1、孟凡欣孟凡欣姜姜 濤濤v用于核酸操作的工具酶用于核酸操作的工具酶v用于基因克隆的載體用于基因克隆的載體v用于基因轉(zhuǎn)移的受體菌或細(xì)胞用于基因轉(zhuǎn)移的受體菌或細(xì)胞v限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶v銜接酶銜接酶vDNA聚合酶聚合酶1. 特點(diǎn)：特點(diǎn)： 分別自水生棲熱菌，分子量為分別自水生棲熱菌，分子量為94,000，最適反響溫度，最適反響溫度75， 對(duì)對(duì)95高溫具良好穩(wěn)定性，該酶不存在高溫具良好穩(wěn)定性，該酶不存在35外切酶活性外切酶活性2. 用途：用途： 主要用于主要用于DNA的體外擴(kuò)增，經(jīng)的體外擴(kuò)增，經(jīng)25次循環(huán)后才進(jìn)入酶的次循環(huán)后才進(jìn)入酶的反響穩(wěn)定期，一個(gè)反響穩(wěn)定期，一個(gè)DNA 分子因此可被擴(kuò)增分

2、子因此可被擴(kuò)增4106倍。倍。 DNA擴(kuò)增技術(shù)又稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒错憯U(kuò)增技術(shù)又稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒错?PCR)，它包括，它包括以下三個(gè)步驟：以下三個(gè)步驟： DNA模板變性模板變性(95)與與DNA引物退火引物退火(45)引物延引物延伸伸72) v是用來(lái)在生物學(xué)寄主和試管間是用來(lái)在生物學(xué)寄主和試管間傳送傳送克隆的序列克隆的序列的的DNA分子分子 (如從細(xì)菌到試管再到植物細(xì)胞如從細(xì)菌到試管再到植物細(xì)胞)。 v其共性有四點(diǎn)：其共性有四點(diǎn)：v啟動(dòng)自發(fā)復(fù)制的才干啟動(dòng)自發(fā)復(fù)制的才干v含有遺傳標(biāo)志含有遺傳標(biāo)志 (通常是顯性的通常是顯性的) 供選擇供選擇v多個(gè)限制酶切位點(diǎn)以利于插入克隆的多個(gè)限制酶切位點(diǎn)以利于插入克

3、隆的DNA v非必需非必需DNA序列盡能夠少，以克隆更大片段序列盡能夠少，以克隆更大片段 Plasmid- Plasmid-獨(dú)立于細(xì)菌染色體外的雙鏈環(huán)獨(dú)立于細(xì)菌染色體外的雙鏈環(huán)DNADNA分子。分子。 Plasmid chromosome Plasmid chromosome v 2.7Kb的雙鏈的雙鏈DNA質(zhì)粒質(zhì)粒v 一個(gè)氨芐青霉素抗性基因一個(gè)氨芐青霉素抗性基因v 一個(gè)多克隆位點(diǎn)一個(gè)多克隆位點(diǎn)大腸桿菌：大腸桿菌： 用于接受質(zhì)粒：用于接受質(zhì)粒：DH5、TB1、JM109、JM101 用于接受用于接受-DNA：LE392、ED8654酵母菌：酵母菌： 畢赤酵母畢赤酵母 啤酒酵母啤酒酵母哺乳動(dòng)物細(xì)胞：哺乳動(dòng)物細(xì)胞： CHO CHO轉(zhuǎn)化細(xì)菌有兩個(gè)根本方法。轉(zhuǎn)化細(xì)菌有兩個(gè)根本方法。一是化學(xué)法：即用一是化學(xué)法：即用CaCl2 處置并加以熱激促進(jìn)處置并加以熱激促進(jìn)DNA進(jìn)