1、食品科學(xué).生物工程.21（6）：1753至1760（2012年）DOI10.1007/S10068-012-0233-8研究論文口服凹唇姜根（提琴形凹唇姜根）提取物可以降低中波紫外線引起的無毛小鼠皮膚老化SungkyungKim、Hyun-InOh和Jae-KwanHwang收稿日期：2012年6月21日/接受：2012年7月11日/在線發(fā)表時間：2012年12月31日？KoSFoST和斯普林格，2012年摘要凹唇姜提琴形凹唇姜（Roxb）Schltr是一種可食用的熱帶姜科藥用植物。這種植物在傳統(tǒng)上被用于治療各種疾病，但是尚未見報道經(jīng)口攝入該植物后對于皮膚的影響。本研究旨在探討凹唇姜根的乙醇提

2、取物對于無毛小鼠模型的抗光老化作用。研究結(jié)果顯示，與未經(jīng)過處理的UVB對照組相比，攝入凹唇姜根提取物（BPE）的小鼠在照射紫外線后發(fā)生皺紋形成、皮膚增厚以及背部皮膚表皮水分丟失的情況有了顯著減少。止匕外，BPE對于UVB誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-3和-13的表達(dá)以及MMP-2和-9活動還有顯著的防止作用。通過這些結(jié)果可以很容易得看出口服BPE對于無毛小鼠產(chǎn)生的體內(nèi)抗光老化作用。因此，凹唇姜根可能有潛力作為口服光防護(hù)制劑并被用于防止紫外線照射造成的皮膚光老化。關(guān)鍵詞：姜科、抗光老化、抗皺、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）、經(jīng)皮水分損失引言皮膚老化可分為內(nèi)在老化和光老化兩種過程。導(dǎo)致皮膚老化的影響因素

3、包括遺傳學(xué)因素、紫外線照射、機(jī)械應(yīng)力以及荷爾蒙的變化（1）長期暴露于紫外線照射（特別是其紫外線成分）會導(dǎo)致皮膚過早老化，即所謂的光老化，這種過程被認(rèn)為是皮膚損傷的主要原因（2）光老化的特點(diǎn)是粗細(xì)不同的皺紋、皮膚干燥、粗糙、膚淺、斑駁色素沉著和組織學(xué)變化以及各種皮膚變化，其中包括皮膚屏障功能的變化（3）。SungkyungKim、Hyun-InOh、Jae-KwanHwang（E3）延世大學(xué)生物材料科學(xué)與工程學(xué)院，韓國首爾120-749,聯(lián)系電話：+82-2-2123-5881傳真：+82-2-362-7265電子由B件：jkhwangyonsei.ac.krJae-KwanHwang生物技術(shù)系

4、，生命科學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院，延世大學(xué)，韓國首爾120-749基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）是一個由24種鋅依賴性蛋白水解酶組成的家族。作為一種在結(jié)構(gòu)上與基質(zhì)降解酶相關(guān)的家族，MMP在各種破壞性過程中發(fā)揮了重要的作用，其中包括炎癥、腫瘤侵襲和皮膚老化（4）等。根據(jù)底物優(yōu)先和結(jié)構(gòu)同源性可以將蛋白酶細(xì)分為不同的官能團(tuán)。人或小鼠的皮膚暴露于紫外線照射可誘導(dǎo)MMP-1（間質(zhì)膠原酶）的合成并由此導(dǎo)致I型和III型膠原蛋白降解的開始；MMP-3（溶基質(zhì)素-1）可以降低基底膜IV型膠原；同時MMP-9（92-kDaIV型明膠酶）可以進(jìn)一步降低由MMP-1產(chǎn)生的膠原片段。嚙齒目動物缺乏MMP-1基因，其功能在這些動物中

5、由MMP-13（5）代替。因?yàn)榈鞍酌缚梢灾苯訁⑴c皮膚的光老化過程（6）,我們可以將MMP活性調(diào)節(jié)作為預(yù)防和治療紫外線引起的皮膚損傷的潛在策略。人們一直在通過各種努力來了解食品與健康之間的關(guān)系。現(xiàn)代營養(yǎng)學(xué)界希望了解特定食品補(bǔ)充劑對機(jī)體的一般性作用，其中皮膚（7）更是重要的研究點(diǎn)。凹唇姜根提琴形凹唇姜根（Roxb）Schltr（印尼語為"temukunci",泰語為"krachai"）是一種主要生長在某些熱帶國家的多年生草本植物。新鮮根狀莖已經(jīng)被用作食品成分以及治療絞痛、干咳、風(fēng)濕病和肌肉疼痛（8）的民間醫(yī)藥成分。近期已有報道稱凹唇姜根提取物具有各種藥理作用

6、（BPE）;其中包括抗炎、抗腫瘤、抗腹瀉、抗痢疾和抗脹氣（9、10）等，除此此外，我們以前的研究表明，對于人皮膚成纖維細(xì)胞（11）,BPE還具有較強(qiáng)的抵御紫外線照射的作用。然而，目前還沒有研究報告涉及到口服BPE的體內(nèi)抗光老化作用。在本研究中，我們將要調(diào)查的是在無毛小鼠體內(nèi)的BPE對于抑制皺紋形成、皮褶增厚、皮膚保濕和經(jīng)皮水分流失（TEWL）和（由基質(zhì)金屬蛋白酶調(diào)節(jié)的）膠原蛋白流失的作用。材料和方法凹唇姜根提琴形凹唇姜根（Roxb）Schltr提取物（BPE）的制備來自慶熙大學(xué)（龍仁，韓國）東方藥材與處理系的Nam-InBaekW±負(fù)責(zé)鑒定了采集自印度尼西亞雅加達(dá)的凹唇姜根莖。相關(guān)的

7、試樣已存入延世大學(xué)（韓國首爾）生物技術(shù)系。干燥的凹唇姜根狀莖被粉碎并用95%乙醇萃取，隨后通過過濾和溶劑蒸發(fā)（產(chǎn)率12.0%）即可得到BPEoBPE包含8.0%的潘多汀A,后者的作用是生物活性化合物（10）。動物和口服我們從動物公司中心實(shí)驗(yàn)室（漢城）購買了白化無毛Hos：HR-1母小鼠（5周齡）。這些小鼠被安置在延世大學(xué)Springer?*KOSFOST1754實(shí)驗(yàn)動物研究中心，具體過程均符合實(shí)驗(yàn)動物護(hù)理和使用指南。小鼠生活在溫度（23±2C）和濕度（55+10%）并且有自動照明（明暗交替：12小時周期）的環(huán)境下。小鼠們可以自由獲取售賣的嚙齒動物食物（JEIL飼料有限公司，大田，韓國

8、）和飲水在開始實(shí)驗(yàn)之前對小鼠進(jìn)行為期1周的馴化，隨后它們會被隨機(jī)分為4組：具體為無口射對照組、UVB照射對照組和BPE處理組（100或200毫克/公斤）。在13周的治療期后會對小鼠進(jìn)行腹膜內(nèi)麻醉劑注射，具體麻醉劑為Zoletil?（維克，卡羅，法國）和Rompun?（拜耳韓國，首爾，韓國）。背部皮膚活檢物質(zhì)在液氮中快速冷凍并儲存于-70C環(huán)境下以便進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄（RT）-PCR、蛋白質(zhì)印跡和明膠酶譜研究。BPE溶解于0.5%（重量/體積）的竣甲基纖維素（CMC）,后者置于5%（v/v）吐溫80下。在13周時間內(nèi)每天通過口服zonde#為小鼠給藥。UVB輻射發(fā)射光譜在275和380納米之間（峰值為3

9、10-315納米）的紫外線燈（TL20W/12RS;飛利浦，埃因霍溫，荷蘭）被用作UVB源。照射強(qiáng)度用UV計測量（型號：585100,瓦爾德曼，Schwenningen,德國）。我們首先確定小鼠背部皮膚上的最小紅斑量（MED）。MED定義為24小時后產(chǎn)生尖銳邊緣紅斑所需要的最小輻射量。確定的MED為大約75兆焦耳/平方厘米。每周3次將小鼠暴露于UVB照射下；第1周的曝光量為1MED,此后每周增加1MED直至達(dá)到4MED的峰值并保持到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。皺紋形成的評估到第13周，無毛小鼠被麻醉后拍攝各小鼠暴露于UVB下的背部皮膚。運(yùn)用硅橡膠制成皮膚表面的印象（副本）（FLEXICO發(fā)展有限公司，波特斯巴，

10、英國）。隨后用立體顯微鏡拍攝所有的皮膚印象（型號為SZH,奧林巴斯，日本大阪）并用Skin-VisiometerSV600軟件加以分析（Courage+Khazaka電子有限公司，德國科?。Ｆゑ藓穸鹊脑u估Kim等人的方法被用于皮褶厚度的評估（12）。在13周UVB照射后使用卡尺測量背部皮膚的皮褶厚度（尾崎制作所股份有限公司，東京，日本）。在測量時用手從小鼠頸部和尾端開始掀開無毛小鼠背部皮膚并在中間位置開始測量皮褶厚度。至少以接近距離進(jìn)行3次測量并計算相應(yīng)平均值。皮膚含水量的評估采用Corneometerp825通過電容方法測定皮膚含水量，儀器被安裝在多探頭AdapterpMPA5（Coura

11、ge+Khazaka電子有限公司）上。TEWL的評估TEWL是表皮屏障功能的關(guān)鍵標(biāo)記物，在最終UVB輻射處理后的一天對小鼠的背部皮膚進(jìn)行TEWL的測量。獲得測量結(jié)果的房間的溫度（23±2C）和濕度（55+10%）均受控。使用配備兩個濕度和溫度傳感器的TewameterTM300開放室系統(tǒng)來確定皮膚表面的水分蒸發(fā)梯度。在中線的左右兩側(cè)分別進(jìn)行一次測量并在傳感器讀數(shù)穩(wěn)定后進(jìn)行記錄（大約為探針放置在皮膚上30秒之后）。按照制造商的說明用設(shè)備軟件確定相應(yīng)的參數(shù)。最終得出6只小鼠的平均值土標(biāo)準(zhǔn)差（SD）實(shí)驗(yàn)結(jié)果，單位為克/hm2。組織學(xué)分析第13周時，小鼠被殺死，其皮膚樣品在10%緩沖的福爾馬

12、林中放置24小時并被包埋在石蠟中。連續(xù)切片（6納米厚）被安裝到硅烷包被的載玻片并用蘇木精和伊紅（H&E）和Masson三色染色法對其進(jìn)行染色。使用配備雙CCD攝像機(jī)的EclipseTE2000U倒置顯微鏡（尼康，東京，日本）來拍攝皮膚組織學(xué)情況。Kimetal.RT-PCR根據(jù)制造商的說明使用Trizol試齊J（Invitrogen公司，卡爾斯巴德，加利福尼亞州，美國）并制備皮膚活體組織的總體RNA并應(yīng)用260/280納米的量化分光光度法。用1間總RNA和dT逆轉(zhuǎn)錄酶預(yù)混料（埃爾皮斯生物技術(shù)，大田，韓國）在20gL的總反應(yīng)體積下合成cDNAoRT按如下方式進(jìn)行：70攝氏度下進(jìn)行盼鐘，4

13、2攝氏度下進(jìn)行60分鐘，94攝氏度下進(jìn)行5分鐘。使用不超過100微升的無菌水稀釋cDNA產(chǎn)物，在含有TakaraLATaq聚合酶（TakaraBio公司，滋賀縣，日本）的25微升反應(yīng)系統(tǒng)中使用5微升的cDNA進(jìn)行PCR。需要使用的引物如下：甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH;內(nèi)部控制）（正向，5'-CCCACTAACATCAAATGGGGA-3'反向，5'-ACACATTGGGGGTAGGAACA-3'）,小鼠MMP-13（正向，5'-CATCCATCCCGTGACCTTAT-3'反向，5'-GCATGACTCTCACAATGCGA-3&

14、#39;）,和小鼠MMP-3（正向，5'-TAGCAGGTTATCCTAAAAGCA-3'反向，5'-CCAGCTATTGCTCTTCAAT-3'）o對GAPDH（95C,30秒，51攝氏度，30秒，72C,45秒）進(jìn)行30擴(kuò)增循環(huán)的熱啟動PCR（95C時5分鐘），又MMP-13（95C,30秒；60C,30秒；72,45秒）進(jìn)行超過26個循環(huán)，XMMP-3（95,30秒；57,30秒；72C,45秒）進(jìn)行28個循環(huán)，此后在熱循環(huán)儀中對每個目標(biāo)物進(jìn)行最終的延伸步驟（在72c時進(jìn)行5分鐘）（GeneAmpPCR2700系統(tǒng)，應(yīng)用生物系統(tǒng)公司，福斯特城，加利福尼亞州

15、，美國）。用1.0%瓊脂糖凝膠電泳分析擴(kuò)增產(chǎn)物并通過Gel-DocQuantityOne軟件（Bio-Rad實(shí)驗(yàn)室，Hercules,CA,USA）實(shí)現(xiàn)染色凝膠的可視化。免疫印跡分析皮膚組織在RIPA緩沖液中勻漿（Sigma-Aldrich公司，圣路易斯，密蘇里州，美國），此后再新加入蛋白酶抑制劑雞尾酒（Sigma-Aldrich公司）并在冰上溫育20分鐘。隨后將勻漿在4c下進(jìn)行15分鐘的15、700xg*g離心處理。使用用蛋白質(zhì)分析試劑盒（Bio-Rad實(shí)驗(yàn)室）測定蛋白濃度。等量蛋白（30微克）煮沸3分鐘，隨后將其投入10%的SDS-PAGE并電泳轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜（濾紙有限公司，Dasse

16、l,德國）。隨后用封閉緩沖液5%脫脂乳，0.1%吐溫20,10mMTris緩沖鹽水（pH7.6）在4c下對印跡進(jìn)行1小時的處理。孵育印跡時使用單克隆抗MMP-3抗體（1:1000稀釋;圣克魯斯生物技術(shù)公司，圣克魯斯，CA,USA）、單克隆抗MMP-13抗體（1:2000稀釋;圣克魯斯生物技術(shù)公司）和單克隆抗微管蛋白抗體（1:1000稀釋；Calbiochem公司，達(dá)姆施塔特，德國），孵育環(huán)境為4c（過夜）。隨后在4c用辣根過氧化物酶綴合薩利抗體進(jìn)行2小時的膜孵育（1:2000稀釋；圣克魯斯生物技術(shù)公司）。使用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光（ECL）檢測試劑盒（埃爾皮斯生物科技）檢測結(jié)合的抗體并使用LAS3000

17、生物成像分析系統(tǒng)（富士膠片公司，東京，日本）實(shí)現(xiàn)可視化。使用2.0.多針距版本的軟件對紗片密度進(jìn)行對比（富士膠片公司）。明膠酶譜為了確定MMP-2和-9的溶明膠活性，我們從皮膚活體組織萃取了蛋白。皮膚標(biāo)本在裂解緩沖液中裂解1M的Tris-鹽酸（pH彳18）、3M氯化鈉、0.5MEDTA、1mM苯甲基氟（PMF）。通過離心分離（15分鐘的15、700xg*離心處理）除去不溶性部分并用Bradford測定法來確定蛋白濃度。如先前所述（13）,在含有明膠的8%聚丙烯酰胺凝膠中進(jìn)行酶譜分析。樣品懸浮在加樣緩沖液10%的SDS、25%甘油、0.25M的Tris（pH值6.8）、0.1%溟酚藍(lán)中并進(jìn)行電泳

18、（采用含1%明膠的8%SDS聚丙烯酰胺凝膠）。使用電泳裝置（Bio-Rad實(shí)驗(yàn)室）在90V下進(jìn)行1個小時的電泳。在室溫下將凝膠用25毫升2.5%的TritonX-100（AcrosOrganics,Geel,比利時）處理1小時以除去SDS。然后在37c下使用發(fā)展中緩沖液進(jìn)行18小時的凝膠培養(yǎng)50毫摩爾Tris（pH值7.8）、10mM的氯化鈣、0.15M氯化鈉。為了檢Springer?*KOSFOSTKimetal.1754測溶明膠活性，通過用0.5%考馬斯亮藍(lán)R-250染色凝膠（飛世爾科技，匹茲堡，PA,USA）實(shí)現(xiàn)蛋白水解條帶可視化隨后使用30%甲醇和10%乙酸進(jìn)行脫色。使用Gel-Doc

19、QuantityOne軟件（Bio-Rad實(shí)驗(yàn)室）測定相對的條帶密度。統(tǒng)計分析通過單因子變異數(shù)分析法對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析（ANOVA）,隨后再應(yīng)用鄧肯的多范圍檢驗(yàn)（SPSS12.0;SPSS公司，芝加哥，IL,USA）。數(shù)據(jù)表示為平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）。在*/p<0.05,*/p<0.01下的差異被認(rèn)為是最為顯著。Springer?*KOSFOST1756Kimetal.結(jié)果與討論XUVB誘導(dǎo)皺紋形成影響慢，性UVB輻射會增加角質(zhì)形成細(xì)胞增殖和表皮增生并降低I型膠原的合成，由此會導(dǎo)致皺紋形成和皮膚厚度增加（14）。最近有報道稱可以在護(hù)膚品中使用傳統(tǒng)草藥（15）。已經(jīng)有證據(jù)顯示口服紅參提

20、取物和綠茶多酚可以防止無毛小鼠發(fā)生UVB誘導(dǎo)的皮膚變化，其中包括皺紋、皮膚厚度增加、彈性降低和色素沉著變化。CoitalIVH剛啜(200mgk6)E環(huán)Skin4Rt)iwIOflRM：tmnkmNnwHdhnz<Rn>Miiiutiin(Rmk(AB*0IDO20DHPt.HPFmtk£)krilhmrlk'aeragen)uul)n«ssHPEtmjikjj圖1.姜根提取物對（BPE）紫外線照射無毛小鼠皺紋形成的影響。（A）在第13周拍攝具有代表性的背側(cè)區(qū)和皮膚表面印象（蒙上硅橡膠）。（B）通過皮膚復(fù)制品表面獲得相對粗糙度值。數(shù)據(jù)表示為平均值土標(biāo)準(zhǔn)差

21、（n=6）;與未曝光的小鼠相比KOSFOST#P<0.01;與UVB暴露小鼠相比*p<0.01。£Springer1757FingerrootExtractSuppressesPhotoagingnil+014X1240BPEke)UVH-十才U100200EPE(mg/kg)O1IAB+HpEIVB+BPE(IUUmg/kg)(200tng/kg)圖2。凹唇姜提取物對（BPE）紫外線照射無毛小鼠皮褶厚度（A）和皮膚組織切片（B）的影響。數(shù)據(jù)表示為平均值土標(biāo)準(zhǔn)差（n=6）;與未曝光的小鼠相比#P<0.01;與UVB暴露的小鼠相比*P<0.01,（16、17）。

22、在這項(xiàng)研究中，重復(fù)紫外線曝光顯著增加了無毛小鼠的皺紋形成。然而，通過口服BPE（圖1A）可以很明顯地控制UVB誘導(dǎo)的皺紋形成。圖1B展示了皮膚粗糙參數(shù)的平均值（R值），具體包括RT（皮膚粗糙）、RM（最大粗糙度）、Rz（平均粗糙度）、RP（光滑粗糙度）和Ra（算術(shù)平均粗糙度）。與未經(jīng)處理的UVB照射小鼠相比，經(jīng)100或200毫克/公斤BPE處理小鼠的R值明顯較低。在實(shí)驗(yàn)期間，小鼠每周都進(jìn)行稱重，同時慢性UVB暴露沒有導(dǎo)致其體重發(fā)生任何變化（數(shù)據(jù)未顯示）。我們的結(jié)果表明口服BPE也能減弱UVB誘發(fā)的皺紋形成。OBFE（mg/lcs）圖3。凹唇姜提取物對（BPE）紫外線照射無毛小鼠的皮膚屏障功能（

23、A,皮膚含水量；B,表皮水分丟失，TEWL）的影響。數(shù)據(jù)表示為平均彳標(biāo)準(zhǔn)差（n=6）;與未曝光的小鼠相比#P<0.01;與UVB暴露的小鼠相比*P<0.01,XUVB誘發(fā)皮膚增厚的影響經(jīng)過13周的UVB處理后，UVB輻射使皮褶厚度顯著上升了0.67毫米（與未曝光控制組相比100±7.5%;*P<0.01,N=6）（圖2A）o然而，接受BPE的小鼠的UVB誘導(dǎo)皮膚增厚現(xiàn)象有較大的衰減（100毫克/千克，UVB對照組的76.9±6.7%;200毫克/公斤，UVB對照組的73.1±9.7%;*P<0.01,N=6）（圖2A）。通過H&E染

24、色（圖2B）可以觀察UVB暴露的小鼠表皮厚度的增加。類似于皮褶厚度的結(jié)果，與沒有接受BPE的UVB照射小鼠相比，接受BPE的小鼠表現(xiàn)出較少的UVB誘導(dǎo)表皮增厚。總體來看，這些數(shù)據(jù)表明經(jīng)過BPE處理的小鼠在皮膚厚度上有顯著的下降。XUVB誘導(dǎo)表皮失水的影響皮膚的最重要的功能之一就是作為防止脫水的屏障。皮膚含水量和TEWL是可以衡量保水能力（屏障功能）的指標(biāo)。Miyauchi等人（18）KcSFoST&Sp:ringer1758Kimetal.(A)BPE(mg.Kft)BPE(mgkg)(Bl(3±-1七二泮)ISA*1>«FHFAtl一-MXLHb>H9

25、l;MQ0100200BPE(nigkg)QWB二+*0100200BPE(mg/kg)圖4。凹唇姜提取物（BPE）對紫外線照射無毛小鼠MMP-3（A）和-13（B）mRNA表達(dá)的影響。mRNA水平通過RT-PCR反應(yīng)確定；條帶通過圖像分析進(jìn)行定量。數(shù)據(jù)表示為平均值土標(biāo)準(zhǔn)差并且應(yīng)能代表3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)；與未暴露的小鼠相比#P<0.01;與UVB暴露的小鼠相比*/><0.05,*P<0.01,報道稱，UVB輻射顯著減少豚鼠皮膚表面的水分含量和水潴留。同樣，Haratake等人（19）報道稱UVB照射增加了無毛小鼠皮膚的TEWLoUVB暴露的小鼠表皮含水量為未曝光對照組（圖3A

26、）含量的44.3+5.7%o然而BPE可以增加表皮水分含量（100毫克/千克，UVB對照組146.7±10.1%;200毫克/公斤，UVB對照組的135.9±18.5%;*/p<0.01,N=6）。與此相反，紫外線暴露的小鼠的TEWL水平是未曝光對照組的283.5±30%（圖3B）oBPE降低了TEWL（100毫克/千克，UVB對照組的51.2±9.5%;200毫克/千克，UVB對照組的60.8±5.1%;P<0.01,N=6）。我們的研究結(jié)果表明，BPE顯著增加了紫外線照射皮膚的水分并減少了TEWL,這表示BPE對皮膚屏障功能具有

27、有益效果。對UVB誘導(dǎo)的MMP-3和MMP-13表達(dá)的影響UVB輻射誘導(dǎo)MMP的表達(dá)，由此會改變細(xì)胞外基質(zhì)的代謝（ECM）并且導(dǎo)致發(fā)生與光老化有關(guān)的特性變化。因此，抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的可以減輕光老化誘導(dǎo)（20）的影響。在紫外線引起的皮膚老化（21）過程中MMPs還具有增加真皮膠原降解的作用。Shim等人（11）報道稱BPE可以抑制紫外線引起的MMP-1的表達(dá)并增加人皮膚成纖維細(xì)胞I型前膠原蛋白的表達(dá)。在這種情況下，BPE提取物有很高潛力可作為防止光老化的膳食補(bǔ)充劑。要了解BPE如何在分子水平上抑制UVB引起的皮膚增厚和皺紋形成，我們用RT-PCR和Westernblot分析來確定MMP-3和M

28、MP-13的表達(dá)。UVB照射將MMP-3mRNA水平增加至未曝光對照組相應(yīng)水平的175+22.9%并將MMP-13的水平增加至220±28.3%。BPE可顯著降低MMP-3mRNA水平（100毫克/千克，UVB對照組的80+5.7%,*/P<0.05;200毫克/千克，UVB對照組的67.6±4.3%,*P<0.01;N=6）（圖4A）。Similarly、BPE顯著減低了MMP-13mRNA水平和劑量依賴性（100毫克/千克，UVB對照組的75±6.4%,*/P<0.05;200毫克/千克,UVB對照組的56.8±9.6%,*/P&l

29、t;0.01;N=6）（圖4B）。同樣，慢性UVB輻射可導(dǎo)致MMP-3蛋白質(zhì)水平（未曝光小鼠水平的300±35.4%）和MMP-13（未曝光小鼠水平的229±19.8%）的顯著上升（*P<0.01,N=6）。BPE可減少M(fèi)MP-3蛋白水平（100毫克/千克，UVB對照組的64.8±9.2%;200毫克/千克,UVB對照組的39.2±8.2%;*/P<0.01,N=6）（圖5A）。BPE亦可減少M(fèi)MP-13蛋白表達(dá)（100毫克/千克,UVB對照組的71.4±12.7%;200毫克/千克，UVB對照組的51.5+8.6%;*P<0

30、.01,N=6）（圖5B）。KOSFOST&Sp:ringer1759【VBMMP3HPE(mgkg)100a-Tubulln網(wǎng)BPE皿何0000aooOB5050505V3-3221105000前00500u2211g>一LWiJd;nM凹唇姜提取物對光老化的抑制作用10010。BPE卬里D0200BPE(mgleg)圖5。凹唇姜提取物對（BPE）對紫外線照射無毛小鼠MMP-3（A）和-13（B）蛋白表達(dá)的影響。蛋白質(zhì)水平通過免疫印跡分析確定；條帶通過圖像分析進(jìn)行定量。數(shù)據(jù)表示為平均值土標(biāo)準(zhǔn)差并且能代表3次獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)；與未暴露的小鼠相比#P<0.01;與UVB暴露的小鼠相

31、比*/><0.05,*P<0.01,BPE(mg/kg)100200(723)二EEIMHS?Jm=lwh矍nltml2504i至J著二才一王蕓>一，一主3Q0200BPE10。疑BPE(mg/kg)圖6。凹唇姜提取物對（BPE）對紫外線照射無毛小鼠體內(nèi)MMP-2（A）和-9（B）活動的影響。MMP-2和MMP-9的活動經(jīng)明膠酶譜確定；條帶通過圖像分析進(jìn)行定量。數(shù)據(jù)表示為平均值土標(biāo)準(zhǔn)差并能代表3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)；與未曝光的小鼠相比#P<0.01;與UVB暴露小鼠相比*P<0.05,*P<0.01對UVB誘導(dǎo)的MMP-2和MMP-9活性的影響MMP-2和MMP

32、-9屬于明膠，其中的蛋白水解消化表皮基底膜的主要組成部分例如，明膠（變性膠原蛋白）和IV型和VII型膠原。止匕外，最近的研究表明，UVB誘導(dǎo)明膠活性可在UVB引起的皮膚損傷中發(fā)揮重要的作用，其中就包括皮膚增厚和皺口服BPE顯著抑制了UVB誘導(dǎo)的MMP-2（100毫克/千克,UVB對照組的75.9±6%;200毫克/公斤，UVB對照組的67.3士&Sp:ringer紋形成（4）。BPEXMMP活性的作用由明膠酶譜確定。慢性UVB照射可將MMP-2活性增加至223.2±22.4%。BPEMMP活性的作用由明膠酶譜確定。慢性UVB照射將MMP-2活性增加至未曝光小鼠活性的

33、223.2±22.4%并將MMP-9活性增加至258.3+42.1%（*P<0.01,N=6）（圖6）。*KoSFoST16.2%;*/P<0.01,N=6）（圖6A）。BPE也能強(qiáng)烈抑制MMP-9活性（100毫克/千克,UVB對照組的58.8±3.8%;2001760Kimetal.毫克/千克，UVB對照組的56.9±9.1%;*/P<0.01,N=6）（圖6B）。我們的結(jié)果表明BPE強(qiáng)烈抑制這些蛋白酶的UVB誘導(dǎo)表達(dá)，這表明BPE可能會減弱真皮層膠原蛋白分解，從而減少皺紋形成。本研究表明，BPE口服可產(chǎn)生抗起皺和保濕效果。通過我們的研究結(jié)果可

34、以很明顯地看出BPE很有潛力作為有效的全身光防護(hù)劑并被用于預(yù)防和治療UVB誘導(dǎo)光老化。從藥用植物中分離天然化合物，可降低基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)并增加前膠原合成，目前這些方面已經(jīng)成為了抗光老化研究的主要焦點(diǎn)。舉例來說，有報道稱某些類黃酮化合物，例如柚皮素、芹菜素、漢黃苓素、山奈酚、榔皮素等可以調(diào)節(jié)MMP-1和1型前膠原的表達(dá)水平（22）。已經(jīng)有報道稱凹唇姜根狀莖含有精油、喬松酮、山姜、喬松素、小豆蔻明、boesenbergin、1、8-枝樹腦以及其他物質(zhì)（23、24）。需要對這些化合物進(jìn)行更多研究以找出其中具有抗光老化作用的官能劑。此外還需進(jìn)行臨床研究以確定飲食用BPE對人體皮膚光老化的的有益效果

35、。參考文獻(xiàn)1. MukherjeeS、DateA、PatravaleV、KortingHC、RoederA、WeindlG維甲酸對皮膚老化的治療：臨床有效性和安全性的概述。Clin.Interv.Aging1:327-348（2006年）2. VincentiMP、BrinckerhoffCE膠原酶轉(zhuǎn)錄調(diào)控（MMP-1,MMP-13）基因?qū)﹃P(guān)節(jié)炎的作用：復(fù)雜信號通路整合對基因特異性轉(zhuǎn)錄因子的募集。ArthritisRes.4:157-164（2002年）3. ChungJH。亞洲人的光老化。Photodermatol.Photo.19:109-121（2003年）4. RittieL,Fish

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