1、色譜柱的故障診斷與維護(hù)液相色譜柱八方世紀(jì)科技有限公司Authoring Division Name File NameSecurity Notice (if required) HLC與GC 色譜柱問題用戶調(diào)查 色譜柱問題百分率Back Pressure, Plugged Frits24%Poor Reproducibility16Sample Recovery14Loss of Resolution13Instability11Voids8.1Leaks, Fittings4.8pH Range2.0Low Plate Count2.0Column Overload2.0Cost1.7Mis

2、cellaneous15介紹提綱I. 常見問題， 現(xiàn)象及排除方案- 基線漂移/噪音- 峰型- 壓力變化- 保留漂移II. 日常維護(hù)/ 良好的實(shí)踐- 在線裝置- 樣品制備- 操作的限制III. 再生/維修已損壞的色譜柱 -物理方法 -化學(xué)方法I. 常見問題 基線噪音可能的原因：流動(dòng)池臟檢測器燈有問題如果是周期性的，則起源于泵的脈沖溫度對(duì)檢測器的影響氣泡經(jīng)過檢測器Time (min.)基線漂移 梯度洗脫 溫度不穩(wěn)定 (示差檢測器） 流動(dòng)相中有污染物 柱中的流動(dòng)相沒有平衡 體系中有污染物流出可能的原因：鬼 峰 鬼峰即使不樣也會(huì)出現(xiàn)的峰20% - 100% MeOH沒有進(jìn)樣60153015037151

3、7問題1- 流動(dòng)相臟問題2- 樣品過量(也可能是回收率太差)峰 型雙 峰柱 塌 陷正 常 峰 雙 峰柱中有死體積 過濾片部分堵塞只有一個(gè)雙峰組分的共洗脫可能原因：樣品與溶劑不匹配峰 型所有的峰都展寬柱效降低柱死體積大進(jìn)樣量 / 質(zhì)量高捻度流動(dòng)相部分峰展寬前次進(jìn)樣后流出的組分大分子量樣品蛋白或聚合物峰展寬樣品與流動(dòng)相不匹配峰 型拖尾峰對(duì)稱性 1.2NormalTailingNormalTailing原因：部分峰拖尾二次保留效應(yīng)殘留硅醇基的反應(yīng)小峰緊跟在大峰的后面流出柱頭有污染金屬所有峰拖尾額外的柱效應(yīng)柱損壞不適當(dāng)?shù)臉悠妨?溶劑峰 型NormalFronting前伸峰不對(duì)稱性 強(qiáng)有機(jī)溶劑) 通常最

4、有效低 pH 流動(dòng)相, 如 0.1% TFA or 0.01M H3PO4, 也是有效的升高溫度（60-80）色譜柱修復(fù)和再生 - 化學(xué)變化-I6M鹽酸胍、異硫氰酸胍、尿素等溶液可用于清除蛋白質(zhì)的沉積XDB, 有機(jī)聚合物等填料可使用高pH 水溶液 /有機(jī)溶液，如： 0.01M NaOH 50% 異丙醇 /水溶液，硅膠基質(zhì)應(yīng)盡量減少接觸時(shí)間 (15-30 min).色譜柱的修復(fù)和再生 - 化學(xué)變化 -IIExample: 4.6 mm ID x 15 cm Zorbax 300SB-C18Flow rate: 1 mL / min; Temp: 80A: 0.1% TFA in water B: 0.1% TFA in acetonitrile100% A for 30 min.; 0-100% B over 30 min.; Hold 100% B for 30 min., Return to 100% A in 5 min.Repeat 3 times. 總 結(jié) 如果使用時(shí)加以注意，大部分的液相色譜柱的問題是可以預(yù)防的- 流動(dòng)相必須是互溶的，無顆粒- 使用保護(hù)柱和在線過濾器，并定期更換- 使用恰當(dāng)?shù)臉悠分苽浞椒? 使用恰當(dāng)?shù)纳V柱清洗程序- 不同類型的色譜柱，請(qǐng)選擇不同的操作條件 (如： SB: