1、皮上劃痕人用炭疽活菌苗制造及檢定規(guī)程本品系用弱毒炭疽菌株制成的活芽胞懸液。專供預(yù)防炭疽病之用。1菌種1.1菌種來源為無莢膜，HYPERLINK l m0-0 t _blank o 書籍相關(guān)：水腫 水腫型，具有一定殘余毒力，免疫原性較好的A16R菌株。由中國藥品生物制品檢定所分發(fā)或經(jīng)同意。1.2菌種應(yīng)以凍干法或用50%(ml/ml)甘油保存。每35年應(yīng)全面檢定其培養(yǎng)特性、殘余毒力、安全性及免疫力，建立種子批。生產(chǎn)前只檢查菌形，培養(yǎng)特性及噬菌體特異性。1.3菌種檢定1.3.1培養(yǎng)及生化特性在牛肉消化液瓊脂或其他適宜固體培養(yǎng)基上生長，菌落為灰白色，不透明，呈卷發(fā)狀。為革蘭氏陽性大桿菌，呈鏈狀排列。無

2、運(yùn)動(dòng)力。能夠形成芽胞。液體培養(yǎng)呈絮狀發(fā)育，在血清培養(yǎng)基上不形成莢膜。能發(fā)酵葡萄糖、HYPERLINK t _blank o 中藥材：麥芽 麥芽糖、蔗糖，不分解水楊苷。1.3.2殘余毒力試驗(yàn)用體重350400g健康豚鼠5只，各皮下注射0.5億/ml的牙包懸液1ml。另用體重1820g小白鼠5只，各皮下注射0.5億/ml的芽胞懸液0.1ml。觀察10天，3只以上動(dòng)物應(yīng)出現(xiàn)HYPERLINK l m0-0 t _blank o 書籍相關(guān)：水腫 水腫，可有特異死亡。但臟器涂片只應(yīng)找到無莢膜的本菌。若全部動(dòng)物不出現(xiàn)HYPERLINK l m0-0 t _blank o 書籍相關(guān)：水腫 水腫，應(yīng)重試。重試

3、仍無HYPERLINK l m0-0 t _blank o 書籍相關(guān)：水腫 水腫，菌種不得用于生產(chǎn)。1.3.3安全試驗(yàn)用體重2.02.5kg分健康家兔10只，各皮下注射2.5億/ml的芽胞懸液1ml，觀察10天，在注射部位可出現(xiàn)HYPERLINK l m0-0 t _blank o 書籍相關(guān)：水腫 水腫，全部動(dòng)物應(yīng)活存。如有死亡，應(yīng)用同數(shù)動(dòng)物重試，重試仍有死亡，菌種不得用于生產(chǎn)。1.3.4免疫力試驗(yàn)上述安全試驗(yàn)動(dòng)物于注射后1820天，用炭疽毒菌攻擊，各皮下注射20個(gè)MLD。同時(shí)用同體重的健康家兔3只，各皮下注射1個(gè)MLD作為對照。觀察10天，對照動(dòng)物死亡3只。試驗(yàn)組保護(hù)60%；對照組死亡2只，

4、試驗(yàn)組保護(hù)80%為合格。對照動(dòng)物死亡1只或無死亡，為對照不成立，應(yīng)重試。2制造制造菌苗的工作室及設(shè)備應(yīng)當(dāng)專用，不得與其他細(xì)菌工作混用。生產(chǎn)中應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作，非制造菌苗用的其他炭疽菌株不得帶到生產(chǎn)工作室內(nèi)。2.1菌種接種牛肉消化液瓊脂或其他適宜固體培養(yǎng)基，于34培育1820小時(shí)，經(jīng)檢查為純菌者，保存于28，在2周內(nèi)供作生產(chǎn)種子用。2.2培養(yǎng)基用pH7.27.4牛肉消化液瓊脂或其他培養(yǎng)基。2.3種子將供制造用菌種，移種于牛肉消化液中。于34培育2024小時(shí)，檢查其生長特性、菌形及純度，應(yīng)符合1.3.1項(xiàng)要求。2.4接種經(jīng)檢查合格之種子培養(yǎng)物，接種于牛肉消化液瓊脂上，置3334培育。成熟的典型芽

5、胞達(dá)至80%以上、無雜菌者采集。2.5采集將培養(yǎng)物刮入50%（ml/ml）甘油蒸餾水原液瓶內(nèi)，振搖使成均勻懸液。每瓶取樣按生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行純菌試驗(yàn)。2.6合并將純菌試驗(yàn)合格之原液進(jìn)行合并分批，取樣做純菌試驗(yàn)、濃度測定及活菌計(jì)數(shù)。2.6.1純菌試驗(yàn)按生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行。2.6.2濃度測定按中國細(xì)菌濁度標(biāo)準(zhǔn)測定濃度。2.6.3活菌計(jì)數(shù)取0.5億/ml的菌液1ml，按10倍系列稀釋至10-5。取10-5稀釋菌液接種5個(gè)平皿，每個(gè)平皿接種0.1ml。置37培育24小時(shí)，計(jì)算每ml菌苗的芽胞活存率。芽胞活存率在50%以上為合格。2.7稀釋分裝2.7.1稀釋用滅菌的50%甘油蒸餾水將原液稀釋

6、成每ml含芽胞40億個(gè)，即為皮上劃痕用菌苗。同批原液稀釋之菌苗為作1批。稀釋若干大瓶時(shí)，應(yīng)按瓶號分為亞批。2.7.2分裝皮上劃痕用菌苗按20人份/ml分裝。規(guī)格為每安瓿1或2ml，抽樣進(jìn)行成品檢定。3成品檢定3.1物理檢查應(yīng)為灰白色之均勻懸液，無異物及搖不散之菌塊。3.2純菌試驗(yàn)按生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行。3.3濃度測定按中國細(xì)菌濁度標(biāo)準(zhǔn)測定濃度，應(yīng)為每ml含菌40億20%3.4活菌計(jì)數(shù)按2.6.3項(xiàng)進(jìn)行。3.5安全試驗(yàn)每批菌苗用體重2.02.5kg，健康家兔5只，各皮下注射2.5億/ml的芽胞懸液1ml。觀察10天?？捎蠬YPERLINK l m0-0 t _blank o 書籍相關(guān)：水腫 水腫，全部動(dòng)物應(yīng)活存。如有死亡，應(yīng)用