1、實驗三 霉菌的形態(tài)觀察一、實驗目的(1)了解根霉、青霉、毛霉及曲霉的形態(tài)構造(2)學會霉菌的載玻片培養(yǎng)法。(3)進一步熟練顯微鏡的使用技術。 1二、實驗材料1.菌種 黑曲霉、產(chǎn)黃青霉、腐乳毛霉、黑根霉。2.培養(yǎng)基 察氏培養(yǎng)基3.其他 顯微鏡、培養(yǎng)箱、培養(yǎng)皿、水浴鍋、乳酸石炭酸棉藍染色液、載玻片、蓋玻片、無菌水、接種環(huán)、接種鉤、解剖針、酒精燈、火柴、濾紙、玻璃鉛筆等。 2三、實驗原理 霉菌為真核微生物，菌絲較粗大，有分枝或不分枝的。菌絲體為五色透明或暗褐色至黑色，或呈現(xiàn)鮮艷的顏色。在顯微鏡下觀察時，菌絲皆呈管狀。在固體培養(yǎng)基上生長，為絨毛狀或棉絮狀。一些較高等的霉菌絲狀管道中皆有橫隔，由橫格狀菌

2、絲隔成許多細胞。細胞易收縮變形，而且孢子很容易分散，所以制標本時常用乳酸石炭酸棉藍染色液。該染色液使細胞不變形，具有防腐殺菌作用，且不易干燥，能保持較長時間，溶液本身呈藍色，有一定的染色效果。 3此外，為了得到清晰、完整并保持自然狀態(tài)的霉菌形態(tài)，還可以利用載玻片培養(yǎng)法或玻璃紙透析培養(yǎng)法進行觀察。載玻片培養(yǎng)法是在一定濕度的培養(yǎng)皿中，放人一霉菌載片培養(yǎng)物，并蓋上一塊蓋玻片，使霉菌在一狹窄的空隙中生長、繁殖便于在顯微鏡下觀察霉菌的特殊形態(tài)構造，如曲霉的足細胞、分生孢子、頂囊等生長情況。并且還可在同一標本上觀察到它們不同階段的生長、發(fā)育狀況。玻璃紙透析培養(yǎng)法，是利用玻璃紙的半透膜特性及透光性，將霉菌生

3、長在覆蓋于瓊脂培養(yǎng)基表面的玻璃紙上，然后將長菌的玻璃之間取一小片，貼放在載玻片上，置于顯微鏡下觀察。本實驗以制片觀察和載玻片培養(yǎng)觀察為主。 4四、操作方法(一)制片觀察法(1)于一潔凈載玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉藍溶液，用解剖針或接種鉤從菌落邊緣處取少量帶有孢子的菌絲于染色液中，再細心地把菌絲挑散開，然后用蓋玻片蓋上，注意不要產(chǎn)生氣泡。(2)置于顯微鏡下，觀察霉菌的形態(tài)。 5(二)載玻片培養(yǎng)觀察法1.無菌培養(yǎng)皿的準備在一潔凈干燥的培養(yǎng)皿內(nèi)，放一鋁絲制載玻片架，再放人分別用紙包好的潔凈載玻片1-2片及蓋玻片1-2片，然后蓋上皿蓋，包扎后滅菌備用。 62.霉菌載玻片培養(yǎng)物的制備（1）取約3ml經(jīng)滅

4、菌后的察氏培養(yǎng)基試管，標上青(毛、根或曲)霉字樣。（2）以無菌操作方式取出無菌培養(yǎng)皿中的載玻片和蓋玻片，打開備用。（3）取一標好字樣的試管培養(yǎng)基，于酒精燈上以微火融化。 7(4)待融化后的培養(yǎng)基冷卻至45t左右時，接人標明菌名的相應霉菌孢子一環(huán)，攪拌均勻，立即取大約3-4環(huán)于載玻片中央，然后迅速蓋上無菌蓋玻片，并于載玻片右上角標明菌名。(5)往培養(yǎng)皿中倒人約3ml的無菌水。(6)將上述制備好的載玻片置于培養(yǎng)皿中的玻片架上，蓋上皿蓋，置于28培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48-72h，取出，置于顯微鏡下觀察霉菌的形態(tài)。 83.黑曲霉平板培養(yǎng)物的制備(1)在水浴鍋中，融化大試管察氏培養(yǎng)基1管。(2)將上述以融化的培

5、養(yǎng)基以無菌操作方式注入已滅過菌的空培養(yǎng)皿中，待凝。(3)于上述培養(yǎng)皿中央，點上黑曲霉孢子少許。(4)置于28t培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h后，取出，用低倍鏡觀察曲霉的足細胞和匍甸菌絲。 9(三)玻璃紙透析培養(yǎng)觀察法(1)向霉菌斜面試管中加入5ml無菌水洗下孢子，制成孢子懸液；(2)用無菌鑷子將已滅菌的直徑與培養(yǎng)皿相同的圓形玻璃紙覆蓋在察氏培養(yǎng)基平板上；(3)用1ml的無菌移液管吸取0.2ml孢子懸液于上述玻璃紙平板上，并用無菌玻璃棒涂抹均勻；(4)置于28t培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h后，取出培養(yǎng)皿。打開皿蓋，用鑷子將玻璃紙與培養(yǎng)基分開，再用剪刀取一小片，置于載玻片上，用顯微鏡觀察其特殊形態(tài)。 10五、思考題及實驗作業(yè)1.你能否通過顯微鏡觀察，區(qū)分出上述