1、第三章第三章環(huán)境中微生物的主要類群環(huán)境中微生物的主要類群授課教員：曾惠講師授課教員：曾惠講師軍事預(yù)防醫(yī)學(xué)院環(huán)境衛(wèi)生學(xué)教研室軍事預(yù)防醫(yī)學(xué)院環(huán)境衛(wèi)生學(xué)教研室20102010年年6 6月月3030日日20082008級級預(yù)防醫(yī)學(xué)預(yù)防醫(yī)學(xué)5 5年制本科年制本科微生物的類群龐雜微生物的類群龐雜 目前已經(jīng)知道的微生物約有目前已經(jīng)知道的微生物約有10萬種，分布在自然環(huán)境中。萬種，分布在自然環(huán)境中。農(nóng)田上層農(nóng)田上層15cm處微生物的數(shù)量處微生物的數(shù)量微生物微生物每克土壤中的數(shù)量每克土壤中的數(shù)量細(xì)菌細(xì)菌9.8107放線菌放線菌2.0106真菌真菌1.2105藻菌藻菌2.5104原生動物原生動物3.0104菌落數(shù)

2、與空氣清潔度的關(guān)系菌落數(shù)與空氣清潔度的關(guān)系空氣清潔度空氣清潔度菌落數(shù)菌落數(shù)最清潔的空氣最清潔的空氣1-21-2潔凈空氣潔凈空氣3030個(gè)以下個(gè)以下普通空氣普通空氣30-15030-150輕度污染空氣輕度污染空氣300300以下以下嚴(yán)重污染空氣嚴(yán)重污染空氣301301以上以上人體微生態(tài)中微生物的含量人體微生態(tài)中微生物的含量部位部位含量含量部位部位含量含量眼睛1g肺20g鼻腔10g腸道1000g口腔20g生殖道20 g皮膚200g總量總量1271g人體消化系統(tǒng)中微生物群體人體消化系統(tǒng)中微生物群體 (個(gè)個(gè)/g)回腸回腸結(jié)腸結(jié)腸直腸或糞便直腸或糞便雙歧桿菌雙歧桿菌1041071010擬桿菌擬桿菌103

3、1081010腸桿菌腸桿菌103106106腸球菌腸球菌107乳桿菌乳桿菌104l按細(xì)胞結(jié)構(gòu)分類：按細(xì)胞結(jié)構(gòu)分類：原核細(xì)胞型微生物原核細(xì)胞型微生物真核細(xì)胞型微生物真核細(xì)胞型微生物非細(xì)胞型微生物非細(xì)胞型微生物l按致病性分類：按致病性分類：致病性微生物致病性微生物條件致病性微生物條件致病性微生物非致病性微生物非致病性微生物 主要內(nèi)容q 概述概述q 原核細(xì)胞型微生物原核細(xì)胞型微生物q 真核細(xì)胞型微生物真核細(xì)胞型微生物q 非細(xì)胞型微生物非細(xì)胞型微生物（重點(diǎn)）（重點(diǎn)）原核微生物與真核微生物在細(xì)胞結(jié)構(gòu)上的根本區(qū)別原核微生物與真核微生物在細(xì)胞結(jié)構(gòu)上的根本區(qū)別生物性狀生物性狀原核微生物原核微生物真核微生物真核

4、微生物核核擬核，無核膜、核仁擬核，無核膜、核仁真正的核，有核膜、核仁真正的核，有核膜、核仁DNA1條條1至數(shù)條至數(shù)條,與與RNA、組蛋白合、組蛋白合核糖體核糖體70S80S(細(xì)胞質(zhì)中細(xì)胞質(zhì)中),70S(細(xì)胞器細(xì)胞器中中)細(xì)胞分裂細(xì)胞分裂二分裂二分裂有絲分裂有絲分裂,減數(shù)分裂減數(shù)分裂有性生殖有性生殖無無有有細(xì)胞器細(xì)胞器無無線粒體、高基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等線粒體、高基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等呼吸鏈呼吸鏈細(xì)胞膜上細(xì)胞膜上線粒體上線粒體上細(xì)胞壁成分細(xì)胞壁成分肽聚糖、磷壁質(zhì)肽聚糖、磷壁質(zhì)多聚糖多聚糖,幾丁質(zhì)幾丁質(zhì)大小大小110m10100m一、原核細(xì)胞型微生物一、原核細(xì)胞型微生物p 細(xì)菌細(xì)菌p 放線菌放線菌p 鞘細(xì)菌鞘細(xì)菌

5、p 滑動細(xì)菌滑動細(xì)菌p 藍(lán)細(xì)菌藍(lán)細(xì)菌原核型微生物原核型微生物基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、核質(zhì)、基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、核質(zhì)、質(zhì)粒質(zhì)粒質(zhì)粒控制細(xì)菌的某些遺傳性狀（有性生殖、細(xì)質(zhì)粒控制細(xì)菌的某些遺傳性狀（有性生殖、細(xì)菌毒力、耐藥性、代謝酶等）菌毒力、耐藥性、代謝酶等）可能具有特殊結(jié)構(gòu)，如鞭毛、莢膜、芽孢和菌可能具有特殊結(jié)構(gòu)，如鞭毛、莢膜、芽孢和菌毛等。毛等。以簡單二分裂法無性繁殖，僅需以簡單二分裂法無性繁殖，僅需20203030分鐘分鐘（一）細(xì)菌（一）細(xì)菌（BacteriaBacteria）（2 2）環(huán)境中常見致病菌與條件致病菌）環(huán)境中常見致病菌與條件致病菌 P23-24P23-2

6、4表表3-13-1（3 3）環(huán)境中其他常見細(xì)菌）環(huán)境中其他常見細(xì)菌 假單胞菌屬假單胞菌屬黃桿菌屬黃桿菌屬產(chǎn)堿桿菌屬產(chǎn)堿桿菌屬無色桿菌屬無色桿菌屬微球菌屬微球菌屬 乳桿菌屬乳桿菌屬其它細(xì)菌其它細(xì)菌 假單胞菌屬（Pseudomonas） 革蘭陰性桿菌，有鞭毛能運(yùn)動革蘭陰性桿菌，有鞭毛能運(yùn)動在自然界分布廣泛在自然界分布廣泛在低溫下能很好生長，可引起冷藏食品的腐敗在低溫下能很好生長，可引起冷藏食品的腐敗變質(zhì)。變質(zhì)。 能利用多種有機(jī)物（是迄今為止發(fā)現(xiàn)的自然界能利用多種有機(jī)物（是迄今為止發(fā)現(xiàn)的自然界雜食性最強(qiáng)的微生物，能以雜食性最強(qiáng)的微生物，能以8080多種有毒有機(jī)物多種有毒有機(jī)物為碳源），故在自然界物質(zhì)

7、轉(zhuǎn)化中起重要作用，為碳源），故在自然界物質(zhì)轉(zhuǎn)化中起重要作用，常被作為污染物生物降解的篩選菌種常被作為污染物生物降解的篩選菌種。（二）放線菌(Actinomycetes)l 介于細(xì)菌和真菌之間。介于細(xì)菌和真菌之間。l 分布廣泛，尤其土壤中（土壤特有的泥腥味）。分布廣泛，尤其土壤中（土壤特有的泥腥味）。l 能產(chǎn)生大量多種抗生素（已經(jīng)超過能產(chǎn)生大量多種抗生素（已經(jīng)超過4000種）種）l 可分解多種有機(jī)物質(zhì)（烴類、氰類、吡啶、纖維可分解多種有機(jī)物質(zhì)（烴類、氰類、吡啶、纖維素等），在環(huán)境治理中具有潛在應(yīng)用價(jià)值。素等），在環(huán)境治理中具有潛在應(yīng)用價(jià)值。 l 少數(shù)菌種對人類有致病作用，如星形偌卡菌引起少數(shù)菌種

8、對人類有致病作用，如星形偌卡菌引起肺部化膿性感染。肺部化膿性感染。l 鏈霉菌屬、諾卡菌屬、小單孢菌屬鏈霉菌屬、諾卡菌屬、小單孢菌屬鏈霉菌屬鏈霉菌屬l 最高等的放線菌，具有各種形最高等的放線菌，具有各種形態(tài)的孢子絲。態(tài)的孢子絲。l 近千種，大多生活在土壤中。近千種，大多生活在土壤中。l 鏈霉菌能分解多種有機(jī)質(zhì)。鏈霉菌能分解多種有機(jī)質(zhì)。l 產(chǎn)生抗生素菌株的主要來源。產(chǎn)生抗生素菌株的主要來源。諾卡菌屬諾卡菌屬l 部分可對人致病，我國主要是部分可對人致病，我國主要是星形諾卡菌，經(jīng)外環(huán)境侵入傷星形諾卡菌，經(jīng)外環(huán)境侵入傷口或吸人肺部，引起有特殊癥口或吸人肺部，引起有特殊癥狀的化膿性感染。狀的化膿性感染。l

9、 在自然環(huán)境中將有機(jī)質(zhì)轉(zhuǎn)化，在自然環(huán)境中將有機(jī)質(zhì)轉(zhuǎn)化，如烴類的降解、氰類的轉(zhuǎn)化，如烴類的降解、氰類的轉(zhuǎn)化，在污水處理中起重要作用。在污水處理中起重要作用。小單孢菌屬小單孢菌屬l 多分布于土壤及污泥中。多分布于土壤及污泥中。l 分解有機(jī)質(zhì)及產(chǎn)生抗生素。分解有機(jī)質(zhì)及產(chǎn)生抗生素。l 棘孢小單孢菌可產(chǎn)生慶大霉素。棘孢小單孢菌可產(chǎn)生慶大霉素。（三）鞘細(xì)菌單細(xì)胞連成的絲狀體細(xì)菌，絲狀體外包圍一單細(xì)胞連成的絲狀體細(xì)菌，絲狀體外包圍一層由有機(jī)物或無機(jī)物組成的鞘套。絲狀體不層由有機(jī)物或無機(jī)物組成的鞘套。絲狀體不分枝或形成假分枝，靠游動孢子或不能游動分枝或形成假分枝，靠游動孢子或不能游動的分生孢子行無性繁殖，常生

10、存于淡水或海的分生孢子行無性繁殖，常生存于淡水或海水中。水中。主要有球衣菌和鐵細(xì)菌屬。主要有球衣菌和鐵細(xì)菌屬。球衣菌球衣菌l 較強(qiáng)的分解有機(jī)物的能力，常生存于流動的、較強(qiáng)的分解有機(jī)物的能力，常生存于流動的、有機(jī)物污染的淡水中；有機(jī)物污染的淡水中；l 活性污泥曝氣池中常見菌種，數(shù)量過多時(shí)會引活性污泥曝氣池中常見菌種，數(shù)量過多時(shí)會引起污泥膨脹。起污泥膨脹。鐵細(xì)菌屬鐵細(xì)菌屬l 能將低鐵氧化為高鐵。能將低鐵氧化為高鐵。l 廣泛存在于自然界，在鐵素循環(huán)中占有重要位置。廣泛存在于自然界，在鐵素循環(huán)中占有重要位置。鐵質(zhì)水管腐蝕與堵塞常因環(huán)境中鐵細(xì)菌活動引起。鐵質(zhì)水管腐蝕與堵塞常因環(huán)境中鐵細(xì)菌活動引起。（四）

11、滑動細(xì)菌（四）滑動細(xì)菌不借鞭毛而靠菌體蠕動進(jìn)行滑動的一類細(xì)菌。不借鞭毛而靠菌體蠕動進(jìn)行滑動的一類細(xì)菌。多為絲狀體，也有桿狀或球狀。多為絲狀體，也有桿狀或球狀。貝氏硫菌屬，為絲狀體，分布于淡水或海水中，貝氏硫菌屬，為絲狀體，分布于淡水或海水中，能氧化能氧化H H2 2S S為硫，對自然界硫素循環(huán)起重要作為硫，對自然界硫素循環(huán)起重要作用。用。噬纖維菌屬呈桿狀，兩端略尖，細(xì)胞柔軟，可噬纖維菌屬呈桿狀，兩端略尖，細(xì)胞柔軟，可滑行。具有很強(qiáng)的分解纖維素的能力?；小＞哂泻軓?qiáng)的分解纖維素的能力。為單細(xì)胞生物，呈球形或桿狀。為單細(xì)胞生物，呈球形或桿狀。過去稱為藍(lán)藻或藍(lán)綠藻過去稱為藍(lán)藻或藍(lán)綠藻（Blue-gr

12、een algae）,近近年根據(jù)其僅有原始核而將其列入原核微生物。年根據(jù)其僅有原始核而將其列入原核微生物。光合型微生物，是生態(tài)系統(tǒng)的首要環(huán)節(jié)（第一個(gè)光合型微生物，是生態(tài)系統(tǒng)的首要環(huán)節(jié)（第一個(gè)產(chǎn)氧的光合生物）。自然界分布廣泛。產(chǎn)氧的光合生物）。自然界分布廣泛。營養(yǎng)要求簡單。水質(zhì)污染時(shí)，可過量繁殖，形成營養(yǎng)要求簡單。水質(zhì)污染時(shí)，可過量繁殖，形成“水華水華”。常見屬：微囊藻屬、魚腥藻屬、顫藻屬。常見屬：微囊藻屬、魚腥藻屬、顫藻屬。（五）藍(lán)細(xì)菌 (Blue bacteria,Cyanobacteria)藍(lán)藻門微微 囊囊 藻藻界、門、綱、目、科、屬、種顫顫 藻藻藍(lán)藻門魚魚 腥腥 藻藻藍(lán)藻門二、真核細(xì)胞型

13、微生物v具有分化程度較高的真正的核，有核膜、核具有分化程度較高的真正的核，有核膜、核仁和染色體，胞漿內(nèi)有完整的細(xì)胞器。仁和染色體，胞漿內(nèi)有完整的細(xì)胞器。v真菌真菌v藻類（低等植物）藻類（低等植物）v原生動物原生動物 （低等動物）（低等動物）（一）真菌（Fungus）o 與原生生物的主要區(qū)別在于有較硬的細(xì)胞壁與原生生物的主要區(qū)別在于有較硬的細(xì)胞壁o 真菌按形態(tài)分為真菌按形態(tài)分為單細(xì)胞單細(xì)胞和和多細(xì)胞多細(xì)胞兩類。兩類。單細(xì)胞真菌為單細(xì)胞真菌為酵母菌酵母菌和和類酵母菌類酵母菌（yeast）。）。多細(xì)胞真菌又稱多細(xì)胞真菌又稱霉菌霉菌(mold)。o 分布廣泛，存在于各種環(huán)境和生物體內(nèi)。分布廣泛，存在于

14、各種環(huán)境和生物體內(nèi)。o 衛(wèi)生學(xué)效應(yīng)：衛(wèi)生學(xué)效應(yīng)：引起物質(zhì)變質(zhì)腐爛的主要原因引起物質(zhì)變質(zhì)腐爛的主要原因發(fā)酵、制藥、食品工業(yè)等中具有重要作用發(fā)酵、制藥、食品工業(yè)等中具有重要作用少數(shù)致病少數(shù)致病霉菌常見代表屬霉菌常見代表屬 曲霉屬曲霉屬：廣泛分布于谷物、土壤等上，分解廣泛分布于谷物、土壤等上，分解有機(jī)質(zhì)能力極強(qiáng)，可造成霉變。為釀造、食有機(jī)質(zhì)能力極強(qiáng)，可造成霉變。為釀造、食品、制藥行業(yè)的重要菌屬。品、制藥行業(yè)的重要菌屬。青霉屬青霉屬：典型結(jié)構(gòu)為帚狀枝，產(chǎn)生單輪或多典型結(jié)構(gòu)為帚狀枝，產(chǎn)生單輪或多輪對稱或不對稱的掃帚狀小梗，多呈藍(lán)綠色。輪對稱或不對稱的掃帚狀小梗，多呈藍(lán)綠色。（二）藻類（algae）藻類是

15、一大群低等植物，細(xì)胞分化比較低級藻類是一大群低等植物，細(xì)胞分化比較低級( (無無跟莖葉花等跟莖葉花等) )。廣泛浮游于淡水及海水的上層，也稱浮游生物廣泛浮游于淡水及海水的上層，也稱浮游生物或浮游植物或浮游植物（phytoplankton）。）。是水生生態(tài)系是水生生態(tài)系統(tǒng)的初級生產(chǎn)者，是水生食物鏈的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。統(tǒng)的初級生產(chǎn)者，是水生食物鏈的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。 含葉綠體，行光合作用，同時(shí)呈現(xiàn)不同的顏色。含葉綠體，行光合作用，同時(shí)呈現(xiàn)不同的顏色。利用二氧化碳，對利用二氧化碳，對N、P需求多。需求多。常見藻類常見藻類 ：綠藻：綠藻：因藻體中含葉綠素及少量葉黃素，細(xì)胞因藻體中含葉綠素及少量葉黃素，細(xì)胞呈草綠色。呈

16、草綠色。l小球藻富含蛋白質(zhì)和脂肪，可大量培養(yǎng)作為小球藻富含蛋白質(zhì)和脂肪，可大量培養(yǎng)作為飼料和食品飼料和食品 。硅藻：硅藻：含有大量硅質(zhì)和果膠質(zhì)，硅藻死亡后，含有大量硅質(zhì)和果膠質(zhì)，硅藻死亡后，形成硅藻土，可作為過濾劑、絕緣劑等。形成硅藻土，可作為過濾劑、絕緣劑等。 甲藻甲藻：淡水中的甲藻喜酸性環(huán)境，當(dāng)水中富含：淡水中的甲藻喜酸性環(huán)境，當(dāng)水中富含腐殖酸時(shí)，常有甲藻存在；海洋腐殖酸時(shí)，常有甲藻存在；海洋“赤潮赤潮”常由常由甲藻大量增殖引起；甲藻產(chǎn)毒可積于貝體而使甲藻大量增殖引起；甲藻產(chǎn)毒可積于貝體而使人體中毒。人體中毒。 夜光藻夜光藻 藻體呈球形，透明，肉眼可見，腹面有一條凹溝，口位于溝中央，藻體呈

17、球形，透明，肉眼可見，腹面有一條凹溝，口位于溝中央，近口處長出一根極小的鞭毛和一條粗大的鞭毛，海生。細(xì)胞內(nèi)原近口處長出一根極小的鞭毛和一條粗大的鞭毛，海生。細(xì)胞內(nèi)原生質(zhì)淡紅色，大量密集時(shí)呈紅色，受波濤振蕩刺激以后放出熒光，生質(zhì)淡紅色，大量密集時(shí)呈紅色，受波濤振蕩刺激以后放出熒光，是我國赤潮的主要藻類。是我國赤潮的主要藻類。本種可產(chǎn)生麻痹性貝毒。本種可產(chǎn)生麻痹性貝毒。膝溝藻膝溝藻日本水域該種赤潮引起魚類大量死亡。日本水域該種赤潮引起魚類大量死亡。是南海北部沿海主要的赤潮生物。是南海北部沿海主要的赤潮生物。 本種可產(chǎn)生腹瀉性貝毒。本種可產(chǎn)生腹瀉性貝毒。 渤海、東海、香港和南沙群島等水域渤海、東海、

18、香港和南沙群島等水域有分布，形成赤潮的主要種類之一。有分布，形成赤潮的主要種類之一。 原甲藻原甲藻（三）原生動物v形態(tài)與構(gòu)造形態(tài)與構(gòu)造 ：單細(xì)胞低等動物。單細(xì)胞低等動物。v衛(wèi)生學(xué)意義：衛(wèi)生學(xué)意義：水中重要浮游生物?？赏淌臣?xì)菌，在污水處理水中重要浮游生物?？赏淌臣?xì)菌，在污水處理中起一定作用。是活性污泥的主要成分。中起一定作用。是活性污泥的主要成分。某些種類是病原體。某些種類是病原體。v環(huán)境中常見原生動物主要有鞭毛綱、肉足綱和環(huán)境中常見原生動物主要有鞭毛綱、肉足綱和纖毛綱。纖毛綱。l 鞭毛綱：鞭毛綱：具有一至多根鞭毛。多生活于有機(jī)質(zhì)具有一至多根鞭毛。多生活于有機(jī)質(zhì)較多的污水。綠眼蟲、波豆蟲、滴蟲等

19、常見。較多的污水。綠眼蟲、波豆蟲、滴蟲等常見。l 肉足綱：肉足綱：運(yùn)動細(xì)胞器是鞭毛，運(yùn)動器官是偽足，運(yùn)動細(xì)胞器是鞭毛，運(yùn)動器官是偽足，也是攝食細(xì)胞器也是攝食細(xì)胞器l變形蟲，生活在富有藻類、含變形蟲，生活在富有藻類、含氧量較高的水塘或溝渠中或潮氧量較高的水塘或溝渠中或潮濕土壤的表層。濕土壤的表層。l 纖毛綱：纖毛綱：運(yùn)動細(xì)胞器是纖毛，也是攝食細(xì)胞器。運(yùn)動細(xì)胞器是纖毛，也是攝食細(xì)胞器。結(jié)構(gòu)較復(fù)雜。包括游泳型和固著型。結(jié)構(gòu)較復(fù)雜。包括游泳型和固著型。 環(huán)境中常見原生動物目前已知有15000種：鞭毛綱：鞭毛綱：運(yùn)動細(xì)胞器是鞭毛，具有一至多根鞭毛。運(yùn)動細(xì)胞器是鞭毛，具有一至多根鞭毛。如綠眼蟲、波豆蟲、滴

20、蟲等。多生活在污水中。如綠眼蟲、波豆蟲、滴蟲等。多生活在污水中。 纖毛綱：纖毛綱：運(yùn)動細(xì)胞器是纖毛。在活性污泥污水處運(yùn)動細(xì)胞器是纖毛。在活性污泥污水處理池中，常以原生動物的類群與比例作為污水凈理池中，常以原生動物的類群與比例作為污水凈化的指標(biāo)。一般情況下，普通單體鐘蟲與群體鐘化的指標(biāo)。一般情況下，普通單體鐘蟲與群體鐘蟲較多時(shí)，說明污泥爆氣池運(yùn)轉(zhuǎn)正常。蟲較多時(shí)，說明污泥爆氣池運(yùn)轉(zhuǎn)正常。 三、非細(xì)胞型微生物三、非細(xì)胞型微生物v 特征：特征：不具有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，具有體積極小、結(jié)構(gòu)簡單、專性寄不具有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，具有體積極小、結(jié)構(gòu)簡單、專性寄生、抵抗力特殊的特點(diǎn)。生、抵抗力特殊的特點(diǎn)。v 環(huán)境中的病毒環(huán)境中的

21、病毒 ：空氣中：如流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、天花空氣中：如流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、天花病毒、水痘病毒、風(fēng)疹病毒、腺病毒等。病毒、水痘病毒、風(fēng)疹病毒、腺病毒等。水中：多為腸道病毒。水中：多為腸道病毒。土壤中：可吸附于顆粒內(nèi)而延長存活時(shí)間。土壤中：可吸附于顆粒內(nèi)而延長存活時(shí)間。 食品中：主要是甲型傳染性感染和胃腸炎。許多疾病食品中：主要是甲型傳染性感染和胃腸炎。許多疾病與食用貝類有關(guān)。如與食用貝類有關(guān)。如19881988年上海甲肝大流行。年上海甲肝大流行。 四、環(huán)境中微生物的應(yīng)用及研究前景l(fā) 環(huán)境中的微生物種類繁多，人們發(fā)現(xiàn)并已利環(huán)境中的微生物種類繁多，人們發(fā)現(xiàn)并已利用的微生物屈指可

22、數(shù)。用的微生物屈指可數(shù)。l 發(fā)現(xiàn)、認(rèn)識并利用有益微生物、控制有害的發(fā)現(xiàn)、認(rèn)識并利用有益微生物、控制有害的微生物成為未來微生物學(xué)發(fā)展的主要方向。微生物成為未來微生物學(xué)發(fā)展的主要方向。l 空間技術(shù)等新技術(shù)發(fā)展，太空微生物學(xué)和極空間技術(shù)等新技術(shù)發(fā)展，太空微生物學(xué)和極端微生物學(xué)成為新的研究熱點(diǎn)。端微生物學(xué)成為新的研究熱點(diǎn)。l 極端微生物是依賴于一種或多種極端理化極端微生物是依賴于一種或多種極端理化因子的極端生命形式，主要類群包括嗜熱因子的極端生命形式，主要類群包括嗜熱菌、嗜冷菌、嗜鹽菌、嗜堿菌、嗜酸菌及菌、嗜冷菌、嗜鹽菌、嗜堿菌、嗜酸菌及抗輻射菌?？馆椛渚?。第四章第四章衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法授課內(nèi)

23、容授課內(nèi)容衛(wèi)生微生物學(xué)檢測的特點(diǎn)及基本原則衛(wèi)生微生物學(xué)檢測的特點(diǎn)及基本原則衛(wèi)生指示微生物衛(wèi)生指示微生物衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法衛(wèi)生微生物研究和檢測方法的前景衛(wèi)生微生物研究和檢測方法的前景（重點(diǎn)）（重點(diǎn)）（重點(diǎn)）（重點(diǎn)）一、衛(wèi)生微生物檢測的特點(diǎn)與基本原則特點(diǎn)：特點(diǎn)：l檢測對象：致病、非致病、條件致病微生物檢測對象：致病、非致病、條件致病微生物l標(biāo)本來源：人體、環(huán)境標(biāo)本來源：人體、環(huán)境l環(huán)境中致病微生物數(shù)量少，需要特異的檢測環(huán)境中致病微生物數(shù)量少，需要特異的檢測方法，并且多依靠指示微生物方法，并且多依靠指示微生物一、衛(wèi)生微生物檢測的特點(diǎn)與基本原則特點(diǎn)特點(diǎn)原則原則l樣品的

24、采集原則樣品的采集原則l樣品的運(yùn)送原則樣品的運(yùn)送原則l實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則1.1.樣品必須要有代表性樣品必須要有代表性: :采樣量：滿足檢測要求（采樣量：滿足檢測要求（P37P37）采樣部位：均勻采樣或者有代表性的部位采樣部位：均勻采樣或者有代表性的部位2.2.避免對樣品的污染避免對樣品的污染器材滅菌、無菌操作器材滅菌、無菌操作3.3.避免對樣品中微生物的殺滅和抑制避免對樣品中微生物的殺滅和抑制避免有毒物質(zhì)的殘留和高溫影響避免有毒物質(zhì)的殘留和高溫影響4.4.對樣品進(jìn)行詳細(xì)的標(biāo)記對樣品進(jìn)行詳細(xì)的標(biāo)記（一）樣品的采集原則（一）樣品的采集原則1.1. 盡快送檢：盡快送檢：l 一般一般3-4h

25、3-4h內(nèi)送檢，減少細(xì)菌死亡和進(jìn)一步內(nèi)送檢，減少細(xì)菌死亡和進(jìn)一步繁殖帶來的影響。繁殖帶來的影響。2.2. 注意保護(hù)待檢的微生物：注意保護(hù)待檢的微生物：l 一定的溫度一定的溫度l 加保護(hù)劑加保護(hù)劑l 特殊微生物需要特殊培養(yǎng)基特殊微生物需要特殊培養(yǎng)基3.3. 進(jìn)行完善的樣品交接進(jìn)行完善的樣品交接l 必須有樣品送檢單，與實(shí)驗(yàn)室人員逐項(xiàng)核必須有樣品送檢單，與實(shí)驗(yàn)室人員逐項(xiàng)核對后交接對后交接（二）樣品的運(yùn)送原則（二）樣品的運(yùn)送原則4.4. 根據(jù)生物安全規(guī)定，妥善包裝待運(yùn)輸標(biāo)本根據(jù)生物安全規(guī)定，妥善包裝待運(yùn)輸標(biāo)本l 高致病力禽流感標(biāo)本，須放在大小適合的帶螺高致病力禽流感標(biāo)本，須放在大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有橡

26、膠圈的塑料管里，擰緊；然后放入旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料管里，擰緊；然后放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；再放入專用運(yùn)輸箱大小適合的塑料袋內(nèi)密封；再放入專用運(yùn)輸箱內(nèi)，放人冰塊，以柔軟物質(zhì)填充，內(nèi)襯具吸水內(nèi)，放人冰塊，以柔軟物質(zhì)填充，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的材料；所有容器必須印有生物危和緩沖能力的材料；所有容器必須印有生物危險(xiǎn)標(biāo)識。險(xiǎn)標(biāo)識。l SARSSARS病毒感染的樣品，須進(jìn)行三層以上的包裝，病毒感染的樣品，須進(jìn)行三層以上的包裝，采集后加無菌外包裝，置于專用密閉盒內(nèi)采集后加無菌外包裝，置于專用密閉盒內(nèi)( (金金屬或硬塑料材質(zhì)屬或硬塑料材質(zhì)) ) ，用具有吸水性和柔軟的物，用具有吸水性和柔軟的物質(zhì)填充固定，

27、置于專用運(yùn)輸箱內(nèi)，由質(zhì)填充固定，置于專用運(yùn)輸箱內(nèi)，由2 2人以上人以上專人專車運(yùn)送。專人專車運(yùn)送。（二）樣品的運(yùn)送原則（二）樣品的運(yùn)送原則（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則l 具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施l微生物危害程度分級：微生物危害程度分級：“實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求”（GB19489-2004GB19489-2004）將微生物危害程度分為）將微生物危害程度分為4 4級。級。l危害等級危害等級I I：低個(gè)體危害，低群體危害。：低個(gè)體危害，低群體危害。l危害等級危害等級IIII：中等個(gè)體危害，有限群體危害。：中等個(gè)體危害，有限群體危害。l危害等級

28、危害等級IIIIII：高個(gè)體危害，低群體危害。：高個(gè)體危害，低群體危害。l危害等級危害等級IVIV：高個(gè)體危害，高群體危害。：高個(gè)體危害，高群體危害。l 具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施l生物安全防護(hù)水平分級及要求：生物安全防護(hù)水平分級及要求：lBSL-1BSL-1：對應(yīng)危害等級：對應(yīng)危害等級I I： P1P1實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室lBSL-2BSL-2：對應(yīng)危害等級：對應(yīng)危害等級IIII： P2P2實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室lBSL-3BSL-3：對應(yīng)危害等級：對應(yīng)危害等級IIIIII：P3P3實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室lBSL-4BSL-4：對應(yīng)危害等級：對應(yīng)危害等級IVIV： P4P4實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室BSL: b

29、iosafety level P: protection（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則l 具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施：具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施：l1 1級（級（P4P4實(shí)驗(yàn)室）：實(shí)驗(yàn)室）：l可檢驗(yàn)危害性最嚴(yán)重的病原體（指實(shí)驗(yàn)室感染機(jī)會可檢驗(yàn)危害性最嚴(yán)重的病原體（指實(shí)驗(yàn)室感染機(jī)會多，感染后病情嚴(yán)重，無特效治療，可致死的微生多，感染后病情嚴(yán)重，無特效治療，可致死的微生物；或可能引起嚴(yán)重的流行、需動員大量的人力物物；或可能引起嚴(yán)重的流行、需動員大量的人力物力進(jìn)行防疫的微生物），如天花病毒、力進(jìn)行防疫的微生物），如天花病毒、HIVHIV、SARSSARS病毒等。病毒等。l2 2級（級（P3P3

30、實(shí)驗(yàn)室）：實(shí)驗(yàn)室）：l可檢驗(yàn)特殊危險(xiǎn)致病菌（如果感染能引起重癥并可可檢驗(yàn)特殊危險(xiǎn)致病菌（如果感染能引起重癥并可能有致死后果的微生物，或本國原本沒有的致病微能有致死后果的微生物，或本國原本沒有的致病微生物），如霍亂菌。生物），如霍亂菌。（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則l 具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施：具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施：l3 3級（級（P2P2實(shí)驗(yàn)室）：實(shí)驗(yàn)室）：l檢驗(yàn)一般致病菌（基本不引起實(shí)驗(yàn)室感染；或感染檢驗(yàn)一般致病菌（基本不引起實(shí)驗(yàn)室感染；或感染了發(fā)病率非常小的微生物）。了發(fā)病率非常小的微生物）。l4 4級（級（P1P1實(shí)驗(yàn)室）：實(shí)驗(yàn)室）：l檢驗(yàn)非致病菌（不致病或有致病性的無毒株

31、）。檢驗(yàn)非致病菌（不致病或有致病性的無毒株）。（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則l 具有合格的人員和標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法具有合格的人員和標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法l人員要有資質(zhì)，并經(jīng)常接受培訓(xùn)人員要有資質(zhì)，并經(jīng)常接受培訓(xùn)細(xì)菌計(jì)數(shù)細(xì)菌計(jì)數(shù)生化實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性生化實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性模擬樣品檢出考核模擬樣品檢出考核l采用國家標(biāo)準(zhǔn)方法或公認(rèn)方法（采用國家標(biāo)準(zhǔn)方法或公認(rèn)方法（WHOWHO、EPAEPA等）等）l 加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制l儀器、設(shè)備、試劑：定期檢定和校準(zhǔn)儀器、設(shè)備、試劑：定期檢定和校準(zhǔn)l注意記錄和核查：如注意記錄和核查：如GLPGLP實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室l報(bào)告規(guī)范：數(shù)據(jù)規(guī)范，完整簽名蓋章報(bào)告規(guī)范：數(shù)據(jù)規(guī)范，完整簽

32、名蓋章l 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有應(yīng)急措施實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有應(yīng)急措施l應(yīng)對突發(fā)事件能力應(yīng)對突發(fā)事件能力l需做多種檢驗(yàn)時(shí)，微生物優(yōu)先需做多種檢驗(yàn)時(shí)，微生物優(yōu)先l恰當(dāng)?shù)臉悠诽幚砼c檢驗(yàn)恰當(dāng)?shù)臉悠诽幚砼c檢驗(yàn)均質(zhì)化后再稀釋均質(zhì)化后再稀釋去除抑菌劑等去除抑菌劑等衛(wèi)生微生物檢測的基本原則衛(wèi)生微生物檢測的基本原則二、衛(wèi)生檢驗(yàn)中的指示微生物v指示微生物（指示微生物（indicator microorganism）：在衛(wèi)生監(jiān)測中，用以反映檢品衛(wèi)生狀況及安在衛(wèi)生監(jiān)測中，用以反映檢品衛(wèi)生狀況及安全性的指示性微生物。全性的指示性微生物。v設(shè)定指示微生物的原因設(shè)定指示微生物的原因微生物（包括致病和非致病的）種類繁多，微生物（包括致病和非致病的

33、）種類繁多，不可能一一檢測不可能一一檢測環(huán)境中致病微生物往往數(shù)量少，檢測困難，環(huán)境中致病微生物往往數(shù)量少，檢測困難，需要用相對易于檢測的微生物來間接反映需要用相對易于檢測的微生物來間接反映（一）指示微生物的選擇q選擇原則：選擇原則：l數(shù)量大數(shù)量大l易于檢出，方法簡單易于檢出，方法簡單l具有一定代表性，其數(shù)量變化能反映樣品衛(wèi)生狀具有一定代表性，其數(shù)量變化能反映樣品衛(wèi)生狀況及安全性況及安全性（一）指示微生物的選擇q指示微生物的種類：指示微生物的種類：反映微生物綜合污染：反映微生物綜合污染：菌落總數(shù)菌落總數(shù)反映微生物污染來源：反映微生物污染來源：糞便污染指示菌糞便污染指示菌（大腸菌（大腸菌群）群）;

34、 ;空氣污染指示菌（溶血性鏈球菌等）空氣污染指示菌（溶血性鏈球菌等）不得檢出的致病微生物不得檢出的致病微生物間接反映致病微生物：如反映腸道病毒的噬菌體等間接反映致病微生物：如反映腸道病毒的噬菌體等可以指示消毒效果：可以指示消毒效果：嗜熱脂肪芽孢桿菌（壓力蒸汽嗜熱脂肪芽孢桿菌（壓力蒸汽滅菌）；短小芽孢桿菌（電離輻射滅菌）；枯草桿滅菌）；短小芽孢桿菌（電離輻射滅菌）；枯草桿菌黑色變種芽孢（環(huán)氧乙烷滅菌）菌黑色變種芽孢（環(huán)氧乙烷滅菌）q 糞便污染指示菌的選擇標(biāo)準(zhǔn)糞便污染指示菌的選擇標(biāo)準(zhǔn)1. 是人及溫血動物腸道的正常菌群，且數(shù)量大。是人及溫血動物腸道的正常菌群，且數(shù)量大。2. 排出體外后，在外環(huán)境中的

35、存活時(shí)間與腸道致病菌排出體外后，在外環(huán)境中的存活時(shí)間與腸道致病菌大致相似或稍長。大致相似或稍長。3. 排出體外以后，在外環(huán)境中不繁殖。排出體外以后，在外環(huán)境中不繁殖。q 糞便污染指示菌的選擇標(biāo)準(zhǔn)糞便污染指示菌的選擇標(biāo)準(zhǔn)4. 在被人或動物糞便污染的樣品中易檢出，而未被糞在被人或動物糞便污染的樣品中易檢出，而未被糞便污染的樣品中無此種菌存在。便污染的樣品中無此種菌存在。5. 用作飲用水指示菌，對常用飲用水消毒劑用作飲用水指示菌，對常用飲用水消毒劑(如氯、如氯、臭氧臭氧)的抵抗力應(yīng)該不低于或略強(qiáng)于腸道致病菌。的抵抗力應(yīng)該不低于或略強(qiáng)于腸道致病菌。6. 檢驗(yàn)方法簡便，易于定量計(jì)數(shù)。檢驗(yàn)方法簡便，易于定

36、量計(jì)數(shù)。q 檢測指示微生物反映樣品安全性的原因檢測指示微生物反映樣品安全性的原因l 致病微生物種類繁多，檢測方法亦多種多致病微生物種類繁多，檢測方法亦多種多樣，對樣品的衛(wèi)生安全性作出評價(jià)時(shí)，不樣，對樣品的衛(wèi)生安全性作出評價(jià)時(shí)，不可能分別檢測各種微生物?？赡芊謩e檢測各種微生物。l 分離、鑒定致病微生物需時(shí)長，不能滿足分離、鑒定致病微生物需時(shí)長，不能滿足實(shí)際工作的需要。實(shí)際工作的需要。（一）指示微生物的選擇l 分離、鑒定致病微生物費(fèi)用高，且對人員分離、鑒定致病微生物費(fèi)用高，且對人員的技術(shù)要求也相對較高。的技術(shù)要求也相對較高。l 由于致病微生物數(shù)量少，而檢測方法的靈由于致病微生物數(shù)量少，而檢測方法的

37、靈敏度不高或者受到檢測量的限制，可能導(dǎo)敏度不高或者受到檢測量的限制，可能導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。致假陰性的結(jié)果。 q 檢測指示微生物反映樣品安全性的原因檢測指示微生物反映樣品安全性的原因（一）指示微生物的選擇（二）常用的指示微生物p菌落總數(shù)菌落總數(shù)反映綜合污染反映綜合污染n定義定義：單位量的被檢樣品：單位量的被檢樣品 (g、ml、cm2、m3)內(nèi)，內(nèi)，所含有的能在某種培養(yǎng)基上經(jīng)一定條件培養(yǎng)后所含有的能在某種培養(yǎng)基上經(jīng)一定條件培養(yǎng)后生成的全部菌落數(shù)量。生成的全部菌落數(shù)量。n表述表述：菌落總數(shù)（：菌落總數(shù)（“細(xì)菌總數(shù)細(xì)菌總數(shù)”不妥），不妥）， cfu/g、cfu/ml。n意義意義：綜合判定檢樣被微生物污

38、染程度。：綜合判定檢樣被微生物污染程度。n方法方法：標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)法、表面涂布法：標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)法、表面涂布法（二）常用的指示微生物p糞便污染指示菌糞便污染指示菌n大腸菌群大腸菌群n大腸桿菌大腸桿菌n糞鏈球菌糞鏈球菌n產(chǎn)氣夾膜梭菌產(chǎn)氣夾膜梭菌間接反映致病微生物存在的指示菌間接反映致病微生物存在的指示菌大腸菌群大腸菌群l 一群能在一群能在3737、24h24h內(nèi)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧內(nèi)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧或兼性厭氧的革蘭陰性無芽胞桿菌。或兼性厭氧的革蘭陰性無芽胞桿菌。l 主要有埃希菌屬、克雷伯菌屬、腸桿菌及枸櫞主要有埃希菌屬、克雷伯菌屬、腸桿菌及枸櫞酸桿菌屬。酸桿菌屬。l 在在3737能生長的大腸

39、菌群稱為總大腸菌群；在能生長的大腸菌群稱為總大腸菌群；在44.544.5仍能生長的大腸菌群稱為耐熱大腸菌群仍能生長的大腸菌群稱為耐熱大腸菌群（糞大腸菌群）。（糞大腸菌群）。大腸菌群大腸菌群l 來源于人、畜糞便，土壤、水體等外環(huán)境。來源于人、畜糞便，土壤、水體等外環(huán)境。l 檢測方法簡單，計(jì)數(shù)容易，菌群中包括的菌種類多，檢測方法簡單，計(jì)數(shù)容易，菌群中包括的菌種類多，檢出幾率高，長期以來被廣泛用作常規(guī)檢測的衛(wèi)生檢出幾率高，長期以來被廣泛用作常規(guī)檢測的衛(wèi)生指示菌。指示菌。l 如大腸菌群有檢出，仍需要繼續(xù)檢測耐熱大腸菌群。如大腸菌群有檢出，仍需要繼續(xù)檢測耐熱大腸菌群。l 檢測方法：多管發(fā)酵法、濾膜法和紙

40、片法。檢測方法：多管發(fā)酵法、濾膜法和紙片法。大腸桿菌大腸桿菌l 埃希大腸桿菌，是總大腸菌群以及耐熱大腸菌群埃希大腸桿菌，是總大腸菌群以及耐熱大腸菌群的主要細(xì)菌，作為糞便污染的指示菌最有意義。的主要細(xì)菌，作為糞便污染的指示菌最有意義。l 大腸桿菌的測定方法較為復(fù)雜。大腸桿菌的測定方法較為復(fù)雜。l 大腸桿菌數(shù)量與耐熱大腸菌群具有很好的相關(guān)性。大腸桿菌數(shù)量與耐熱大腸菌群具有很好的相關(guān)性。l 如大腸菌群有檢出，仍需要繼續(xù)檢測耐熱大腸菌如大腸菌群有檢出，仍需要繼續(xù)檢測耐熱大腸菌群，如條件允許，最好進(jìn)一步檢測大腸桿菌。群，如條件允許，最好進(jìn)一步檢測大腸桿菌。糞鏈球菌糞鏈球菌l 現(xiàn)歸為腸球菌屬，是人及動物腸

41、道中的正常菌群，現(xiàn)歸為腸球菌屬，是人及動物腸道中的正常菌群，主要棲居于動物腸道內(nèi)，數(shù)量較高；人糞中所占數(shù)主要棲居于動物腸道內(nèi)，數(shù)量較高；人糞中所占數(shù)量遠(yuǎn)少于大腸桿菌，每克糞便約含量遠(yuǎn)少于大腸桿菌，每克糞便約含10108 8個(gè)。個(gè)。l 大腸菌群與糞鏈球菌比值可區(qū)分人畜糞便來源：大腸菌群與糞鏈球菌比值可區(qū)分人畜糞便來源：l4.04.0，主要為人糞污染，主要為人糞污染 l0.70.7，主要為畜糞污染，主要為畜糞污染l0.70.74.04.0，混合污染，混合污染產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)氣莢膜梭菌l 人和動物特別是食草動物腸道內(nèi)的常住菌，數(shù)量遠(yuǎn)人和動物特別是食草動物腸道內(nèi)的常住菌，數(shù)量遠(yuǎn)少于大腸桿菌，每克糞便為少

42、于大腸桿菌，每克糞便為10105 510106 6個(gè)。個(gè)。l 該菌能形成芽胞，對含氯消毒劑及外界不良環(huán)境有該菌能形成芽胞，對含氯消毒劑及外界不良環(huán)境有較強(qiáng)抵抗力，在外環(huán)境中存活時(shí)間較長。較強(qiáng)抵抗力，在外環(huán)境中存活時(shí)間較長。l 若產(chǎn)氣莢膜梭菌被大量檢出而大腸菌群數(shù)量很少時(shí)，若產(chǎn)氣莢膜梭菌被大量檢出而大腸菌群數(shù)量很少時(shí)，則表示樣品過去曾受過糞便污染，即陳舊性污染。則表示樣品過去曾受過糞便污染，即陳舊性污染。 人類及溫血動物腸道中寄居三類正常微生物人類及溫血動物腸道中寄居三類正常微生物大腸菌群大腸菌群：量最：量最多多，生存時(shí)間與腸道致病菌，生存時(shí)間與腸道致病菌接近接近，抵抗力比致病菌，抵抗力比致病菌

43、強(qiáng)強(qiáng), ,，檢出方法較，檢出方法較易易腸球菌腸球菌：量：量中等中等，生存時(shí)間比腸道致病菌，生存時(shí)間比腸道致病菌短短，抵抗力比致病菌抵抗力比致病菌弱弱產(chǎn)氣夾膜梭菌產(chǎn)氣夾膜梭菌：量最：量最少少，生存時(shí)間比腸道致，生存時(shí)間比腸道致病菌病菌長長，抵抗力比致病菌，抵抗力比致病菌強(qiáng)強(qiáng)p不得檢出的致病菌不得檢出的致病菌微生物微生物主要危害主要危害主要指示作用主要指示作用沙門菌沙門菌腸道致病菌腸道致病菌口服藥、食品不得檢出口服藥、食品不得檢出志賀菌志賀菌菌痢菌痢食品不得檢出食品不得檢出金葡菌金葡菌局部化膿、食物局部化膿、食物中毒中毒食品、化妝品、外用藥不得檢食品、化妝品、外用藥不得檢出；游泳池水指標(biāo)菌出；游泳

44、池水指標(biāo)菌乙型溶血性鏈乙型溶血性鏈球菌球菌食物中毒食物中毒食品污染食品污染銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌條件致病菌條件致病菌外傷、眼科用藥、化妝品不得外傷、眼科用藥、化妝品不得檢出，游泳池水指標(biāo)菌檢出，游泳池水指標(biāo)菌破傷風(fēng)梭菌破傷風(fēng)梭菌外傷皮膚感染外傷皮膚感染外用藥不得檢出外用藥不得檢出（二）常用的指示微生物（二）常用的指示微生物p腸道病毒的指示微生物腸道病毒的指示微生物n大腸菌群不是水中病毒適宜的指示菌。大腸菌群不是水中病毒適宜的指示菌。n理想的病毒指示微生物條件：理想的病毒指示微生物條件：檢驗(yàn)方法簡單檢驗(yàn)方法簡單操作安全操作安全抵抗力與腸道病毒相當(dāng)或稍強(qiáng)抵抗力與腸道病毒相當(dāng)或稍強(qiáng)在被人糞腸道病毒

45、污染的環(huán)境中一定存在，在被人糞腸道病毒污染的環(huán)境中一定存在，其存在數(shù)量應(yīng)等于或大于腸道病毒的數(shù)目。其存在數(shù)量應(yīng)等于或大于腸道病毒的數(shù)目。 （二）常用的指示微生物（二）常用的指示微生物大腸桿菌噬菌體大腸桿菌噬菌體f2f2；脊髓灰質(zhì)炎病毒減毒疫苗株；脊髓灰質(zhì)炎病毒減毒疫苗株I I。三、衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法u 樣品的處理樣品的處理u 損傷菌的復(fù)蘇損傷菌的復(fù)蘇u 選擇性增菌與分離選擇性增菌與分離u 定量計(jì)數(shù)方法定量計(jì)數(shù)方法u 分型鑒定的方法分型鑒定的方法混勻樣品（非常重要）混勻樣品（非常重要）n方法方法l液體：電動混勻、手搖混勻、敲打混勻液體：電動混勻、手搖混勻、敲打混勻l固體：攪碎混勻、研磨混

46、勻、勻漿混勻固體：攪碎混勻、研磨混勻、勻漿混勻n目的目的l保證檢驗(yàn)結(jié)果的客觀性和準(zhǔn)確性。保證檢驗(yàn)結(jié)果的客觀性和準(zhǔn)確性。l將樣品充分破碎、混勻，有利于取樣的代表性，將樣品充分破碎、混勻，有利于取樣的代表性，而且可將樣品內(nèi)部的待測微生物釋放，有利于而且可將樣品內(nèi)部的待測微生物釋放，有利于培養(yǎng)鑒定。培養(yǎng)鑒定。（一）樣品的處理混勻樣品（非常重要）混勻樣品（非常重要）樣品濃縮樣品濃縮n方法方法l沉淀法：借助離心力完成。沉淀法：借助離心力完成。l過濾法：細(xì)菌被阻留在膜上。過濾法：細(xì)菌被阻留在膜上。l吸附沉淀法：細(xì)菌被共沉淀或被吸附。吸附沉淀法：細(xì)菌被共沉淀或被吸附。l免疫磁珠法：用磁分離技術(shù)分離和濃縮微生

47、物。免疫磁珠法：用磁分離技術(shù)分離和濃縮微生物。（一）樣品的處理環(huán)境樣品微生物，在采樣送檢等過程中，受各環(huán)境樣品微生物，在采樣送檢等過程中，受各種不利因素作用，可發(fā)生種不利因素作用，可發(fā)生亞致死性損傷亞致死性損傷。用普。用普通培養(yǎng)方法不容易培養(yǎng)。需預(yù)先進(jìn)行復(fù)蘇通培養(yǎng)方法不容易培養(yǎng)。需預(yù)先進(jìn)行復(fù)蘇（resuscitation）或修復(fù)）或修復(fù) (repair)才能培養(yǎng)。才能培養(yǎng)。 無選擇壓力的培養(yǎng)環(huán)境無選擇壓力的培養(yǎng)環(huán)境 較低的培養(yǎng)溫度較低的培養(yǎng)溫度（二）損傷菌的復(fù)蘇p目的菌檢測的困難：目的菌檢測的困難：少、與其他少、與其他菌混合。菌混合。p選擇方法：選擇方法：抑制其它微生物生長、抑制其它微生物生長

48、、促進(jìn)目標(biāo)微生物生長促進(jìn)目標(biāo)微生物生長物理方法：物理方法：厭氧條件培養(yǎng)厭氧厭氧條件培養(yǎng)厭氧菌、光照條件培養(yǎng)藻類等菌、光照條件培養(yǎng)藻類等化學(xué)方法：化學(xué)方法：根據(jù)微生物的營養(yǎng)根據(jù)微生物的營養(yǎng)需求，加入特制的促進(jìn)或抑制需求，加入特制的促進(jìn)或抑制生長的物質(zhì)生長的物質(zhì)Obligate Aerobes（三）對目的菌的選擇性增菌與分離EMB (Eosin Methylene Blue，伊紅亞甲基藍(lán))ldyes inhibit Gram (+) bacterialselects for Gram (-) bacterialG.I. Tract infections caused by Gram (-) bac

49、teria計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)直接（顯微鏡下計(jì)數(shù)、比濁法）直接（顯微鏡下計(jì)數(shù)、比濁法） 間接間接（使菌繁殖）（使菌繁殖）傾注平板法傾注平板法表面涂布法表面涂布法MPN法（法（統(tǒng)計(jì)學(xué)方法統(tǒng)計(jì)學(xué)方法）“單個(gè)菌單個(gè)菌” ” 生生長成長成“菌落菌落”而而計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法（四）微生物定量計(jì)數(shù)法傾注平板法傾注平板法v準(zhǔn)確稀釋待測樣品（一般準(zhǔn)確稀釋待測樣品（一般10倍梯度），準(zhǔn)確將稀倍梯度），準(zhǔn)確將稀釋物定量（一般釋物定量（一般1ml）均勻地傾注到瓊脂培養(yǎng)基）均勻地傾注到瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)后計(jì)數(shù)菌落。中，培養(yǎng)后計(jì)數(shù)菌落。表面涂布法表面涂布法v將樣品定量（一般將樣品定量（一般0.1ml）涂布在瓊脂培養(yǎng)基的）涂布在瓊脂培養(yǎng)基的表面，培養(yǎng)后，計(jì)數(shù)表面生長的菌落數(shù)。表面，培養(yǎng)后，計(jì)數(shù)表面生長的菌落數(shù)。一個(gè)平板上生長的菌一個(gè)平板上生長的菌落數(shù)在