1、關(guān)于高效液相色譜的特點(diǎn)與儀器2022/8/18第一張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/18一、液相色譜儀器（ high performance liquid chromatograph）第二張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/18Waters LC 2695第三張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/18IC 4500i第四張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/181. 分離效能高GC 分離效能較高，n=103塔板/米，HPLC 可達(dá)到 51033104 塔板/米，可使用較短的柱子。二、高效液相色譜法的特點(diǎn)2. 選擇性高

2、HPLC 柱效高，流動(dòng)相可以控制和改善分離的選擇性。3. 檢測(cè)靈敏度高HPLC廣泛采用高靈敏度檢測(cè)器，如UV（10-9 g/mL），熒光檢測(cè)器（10-11g/mL）。HPLC的優(yōu)點(diǎn)第五張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/184.分析速度快HPLC 載液流速可達(dá)110ml/min，完成一個(gè)樣品分析僅需幾分鐘到幾十分鐘。5.應(yīng)用范圍廣HPLC 法不受樣品沸點(diǎn)、揮發(fā)度和熱穩(wěn)定性限制，適于分析生物大分子、離子型化合物、不穩(wěn)定的天然物及各種高分子化合物。原則上相對(duì)分子量大于400 的有機(jī)物都可用 HPLC 法分析。第六張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月202

3、2/8/18分析成本高，宜引起污染。缺少高靈敏度的通用型檢測(cè)器。不能替代GC完成沸程范圍寬的石油產(chǎn)品的分析。操作較GC復(fù)雜。HPLC的局限性第七張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/18實(shí)際應(yīng)用中，凡是能用GC分析的樣品一般不用HPLC，因?yàn)镚C更快，更靈敏，更方便，且耗費(fèi)較低 。 HPLC與GC比較氣相色譜高效液相色譜只能分析揮發(fā)性物質(zhì)幾乎可分析各種物質(zhì)不能用于熱不穩(wěn)定物質(zhì)的分析可用于熱不穩(wěn)定物質(zhì)的分析毛細(xì)管色譜可得到很高的柱效色譜柱不能很長(zhǎng)、柱效不會(huì)很高有很靈敏檢測(cè)器和較靈敏的通用檢測(cè)器沒有較靈敏的通用檢測(cè)器流動(dòng)相為氣體，無毒、易于處理流動(dòng)相有毒、費(fèi)用較高運(yùn)行和操作容易運(yùn)

4、行和操作較氣相難儀器制造難度較小儀器制造難度較大第八張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18三、流程及主要部件高效液相色譜儀的主要部件：儲(chǔ)液罐、高壓輸液泵、進(jìn)樣裝置、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀和數(shù)據(jù)處理裝置。工作流程第九張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18一、儲(chǔ)液罐及流動(dòng)相的脫氣1.儲(chǔ)液罐溶劑在放人儲(chǔ)液罐之前必須經(jīng)過0.45m濾膜過濾：除去溶劑中的機(jī)械雜質(zhì)，以防輸液管道或進(jìn)樣閥產(chǎn)生阻塞現(xiàn)象。儲(chǔ)液罐的材料應(yīng)耐腐蝕 ：常用玻璃、氟塑料或PEEK塑料 ，容積約為0.52.0L。儲(chǔ)液罐放置位置要高于泵體：以保持一定的輸液靜壓差

5、。使用過程儲(chǔ)液罐應(yīng)密閉：防溶劑蒸發(fā)引起流動(dòng)相組成變化，還可防止空氣中O2、CO2重新溶于已脫氣的流動(dòng)相中。第十張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/182流動(dòng)相脫氣 除去其中溶解氣體，防止流動(dòng)相由柱流至檢測(cè)器時(shí)，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡，而增加基線噪聲。使用熒光檢測(cè)器，溶解在流動(dòng)相中的氧氣，會(huì)造成熒光猝滅。還會(huì)導(dǎo)致樣品中某些組分被氧化或會(huì)使柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能。流動(dòng)相在使用前必須進(jìn)行脫氣處理第十一張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18吹氦脫氣法，在0.1MPa下，以約60mL/min流速通入流動(dòng)相1015m

6、in。此法適用于所有的溶劑，脫氣效果較好，但價(jià)格較貴。加熱回流法，此法的脫氣效果較好 。抽真空脫氣法，用微型真空泵除去溶解氣體，降壓至0.050.70MPa。 超聲波脫氣法，流動(dòng)相置放于超聲波清洗器中，用超聲波振蕩1015min。脫氣效果最差。在線真空脫氣法，真空脫氣裝置串接到儲(chǔ)液系統(tǒng)中，使流動(dòng)相進(jìn)入輸液泵前連續(xù)真空脫氣。此法脫氣效果最好，適于多元溶劑體系 。常用的脫氣方法第十二張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18第十三張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18二、高壓輸液泵1. 高壓泵性能有足夠的輸出壓力：壓力范圍

7、250400kg/cm2。輸出流量恒定：流量精密度應(yīng)在1%，無脈動(dòng)。流量范圍寬：分析儀器應(yīng)在0.1 10.0ml/min。 制備儀器1100ml/min?？谷軇┑母g：常用不銹鋼和PEEK塑料。泵死體積要?。灰员阊杆俑鼡Q溶劑和梯度洗提。第十四張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/182. 高壓泵分類：恒流泵：輸出流量恒定，與柱引起阻力無關(guān)。恒壓泵：輸出壓力恒定，與柱引起阻力無關(guān)。(1) 恒流泵：常用往復(fù)式柱塞泵和注射泵。 特點(diǎn)：流量恒定，液腔體積小（0.1ml），更換溶劑和梯度洗提方便，但有脈動(dòng)，應(yīng)用廣泛。第十五張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月20

8、22/8/182022/8/18第十六張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18(2) 恒壓泵：常用氣動(dòng)泵根據(jù)壓力傳導(dǎo)原理設(shè)計(jì)的，即 P1.SA=P2.SBP1 低壓，推動(dòng)大面積 SA，則在小面積 SB 活塞輸出大壓力P2 。特點(diǎn)：壓力恒定，無脈動(dòng)，液腔體積較大，更換流動(dòng)相不方便。當(dāng)泵的負(fù)荷阻力小時(shí)可提供大的輸出流量，適于勻槳法填裝柱子。第十七張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/183梯度洗脫裝置梯度洗提：在分離過程中按一定的程序連續(xù)改變載液中溶劑的配比和極性。通過載液極性改變來改變分離因素，改善分離效果、縮短分析時(shí)間、

9、改善峰形，提高分析精度。高壓梯度（內(nèi)梯度） 兩臺(tái)高壓泵，將兩種不同極性溶劑按一定比例送入梯度混合室，混合后進(jìn)入色譜柱。第十八張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18第十九張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18低壓梯度（外梯度）:一臺(tái)高壓泵, 通過比例調(diào)節(jié)閥,將兩種或多種不同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。第二十張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18第二十一張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18三、進(jìn)樣裝置流路中為高壓力工作狀態(tài)；通

10、常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置；特點(diǎn)：耐高壓，進(jìn)樣的重現(xiàn)性好，易于自動(dòng)化，易造成色譜峰柱前擴(kuò)寬。第二十二張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18裝入狀態(tài)出口進(jìn)樣狀態(tài)采樣環(huán)泵入溶劑進(jìn)色譜柱三、進(jìn)樣裝置第二十三張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18四、高效分離柱發(fā)展趨勢(shì)是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。 柱材：一般采用不銹鋼管和 PEEK 塑料。柱型及尺寸：一般采用管內(nèi)徑16 mm，柱長(zhǎng)540 cm直型柱，標(biāo)準(zhǔn)柱型3.9 或 4.6mm ，L 15、30cm。填料粒度：510 m，柱效500010000 ， 35 m，L 5

11、10cm。 第二十四張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18五、液相色譜檢測(cè)器理想的HPLC 檢測(cè)器應(yīng)具備的特性靈敏度高；對(duì)所有溶質(zhì)都有快速響應(yīng)；響應(yīng)對(duì)流動(dòng)相流量和溫度變化不敏感；線性范圍寬；不引起柱外擴(kuò)散。至今沒有一種檢測(cè)器完全具備。常用的檢測(cè)器UVD；RID；ECD；FLD。第二十五張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18 紫外檢測(cè)器 溶質(zhì)性質(zhì)檢測(cè)器。 構(gòu)造：第二十六張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/18特點(diǎn)：靈敏度高(10-9g/mL），線性范圍寬，易于操作，對(duì)流動(dòng)相的流速和溫度變化不敏感，

12、適用于梯度洗脫。應(yīng)用：HPLC中使用最為廣泛?；诒粶y(cè)組分對(duì)紫外光的選擇性吸收，其吸光度與試樣中組分濃度成正比，檢測(cè)原理：即 A C。第二十七張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18 無組分進(jìn)入時(shí)，測(cè)量池和參比池只通過流動(dòng)相，光電管接受的輻射強(qiáng)度相等，無信號(hào)輸出。 組分進(jìn)入時(shí)，其吸收一定紫外光，光電管接受到輻射強(qiáng)度不等，有信號(hào)輸出。第二十八張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18（2） 光電二極管陣列檢測(cè)器（PDAD）二級(jí)管陣列檢測(cè)器是UV檢測(cè)器的重要進(jìn)展， 光電二極管陣列檢測(cè)器：1024個(gè)二極管陣列，各檢測(cè)特定波長(zhǎng)，

13、計(jì)算機(jī)快速處理。與普通UVD的區(qū)別進(jìn)入檢測(cè)器流通池的不再是單色光；獲得的檢測(cè)信號(hào)不是單一波長(zhǎng)上的，而是全部紫外光波長(zhǎng)上的信號(hào)?？商峁┙M分的光譜信息，利于定性分析。第二十九張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18 檢測(cè)原理：光源發(fā)出的輻射（氘燈）吸收池光柵（全息）二級(jí)管陣列檢測(cè)器，并用電子學(xué)方法和計(jì)算機(jī)技術(shù)采集數(shù)據(jù)可得三維色譜圖光譜圖第三十張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18第三十一張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18第三十二張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022

14、/8/182022/8/18特點(diǎn)：最大優(yōu)點(diǎn)是同時(shí)獲得吸收值是保留時(shí)間和波長(zhǎng)函數(shù)的三維圖?？衫蒙V保留值規(guī)律及光譜特征吸收曲線綜合進(jìn)行定性分析?？蓪?duì)每個(gè)色譜峰的指定位置（峰前沿、頂、尾）進(jìn)行光譜比較，以判斷色譜峰的純度及分離情況。目前靈敏度不及UVD。第三十三張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18整體性質(zhì)檢測(cè)器，普及程度僅次于UVD。（3）示差折光檢測(cè)器（RID） 檢測(cè)原理：通過連續(xù)測(cè)定參比流通池中和樣品流通池中溶液折射率的差值方法，來測(cè)定試樣濃度。折射率的差值與組分的濃度成正比第三十四張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/182022/8/18 特點(diǎn)：1. 通用型檢測(cè)器，幾乎每種物質(zhì)都有各自的折射率都可用差示折光檢測(cè)器檢測(cè)；2. 靈敏度低，可以達(dá)到10-7g/mL ；3. 對(duì)溫度、流