1、蛋 白 質(zhì) 含 量 的 測 定 微量凱氏定氮法 指導(dǎo)老師：孫瑞方蛋白質(zhì)的理論知識：蛋白質(zhì)組成： 必需AA，條件必需AA，非必需AA,限制AA,AA模式蛋白質(zhì)功能：蛋白質(zhì)來源：蛋白質(zhì)的評價：食物蛋白質(zhì)的營養(yǎng)評價：三蛋白質(zhì)利用率一 蛋白質(zhì)的含量二蛋白質(zhì)消化率1.真消化率2.表觀消化率1.生物價2.蛋白質(zhì)凈利用率3.蛋白質(zhì)功效比值4.氨基酸評分蛋白質(zhì)含量的測定方法:定氮法雙縮尿法（Biuret法）Folin酚試劑法（Lowry法）紫外吸收法考馬斯亮藍(lán)法（Bradford法）蛋白質(zhì)測定方法的比較：微量凱氏定氮法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、掌握凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)含量的原理 和方法。 2、學(xué)會使用凱氏定氮儀。二、

2、實(shí)驗(yàn)原理： 1. 氮元素：蛋白質(zhì)區(qū)別于糖和脂肪的基本特征絕大多數(shù)蛋白質(zhì)的氮元素含量相當(dāng)接近，一般恒定在1517%，平均值為16%左右。 只要測定出生物樣品中的含氮量，再乘以相應(yīng)的蛋白質(zhì)換算系數(shù)（均值為6.25、乳制品為6.38），就可以計(jì)算出樣品中的蛋白質(zhì)含量。消化蒸餾吸收滴定2. 含氮量的測定 先高溫條件下強(qiáng)酸(濃H2SO4)把樣品中的蛋白質(zhì)的有機(jī)氮全部消化為無機(jī)氮形式 再強(qiáng)堿高溫水蒸氣蒸餾出氨氣 用硼酸吸收氨氣 用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸進(jìn)行滴定反應(yīng)方程式三、試劑：1、消化液：98%濃硫酸2、催化劑：硫酸銅、硫酸鉀3、堿溶液：40%氫氧化鈉4、吸收液：2%硼酸5、混合指示劑： 0.1%甲基紅乙醇溶液：0.

3、1%甲基藍(lán)乙醇溶液=（1：1）6、標(biāo)準(zhǔn)滴定液：0.2M HCL四實(shí)驗(yàn)步驟消化蒸餾、吸收滴定步驟一步驟二步驟三（一）消化1、標(biāo)記消化瓶2、依次將下列物質(zhì)加入消化瓶： 5-6顆玻璃珠、催化劑 （ K2SO4，CuSO4 ） 、1ml牛奶、10ml濃硫酸3、將消化瓶放入智能數(shù)控消化爐進(jìn)行消化，至液體變?yōu)闊o色250 1h左右350 40min左右450 2.5h左右1.觀察濃硫酸剛加入牛奶中的顏色變化及原因？ 2.玻璃珠、 K2SO4、CuSO4 的作用？（二）蒸餾、吸收微量凱氏定氮蒸餾裝置傳統(tǒng)裝置1：電爐2：水蒸氣發(fā)生器3：螺旋夾4：小玻杯及棒狀玻塞5：反應(yīng)室6：反應(yīng)室外層7：橡皮管及螺旋夾8：冷凝

4、管9：蒸餾液接收瓶半自動凱氏定氮儀1、確保儀器運(yùn)行正常、管道內(nèi)部干凈、管道及其連接口密封性好2、準(zhǔn)備好吸收液（200ml 2%硼酸 + 2ml 混合指示劑）并做好標(biāo)記3、將堿溶液及去離子水桶與儀器連接好，放入盛裝消化好樣品的消化瓶，放入盛裝吸收液的錐形瓶并保證管口插入液面下。4、設(shè)置并啟動程序程序設(shè)置：體積改為0 ml體積改為20 ml（三）滴定：至灰色或藍(lán)紫色至灰色或藍(lán)紫色終點(diǎn)至灰色或藍(lán)紫色滴定前滴定終點(diǎn)滴定過量X：樣品蛋白質(zhì)含量 （g/100g 或g/100mL）V1、V2：測定用樣、試劑空白消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積 （mL）C：鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的摩爾濃度 （mol/L）0.014：1mol/L鹽

5、酸標(biāo)準(zhǔn)液1mL相當(dāng)于氮的克數(shù)m：樣品質(zhì)量（g）或體積（mL）F：蛋白質(zhì)換算系數(shù)6.25五、結(jié)果計(jì)算:六、注意事項(xiàng):1、注意標(biāo)記。2、樣品加入消化管時防止掛壁且注意梯度升溫。3.往消化管內(nèi)加樣時注意加樣順序（玻璃珠-催化劑-牛奶-濃硫酸）。4、硫酸鉀用于提高反應(yīng)溫度，但不可過多，否則溫度過高，會引起生成的銨鹽分解產(chǎn)生氨，影響結(jié)果。5、硫酸銅起催化劑作用并可指示消化終點(diǎn)。6、取消化瓶時防止?fàn)C傷。7、嚴(yán)禁污染吸收液、所用去離子水及管道等。8、吸收前確保管口插入液面以下，吸收結(jié)束后使冷凝管下端離開液面，并用去離子水將管口沖洗干凈并回收至接收瓶。9、規(guī)范滴定操作，且終點(diǎn)判定要一致。1.實(shí)驗(yàn)完成后記得清理臺面。2.實(shí)驗(yàn)報告：實(shí)驗(yàn)題目實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)