1、檢出限和定量限的建立與驗(yàn)證前 言NCCLS制訂的標(biāo)準(zhǔn)文件EP17-AProtocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation;Approved Guideline內(nèi) 容四. 結(jié)果報(bào)告二. 空白限和檢出限的建立與驗(yàn)證三. 定量限的確認(rèn)與驗(yàn)證一. 名詞解釋 五. 小結(jié)一. 名詞解釋 空白限（limit of blank, LoB）：（一定概率下）空白樣本可能被檢測得到最高測量結(jié)果。并非被測物的實(shí)際濃度；是確保陽性信號在實(shí)際濃度處成為檢出限；檢出限（limit of detection, LoD）：檢測

2、系統(tǒng)或方法所能檢測出的分析物的最低濃度。分析靈敏度；檢測底限；最小檢出濃度定量限（limit of quantitation, LoQ）:一定實(shí)驗(yàn)條件下，在精密度和正確度可接受的情況下檢測系統(tǒng)能夠得到可靠結(jié)果的被測物最低濃度。 三者關(guān)系： LoB LoB（或者計(jì)算 LoB（或者計(jì)算85%驗(yàn)證通過。三. 定量限的建立與驗(yàn)證3.1 定量限的簡介（ LoQ ）定量限（limit of quantitation, LoQ）:一定實(shí)驗(yàn)條件下，檢測系統(tǒng)能夠得到可靠結(jié)果的被測物最低濃度，其總誤差符合實(shí)驗(yàn)室預(yù)期要求（臨床可接受）。 LoB LoD LoQ若低濃度樣本的測量不確定度（uncertainty）或總

3、誤差（total error）能夠確定，也可以不建立LoQ，直接提供低濃度樣本的不確定度，由用戶來決定測定值是否可用。總誤差（total error，TE）的計(jì)算方法可參考文件EP21。樣本要求：已準(zhǔn)確定值。1）低濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或有證參考物質(zhì)；2）在線性范圍內(nèi)稀釋。廠家或方法開發(fā)者完成。三. 定量限的建立與驗(yàn)證3.2 定量限的建立（ LoQ ）總誤差規(guī)定目標(biāo)。樣本數(shù)：建立，至少40次檢測；驗(yàn)證，至少25次（建議多個樣本多天、多次測定）根據(jù)LoD的測定結(jié)果的偏倚和不精密度，計(jì)算TE。計(jì)算SDS，若多個樣本，按照下面公式計(jì)算：計(jì)算偏倚Bias=每個樣本測定的均值-參考值總誤差TE= Bias +2

4、 SDS。 若LoD的總誤差 目標(biāo)總誤差，則LoQ = LoD。 不滿足則提高分析物濃度，按照上述步驟檢測，重新計(jì)算TE，直至TE目標(biāo)總誤差。三. 定量限的建立與驗(yàn)證3.3 驗(yàn)證定量限（ LoQ ）采用被測物量=LoQ的樣本，至少進(jìn)行25次檢測（建議多個樣本、多天進(jìn)行）。計(jì)算每個測定結(jié)果與參考值的偏差，比較是否偏差目標(biāo)總誤差（TE）計(jì)算小于TE的檢測結(jié)果所占比例是否符合要求（默認(rèn) =5%），即95%。 *若檢測結(jié)果滿足表2中的最低限，也被認(rèn)為 符合95%的要求。符合要求，驗(yàn)證通過。不符合要求，則聯(lián)系廠家或單獨(dú)建立LoQ。 三. 定量限的建立與驗(yàn)證3.4 舉例EP17-A：建立LoQ數(shù)據(jù)采用建立

5、LoD時(shí)，非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，SDS=0.108 。假設(shè)1：無偏倚（Bias）假設(shè)2：濃度0.5 g/L以下，目標(biāo)TE=0.250 g/L計(jì)算：TE= Bias +2 SDS=2x0.108=0.216 g/L0.250 g/L則LoQ= LoD.三. 定量限的建立與驗(yàn)證3.4 舉例總誤差目標(biāo)20%。計(jì)算：0.500 g/LTE= Bias +2 CV=（0.5-0.493）*100/0.5+2x9.3331=20.062%則LoQ= 0.500 g/L.譚麗娜. 酶聯(lián)免疫法檢測血清HBsAg的空白限、檢出限及定量限的建立與評價(jià)D.2013四. 結(jié)果報(bào)告 報(bào)告具體詳細(xì)報(bào)告相對簡單四. 結(jié)果報(bào)告 圖5. 空白樣本、低濃度樣本（LoD）和定量限處（LoQ）重復(fù)測定結(jié)果的分布