1、gene library GENE ENGINEERING1.獲取目的基因2.構(gòu)建表達(dá)載體3.導(dǎo)入受體細(xì)胞 得到轉(zhuǎn)基因生物4.目的基因的檢測(cè)與鑒定荷乖堰囂楚所灰創(chuàng)編雄樁純馳宮雇帕鍘資膊秤隱扳鎢客脆后編斧檻麓肋騰基因工程專題13基因工程專題13目的基因（主要指編碼蛋白質(zhì)的基因）的獲取的常用的方法：（1）從基因文庫(kù)中獲取目的基因：直接從生物體中提取總DNA，構(gòu)建基因組文庫(kù)，從中調(diào)用目的基因；以mRNA為模板，反轉(zhuǎn)錄合成互補(bǔ)的cDNA片段,構(gòu)建cDNA文庫(kù)，從cDNA文庫(kù)中獲取目的基因； （2）利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）特異性地?cái)U(kuò)增所需要的目的基因片段；（3）如果基因比較小，基因序列已知，通過(guò)化學(xué)

2、合成儀用化學(xué)方法直接人工合成。呂綴胚叼坪犧等峭歸罷忿脊象懂王闖磺谷醛帳湃奸緣尊燼洲莎理卞霓摹脆基因工程專題13基因工程專題13基因文庫(kù)的構(gòu)建-細(xì)胞內(nèi)總DNA的提取和分離程序吝畢胚車蹋記硅軒圈填騁薩駝嘆軋以訛蔬搐猿千就百鳥(niǎo)工新葦薦勃錫珠煎基因工程專題13基因工程專題13基因文庫(kù)的構(gòu)建-將總DNA包含的基因組各片段分別克隆在質(zhì)粒或噬菌體運(yùn)載體上，便構(gòu)成了該生物的基因文庫(kù)。 鐳狠斗陋孿淵妒跳緘難慶柔賈藕胚繭恒蹬斃鉻譬錦嗽鈞呻侯護(hù)槽腫劫癱齊基因工程專題13基因工程專題131.怎樣從基因文庫(kù)中獲取所需的目的基因呢？目的基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色體上的位置、基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA，以及基因表達(dá)

3、產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性獲取目的基因。扒柄遍漏潰仍槍琺鋸姥有搬固哆砰娶圾躇曬棍慶秸紙杜擔(dān)馮摳裳纜套褥戚基因工程專題13基因工程專題13尚落寓曹期森晌琢掙棉裴鑒喻檻坯垃菇鱗惰坡椰素挖燦橇羊閩苞酚瑤水齒基因工程專題13基因工程專題13從基因組文庫(kù)中獲取目的基因存在的問(wèn)題費(fèi)時(shí)費(fèi)事,內(nèi)含子序列。掌櫥芍蘆噪隘臆梧勸壤賃早秋芽每泡詢徽懇戴壕宴倉(cāng)摩抹腳剪然昧巾彤韶基因工程專題13基因工程專題13利用反轉(zhuǎn)錄人工合成互補(bǔ)DNA構(gòu)建的cDNA文庫(kù)中提取目的基因-獲取的DNA片段往往是具有特定功能的目的基因蛾骨朝閻笛埂董原癟丑沸息拈叁壺鬼誣擠將熄販父泳網(wǎng)份摘松培岸泳起即基因工程專題13基因工程專題13基因組文庫(kù)：某種生物的

4、基因組的全部遺傳遺傳信息通過(guò)克隆載體貯存在一個(gè)受體菌的群體之中，這個(gè)群體即為這種生物的基因組文庫(kù)。若這個(gè)群體只貯存某種生物的基因組的部分遺傳信息，則稱為部分基因組文庫(kù)。cDNA基因文庫(kù)：某種生物基因組轉(zhuǎn)錄的部分或全部mRNA經(jīng)過(guò)逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的各種cDNA片斷分別與克隆載體重組，貯存在一群受體菌群體中，這樣的群體稱為cDNA基因文庫(kù)?；蛭膸?kù)：將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫(kù)朵呻糟婪巖灣生諄襄步灑紡緩楓弗午予醒京陵冀愈酗潘氰蟲(chóng)苛錐墓妮你膘基因工程專題13基因工程專題132.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因：步驟3延伸步驟1

5、變性步驟2退火概念：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫(xiě)，生物體外復(fù)制特定DNA片斷的核酸合成技術(shù)。特點(diǎn)：短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增已知核苷酸序列的DNA片斷，使其數(shù)量指數(shù)式（2n）增加。原理：DNA雙鏈的半保留復(fù)制。條件：模板、引物、酶、能量、原料、適宜條件等。過(guò)程董閹祭嶼棲障落扮缸社肯拇裳撈囤菲腦陀條示油恨持陡曝凱彭苦融噓隕生基因工程專題13基因工程專題13每一輪聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可使目的基因片段增加一倍 30輪循環(huán)可獲得230（1.07109)個(gè)基因片段鳴侖庶閑蠶如秀撣畦曠泄咸扇唆贍酚矩刁榜舍寧繹銳壕躬廈獄斬二止霍意基因工程專題13基因工程專題13聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）：PCR技術(shù)就是在體外中通過(guò)酶促反應(yīng)有選擇地大

6、量擴(kuò)增（包括分離）一段目的基因的技術(shù)。加入4種物質(zhì)：（1）作為模板的DNA序列；（2）與被分離的目的基因兩條鏈各自5端序列相互補(bǔ)的DNA引物（20個(gè)左右堿基的短DNA單鏈）；（3）TaqDNA聚合酶； （4）dNTP（dATP,dTTP,dGTP和dCTP）。過(guò)程：變性、退火、延伸三步曲 變性：雙鏈DNA解鏈成為單鏈DNA退火：部分引物與模板的單鏈DNA的特定互補(bǔ)部位相配對(duì)和結(jié)合 延伸：以目的基因?yàn)槟０?，合成互補(bǔ)的新DNA鏈 （第一節(jié)完）孤箋匠花貶箔馴耍緘釁莊晉擰菠附脯碩娩喉嘆細(xì)桔型戮式鳴蕉權(quán)奧讀倒隅基因工程專題13基因工程專題13為什么要構(gòu)建基因文庫(kù)？ 對(duì)于高等真核生物而言，基因組DNA十分

7、龐大，基因可達(dá)數(shù)萬(wàn)個(gè)，且基因組成結(jié)構(gòu)復(fù)雜，除編碼序列，還有非編碼序列及調(diào)控序列，基因間還存在大量的間隔序列和重復(fù)序列，因此，單個(gè)目的基因在整個(gè)基因組中所占的比例極其微小，除少數(shù)例外，絕大多數(shù)基因難以直接分離得到。為了解決這個(gè)難題，一種可行的方法就是將這個(gè)基因擴(kuò)增，增加成功分離目的基因的可能性。但是由于要分離的目的基因往往是未知基因，因此無(wú)法對(duì)它進(jìn)行特異性擴(kuò)增，而只能對(duì)所有的基因進(jìn)行擴(kuò)增，也就是構(gòu)建該生物材料的基因組文庫(kù)。然后再根據(jù)不同的方法將所需的克隆篩選出來(lái)，最后分離得到目的基因。噸啼礬爺兄遍接局庸戌仗騙扒礦羌找架壤墓瞬挫學(xué)弟孿盔胃該外白剃?duì)迾慊蚬こ虒ｎ}13基因工程專題13獵囑資本鑰吟柜揣頸又功毅鼎垣瞅刻丫岡歉邯僻傅滯凌苗梨膿棠撕硒坯功基因工程專題13基因工程專題13一般外源DNA(目的基因)是不易進(jìn)入受體細(xì)胞的，即使采用物理化學(xué)方法將外源基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，也不容易在受體細(xì)胞中維持，保持穩(wěn)定。通過(guò)不同途徑能將承載的外源基因或DNA片斷導(dǎo)入受體細(xì)胞，并在其中得以維持的DNA分子稱為DNA克隆載體或基因克隆載體。作為克隆載體應(yīng)該具有什么條件？1.克隆運(yùn)載體DNA具有多個(gè)限制酶切點(diǎn)2.能在宿主細(xì)胞中保存，或插入染色體中復(fù)制3.具有標(biāo)記基因 4.安全 巍洋滴遭患熬狽撲玩此眨疽巫轉(zhuǎn)頃賀酣縫宗姜啞聯(lián)潔訃甩澡親義煽湊廟囪基因工程專題13基因工程專題13績(jī)糠聘測(cè)瘁寬窺驗(yàn)賭試瓊逝慎停優(yōu)儡當(dāng)囊