1、難點(diǎn)突破練741(2019長(zhǎng)沙長(zhǎng)郡中學(xué)模擬)下列關(guān)于基因工程的敘述中，正確的是()ADNA連接酶和RNA聚合酶催化生成的化學(xué)鍵相同BDNA連接酶對(duì)“縫合”序列不進(jìn)行特異性識(shí)別，無專一性催化特點(diǎn)C受體細(xì)菌若能表達(dá)質(zhì)粒載體上抗性基因，即表明重組質(zhì)粒成功導(dǎo)入D培育轉(zhuǎn)基因油菜，需對(duì)受體細(xì)胞進(jìn)行氯化鈣處理2在DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中有三次過濾(1)過濾用蒸餾水稀釋過的雞血細(xì)胞液(2)過濾含黏稠物的物質(zhì)的量濃度為0.14mol/L的NaCl溶液(3)過濾溶解有DNA的物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液以上三次過濾分別為了獲得()A含核物質(zhì)的濾液、紗布上的黏稠物、含DNA的濾液B含核物質(zhì)的濾液、濾液

2、中DNA黏稠物、含DNA的濾液C含核物質(zhì)的濾液、濾液中DNA黏稠物、紗布上的DNAD含較純DNA濾液、紗布上的黏稠物、含DNA的濾液3金茶花是中國特有的觀賞品種，但易得枯萎病。科學(xué)家在某植物中找到了抗枯萎病的基因，下圖所示的方法培育出了抗枯萎病的金茶花新品種。相關(guān)敘述正確的是()A圖中在基因工程中依次叫做基因表達(dá)載體、目的基因B形成的操作中使用的酶有限制酶、DNA聚合酶和DNA連接酶C由培育至的過程中，依次經(jīng)歷了脫分化、再分化過程D在幼苗中檢測(cè)到抗枯萎病基因標(biāo)志著成功培育出新品種4在基因工程中利用某目的基因(圖甲)和P1噬菌體載體(圖乙)構(gòu)建重組DNA。限制性核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)分別是Bgl、

3、EcoR和Sau3A。下列分析錯(cuò)誤的是()A構(gòu)建重組DNA時(shí)，可用Bgl和Sau3A切割目的基因所在片段和P1噬菌體載體B構(gòu)建重組DNA時(shí)，可用EcoR和Sau3A切割目的基因所在片段和P1噬菌體載體C圖乙中的P1噬菌體載體只用EcoR切割后，含有2個(gè)游離的磷酸基團(tuán)D用EcoR切割目的基因所在片段和P1噬菌體載體，再用DNA連接酶連接，只能產(chǎn)生一種重組DNA5(2019天津一中調(diào)研)chIL基因是藍(lán)藻擬核DNA上控制葉綠素合成的基因。為研究該基因?qū)θ~綠素合成的控制，需要構(gòu)建缺失chIL基因的變異株，構(gòu)建過程如圖所示。下列敘述不正確的是()AchIL基因的基本組成單位是脫氧核糖核苷酸B過程應(yīng)使用

4、不同的限制性核酸內(nèi)切酶C構(gòu)建的基因表達(dá)載體中應(yīng)含有起始密碼子和終止密碼子D若操作成功，可用含紅霉素的培養(yǎng)基篩選出所需變異株6(2018溫州中學(xué)月考)通常禽流感病毒只能侵染鳥類，人流感病毒只能侵染哺乳類?，F(xiàn)用高致病性禽流感病毒和低致病性人流感病毒(哺乳類感染病毒后基本無癥狀)的核酸完成如下實(shí)驗(yàn)，該實(shí)驗(yàn)不能說明()A步驟說明流感病毒的遺傳物質(zhì)是DNA片段B步驟需要同種限制酶和DNA連接酶處理cDNA和質(zhì)粒C通過和產(chǎn)生的活病毒可能是不同病毒間核酸重組的結(jié)果D步驟說明豬的呼吸道上皮細(xì)胞可作為活病毒的宿主細(xì)胞7(2018煙臺(tái)高考適應(yīng)性練習(xí))干擾素是動(dòng)物和人體細(xì)胞受到病毒感染后產(chǎn)生的一種糖蛋白，具有抗病毒

5、、抑制細(xì)胞增殖及抗腫瘤的作用。利用基因工程技術(shù)培育能生產(chǎn)干擾素的植物流程如圖所示。請(qǐng)回答下列問題：限制酶識(shí)別序列和切割位點(diǎn)EcoRGAATTCBamHSmaApaGGATCCCCCGGGGGGCCC(1)首先獲取的動(dòng)物干擾素基因稱為_。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增干擾素基因時(shí)，設(shè)計(jì)引物序列的主要依據(jù)是_。(2)過程中剪切質(zhì)粒和目的基因時(shí)所需要的工具酶是_和_。酶切后，目的基因形成的兩個(gè)黏性末端序列_(填“相同”或“不相同”)。(3)過程中將重組質(zhì)粒導(dǎo)入根瘤農(nóng)桿菌時(shí)，常用_處理根瘤農(nóng)桿菌，其目的是_。(4)在培育愈傷組織的固體培養(yǎng)基中，除了無機(jī)鹽、有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、瓊脂、植物激素外，還需添加卡那霉素?？敲顾?/p>

6、的作用是_。在分子水平上通常采用_技術(shù)檢測(cè)干擾素基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞。8胰島素A、B鏈分別表達(dá)法是生產(chǎn)胰島素的方法之一。圖1是該方法所用的基因表達(dá)載體，圖2表示利用大腸桿菌作為工程菌生產(chǎn)人胰島素的基本流程(融合蛋白A、B分別表示半乳糖苷酶與胰島素A、B鏈融合的蛋白)。請(qǐng)回答下列問題：(1)圖1基因表達(dá)載體中沒有標(biāo)注出來的基本結(jié)構(gòu)是_。用(2)圖1中啟動(dòng)子是_酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能啟動(dòng)目的基因的表達(dá)；氨芐青霉素抗性基因的作用是_。(3)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)必需的工具酶有_。(4)半乳糖苷酶與胰島素A鏈或B鏈融合表達(dá)，可將胰島素肽鏈上蛋白酶的切割位點(diǎn)隱藏在內(nèi)部，其意義在于_。(5)溴化氰能切

7、斷肽鏈中甲硫氨酸羧基端的肽鍵，溴化氰處理相應(yīng)的融合蛋白能獲得完整的A鏈或B鏈，且半乳糖苷酶被切成多個(gè)肽段，這是因?yàn)開。(6)根據(jù)圖2中胰島素的結(jié)構(gòu)，請(qǐng)推測(cè)每個(gè)胰島素分子中所含游離氨基的數(shù)量。你的推測(cè)結(jié)果是_，理由是_。9(2018福州一中模擬)請(qǐng)回答基因工程方面的有關(guān)問題：(1)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，其原理與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制類似(如下圖所示)。圖中引物為單鏈DNA片段，它是子鏈合成延伸的基礎(chǔ)。從理論上推測(cè)，第四輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物A的DNA片段所占的比例為_。在第_輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長(zhǎng)的DNA片段。(2)設(shè)計(jì)引物是PCR技術(shù)關(guān)鍵步驟之一。某同學(xué)設(shè)計(jì)的兩組引物(只標(biāo)注了

8、部分堿基序列)都不合理(如下圖)，請(qǐng)分別說明理由。第1組：_；第2組：_。(3)PCR反應(yīng)體系中含有熱穩(wěn)定DNA聚合酶，下面的表達(dá)式不能正確反映DNA聚合酶的功能，這是因?yàn)開。(4)用限制酶EcoR、Mbo單獨(dú)或聯(lián)合切割同一種質(zhì)粒，得到的DNA片段長(zhǎng)度如下圖(1kb即1000個(gè)堿基對(duì))，請(qǐng)畫出質(zhì)粒上EcoR、Mbo的切割位點(diǎn)。10下表是幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，其中切割位點(diǎn)相同的酶不重復(fù)標(biāo)注。請(qǐng)回答下列問題：限制酶識(shí)別序列及切割位點(diǎn)BamHGGATCCCCTAGGBclTGATCAACTAGTSau3AGATCCTAGHindAAGCTTTTCGA

9、A(1)用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用_兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過_酶作用后獲得重組質(zhì)粒。為了擴(kuò)增重組質(zhì)粒，需將其轉(zhuǎn)入處于_態(tài)的大腸桿菌中。(2)為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加_，平板上長(zhǎng)出的菌落，常用PCR鑒定，所用的引物組成為圖2中_。(3)若BamH酶切的DNA末端與Bcl酶切的DNA末端連接，連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為_，對(duì)于該部位，這兩種酶_(填“都能”“都不能”或“只有一種能”)切開。(4)若用Sau3A酶切圖1質(zhì)粒最多可能獲得_種大小不同的DNA片段。11(2019長(zhǎng)春模擬)抗凝血酶蛋白是一種血漿糖蛋白，臨床上主要用于

10、血液性疾病的治療。凝乳酶是奶酪生產(chǎn)中的關(guān)鍵性酶。下列是生產(chǎn)這兩種酶的相關(guān)思路，請(qǐng)回答下列問題：(1)圖1為通過培育轉(zhuǎn)基因奶牛獲得抗凝血酶蛋白的流程。圖中過程a指的是利用_法將目的基因?qū)胧芫眩荏w細(xì)胞不選用體細(xì)胞的理由是_。在胚胎移植前，需進(jìn)行_，目的是確定要培育的個(gè)體能產(chǎn)奶?？刹捎胈法來鑒定牛奶中是否含有抗凝血酶蛋白。(2)從牛胃液中分離得到的凝乳酶以其催化能力強(qiáng)而被廣泛應(yīng)用，研究人員運(yùn)用基因工程技術(shù)，將編碼該酶的基因轉(zhuǎn)移到了微生物細(xì)胞中。從牛胃細(xì)胞中提取mRNA，再通過_形成cDNA。以此cDNA為模板通過PCR擴(kuò)增目的基因，有時(shí)需要在引物的5端設(shè)計(jì)_(填“限制酶”“DNA連接酶”或“R

11、NA聚合酶”)識(shí)別序列，以便構(gòu)建基因表達(dá)載體。為提高基因表達(dá)載體的比例，在構(gòu)建基因表達(dá)載體DNA分子(如圖2所示)時(shí)最好選用_作為限制酶。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，如果將該凝乳酶的第20位和第24位氨基酸變?yōu)榘腚装彼?，則其催化能力將提高2倍?，F(xiàn)已知通過蛋白質(zhì)工程可生產(chǎn)高效凝乳酶，請(qǐng)寫出有關(guān)制備步驟：_。12(2019蘇州調(diào)研)科研人員利用胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)對(duì)干擾素基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療，其技術(shù)流程如圖1；圖2表示目的基因及限制酶切點(diǎn)；圖3表示質(zhì)粒，據(jù)圖回答：(1)重組細(xì)胞的細(xì)胞核來自_細(xì)胞。(2)將基因?qū)隕S細(xì)胞而不是導(dǎo)入上皮細(xì)胞是因?yàn)镋S細(xì)胞具有_。(3)步驟導(dǎo)入的目的基因是_。(4)從基因組數(shù)據(jù)

12、庫中查詢干擾素基因的核苷酸序列，以便根據(jù)其序列設(shè)計(jì)合成引物用于PCR擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增過程至少第_輪循環(huán)后才能獲得純目的基因片段(僅含引物之間的序列)。(5)對(duì)干擾素基因片段和質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切時(shí)，可選用限制酶的組合為_或_。(6)將步驟獲得的ES細(xì)胞在熒光顯微鏡下觀察，選擇發(fā)_色熒光的細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)。為檢測(cè)干擾素基因是否表達(dá)，可以采用_的方法。答案精析1A2A過濾用蒸餾水稀釋過的雞血細(xì)胞液應(yīng)取濾液(其內(nèi)含DNA)；過濾含黏稠物的物質(zhì)的量濃度為0.14mol/L的NaCl溶液應(yīng)取黏稠物(因其內(nèi)含析出的DNA)；DNA易溶于物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液，故過濾該溶液時(shí)應(yīng)取濾液(其內(nèi)溶有D

13、NA)。3C4D由題圖可知，Bgl、Sau3A及EcoR三種酶在目的基因和P1噬菌體上都有切口，故可用Bgl和Sau3A或EcoR和Sau3A切割目的基因所在片段和P1噬菌體載體，A、B項(xiàng)正確；從圖乙知P1噬菌體載體為環(huán)狀DNA，只用EcoR切割后產(chǎn)生兩條反向雙螺旋鏈狀DNA，有2個(gè)游離的磷酸基團(tuán)，C項(xiàng)正確；用EcoR切割目的基因所在片段和P1噬菌體載體，再用DNA連接酶連接，能產(chǎn)生不止一種重組DNA，D項(xiàng)錯(cuò)誤。5C6A步驟說明流感病毒的遺傳物質(zhì)是RNA，A項(xiàng)錯(cuò)誤；步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，需要同種限制酶和DNA連接酶處理cDNA和質(zhì)粒，B項(xiàng)正確；據(jù)題意可知，兩種流感病毒單獨(dú)存在時(shí)不能使豬患流

14、感，但是通過和產(chǎn)生的活病毒可使豬患流感，故可能是不同病毒間核酸重組的結(jié)果，C項(xiàng)正確；經(jīng)過步驟豬患流感，說明豬的呼吸道上皮細(xì)胞可作為活病毒的宿主細(xì)胞，D項(xiàng)正確。7(1)目的基因干擾素基因兩端的部分核苷酸序列(2)BamHEcoR不相同(3)Ca2使其成為感受態(tài)細(xì)胞，最終使干擾素基因插入馬鈴薯細(xì)胞的染色體DNA上(4)篩選出導(dǎo)入重組質(zhì)粒的植物細(xì)胞DNA分子雜交解析(1)在基因工程中，獲取的動(dòng)物干擾素基因稱為目的基因。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增干擾素基因時(shí)，需要依據(jù)干擾素基因兩端的部分核苷酸序列設(shè)計(jì)引物序列。(2)題圖顯示：干擾素基因中存在Sma的識(shí)別位點(diǎn)，若使用Sma切割質(zhì)粒和外源DNA，則會(huì)破壞干擾素基

15、因，因此過程所示的構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)不能使用Sma切割。BamH和EcoR的識(shí)別位點(diǎn)位于目的基因的兩側(cè)，質(zhì)粒上也有BamH和EcoR的識(shí)別位點(diǎn)，因此，過程中剪切質(zhì)粒和目的基因時(shí)所需要的工具酶是BamH和EcoR。因BamH和EcoR的識(shí)別位點(diǎn)不同，所以酶切后，目的基因形成的兩個(gè)黏性末端序列不相同。(3)過程中將重組質(zhì)粒導(dǎo)入根瘤農(nóng)桿菌時(shí)，常用Ca2處理根瘤農(nóng)桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞，最終使干擾素基因插入馬鈴薯細(xì)胞的染色體DNA上。其(4)重組質(zhì)粒中含有的抗卡那霉素基因?qū)儆跇?biāo)記基因，作用是鑒別受體細(xì)胞是否含有目的基因，便于篩選?？梢?，在培育愈傷組織的固體培養(yǎng)基中添加卡那霉素的作用是篩選出導(dǎo)入重組質(zhì)粒的

16、植物細(xì)胞。在分子水平上檢測(cè)干擾素基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，通常采用DNA分子雜交技術(shù)。8(1)終止子(2)RNA聚合作為標(biāo)記基因，將含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌篩選出來(3)限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶(4)防止胰島素的A、B鏈被細(xì)菌體內(nèi)蛋白酶降解(5)半乳糖苷酶中含有多個(gè)甲硫氨酸，而胰島素A、B鏈中不含有甲硫氨酸(6)至少2個(gè)兩條肽鏈的一端各有一個(gè)游離的氨基，氨基酸R基中可能還含有游離的氨基9(1)15/16三(2)引物和引物局部發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效引物自身折疊后會(huì)出現(xiàn)局部堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效(3)DNA聚合酶只能將單個(gè)脫氧核苷酸連續(xù)結(jié)合到雙鏈DNA片段的引物鏈上(4)如圖所示解析(1)根據(jù)PCR過

17、程特點(diǎn)可知，以原來的每條母鏈為模板合成的兩個(gè)新DNA分子中，只含有引物A或引物B，而以新合成的子鏈為模板合成新DNA分子時(shí)，兩種引物都含有，故第四輪循環(huán)共產(chǎn)生16個(gè)DNA分子，其中含有引物A的分子是15個(gè)，占15/16。由題圖知，第一、二輪循環(huán)合成的子鏈長(zhǎng)度均不同，根據(jù)DNA半保留復(fù)制的特點(diǎn)，前兩輪循環(huán)產(chǎn)生的4個(gè)DNA分子的兩條鏈均不等長(zhǎng)，第三輪循環(huán)產(chǎn)生的DNA分子存在等長(zhǎng)的兩條核苷酸鏈。(2)引物是單鏈DNA時(shí)才能與DNA結(jié)合，而單鏈DNA的堿基互補(bǔ)配對(duì)部分容易形成雙鏈結(jié)構(gòu)而失去其功能。從圖示可以看出，第1組引物和引物局部堿基互補(bǔ)配對(duì)，易形成雙鏈結(jié)構(gòu)而失效。第2組引物相互間不能發(fā)生堿基互補(bǔ)配

18、對(duì)，但自身折疊后會(huì)出現(xiàn)局部堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效。(3)DNA聚合酶的作用是將單個(gè)脫氧核苷酸連續(xù)結(jié)合到雙鏈DNA片段的引物鏈上，而不能直接將兩個(gè)脫氧核苷酸連在一起。(4)單獨(dú)用EcoR可將質(zhì)粒切成一段，說明在其上有一個(gè)EcoR切點(diǎn)。單獨(dú)使用Mbo能將環(huán)狀質(zhì)粒切成2.5kb和11.5kb兩段，說明在質(zhì)粒上有兩個(gè)Mbo切點(diǎn)，且切點(diǎn)在2.5kb和11.5kb之間。兩者共同使用時(shí)，環(huán)狀質(zhì)粒被切成三段，說明在質(zhì)粒上共有三個(gè)切點(diǎn)，說明EcoR的切點(diǎn)在5.5kb和6kb之間，圖示見答案。10(1)Bcl和HindDNA連接感受(2)四環(huán)素引物甲和引物丙(3)TGATCCACTAGGGGATCA都不能(4)7CC

19、TAGT解析(1)選擇的限制酶應(yīng)在目的基因兩端存在酶切位點(diǎn)，且至少有一個(gè)標(biāo)記基因，BamH會(huì)破壞兩個(gè)標(biāo)記基因，因此只能選Bcl和Hind。酶切后的載體和目的基因片段通過DNA連接酶作用后獲得重組質(zhì)粒。為了擴(kuò)增重組質(zhì)粒，需將其轉(zhuǎn)入處于感受態(tài)的大腸桿菌中。(2)為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，根據(jù)質(zhì)粒上的抗性基因，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加四環(huán)素。PCR技術(shù)要求兩種引物分別和目的基因的兩條單鏈結(jié)合，沿相反的方向合成子鏈。(3)根據(jù)BamH和Bcl的酶切位點(diǎn)，BamH酶切的DNA末端與Bcl酶切的DNA末端連接，連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為TGATCCACTAGGGGATCA，與兩種酶的酶切位點(diǎn)均不同