1、會計(jì)學(xué)1細(xì)胞化學(xué)細(xì)胞化學(xué)(huxu)染色檢驗(yàn)染色檢驗(yàn)第一頁，共10頁。 涂片應(yīng)新鮮制作、厚薄適宜。涂片應(yīng)新鮮制作、厚薄適宜。TMB TMB 配制在配制在85858888的乙醇溶液中染色效果較好，勿用的乙醇溶液中染色效果較好，勿用90909595乙醇，否則細(xì)胞表面蛋白質(zhì)很快凝固，妨礙試劑向胞內(nèi)滲入乙醇，否則細(xì)胞表面蛋白質(zhì)很快凝固，妨礙試劑向胞內(nèi)滲入而使顯色反應(yīng)減弱或消失。而使顯色反應(yīng)減弱或消失。過氧化氫溶液需新鮮配制，其濃度與加入量不能隨意更改。涂片中過氧化氫溶液需新鮮配制，其濃度與加入量不能隨意更改。涂片中粒細(xì)胞看不見陽性顆粒粒細(xì)胞看不見陽性顆粒(kl)(kl)，紅細(xì)胞呈棕色或綠色，即表示，紅

2、細(xì)胞呈棕色或綠色，即表示過氧化氫過濃。若過氧化氫加于血片上不產(chǎn)生氣泡，則示無效過氧化氫過濃。若過氧化氫加于血片上不產(chǎn)生氣泡，則示無效。染色液適宜染色液適宜pHpH值應(yīng)為值應(yīng)為5.55.5，若，若pHpH值值 5.0 5.0會出現(xiàn)假陽性結(jié)果。會出現(xiàn)假陽性結(jié)果。試劑應(yīng)置于低溫暗處，防止光線照射失效。試劑應(yīng)置于低溫暗處，防止光線照射失效。染色時加稀過氧化氫溶液之后必須與染色液充分混勻，否則同一片染色時加稀過氧化氫溶液之后必須與染色液充分混勻，否則同一片子上細(xì)胞染色情況不一致。子上細(xì)胞染色情況不一致。第2頁/共10頁第二頁，共10頁。 POX POX染色是鑒別急性粒細(xì)胞白血病染色是鑒別急性粒細(xì)胞白血病

3、(acute myeloblastic leukemia, (acute myeloblastic leukemia, AML)AML)、急性單核細(xì)胞白血病、急性單核細(xì)胞白血病(acute monocytic leukemia, AMOL)(acute monocytic leukemia, AMOL)、 急性急性淋巴細(xì)胞白血病淋巴細(xì)胞白血病(acute lymphocytic leukemia, ALL)(acute lymphocytic leukemia, ALL)的重要細(xì)胞化學(xué)染的重要細(xì)胞化學(xué)染色方法。色方法。AMLAML時白血病細(xì)胞可呈陽性反應(yīng)時白血病細(xì)胞可呈陽性反應(yīng), , 陽性顆粒

4、一般較多，陽性顆粒一般較多， 較粗大，較粗大，常呈局限性分布；常呈局限性分布；ALLALL時白血病細(xì)胞呈陰性反應(yīng)；時白血病細(xì)胞呈陰性反應(yīng)；AMOLAMOL時白血病細(xì)胞呈陰時白血病細(xì)胞呈陰性或弱陽性反應(yīng)，陽性時顆粒稀少、細(xì)小性或弱陽性反應(yīng)，陽性時顆粒稀少、細(xì)小(xxio)(xxio)，呈彌散分布。，呈彌散分布。第3頁/共10頁第三頁，共10頁。 目的目的: 了解過碘酸了解過碘酸-雪夫反應(yīng)的原理、方法、注意事項(xiàng)和臨床意義。雪夫反應(yīng)的原理、方法、注意事項(xiàng)和臨床意義。原理原理: 過碘酸過碘酸-雪夫反應(yīng)雪夫反應(yīng)(Periodic acid Schiff reaction, PAS)又稱糖原染色，其原理為

5、過碘酸可將細(xì)胞內(nèi)含有又稱糖原染色，其原理為過碘酸可將細(xì)胞內(nèi)含有1,2-乙二醇基的糖類氧化而產(chǎn)生雙醛基，后者與雪夫乙二醇基的糖類氧化而產(chǎn)生雙醛基，后者與雪夫(Schiff)染料作用，使無色品紅變?yōu)樽霞t色的化合物，定位于含有多糖類的胞質(zhì)中。根據(jù)胞質(zhì)中糖原種類及含量多少染料作用，使無色品紅變?yōu)樽霞t色的化合物，定位于含有多糖類的胞質(zhì)中。根據(jù)胞質(zhì)中糖原種類及含量多少(dusho)，可呈現(xiàn)粗細(xì)不等紅色顆粒、塊狀物或均勻紅色。，可呈現(xiàn)粗細(xì)不等紅色顆粒、塊狀物或均勻紅色。第4頁/共10頁第四頁，共10頁。 1.新鮮干燥的涂片新鮮干燥的涂片(t pin)用用95乙醇固定乙醇固定10min，流水沖洗，待干。，流水

6、沖洗，待干。2.加入加入10g/L過碘酸氧化過碘酸氧化1520min，蒸餾水沖洗，待干。，蒸餾水沖洗，待干。3.置雪夫染液中置雪夫染液中37(或室溫或室溫)染色染色3060min。4.用亞硫酸溶液沖洗用亞硫酸溶液沖洗3次后，再用流水沖洗次后，再用流水沖洗23min，待干。，待干。5.20g/L甲綠復(fù)染甲綠復(fù)染1020min。6. 水洗，待干，鏡檢。水洗，待干，鏡檢。7. 結(jié)果判斷：如在胞質(zhì)中出現(xiàn)彌散狀、顆粒狀或塊狀紅色為陽性。胞質(zhì)無色或無顆粒為糖原陰性。反應(yīng)強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：結(jié)果判斷：如在胞質(zhì)中出現(xiàn)彌散狀、顆粒狀或塊狀紅色為陽性。胞質(zhì)無色或無顆粒為糖原陰性。反應(yīng)強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)如下： 第5頁/共1

7、0頁第五頁，共10頁。 （1 1）中性粒細(xì)胞的分級標(biāo)準(zhǔn)：）中性粒細(xì)胞的分級標(biāo)準(zhǔn)： 0 0分胞質(zhì)無色分胞質(zhì)無色(w s)(w s)。 1 1分胞質(zhì)內(nèi)呈淡紅色，有極少顆粒。分胞質(zhì)內(nèi)呈淡紅色，有極少顆粒。 2 2分胞質(zhì)呈紅色，厚而不透明，或有少量顆粒。分胞質(zhì)呈紅色，厚而不透明，或有少量顆粒。 3 3分胞質(zhì)呈深紅色，顆粒較緊密，但尚有空隙。分胞質(zhì)呈深紅色，顆粒較緊密，但尚有空隙。 4 4分胞質(zhì)呈深紫紅色，顆粒緊密，無空隙。分胞質(zhì)呈深紫紅色，顆粒緊密，無空隙。（2 2）淋巴細(xì)胞分級標(biāo)準(zhǔn)：）淋巴細(xì)胞分級標(biāo)準(zhǔn)： 0 0分胞質(zhì)內(nèi)無色分胞質(zhì)內(nèi)無色(w s)(w s)。 1 1分胞質(zhì)內(nèi)呈彌散淡紅或有少數(shù)細(xì)顆粒分胞

8、質(zhì)內(nèi)呈彌散淡紅或有少數(shù)細(xì)顆粒(10(10個個) )。 2 2分胞質(zhì)內(nèi)呈彌散較深的紅色或有多數(shù)細(xì)顆粒分胞質(zhì)內(nèi)呈彌散較深的紅色或有多數(shù)細(xì)顆粒(10(10個個) )。 3 3分胞質(zhì)內(nèi)有較粗顆粒或少數(shù)小塊狀紅色物質(zhì)。分胞質(zhì)內(nèi)有較粗顆?；蛏贁?shù)小塊狀紅色物質(zhì)。 4 4分胞質(zhì)內(nèi)呈多數(shù)粗顆粒并有大塊紅色物質(zhì)。分胞質(zhì)內(nèi)呈多數(shù)粗顆粒并有大塊紅色物質(zhì)。第6頁/共10頁第六頁，共10頁。 （3 3）幼紅細(xì)胞的分級標(biāo)準(zhǔn)：）幼紅細(xì)胞的分級標(biāo)準(zhǔn)： 0 0分胞質(zhì)內(nèi)無色。分胞質(zhì)內(nèi)無色。 1 1分胞質(zhì)內(nèi)有少數(shù)分散分胞質(zhì)內(nèi)有少數(shù)分散(fnsn)(fnsn)細(xì)小顆?；驕\紅色彌漫物質(zhì)。細(xì)小顆?；驕\紅色彌漫物質(zhì)。 2 2分胞質(zhì)中有分胞質(zhì)

9、中有1 12 2個濃的顆?；虬|(zhì)呈彌散紅色。個濃的顆?；虬|(zhì)呈彌散紅色。 3 3分胞質(zhì)中有較粗紅色顆粒直至小塊紅色物質(zhì)。分胞質(zhì)中有較粗紅色顆粒直至小塊紅色物質(zhì)。 4 4分胞質(zhì)中有粗大紅色塊或有粗大致密的紫紅色顆粒。分胞質(zhì)中有粗大紅色塊或有粗大致密的紫紅色顆粒。（4 4）巨核細(xì)胞的分級標(biāo)準(zhǔn)：）巨核細(xì)胞的分級標(biāo)準(zhǔn)： 0 0分胞質(zhì)內(nèi)無紅色顆粒，但仍呈彌散性著色，此系其它多糖類物質(zhì)。分胞質(zhì)內(nèi)無紅色顆粒，但仍呈彌散性著色，此系其它多糖類物質(zhì)。 1 1分少量糖原包涵體，常定位于核膜附近。分少量糖原包涵體，常定位于核膜附近。 2 2分中等量糖原包涵體，定位于核膜處或分散分中等量糖原包涵體，定位于核膜處或分散

10、(fnsn)(fnsn)在胞質(zhì)中，約占胞質(zhì)的在胞質(zhì)中，約占胞質(zhì)的1/31/3。 3 3分大量糖原包涵體分散分大量糖原包涵體分散(fnsn)(fnsn)于胞質(zhì)中，占胞質(zhì)于胞質(zhì)中，占胞質(zhì)1/21/2。 4 4分糖原包涵體充滿整個胞質(zhì)。分糖原包涵體充滿整個胞質(zhì)。第7頁/共10頁第七頁，共10頁。 1.1.所用染色缸及器具應(yīng)十分清潔、干燥。所用染色缸及器具應(yīng)十分清潔、干燥。2.2.雪夫雪夫(Schiff)(Schiff)染液應(yīng)避光密封冰箱保存，一般染液應(yīng)避光密封冰箱保存，一般44下可保存下可保存6 6個月，試劑應(yīng)為無色，變紅則失效。個月，試劑應(yīng)為無色，變紅則失效。3.3.10g/L10g/L過碘酸溶液

11、質(zhì)量要保證，變黃則不能用。氧化時間要準(zhǔn)確，以過碘酸溶液質(zhì)量要保證，變黃則不能用。氧化時間要準(zhǔn)確，以20min20min為宜。為宜。4.4.染色時間和溫度應(yīng)相對恒定，一般以染色時間和溫度應(yīng)相對恒定，一般以3737染色染色30min30min最適宜。最適宜。5.5.染色好的涂片應(yīng)及時檢查，以免褪色染色好的涂片應(yīng)及時檢查，以免褪色(tu s)(tu s)。6.6.偏重亞硫酸鈉易于分解，過碘酸易潮解，應(yīng)密封干燥保存。偏重亞硫酸鈉易于分解，過碘酸易潮解，應(yīng)密封干燥保存。7.7.堿性品紅的質(zhì)量對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響。堿性品紅的質(zhì)量對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響。注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)第8頁/共10頁第八頁，共10頁。 1.紅血病、

12、紅白血病及貧血類型紅血病、紅白血病及貧血類型(lixng)的鑒別：紅血病、紅白血病、缺鐵性貧血、重型地中海貧血及骨髓增生異常綜合征時幼紅細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng)；溶血性貧血、急慢性白血病、淋巴瘤時幼紅細(xì)胞呈陰性反應(yīng)或弱陽性反應(yīng)；再生障礙性貧血、巨幼細(xì)胞貧血時幼紅細(xì)胞呈陰性反應(yīng)。的鑒別：紅血病、紅白血病、缺鐵性貧血、重型地中海貧血及骨髓增生異常綜合征時幼紅細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng)；溶血性貧血、急慢性白血病、淋巴瘤時幼紅細(xì)胞呈陰性反應(yīng)或弱陽性反應(yīng)；再生障礙性貧血、巨幼細(xì)胞貧血時幼紅細(xì)胞呈陰性反應(yīng)。2.白血病類型白血病類型(lixng)的鑒別：的鑒別：AML原始粒細(xì)胞與早幼粒細(xì)胞呈陰性或弱陽性反應(yīng)，以彌漫性反應(yīng)為主；原始粒細(xì)胞