1、KMnO4-鈣指示劑-羅丹明B化學(xué)發(fā)光法測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚的含量 作者：孫四娟，唐驍爽，唐玉海，熊鳳梅，木尼熱阿布都克熱木，王麗娟【摘要】 目的 建立快速、準(zhǔn)確測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚的流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光新方法。方法 酸性條件下，KMnO4可氧化鈣指示劑產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，羅丹明B對(duì)此發(fā)光有較強(qiáng)的增敏，對(duì)乙酰氨基酚的存在抑制體系發(fā)光，基于此結(jié)合流動(dòng)注射技術(shù)建立了一種新的測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚含量的化學(xué)發(fā)光法。結(jié)果 在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下，在5.010-7-1.010-5g/mL范圍內(nèi)，對(duì)乙酰氨基酚的質(zhì)量濃度與化學(xué)發(fā)光信號(hào)的降低值有較好的線性關(guān)系，檢出限(S/N=3)為7.010-8g/mL，對(duì)1.010-6g/mL對(duì)乙酰

2、氨基酚進(jìn)行11次平行測(cè)定，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.2%。結(jié)論 本方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，用于片劑中對(duì)乙酰氨基酚含量的測(cè)定，得到較滿意的結(jié)果。 【關(guān)鍵詞】 化學(xué)發(fā)光；KMnO4；鈣指示劑；羅丹明B；對(duì)乙酰氨基酚ABSTRACT: Objective To establish a rapid and precise continuous flow-injection chemiluminescence for the determination of paracetamol. Methods In acid solution, calcon could be oxidized by KMnO4 prod

3、ucing a weak chemiluminescence, and great chemilumimescence was obtained with the presence of rhodamine B. Then the signal was inhibited with the presence of paracetamol. The inhibitor intensity was linear with the concentration of paracetamol. Coupled with the flow injection technique, a rapid flow

4、 injection chemiluminescence method was developed for the determination of paracetamol. The parameters affecting the chemiluminescence signal were investigated. Results Under the optimized conditions, the linear range was 5.010-7-1.010-5g/mL. The detection limit was 7.010-8g/mL with a signal-to-nois

5、e ratio of 31. The RSD of 11 times parallel assays for 1.010-6g/mL paracetamol was 2.2%. Conclusion The method is simple, rapid and precise, and satisfactory results were obtained with the method applied for the pharmaceutical preparations of paracetamol.KEY WORDS: chemiluminescence; KMnO4-calcon-rh

6、odamine B; paracetamol對(duì)乙酰氨基酚(paracetamol)是具有解熱、鎮(zhèn)痛作用的酰胺類藥物，常與其他解熱、鎮(zhèn)痛藥物組成復(fù)方制劑。因此，建立一種快速、簡(jiǎn)單、靈敏的方法對(duì)對(duì)乙酰氨基酚進(jìn)行分析具有重要意義。文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)乙酰氨基酚含量測(cè)定的方法較多，包括高效液相色譜法(HPLC)1-4、紫外分光光度法5、電化學(xué)法6-9、毛細(xì)管電泳法10-12、熒光法13、化學(xué)發(fā)光法14和其他光譜法15等。所采用的各種方法都各有其優(yōu)缺點(diǎn)。文獻(xiàn)報(bào)道用KMnO4-Ru(bpy)2+3化學(xué)發(fā)光法測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚的含量，方法的檢出限為2.010-7g/mL，且使用了較昂貴的Ru(bpy)2+3試劑14。基

7、于我們對(duì)KMnO4化學(xué)發(fā)光體系的研究16，本研究發(fā)現(xiàn)對(duì)乙酰氨基酚的存在可以抑制KMnO4-鈣指示劑-羅丹明B體系化學(xué)發(fā)光，據(jù)此建立了新的測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚含量的化學(xué)發(fā)光法。1 材料與方法1.1 材料IFFM-E型流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光分析儀(西安瑞邁電子科技有限公司)，IFFS-A型多功能化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器(西安瑞邁電子科技有限公司)。光電倍增管(PMT)高壓為600 V，使用的連接管均為聚四氟乙烯管(PTFE，0.8 mm i.d.)。 KMnO4溶液：精密稱取KMnO4(西安化學(xué)試劑廠)0.395 0 g，用適量水溶解并定容于25 mL容量瓶中得1.010-1mol/L KMnO4儲(chǔ)備液；鈣指示劑溶液

8、：精密稱取鈣指示劑(2-萘酚-4-磷酸-偶氮-2羥基-3-萘酸，上海公私合營(yíng)新中化學(xué)廠)2.191 0 g，用適量水溶解并定容于200 mL容量瓶中，得2.510-2mol/L鈣指示劑儲(chǔ)備液；羅丹明B溶液：精密稱取羅丹明B(天津天泰精細(xì)化學(xué)品有限公司)，用適量水溶解并定容于100 mL的容量瓶中即得到1.010-2mol/L羅丹明B儲(chǔ)備液。 對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品溶液：準(zhǔn)確稱取對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品(中國(guó)藥品及生物制品檢驗(yàn)所；批號(hào)：100018-200408；純度：99.6%)0.100 0 g，用適量水溶解并分別將其定容于100 mL的容量瓶中可得1.010-3g/mL的對(duì)乙酰氨基酚的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，使

9、用前逐級(jí)稀釋至所需濃度。 對(duì)乙酰氨基酚片劑(石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司)，實(shí)驗(yàn)中所用的試劑均為分析純，水為二次蒸餾水。1.2 方法流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光的流路圖如圖1所示。流路a、b、c、d分別用來(lái)輸送酸性羅丹明B、樣品溶液、KMnO4及鈣指示劑溶液。其中樣品溶液通過(guò)Y型混合器與 KMnO4混合，此混合溶液通過(guò)六通閥與鈣指示劑混合后，再通過(guò)一Y型混合器與羅丹明B混合發(fā)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，所產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光信號(hào)由光電倍增管放大檢測(cè)并由計(jì)算機(jī)記錄。主泵與副泵的流速都為1.2 mL/min。2 結(jié)果2.1 不同氧化劑的選擇實(shí)驗(yàn)考察了KMnO4、KIO4、K2Cr2O7、KBrO3、Ce()、和H2O2等不同氧化劑

10、的作用，研究發(fā)現(xiàn)只有選用KMnO4時(shí)得到的發(fā)光信號(hào)最穩(wěn)定，且峰形好。2.2 KMnO4濃度的影響考察了1.010-2-1.010-5mol/L不同濃度KMnO4對(duì)檢測(cè)信號(hào)的影響。結(jié)果表明，隨著KMnO4濃度的增大發(fā)光信號(hào)也增大，但當(dāng)其濃度大于5.010-3mol/L時(shí)，化學(xué)發(fā)光信號(hào)值不穩(wěn)定，峰形較差。本實(shí)驗(yàn)選擇5.010-3mol/L KMnO4為最佳實(shí)驗(yàn)條件。2.3 酸性介質(zhì)的影響考察了相同濃度的H2SO4、HNO3、H3PO4、和HCl等酸性介質(zhì)對(duì)化學(xué)發(fā)光信號(hào)的影響。觀察到在其他幾種介質(zhì)中都可以產(chǎn)生發(fā)光，雖使用HNO3可以得到較大的發(fā)光信號(hào)，但信號(hào)不穩(wěn)定。只有選用介質(zhì)H2SO4時(shí)所得到的化

11、學(xué)發(fā)光信號(hào)較大而且穩(wěn)定，所以實(shí)驗(yàn)選取H2SO4作為酸性介質(zhì)。 同時(shí)考察了0.005-2 mol/L不同濃度的H2SO4對(duì)化學(xué)發(fā)光信號(hào)的影響，結(jié)果表明當(dāng)H2SO4濃度從0.005-1 mol/L變化時(shí)化學(xué)發(fā)光信號(hào)不斷增大，H2SO4大于1 mol/L時(shí)，H2SO4濃度對(duì)化學(xué)發(fā)光信號(hào)的影響較小。本實(shí)驗(yàn)選擇1 mol/L的H2SO4作為反應(yīng)的最佳條件。2.4 熒光物的選擇及羅丹明B濃度的影響研究了不同熒光增敏劑羅丹明B、羅丹明6、羅丹明123、熒光素等對(duì)實(shí)驗(yàn)體系發(fā)光信號(hào)的影響，結(jié)果表明只有在選用羅丹明B時(shí)得到的化學(xué)發(fā)光信號(hào)最大且較穩(wěn)定，所以實(shí)驗(yàn)以羅丹明B作熒光增敏劑。 考察了110-3-110-5m

12、ol/L不同濃度羅丹明B 對(duì)檢測(cè)信號(hào)的影響。結(jié)果表明，隨著羅丹明B濃度增大，發(fā)光信號(hào)增大，當(dāng)其濃度為2.510-4mol/L時(shí)，得到最大的化學(xué)發(fā)光信號(hào)值，之后，增大羅丹明B的濃度對(duì)化學(xué)發(fā)光信號(hào)的影響不顯著。本實(shí)驗(yàn)選擇1.010-4mol/L羅丹明B為最佳實(shí)驗(yàn)條件。2.5 鈣指示劑濃度的影響研究了2.510-5-2.510-3mol/L范圍內(nèi)不同濃度鈣指示劑對(duì)化學(xué)發(fā)光信號(hào)的影響。實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)鈣指示劑濃度逐漸增大時(shí)，發(fā)光信號(hào)也不斷增大，當(dāng)鈣指示劑濃度達(dá)到1.010-4mol/L時(shí)，發(fā)光信號(hào)達(dá)到最大值，濃度大于1.010-4mol/L時(shí)，化學(xué)發(fā)光信號(hào)又減小，因而選取1.010-4mol/L作為優(yōu)化的

13、條件進(jìn)行以下的實(shí)驗(yàn)。2.6 線性范圍及檢出限在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)對(duì)乙酰氨基酚標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行逐級(jí)稀釋分析，結(jié)果表明對(duì)乙酰氨基酚在5.010-7-1.010-5g/mL范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，方法的檢出限為7.010-8g/mL，對(duì)1.010-6g/mL對(duì)乙酰氨基酚進(jìn)行11次平行測(cè)定，得到的RSD (相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差)為2.2%。線性關(guān)系的相關(guān)參數(shù)如表1所示。2.7 干擾實(shí)驗(yàn)對(duì)1.010-6g/mL對(duì)乙酰氨基酚進(jìn)行測(cè)定，當(dāng)測(cè)定的相對(duì)誤差為5%時(shí)可認(rèn)為共存物質(zhì)不引起測(cè)定的干擾。結(jié)果表明，共存物質(zhì)的允許量為：1 000倍的K+、Na+、NO-3、Cl-、Br-，500 倍的檸檬酸鈉、淀粉、硬脂酸鹽、乳糖，

14、50倍的尿素、SO2-4、PO3-4、CO2-3、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Fe3+，10倍的Al3+、Fe2+、Zn2+對(duì)測(cè)定不引起干擾。2.8 樣品分析取對(duì)乙酰氨基酚(標(biāo)示量為0.5 g/片)10片，精密稱定、研細(xì)、混勻。準(zhǔn)確稱取相當(dāng)于1.0 g對(duì)乙酰氨基酚精細(xì)粉末，用適量水溶解并定容于100 mL的容量瓶中，得到1.010-3g/mL的樣品溶液，稀釋至工作曲線線性范圍內(nèi)按圖1所示流路進(jìn)行分析。并進(jìn)行加樣回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表2、表3；同時(shí)將本法與藥典方法進(jìn)行了對(duì)照。結(jié)果表明，本方法用于對(duì)乙酰氨基酚片劑含量的測(cè)定與藥典方法無(wú)顯著差異，但相對(duì)于藥典方法，本法快速、操作簡(jiǎn)單，儀器運(yùn)行成本低。表

15、1 對(duì)乙酰氨基酚的線性關(guān)系方程及相關(guān)參數(shù)（略）表2 樣品的回收率測(cè)定結(jié)果（略）表3 樣品的測(cè)定結(jié)果（略）3 討論 在酸性條件下，KMnO4可以單獨(dú)氧化羅丹明B或鈣指示劑產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，但產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光信號(hào)都較小，當(dāng)兩者都存在時(shí)產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光信號(hào)較大且重現(xiàn)性好，可能是由于KMnO4對(duì)羅丹明B及鈣指示劑的協(xié)同氧化作用。未報(bào)道KMnO4在酸性條件下發(fā)光體的存在，因此其發(fā)光體可能為羅丹明B及鈣指示劑的中間體，其可能的發(fā)光機(jī)制如下：高錳酸鉀+羅丹明B+鈣指示劑羅丹明B*+鈣指示劑*+其他物質(zhì)鈣指示劑*鈣指示劑+hv 羅丹明B*羅丹明B+hv對(duì)乙酰氨基酚+鈣指示劑*+羅丹明B*鈣指示劑+羅丹明B+其他物質(zhì)

16、應(yīng)用此方法測(cè)定片劑中對(duì)乙酰氨基酚含量，簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，結(jié)果滿意。【參考文獻(xiàn)】 1Chen XY, Huang J, Zhang K, et al. Sensitive liquid chromatographytandem mass spectrometry method for the simultaneous determination of paracetamol and guaifenesin in human plasma J. J Chromatogr B, 2005, 817(2):263-269.2Franeta JT, Agbaba D, Eric S, et al. HP

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