1、 動物實驗基本操作技術 常規(guī)采血方法 給藥途徑與方法 麻醉方法 處死方法 實驗動物的抓取與固定性別鑒定 年齡的大致判斷妊娠檢查分組與編號第一節(jié) 實驗動物的抓取與固定 一、大、小鼠的抓取固定 小鼠固定盒固定 大鼠固定盒固定 二、豚鼠的抓取固定法二、豚鼠的抓取固定法 三、家兔的抓取固定法三、家兔的抓取固定法 第二節(jié) 性別鑒定 一、大、小鼠的性別鑒定 二、兔的性別鑒定 Female Male 第三節(jié) 年齡的大致判斷 一、大、小鼠 1. 根據(jù)形態(tài)鑒定日齡（大、小情況基本一樣） 日齡/d 1 3 4 5 8 外觀形態(tài)特征 仔鼠裸體鮮紅 耳殼露出表皮 臍帶瘢痕脫落 能翻身 能爬行 日齡/d 10 911

2、外觀形態(tài)特征 能聽到聲音 全身被白毛，門齒長出 1315 18以后 眼皮張開，能跳躍，能抓取東西 能自行采食，獨立生活 2. 根據(jù)體重鑒定日齡 小鼠日齡與體重的對應 日齡/d 初生 5 10 15 20 25 30 體重1.8 4.0 6.0 11.0 15.0 21.0 21.0 /g 大鼠日齡與體重的對應 /d /g /d /g 初生 10 20 30 40 67 1725 3550 5590 100150 50 60 70 80 150210 170240 210270 240320日齡體重日齡體重 常規(guī)采血方法 頸靜脈或頸動脈采血股靜脈或股動脈采血心臟采血尾部采血眼眶采血斷頭取血 一、

3、大、小鼠的采血方法 1 2 3 4 5 6頸靜脈或頸動脈采血 尾部采血 心臟采血 耳緣剪口采血心臟采血方法同大、小鼠。股動脈采血方法同大、小鼠。后肢背中足靜脈采血 二、豚鼠的采血方法 1 2 3 4心臟采血耳中央動脈采血耳靜脈采血 三、家兔的采血方法 1 2 3 四、狗、貓的采血方法 1后肢外側跗外靜脈、內側隱靜脈、前肢內側皮下頭靜脈采血 2股動脈采血 3. 心臟采血同大、小鼠心臟采血 4耳緣靜脈采血同兔耳緣靜脈采血 采血方法的選擇，決定于實驗目的所需血量以及采血方法的選擇，決定于實驗目的所需血量以及動物種類。凡用動物種類。凡用 血量較少血量較少 的檢驗如紅、白細胞計數(shù)、的檢驗如紅、白細胞計數(shù)

4、、血紅蛋白的測定，血液涂片以及酶活性微量分析法血紅蛋白的測定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可等，可刺破組織取毛細血管刺破組織取毛細血管 的血。當?shù)难?。?需血量較多需血量較多 時時可作可作靜脈采血靜脈采血 。靜脈采血時，。靜脈采血時， 若需反復多次，應自若需反復多次，應自遠離心臟端開始，以免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈遠離心臟端開始，以免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈 。 研究毒物對肺功能的影響、血液酸堿平衡、水鹽研究毒物對肺功能的影響、血液酸堿平衡、水鹽代謝紊亂，需要比較動、靜脈血氧分壓、二氧化碳代謝紊亂，需要比較動、靜脈血氧分壓、二氧化碳分壓和血液分壓和血液pH值以及值以及 K+、Na+、Cl-離子

5、濃度，必離子濃度，必須須采取動脈血液采取動脈血液。 采血時要注意 采血場所有充足的光線；室溫夏季最好保持在2528，冬季，1520為宜； 采血用具有采用部位一般需要進行 消毒； 采血用的注射器和試管必須保持清潔干燥 ； 若需抗凝全血 ，在注射器或試管內需預先加入抗凝劑。 取少量血 部 位 尾靜脈 耳靜脈 眼底靜脈叢 d舌下靜脈 動物種類 大鼠、小鼠 兔、狗、貓、豬、山羊、綿羊 兔、大鼠、小鼠 兔 e腹壁靜脈 青蛙、蟾蜍 f冠、腳蹼皮下靜脈 雞、鴨、鵝 取中量血 部 位 前肢內側皮下頭靜脈 動物種類 狗、猴、貓 后肢外側皮下小隱靜脈 狗、猴、貓 耳中央動脈 頸靜脈 兔 狗、貓、兔 心臟 斷頭 翼

6、下靜脈 豚鼠、大鼠、小鼠 大鼠、小鼠 雞、鴨、鴿、鵝 頸動脈 雞、鴨、鴿、鵝 取大量血 部 位 股動脈、頸動脈 心臟 頸靜脈 動物種類 狗、猴、貓、兔 狗、猴、貓、兔 馬、牛、山羊、綿羊 摘眼球 大鼠、小鼠 4. 最大安全采血量與最小致死采血量 動物種類 小鼠 最大安全采 血量 (ml) 0.2 最小致死采 血量 (ml) 0.3 大鼠 豚鼠 兔 狼狗 獵狗 猴 1 5 10 100 50 15 2 10 40 500 200 60 給藥途徑與方法 在動物實驗過程中，應根據(jù)不同的實驗目的、動物種類、藥物類型來決定動物的給藥途徑與方法。動物的給藥方法主要分為注射法和投入法兩種，不同方法按給藥途徑

7、又分為很多具體類型。注射法分為注射法分為 ：皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、腦膜下注射、腦內注射、胸腔內注射、腰椎內注腦膜下注射、腦內注射、胸腔內注射、腰椎內注射、靜脈注射、關節(jié)腔注射和心內注射射、靜脈注射、關節(jié)腔注射和心內注射 。 投入法可分為投入法可分為：鼻腔內投入、胃腔內投入、腸管鼻腔內投入、胃腔內投入、腸管內投入、氣管內投入和經(jīng)口腔投入。內投入、氣管內投入和經(jīng)口腔投入。 以下將各種動物的主要給藥途徑和方法做一介紹。 （一）皮下皮下注射 皮下注射部位一般 狗、貓狗、貓多在大腿外側大腿外側，豚豚鼠鼠在后腿的內側或小腹部后腿的內側或小腹部 ；大白鼠大白鼠可在側下側

8、下腹部腹部。兔兔在背部或耳根背部或耳根 部注射。蛙蛙可在脊背脊背部淋巴腔部淋巴腔注射。 （二）皮內皮內注射 皮內注射時需將注射的 局部脫去被毛局部脫去被毛 ，消毒后，用左手拇指和食指按住皮膚并使之繃緊，在兩指之間，用注射器連4(1/2)細針頭，緊貼皮膚表層刺入皮內，然后再向上挑起并再稍刺入，即可注射藥液，此時可見皮膚表面鼓起一白色小皮丘白色小皮丘。 （三）（三）肌肉肌肉注射注射 肌肉內血管豐富，注射后吸收較快，僅次于靜脈注射；又因感覺神經(jīng)較皮下少，故引起疼痛較輕，臨床上應用較多。 1、部位 凡是肌肉豐富的部位，均可進行肌肉注射。犬貓在脊柱兩側的腰部肌肉或股部肌肉。 2、方法 局部消毒，將針頭迅

9、速刺入肌肉內，抽拔活塞無回血后緩慢注入藥液。注射時，不要將針頭全刺入肌肉內，以免折斷時不易取出。 （四）腹腔腹腔注射 用大、小白鼠做實驗時，以左手抓住動物，使腹部向上，右手將注射針頭于 左（或右）下腹部刺入左（或右）下腹部刺入皮下，使針頭向前推針頭向前推 0.51.0cm，再以以45度角度角穿過腹肌，固定針頭，緩緩注入藥液， 為避免傷及內臟，可使動物處于 頭低位頭低位 ，使內臟移向上腹。若實驗動物為家家兔兔，進針部位為下腹部的腹白線離開腹白線離開1cm處處。 （五）靜脈靜脈注射 1兔：兔耳部血管分布清晰。兔耳中央為動脈，耳外緣為靜脈 。內緣靜脈深不易固定，故不用。外緣靜脈表淺易固定，常用。先拔

10、去注射部位的被毛，用手指彈動或輕揉兔耳，使靜脈充盈，左手食指和中指夾住靜脈的近端 ，拇指繃緊靜脈的遠端 ，無名指及小指墊在下面，右手持注射器連6號針頭盡量從靜脈的遠端刺入，移動拇指于針頭上以固定針頭，放開食指和中指，將藥液注入，然后拔出針頭，用手壓迫針眼片刻。 2小白鼠和大白鼠 一般采用 尾靜脈注射 ，操作時先將動物固定在鼠筒內或扣在燒杯中，使尾巴露出，尾部用4550的溫水浸潤半分鐘或用 酒精擦拭 使血管擴張，并可使表皮角質軟化，以 左手拇指和食指捏住鼠尾兩側 ，使靜脈充盈，用中指從下面托起尾巴，以無名指和小指夾住尾巴的末梢，右手持注射器連4(1/2)號細針頭，使針頭與靜脈平行（小于30），從

11、尾下四分之一處（約距尾尖23厘米）處進針 ，此處皮薄易于刺入，先緩注少量藥液，如無阻力，表示針頭已進入靜脈，可繼續(xù)注入。注射完畢后把尾部向注射側彎曲以止血 。如需反復注射，應盡可能從末端開始，以后向尾根部方向移動注射。 3狗 狗靜脈注射多選 前肢內側皮下頭靜脈 或后肢小隱靜脈注射。注射前由助手將動物側臥，剪去注射部位的被毛，用 膠皮帶扎緊 （或用手抓緊）靜脈近端，使血管充盈，從靜脈的遠端將注射針頭平行刺入 血管，待有回血后，松開綁帶（或兩手），緩緩注入藥液。 （一）部位 犬貓均可在頸靜脈溝上1/3與中1/3交界處進行靜脈注射。犬還可在腕關節(jié)以上的前內側或腕關節(jié)以下掌中部前內側的靜脈，或跗關節(jié)外

12、側上方的靜脈、股內側的靜脈等注射。 幾種動物不同給藥途徑的常用注射量（毫升） 注射途徑 小鼠 大鼠 豚鼠 2 5 兔 5 10 狗 5 15 腹 腔 0.2 1.0 1 3 肌 肉 0.1 0.2 0.2 0.5 0.2 0.5 0.5 1 2 5 靜 脈 0.2 0.5 1 2 皮 下 0.1 0.5 0.5 1 1 5 0.5 2 3 10 1 3 5 15 3 10 （六）經(jīng)口給藥 多用灌胃法，此法劑量準確，適用于 小白鼠、大白鼠、家兔等動物。 1小鼠、大鼠（或豚鼠） 灌胃時將灌胃針按在注射器上，吸入藥液。左手抓住鼠背部及頸部皮膚將動物固定，右手持注射器，將灌胃針插入動物口中， 沿咽后壁

13、沿咽后壁 徐徐插入食道。動物應固定成垂直體位，針插入時應無阻力。若感若感到阻力或動物掙扎時，應立即停止到阻力或動物掙扎時，應立即停止 進針或將針拔出，以兔損傷或穿破食道以及誤入氣管。 一般當灌胃針插入 小鼠34cm，大鼠或豚鼠46cm后可將藥物注入。常用的灌胃量小鼠為0.2 1ml，大鼠14ml，豚鼠為15ml。 2狗、兔、貓、猴 灌胃時，先將動物固定，再將特制的開口器放入動物口中，開口器之寬度可視動物口腔大小而定， 灌胃時將開口器放于上述動物上下門牙之后，并用繩將它固定于嘴部，將帶有彈性的橡皮導管（如導尿管），經(jīng)開口器上的小圓孔插入，沿咽后壁而進入食道，此時應檢查導管是否正確插入食道，可將導

14、管外口置于一盛水的燒杯中，如不發(fā)生氣泡，即認為此導管是在食道中，未誤入氣管，即可將藥液灌入。 給狗、兔灌胃時，也可不用開口器：狗灌胃時，用12號灌胃管， 左手抓住狗嘴，右手中指由右嘴角插入，摸到最后一對臼齒后的天然空隙，胃管由此空隙順食管方向不斷插入約20cm，可達胃內，將胃管另一端插入水中，如不出氣泡，表示確已進入胃，而沒誤入氣管內，即可灌入。 兔灌胃時，將兔固定在木制固定盒內左手虎口卡住并固定好兔嘴，右手取14號細導管，由右側唇裂避開門齒，將導管慢慢插入，如插管順利，動物不掙扎，插入約15cm時，即表示插入胃內，將藥液注入。 各種動物一次灌胃能耐受的最大容積小鼠為0.51.0ml，大鼠47

15、ml，豚鼠為47ml，家兔為80150ml，狗為200500ml。 麻醉方法 麻醉(anesthesia)的基本任務是 消除實驗過程中所至的疼痛和不適 感覺，保障實驗動物的 安全，使動物在實驗中服從操作，確保實驗順利進行。 一、常用的麻醉劑 動物實驗中常用的 麻醉劑分為三類 ，即揮發(fā)性麻 醉 劑 、 非 揮 發(fā) 性 麻 醉 劑 和 中 藥 麻 醉 劑 。 1揮發(fā)性麻醉劑 包括乙醚、氯仿等，乙醚吸入麻醉適用于各種動物，其麻醉量和致死量差距大，所以安全度亦大，動物麻醉深度容易掌握，而且麻后蘇醒較快。其缺點是對局部刺激作用大，可引起上呼吸道粘膜液體分泌增多，再通過神經(jīng)反射可影響呼吸、血壓和心跳活動，

16、并且容易引起窒息，故在乙醚吸入麻醉時必需有人照看，以防麻醉過深而出現(xiàn)以上情況。 2非揮發(fā)性麻醉劑 這類麻醉劑種類較多，包括 苯巴比妥鈉、戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉 等巴比妥類的衍生物，氨基甲酸乙脂和水合氯醛。這些麻醉劑使用方便，一次給藥可維持較長的麻醉時間，麻醉過程較平衡，動物無明顯掙扎現(xiàn)象。但缺點是 蘇醒較慢。 3中藥麻醉劑 動物實驗時有時也用到象洋金花和氫溴酸東莨菪堿等中藥麻醉劑，但由于其作用 不夠穩(wěn)定 ，而且常需加佐劑麻醉效果才能理想，故在使用過程中不能得到普及，因而，多數(shù)實驗室不選用這類麻醉劑進行麻醉。 二、動物的麻醉方法 1全身麻醉 （1）吸入法 用一塊圓玻璃板和一個鐘罩或一個密閉的玻璃箱

17、作為揮發(fā)性麻醉劑的容器，多選用乙醚作麻藥。麻醉時用幾個棉球，將乙醚倒入其中，迅速轉入鐘罩或箱內，讓其揮發(fā)，然后把待麻醉動物投入，約隔46分鐘即可麻醉，麻醉后應立即取出，并準備一個蘸有乙醚的棉球小燒杯，在動物麻醚變淺時給套在鼻上使其補吸麻藥。本法最適于大、小鼠的短期操作性實驗的麻醉，也可用于較大的動物。由于乙醚燃點很低，遇火極易燃燒，所以在使用時，一定要遠離火源。 （2）腹腔和靜脈給藥麻醉法 非揮發(fā)性和中藥麻醉劑均可用作腹腔和靜脈注射麻醉，操作簡便，是實驗室最常采用的方法之一。腹腔給藥麻醉多用于大小鼠和豚鼠，較大的動物如兔、狗等則多用靜脈給藥進行麻醉。由于各麻醉劑的作用長短以及毒性的差別。所以在

18、腹腔和靜脈麻醉時，一定要控制藥物的濃度和注射量 。 2局部麻醉 貓的局部麻醉一般應用0.51.0%鹽酸普魯卡因 注 射。 粘 膜表 面 麻 醉宜 用2%鹽 酸 可卡 因 。 兔在眼球手術時，可于結膜囊滴入0.02%鹽酸可卡因溶液，數(shù)秒鐘即可出現(xiàn)麻醉。 狗的局部麻醉用0.51%鹽酸普魯卡因注射。眼鼻、咽喉表面麻醉可用2%鹽酸可卡因。 4麻醉注意事項 靜脈注射必須緩慢，同時觀察肌肉緊張性、角膜反射和對皮膚夾捏的反應，當這些活動明顯減弱或消失時，立即停止注射。配制的藥液濃度要適中，不可過高，以兔麻醉過急；但也不能過低，以減少注入溶液的體積。 麻醉時需注意保溫。麻醉期間，動物的體溫調節(jié)機能往往受到抑制

19、，出現(xiàn)體溫下降，可影響實驗的準確性。此時常需采取保溫措施。保溫的方法有，實驗桌內裝燈，電褥，臺燈照射等。無論用哪種方法加溫都應根據(jù)動物的肛門體溫而定。常用實驗動物 正 常 體 溫 ： 貓 為38.61.0 ， 兔 為38.41.0，大鼠為39.30.5。 作慢性實驗時，在寒冷冬季，麻醉劑在注射前應加熱至動物體溫水平。 處死方法 當實驗中途停止或結束時，實驗者應站在實驗動物的立場上以人道的原則去處置動物，原則上不給實驗動物任何恐怖和痛苦，也就是要施行安樂死。安樂死是指實驗動物在沒有痛苦感覺的情況下死去。實驗動物安樂死方法的選擇取決于動物的種類與研究的課題。 一、蛙 類 常用金屬探針插入枕骨大孔，

20、破壞腦脊髓的方法處死。將蛙用濕布包住，露出頭部，左手執(zhí)蛙，并用食指按壓其頭部前端，拇指按壓背部，使頭前俯；右手持探針由凹陷處垂直刺入，刺破皮膚即入枕骨大孔。這時將探針尖端轉向頭方，向前深入顱腔，然后向各方攪動，以搗毀腦組織。再把探針由枕骨大孔刺入并轉向尾方，刺入椎管，以破壞脊髓。腦和脊髓是否完全破壞，可檢查動物四肢肌肉的緊張性是否完全消失。拔出探針后，用一小干棉球將針孔堵住，以防止出血。操作過程中要防止毒腺分泌物射入實驗者眼內。如被射入時，則需立即用生理鹽水沖洗眼睛。 二、大鼠和小鼠 1. 頸椎脫臼法：右手抓住鼠尾用力向后拉，同時左手拇指與食指用力向下按住鼠頭。將脊髓與腦髓拉斷，鼠便立即死亡。

21、 2. 斷頭法：用剪刀在鼠頸部將鼠頭剪掉，鼠立即死亡。 3. 擊打法：右手抓住鼠尾提起，用力摔擊其頭部，鼠痙攣后立即死去?；蛴媚惧N用力擊打鼠頭部也可致死。 4. 急性大出血法：可采用鼠眼眶動脈和靜脈急性大量失血方法使鼠立即死亡。 5. 藥物致死法：吸入一定量的一氧化碳、乙醚、氯仿等均可使動物致死。 三、狗、兔、豚鼠 1. 空氣栓塞法： 向動物靜脈內注入一定量的空氣，使之發(fā)生栓塞而死。當空氣注入靜脈后，可在右心隨著心臟的跳動使空氣與血液成泡沫狀，隨血液循環(huán)到全身。如進到肺動脈，可阻塞其分支，進入心臟冠狀動脈，造成冠狀動脈阻塞，發(fā)生嚴重的血液循環(huán)障礙，動物很快致死。一般兔、貓等靜脈內注入2040m

22、l空氣即可致死。每條狗由前肢或后肢皮下靜脈注入80150ml空氣，可很快致死。 2. 急性失血法 先使動物輕度麻醉，如狗可按每公斤體重靜脈注射硫噴妥納 2030mg，動物即很快入睡。暴露股三角區(qū)，用鋒利的殺狗刀在股三角區(qū)作一個約10cm的橫切口，把股動、靜脈全切斷，立即噴出血液。用一塊濕紗布不斷擦去股動脈切周圍處的血液和血凝塊，同時不斷的用自來水沖洗流血，使股動脈切口處保持暢通，動物35分鐘內即可致死。采用此種方法，動物十分安靜，對臟器無損傷，對活殺采集病理切片標本是一種較好的方法。 3. 破壞延腦法 如果急性實驗后，腦已暴露，可用器具將延髓破壞，導致動物死亡。對家兔也可用木錘用力錘擊其后腦部，損壞延腦，造成死亡。 4.