1、臨床基因擴增檢驗的質(zhì)量保證衛(wèi)生部臨床檢驗中心 李金明.定 義質(zhì)量保證(Quality Assurance,QA) 為一產(chǎn)品或效力滿足特定質(zhì)量要求提供充分可信性所必要的有方案的和系統(tǒng)的措施。 室內(nèi)質(zhì)量控制Internal Quality Control,IQC) 由實驗室任務(wù)人員，采取一定的方法和步驟，延續(xù)評價本實驗室任務(wù)的可靠性程度，旨在監(jiān)測和控制本實驗室任務(wù)的精細(xì)度，提高本室常規(guī)任務(wù)中批內(nèi)、批間樣本檢驗的一致性，以確定測定結(jié)果能否可靠、可否發(fā)出報告的一項任務(wù)。 .定 義室間質(zhì)量評價 External Quality Assessment, EQA 為客觀比較一實驗室的測定結(jié)果與靶值的差別，由

2、外單位機構(gòu)，采取一定的方法，延續(xù)、客觀地評價實驗室的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實驗室之間的結(jié)果具有可比性。這是對實驗室操作和實驗方法的回想性評價，而不是用來決議在實時的測定結(jié)果的可接受性。當(dāng)EQA用來為執(zhí)業(yè)答應(yīng)或?qū)嶒炇艺J(rèn)證的目的而評價實驗室操作時，常描畫為實驗室才干比對檢驗Proficiency testing, PT。在以前的文獻(xiàn)中，EQA常描畫室間質(zhì)量控制。.定 義 準(zhǔn)確度 (Accuracy) 待測物的測定值與其真值的一致性程度。準(zhǔn)確度不能直接以數(shù)值表示，通常以不準(zhǔn)確度來間接衡量。對一分析物反復(fù)多次測定，所得均值與其真值或參考靶值之間的差別亦即偏向即為測定的不準(zhǔn)確度。 偏向 (Bia

3、s) 待測物的測定值與一可接受參考值之間的差別。.定 義精細(xì)度(Precision) 在一定條件下所獲得的獨立的測定結(jié)果之間的一致性程度。與準(zhǔn)確度一樣，精細(xì)度同樣也是以不精細(xì)度來間接表示。測定不精細(xì)度的主要來源是隨機誤差，以規(guī)范差SD和/或變異系數(shù)CV詳細(xì)表示。SD或CV越大，表示反復(fù)測定的離散度越大，精細(xì)度越差，反之那么越好。 .定 義批 (Run) 在一樣條件下所獲得的一組測定。 均值Mean 規(guī)范差Standard deviation, SD或s 變異系數(shù)Coefficient of variation, CV .定 義正態(tài)分布(Gaussian distribution) 當(dāng)一質(zhì)控物用

4、同一方法在不同的時間反復(fù)多次測定，當(dāng)測定數(shù)據(jù)足夠多時，如以橫軸表示測定值，縱軸表示在大量測定中相應(yīng)測定值的個數(shù)，那么可得到一個兩頭低，中間高，中為一切測定值的均值，左右對稱的“鐘形曲線，亦即正態(tài)分布，又稱高斯分布。 .定 義正態(tài)分布的根本統(tǒng)計學(xué)含義可用均數(shù)、規(guī)范差s和概率來闡明。.臨床基因擴增檢驗實驗室常規(guī)測定步驟標(biāo)本搜集：選擇測定工程、標(biāo)本搜集和保管。實驗室測定：標(biāo)本接納、貼標(biāo)簽、樣本處置、核酸擴增、產(chǎn)物檢測、測定的有效性和臨床診療價值。報告和解釋：結(jié)果發(fā)出、結(jié)果解釋和臨床管理。.質(zhì)量保證、室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評之間的關(guān)系.臨床標(biāo)本搜集、運送、保管及其質(zhì)量控制 標(biāo)本搜集 標(biāo)本保管標(biāo)本運送 .標(biāo)本

5、搜集標(biāo)本采集時間對擴增檢測結(jié)果的影響 標(biāo)本采集部位的預(yù)備 標(biāo)本的類型和采集量 采樣質(zhì)量的評價 采樣及運輸容器 標(biāo)本采集中的防污染 .標(biāo)本采集時間對擴增檢測結(jié)果的影響在疾病開展過程中，標(biāo)本采集過早或過晚都能夠會給出假陰性結(jié)果。 .標(biāo)本采集部位的預(yù)備標(biāo)本采集部位的清潔消毒可去掉污染的微生物或其它雜物,但應(yīng)適度,過度清潔消毒有能夠會去掉或破壞靶微生物,故標(biāo)本采集部位的預(yù)備應(yīng)由訓(xùn)練有素的人員進(jìn)展。.標(biāo)本的類型和采集量標(biāo)本的類型: 血清(漿)、分泌物、痰、糞便、尿和腦脊液等。標(biāo)本的采集量:應(yīng)根據(jù)所測病原體而定。普通來說，假設(shè)標(biāo)本的量對病原體培育夠用的話，那么其量亦足以用于核酸提取及其后的擴增檢測。對于定

6、量測定來說，對標(biāo)本的搜集要求更為準(zhǔn)確。.采樣質(zhì)量的評價血清(漿)標(biāo)本:溶血、脂血等；分泌物、痰：評價內(nèi)容包括細(xì)胞組成，所需類型細(xì)胞的數(shù)量和核酸總量。 評價方法：包括肉眼察看,顯微鏡下察看和化學(xué)分析等。 .采樣及運輸容器 標(biāo)本的采集資料如棉簽應(yīng)為一次性運用；運輸容器亦應(yīng)為密閉的一次性安裝；采樣所用的防腐劑、抗凝劑及相關(guān)試劑資料不應(yīng)對核酸擴增及檢測過程呵斥干擾。 .標(biāo)本采集中的防污染 采集中要特別留意污染，防止混入操作者的頭發(fā)、表皮細(xì)胞、痰液等； 如運用玻璃器皿，必需經(jīng)高壓滅菌，以使能夠存在的RNase失活。.標(biāo)本保管 靶核酸(尤其是RNA)易受核酸酶的作用而迅速降解，因此標(biāo)本的保管對于核酸擴增測

7、定的有效性極為重要。 運用GITC作為穩(wěn)定劑保管標(biāo)本，標(biāo)本可在室溫下穩(wěn)定約7天。 .標(biāo)本保管臨床體液標(biāo)本長期保管應(yīng)在-70下。 如為提取核酸后用于DNA擴增分析的樣本，可于10 mmol/L Tris,1mmol/L EDTA(pH7.58.0)緩沖液中4 下保管。 用于RNA擴增分析的樣本，那么應(yīng)于上述緩沖液中-80或液氮下保管。 核酸的乙醇沉淀物那么可于-20下保管。 .標(biāo)本運送 樣本一經(jīng)采集，那么應(yīng)盡能夠快的送至檢測實驗室。樣本中如參與了適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑,如用于RNA測定參與GITC的血清(漿)樣本和用于DNA測定的EDTA抗凝血等,那么可在室溫下運送或郵寄。實驗室應(yīng)根據(jù)待測靶核酸的特性，對

8、各種臨床樣本的運送條件作出相應(yīng)的規(guī)定。.臨床基因擴增檢驗的室內(nèi)質(zhì)量控制測定前的質(zhì)量控制核酸樣本的制備及其質(zhì)量控制 統(tǒng)計學(xué)質(zhì)量控制質(zhì)量控制的評價.測定前質(zhì)量控制實驗室設(shè)備、儀器設(shè)備及管理理想的試劑和操作方法 人員培訓(xùn) .實驗室設(shè)備、儀器設(shè)備及管理臨床基因擴增檢驗實驗室應(yīng)有充分合理的空間、良好的照明和空調(diào)設(shè)備 ；實驗室儀器設(shè)備應(yīng)保養(yǎng)良好，實驗用品要到達(dá)相應(yīng)的要求。加樣器的校準(zhǔn)？帶濾塞吸頭的運用及質(zhì)檢？離心機？熱循環(huán)儀？水浴箱和/或恒溫干浴儀？酶標(biāo)儀和洗板機？.基因擴增儀器設(shè)備的質(zhì)控.帶濾塞吸頭的運用及質(zhì)檢首先制備一個含12%甘油及色素如甲基橙的水溶液，假設(shè)吸頭的最大體積為100l，那么將加樣器汲取

9、體積調(diào)至110120l，再套上吸頭后汲取上述有色液體。假設(shè)吸頭質(zhì)量好，那么有色液體不應(yīng)出如今濾塞之上，否那么闡明濾塞不嚴(yán)。 .帶濾塞吸頭的運用及質(zhì)檢用實驗來檢驗帶濾塞吸頭的質(zhì)量：先純化制備數(shù)份強陽性和數(shù)份陰性核酸標(biāo)本，然后將加樣器汲取量設(shè)至擴添加樣所需的體積，運用待評價帶濾塞吸頭對一份強陽性樣本來回汲取10次模擬10份陽性樣本的汲取，將最后一次的汲取液加至一含擴增反響液的管中，之后，換一個新吸頭，延續(xù)汲取10份陰性樣本分別至10個擴增反響管中，此過程反復(fù)35次，最后對每一管按所用試劑方法進(jìn)展擴增檢測。強陽性樣本應(yīng)為強陽性，陽性弱或出現(xiàn)陰性那么闡明吸頭能夠含有擴增抑制物。一切陰性樣本應(yīng)為陰性，出

10、現(xiàn)陽性那么闡明吸頭不能有效地防止氣溶膠對加樣器的污染。 .擴增儀孔間溫度的反復(fù)性和均一性的檢測方法一是運用一種熱電偶探針、微伏轉(zhuǎn)換器和自動圖示記錄儀組成擴添加熱模塊孔內(nèi)溫度監(jiān)測記錄系統(tǒng)，當(dāng)孔間溫度變異超出1時，其可測出來。詳細(xì)做法是將裝有TE緩沖液并上加石蠟油的擴增反響管放置于擴增儀各孔中，熱電偶探針透過擴增反響管蓋插至緩沖液中，然后按程序進(jìn)展一個常規(guī)的PCR擴增，加熱模塊如為96孔，那么至少要測定12孔不同位置孔內(nèi)的溫度，在整個擴增過程中，可挪動熱電偶探針至上述不同孔中監(jiān)測溫度，但每一孔內(nèi)溫度監(jiān)測至少要有一個擴增周期。 .擴增儀孔間溫度的反復(fù)性和均一性的檢測方法第二種方法并非直接測定孔內(nèi)溫度

11、，而是經(jīng)過擴增功能來間接獲知孔間的均一性，即將加有一知的含一定濃度的陽性質(zhì)控樣本的擴增反響管置于擴增儀各孔中按常規(guī)進(jìn)展擴增檢測，察看結(jié)果的一致性程度，假設(shè)有某一個或幾個孔結(jié)果有問題，那么應(yīng)確定這一個或幾個孔能否會反復(fù)性地得到假陰性結(jié)果，假設(shè)是，那么闡明相應(yīng)孔的熱傳導(dǎo)有損壞。 .理想的試劑和操作方法 試劑盒的質(zhì)檢定量測定的精細(xì)度是測定組成步驟的變異和的平方根(SD)= 上式中SDa、SDb、SDc是步驟a、b、c等例如試劑預(yù)備、標(biāo)本采集、核酸提取、擴增和產(chǎn)物檢測等的規(guī)范差； .理想的試劑和操作方法改善測定精細(xì)度的措施必需首先著重在最不精細(xì)的步驟上，應(yīng)對試劑預(yù)備、標(biāo)本搜集、核酸提取、測定方法和儀器

12、操作寫出“規(guī)范操作程序(SOP) .人員培訓(xùn) 臨床基因擴增檢驗的操作主要是標(biāo)本處置中的核酸提取步驟，這其中所涉及的又主要是加樣器的運用，雖然操作簡單，但由于均為微量操作，要獲得穩(wěn)定可靠的測定結(jié)果，操作人員需求一定的專業(yè)技術(shù)知識和閱歷，要盡能夠做到知其然又知其所以然。 .核酸樣本的制備、擴增檢測及其質(zhì)量控制普通核酸提取試劑促使靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋出的原理核酸的分別純化靶核酸提取的質(zhì)量 臨床標(biāo)本及核酸提取中能夠存在的抑制和干擾物質(zhì) 核酸樣本制備及擴增檢測的質(zhì)控 產(chǎn)物檢測的質(zhì)控 .普通核酸提取試劑促使靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋出的原理靶核酸可以與宿主細(xì)胞整合，核內(nèi)游離及胞漿內(nèi)各種構(gòu)形存在于細(xì)胞內(nèi)，如測定的是病原微

13、生物,那么靶核酸存在于細(xì)菌、病毒、原蟲或真菌細(xì)胞內(nèi)，假設(shè)上述細(xì)胞破裂,那么靶核酸亦可存在于細(xì)胞外。 普通均運用去垢劑(如Triton-100)裂解細(xì)胞，用一種蛋白裂解酶(如蛋白酶K)消化結(jié)合于核酸的蛋白質(zhì)，從而將靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋放出來。.核酸的分別純化 核酸的分別純化就是要將蛋白、脂類等干擾核酸擴增的物質(zhì)去除。 經(jīng)典方法硅吸附法對于商品核酸提取試劑盒，臨床實驗室在運用前，必需對其核酸提取純度和效率進(jìn)展評價。 .靶核酸提取的質(zhì)量 純化的靶核酸的完好性：可運用凝膠電泳將樣本的核酸提取物與一核酸規(guī)范比較測定。 核酸提取的產(chǎn)率：可在A260讀數(shù)測定。核酸純度：可經(jīng)過提取物A260/A280比率斷定血清

14、或血漿中病原體核酸純化純度：采用一種間接的方法，即使用知病原體含量的溶血和/或脂血標(biāo)本用待評價試劑提取，然后進(jìn)展擴增檢測，比較所得到的結(jié)果 .臨床標(biāo)本及核酸提取中能夠存在的抑制和干擾物質(zhì) 臨床標(biāo)本中：血清或血漿中的血紅素及其代謝產(chǎn)物、痰中酸性多糖和糖蛋白成份 、降解靶核酸的核酸酶等。核酸提取中：許多試劑如乙二胺四乙酸(EDTA)、去垢劑如十二烷基硫酸鹽(SDS)和chaotrope試劑如異硫氰酸胍和鹽酸胍等、酚、氯仿、乙醇等有機溶劑 。 .核酸樣本制備及擴增檢測的質(zhì)控對臨床標(biāo)本中能夠存在的抑制/干擾物的質(zhì)控措施 核酸提取及擴增有效性的質(zhì)控 .對臨床標(biāo)本中能夠存在的抑制/干擾物的質(zhì)控措施質(zhì)控措施

15、： 采用內(nèi)質(zhì)控internal control, IC通常稱為內(nèi)標(biāo)的方法 內(nèi)標(biāo)有兩種,即競爭性的和非競爭性的內(nèi)標(biāo)。 內(nèi)標(biāo)設(shè)置的必要性？.核酸提取及擴增有效性的質(zhì)控 知弱陽性質(zhì)控樣本基質(zhì)與待測標(biāo)本一樣：至少帶1份，其最后的檢測結(jié)果，應(yīng)是核酸提取和擴增檢測的有效性的綜合反映。知陰性質(zhì)控樣本基質(zhì)與待測標(biāo)本一樣：至少帶1份，擴增測定的結(jié)果可以判別核酸提取過程中能否發(fā)生污染。 .統(tǒng)計學(xué)質(zhì)量控制 理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件測定中質(zhì)控樣本的設(shè)置、數(shù)量及陳列順序 統(tǒng)計學(xué)質(zhì)控的特點 統(tǒng)計質(zhì)控方法.理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件基質(zhì)與待測樣本一致；所含待測物濃度接近實驗的決議性程度；穩(wěn)定；靶值或預(yù)期結(jié)果已定；無知的生物傳

16、染危險性；單批可大量獲得；價廉.測定中質(zhì)控樣本的設(shè)置、數(shù)量及陳列順序每次檢測終究運用幾個質(zhì)控樣本并排在臨床標(biāo)本中的哪個位置最為適宜？從實際上說，為最大能夠地檢出實驗的隨機和系統(tǒng)誤差，應(yīng)每隔幾份臨床標(biāo)本插入1份質(zhì)控樣本，但思索國內(nèi)目前的實踐情況及本錢效益，普通來說，假設(shè)臨床基因擴增檢驗的標(biāo)本量不是特別大，定性測定有一份接近cut-off的弱陽性和一份陰性質(zhì)控樣本應(yīng)可以滿足要求。而定量測定那么要根據(jù)實驗的測定范圍，采用高、中、低三種濃度的質(zhì)控樣本。至于在測定中的陳列順序，可排于規(guī)范品或校準(zhǔn)品之后，臨床樣本之前。 .臨床基因擴增檢驗室內(nèi)質(zhì)控的獨特性即監(jiān)測污染發(fā)生的陰性質(zhì)控的設(shè)置。 應(yīng)該包括1份陰性原

17、血清樣本、1份在標(biāo)本核酸提取過程中帶入的一個空管和僅含擴增反響混合液的管。 .陰性原血清質(zhì)控樣本的功能 監(jiān)測實驗室的以前擴增產(chǎn)物的污染； 由實驗操作所致的標(biāo)本間的交叉污染；擴增反響試劑的污染。 .在標(biāo)本核酸提取過程中帶入的一個空管的功能根本功能與陰性原血清質(zhì)控樣本一樣，但不同的是，其基質(zhì)為水，不含陰性原血清質(zhì)控樣本中能夠有的擴增抑制物，因此對污染的反映更為靈敏；不能取代原血清陰性樣本。.僅含擴增反響混合液的管的功能監(jiān)測擴增試劑能否發(fā)生污染，具有較強的污染鑒別性。如想鑒別實驗室能否發(fā)生污染，可將一個或多個空管翻開靜置于標(biāo)本制備區(qū)3060分鐘，然后參與擴增反響混合液同時以水替代核酸樣本擴增，如為陽

18、性，而上述僅含擴增反響混合液的管為陰性，那么闡明實驗室以前擴增產(chǎn)物的存在。 .統(tǒng)計學(xué)質(zhì)控的特點 檢驗誤差有兩類，一是系統(tǒng)誤差，一是隨機誤差。系統(tǒng)誤差通常表現(xiàn)為質(zhì)控物測定均值的漂移，是由操作者所運用的儀器設(shè)備、試劑、規(guī)范品或校準(zhǔn)物出現(xiàn)問題而呵斥的，這種誤差可以經(jīng)過前述的措施方法加以控制，是可以排除的。隨機誤差那么表現(xiàn)為測定SD的增大，主要是由實驗操作人員的操作等隨機要素所致，其出現(xiàn)難以完全防止和控制。.統(tǒng)計學(xué)質(zhì)控的功能統(tǒng)計學(xué)質(zhì)控的功能就是發(fā)現(xiàn)誤差的產(chǎn)生及分析誤差產(chǎn)生的緣由，采取措施予以防止。開展統(tǒng)計質(zhì)量控制前，應(yīng)將可以控制的誤差產(chǎn)生要素盡能夠地加以控制，這不但是做好室內(nèi)質(zhì)控的前提，也是保證常規(guī)檢

19、驗任務(wù)質(zhì)量的先決條件。 .統(tǒng)計質(zhì)控方法 基線測定質(zhì)控規(guī)那么的表達(dá)方式及定義 Levey-Jennings質(zhì)控圖方法 Levey-Jennings質(zhì)控圖結(jié)合Westgard多規(guī)那么質(zhì)控方法 累積和 (CUSUM) 質(zhì)控方法 “即刻法質(zhì)控方法 .基線測定最正確條件下的變異Optimal conditions variance, OCV和常規(guī)條件下的變異Routine conditions variance, RCV； 當(dāng)RCV與OCV接近，或小于2 OCV時，那么RCV是可以接受的。以上為批間變異。批內(nèi)變異的測定；室內(nèi)質(zhì)控物的測定準(zhǔn)確度的評價。 .臨床基因擴增檢驗IQC統(tǒng)計計算問題可運用質(zhì)控樣本擴

20、增后的拷貝數(shù)/ml或IU/ml來進(jìn)展統(tǒng)計計算，也可用其對數(shù)值進(jìn)展。由于基因擴增結(jié)果的原始數(shù)據(jù)通常很大，故運用其對數(shù)值來進(jìn)展質(zhì)控統(tǒng)計分析能夠要更為方便一些。 .質(zhì)控規(guī)那么的表達(dá)方式及定義 質(zhì)控規(guī)那么的表達(dá)方式 質(zhì)控規(guī)那么的功能 常用質(zhì)控規(guī)那么的符號及定義 .質(zhì)控規(guī)那么的表達(dá)方式通常質(zhì)控規(guī)那么以符號AL來表示，其中A為質(zhì)控測定中超出質(zhì)量控制限的測定值的個數(shù)，L為控制限，通常用均值或均值13SD來表示。 當(dāng)質(zhì)控測定值超出控制限L時，即可將該批測定判為失控。 常用的13S質(zhì)控規(guī)那么，其中1為原式中的A，3s為原式中的L，表示均值3s，其確切的含義為：在質(zhì)控測定值中，假設(shè)有一個測定值超出均值3s范圍，即

21、可將該批測定判為失控。 .質(zhì)控規(guī)那么的功能 簡單地說就是用于判別測定批的失控還是在控 。當(dāng)整個質(zhì)控過程中運用同一個質(zhì)控物時，可用來判別單個或多個測定批內(nèi)該質(zhì)控物的測定值能否失控； 當(dāng)整個質(zhì)控過程中運用兩個或兩個以上的不同的質(zhì)控物時，可用來判別同一或多個測定批內(nèi)的兩個或兩個以上的質(zhì)控物的測定值能否失控。 .常用質(zhì)控規(guī)那么的符號及定義 符 號 定 義12S 一個質(zhì)控測定值超出2s控制限。13S 一個質(zhì)控測定值超出3s控制限。22S 兩個延續(xù)的質(zhì)控測定值同時超出+2s或2s控制限。R4S 同一批測定中，兩個不同濃度質(zhì)控物的測定值之間的 差值超出4s控制限。31S 三個延續(xù)的質(zhì)控測定值同時超出+1s或

22、1s控制限。41S 四個延續(xù)的質(zhì)控測定值同時超出+1s或1s控制限。7X 七個延續(xù)的質(zhì)控測定值同時處于均值的同一側(cè)。7T 七個延續(xù)的質(zhì)控測定值呈現(xiàn)一個向上或向下的趨勢變化。8X 八個延續(xù)的質(zhì)控測定值同時處于均值的同一側(cè)。9X 九個延續(xù)的質(zhì)控測定值同時處于均值的同一側(cè)。10X 十個延續(xù)的質(zhì)控測定值同時處于均值的同一側(cè)。.Levey-Jennings質(zhì)控圖方法 也稱Shewhart質(zhì)控圖，是由美國的Shewhart于1924年首先提出，并用于工業(yè)產(chǎn)品的質(zhì)量控制。后來二十世紀(jì)五十年代初，Levey-Jennings將其引入臨床檢驗的質(zhì)量控制 。經(jīng)Henry和Segalove的改良，即為目前常用的Le

23、vey-Jennings質(zhì)控圖。.質(zhì)控圖.質(zhì)控圖.Levey-Jennings質(zhì)控圖根本的統(tǒng)計學(xué)含義穩(wěn)定條件下，在20個IQC結(jié)果中不應(yīng)有多于1個結(jié)果超越2SD95.5%可信限限制；在1000個測定結(jié)果中超越3SD99.7%可信限的結(jié)果不多于3個。如以3s為失控限，假失控的概率為0.3%。 .質(zhì)控圖的記錄的其它方面IQC數(shù)據(jù)是用來控制實踐過程的，因此其表達(dá)應(yīng)清楚和直接，在質(zhì)控圖上記錄結(jié)果時，應(yīng)同時記錄測定的詳細(xì)情況，如日期、試劑、質(zhì)控物批號和含量及測定者姓名等。 .Levey-Jennings質(zhì)控圖方法的特點優(yōu)點是簡單明了；缺陷： 以2s為失控限，假失控的概率太高，通常不能接受； 以3s為失控

24、限，假失控的概率低，但誤差檢出才干不強。 .Levey-Jennings質(zhì)控圖結(jié)合Westgard多規(guī)那么質(zhì)控方法 Westgard多規(guī)那么質(zhì)控方法即是將前述的多個質(zhì)控規(guī)那么同時運用進(jìn)展質(zhì)控判別的方法。最初常用的有六個質(zhì)控規(guī)那么，即12S、13S、22S、R4S、41S和10X，其中12S規(guī)那么作為告警規(guī)那么，當(dāng)出現(xiàn)質(zhì)控測定值違反12S規(guī)那么時，那么起動其它規(guī)那么進(jìn)展判別。只需當(dāng)運用一切質(zhì)控規(guī)那么判別確定某測定批在控時才闡明該測定批在控，只需上述質(zhì)控規(guī)那么之一判別測定批失控那么即以為該測定批失控。通常上述規(guī)那么中，13S和R4S規(guī)那么反映的是隨機誤差，而22S、41S和10X反映的是系統(tǒng)誤差，

25、系統(tǒng)誤差超出一定的程度，也可從13S和R4S規(guī)那么反映出來。 .Westgard多規(guī)那么質(zhì)控方法的特點其是在Levey-Jennings質(zhì)控圖方法的根底上產(chǎn)生的，自然也就具有Levey-Jennings質(zhì)控圖方法的優(yōu)點，可經(jīng)過類似的質(zhì)控圖來進(jìn)展分析； 假失控和假告警概率低； 誤差檢出才干加強 。.累積和 (CUSUM) 質(zhì)控方法累積和 (CUSUM) 質(zhì)控方法于1977年由Westgard等提出,對系統(tǒng)誤差有較好的測出才干。 .常用的累積和 (CUSUM) 質(zhì)控規(guī)那么 質(zhì)控規(guī)那么 起動累積和計算的閾值k 質(zhì)控限h 1.0s 2.7s 1.0s 3.0s 0.5s 5.1s.累積和 (CUSUM

26、) 質(zhì)控詳細(xì)步驟 與上述其它質(zhì)控方法一樣,首先得到測定均值和規(guī)范差(s) ;確定起動累積和計算的閾值k和質(zhì)控限h; 確定質(zhì)控規(guī)那么; 繪制質(zhì)控圖;累積和(CUSUM)計算;如有失控，那么采取措施予以糾正，再開場上述累積和計算。 .累積和 (CUSUM) 質(zhì)控圖.“即刻法質(zhì)控方法 “即刻法質(zhì)控方法的本質(zhì)是一種統(tǒng)計學(xué)方法,即Crubs異常值取舍法 ；只需有3個以上的數(shù)據(jù)即可決議能否有異常值的存在。 .“即刻法質(zhì)控方法詳細(xì)步驟 將延續(xù)的質(zhì)控測定值按從小到大陳列，即x1、x2、x3、x4、x5、x6、xnx1為最小值，xn為最大值； 計算均值()和規(guī)范差(s);按下述公式計算SI上限和SI下限值； S

27、I上限=x最大值 均值/s SI下限=均值 x最大值 /s將SI上限和SI下限值與SI值表中的數(shù)值比較。 .質(zhì)控結(jié)果的判別 SI上限和SI下限值均 n3s對應(yīng)的值時，闡明該質(zhì)控測定值的變化已超出3s，屬“失控。.室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)的評價 IQC為一集體活動，除實踐測定者外，還應(yīng)有另外一人對測定數(shù)據(jù)進(jìn)展質(zhì)檢。不能將IQC作為一個監(jiān)察方法，當(dāng)發(fā)現(xiàn)一次測定未到達(dá)質(zhì)量規(guī)范時，應(yīng)以建立性的而非批判的方式去探查失控的緣由。除了將IQC數(shù)據(jù)作為日常質(zhì)控外，還應(yīng)定期評價累積數(shù)據(jù)以監(jiān)測在測定操作中的長期變化趨勢。評價應(yīng)定期進(jìn)展。.弱陽性質(zhì)控樣本常見的失控緣由 核酸提取中的隨機誤差。如核酸提取中的喪失、有機溶劑的去除不

28、徹底、標(biāo)本中擴增抑制物的殘留等。 儀器的問題。如擴增儀孔間溫度的不均一性、孔內(nèi)溫度與所示溫度的不一致性等。 試劑的問題。如Taq酶和/或逆轉(zhuǎn)錄酶的失活、探針的純度及標(biāo)志效率和核酸提取試劑的效率等。 .陰性質(zhì)控樣本的失控緣由 主要為擴增產(chǎn)物的“污染和/或臨床標(biāo)本的核酸提取過程中發(fā)生的標(biāo)本間的交叉 “污染. .室內(nèi)質(zhì)控的局限性IQC可確保每次測定與確定的質(zhì)量規(guī)范一致，但不能保證在單個的測定樣本中不出現(xiàn)誤差。比如樣本鑒別錯誤、樣本汲取錯誤、結(jié)果記錄錯誤等。此類誤差的發(fā)生率在不同的實驗室有所不同，普通要求小于0.1%，且應(yīng)均勻地分布于測定前、測定中和測定后的不同階段。.影響臨床基因擴增檢驗結(jié)果的最關(guān)鍵要素產(chǎn)物“污染Carry-over)測定人員的操作：標(biāo)本混淆；貼錯標(biāo)簽、核酸提取等試劑.防止基因擴增檢驗假陽性結(jié)果的措施嚴(yán)厲的實驗室分區(qū)；運用帶“濾心的吸頭；設(shè)立“陰性質(zhì)控與標(biāo)本同時處置；運用防“污染含UNG的PCR試劑；臨床“假陽性問題：病原微生物如結(jié)核桿菌經(jīng)藥物治療后已死亡，但PCR仍可為陽性，故治療終了后至少兩周內(nèi)不宜做PCR檢測。.防止基因擴增檢驗假陰性結(jié)果的措施防止由于來自于標(biāo)本的血紅蛋白、肝素、某些激素或來自標(biāo)本處置中的去垢劑、有機溶劑的抑制造用的措施：純化核酸；標(biāo)本反復(fù)雙份測定；