生化物，生成特殊衍生化物，1. 1. 改變待測物的色譜保留特性以改善分離度；改變待測物的色譜保留特性以改善分離度；2. 2. 改變待測物的檢測特性，以增加其對檢測器的響改變待測物的檢測特性，以增加其對檢測器的響 應（例：紫外標記、熒光標記、電化學標記）應（例：紫外標記、熒光標記、電化學標記） ；3. 3. 生成穩(wěn)定的衍生化物，改善待測物的不穩(wěn)定性（生成穩(wěn)定的衍生化物，改善待測物的不穩(wěn)定性（例：例：-SH-SH基團易氧化的問題可通過?；瘉斫鉀Q）?；鶊F易氧化的問題可通過?；瘉斫鉀Q）。化學衍生化的目的化學

37、衍生化的目的:76HPLC化學衍生化分類 在線化學衍生化 是否與HPLC系統聯機 離線化學衍生化 柱前衍生化 發(fā)生衍生化發(fā)應的先后 柱后衍生化77柱前衍生化柱前衍生化 在色譜分離前，預先將樣品制成適當的衍生物，然后再進在色譜分離前，預先將樣品制成適當的衍生物，然后再進入色譜柱進行分離檢測。入色譜柱進行分離檢測。優(yōu)點：優(yōu)點：（1）對用作流動相的溶劑體系沒有限制；）對用作流動相的溶劑體系沒有限制；（2）反應條件，反應速率不受限制；）反應條件，反應速率不受限制； （3）通過選擇合適的試劑以及萃取方法，可以）通過選擇合適的試劑以及萃取方法，可以 消除許多干擾；消除許多干擾；（4）過量溶劑、試劑容易除去

38、；）過量溶劑、試劑容易除去；（5）轉變成合適的衍生物，可使分離度改進。）轉變成合適的衍生物，可使分離度改進。78缺點缺點:（1）操作過程繁瑣，容易影響定量準確性。（2）當一個復雜組分樣品經過衍生化反應 后，有可能產生多種衍生化產物給色 譜分離帶來困難。 79柱后衍生化柱后衍生化 將樣品先注入色譜柱，按選定的色譜條件使樣品組分得將樣品先注入色譜柱，按選定的色譜條件使樣品組分得以分離，當各個組分從色譜柱流出后，分別與衍生化試劑相以分離，當各個組分從色譜柱流出后，分別與衍生化試劑相遇，在一定的反應條件下，生成具有某種檢測特性的衍生化遇，在一定的反應條件下，生成具有某種檢測特性的衍生化產物再進入檢測器

39、。產物再進入檢測器。80 要求：要求：（1）對流動相的選擇更嚴格，必須考慮衍生化）對流動相的選擇更嚴格，必須考慮衍生化 試劑、反應產物的溶解度，以及它們與流試劑、反應產物的溶解度，以及它們與流 動相可能發(fā)生的副反應；動相可能發(fā)生的副反應；（2）由于在高效液相色譜中采用高流速，因此）由于在高效液相色譜中采用高流速，因此 反應速率必須很快（小于反應速率必須很快（小于30s）；）；（3 3）檢測器對衍生化試劑不能有響應。）檢測器對衍生化試劑不能有響應。 81柱后衍生流程圖如下：柱后衍生流程圖如下： 82 紫外衍生化 熒光衍生化 電化學衍生化 手性衍生化 固定化酶反應器（IMER）83 熒光衍生反應熒光衍生反應 在液相色譜法中，熒光檢測器是一種高靈敏度、高選擇性的檢測器，比紫外檢測器的靈敏度要高10到1000倍，因此，為了檢測痕量非熒光物質，常將它與熒光衍生化試劑反應，生成熒光物質，然后用熒光檢測器檢測 843.3.色譜色譜- -質譜聯用方法質譜聯用方法 色譜技術的特點在于其優(yōu)越的分離性能，而質譜具有很強的定性能力，可以提供大量的分子結構信息。將色譜-質譜聯用技術用于農藥殘留量檢測，特別是應用于農藥代謝物、降解物的檢測和多殘留檢測等具有突出的特點。適用于揮發(fā)和半揮發(fā)性有機殺蟲