1、第六章 口腔細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用提要：本章介紹細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理及基本方法；牙齒相關(guān)細(xì)胞、唾液腺細(xì)胞、口腔黏膜細(xì)胞、頜骨相關(guān)硬組織細(xì)胞、口腔腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)及特點(diǎn)；組織工程的基本原理、口腔組織特有的干細(xì)胞、再生醫(yī)學(xué)技術(shù)在口腔醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用；基因芯片、蛋白芯片、組織芯片，蛋白質(zhì)組學(xué)、生物信息學(xué)、模式生物學(xué)、系統(tǒng)生物學(xué)等。重點(diǎn)掌握細(xì)胞培養(yǎng)基本原理及方法，口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)，了解口腔干細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用及口腔生物學(xué)其他研究方法。第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)與cell相關(guān)的SCI雜志Cell IF:33.166Stem cell IF: 7.133Blood IF:9.775Molecular a

2、nd cellular biology IF: 5.036Journal of cell biology IF:9.688Cellular microbiology IF:4.816細(xì)胞培養(yǎng)(cell culture)也叫細(xì)胞克隆技術(shù) ，將真核生物或原核生物細(xì)胞培養(yǎng)在受控制的狀態(tài)下，使其生長。這項(xiàng)技術(shù)的發(fā)展與方法，與組織培養(yǎng)或器官培養(yǎng)關(guān)系密切 。通過細(xì)胞培養(yǎng)得到大量的細(xì)胞或其代謝產(chǎn)物。因?yàn)樯锂a(chǎn)品都是從細(xì)胞得來，所以可以說細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是生物技術(shù)中最核心、最基礎(chǔ)的技術(shù)。 細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)展史1885年，Roux溫生理鹽水培育雞胚組織1907年，哈里森(Harrison)在無菌條件下用淋巴液作培養(yǎng)基，培

3、養(yǎng)蛙胚神經(jīng)組織存活數(shù)周，并觀察到神經(jīng)細(xì)胞突起的生長過程，由此創(chuàng)建了蓋片覆蓋凹窩玻璃懸滴培養(yǎng)法，奠定了動(dòng)物組織體外培養(yǎng)的基礎(chǔ)1910-1912年，Carrel采用無菌操作、更新培養(yǎng)基、傳代，完善了懸滴培養(yǎng)法1923年，Carral設(shè)計(jì)創(chuàng)立了卡氏瓶培養(yǎng)法，極大地推動(dòng)了當(dāng)時(shí)組織培養(yǎng)研究。1943，Earle、Dulbecco等年創(chuàng)建單層細(xì)胞培養(yǎng)法，首建長期傳代的L-細(xì)胞系1951年，Dulbecco等采用胰蛋白酶消化組織培養(yǎng)法1951年，Gey首建人腫瘤細(xì)胞Hela細(xì)胞系1957年，各種培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)基孕育而生。用單層細(xì)胞培養(yǎng)法可以建立很多細(xì)胞系(cellline)通過單細(xì)胞分離培養(yǎng)法又可建立克隆細(xì)胞

4、株(clone或cellstrain)1963年，進(jìn)行了單細(xì)胞克隆1975年，Sato成功地用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)了垂體細(xì)胞株CH41982年，F(xiàn)ridenshtein等發(fā)現(xiàn)并建立了以貼壁培養(yǎng)法為主要手段的分離擴(kuò)增方法1957年，各種培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)基孕育而生1990年，干細(xì)胞分離1992年，小鼠及大鼠神經(jīng)干細(xì)胞1997年，克隆羊多利誕生1998年，人類胚胎干細(xì)胞2006年-2007年，成體干細(xì)胞一、細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念細(xì)胞培養(yǎng)(cell culture)： 模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，在適當(dāng)?shù)臈l件下，使活體組織細(xì)胞在體外環(huán)境存活、生長增殖，并維持其結(jié)構(gòu)功能原代培養(yǎng)(

5、primary cell culture)： 取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長的細(xì)胞在傳代之前稱為原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)：細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中生長一定時(shí)間后，被分開接種到新的培養(yǎng)器皿中第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理體外細(xì)胞生物學(xué)形態(tài)特點(diǎn)貼壁型細(xì)胞 (adherent cells)懸浮型細(xì)胞 (suspended cells)生長增殖過程培養(yǎng)細(xì)胞生命期培養(yǎng)細(xì)胞一代生存期第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理貼壁型細(xì)胞(adherent cells)必須貼附于支持物表面才能生長。大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞貼附生長，屬于貼壁依賴性細(xì)胞第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理按照培養(yǎng)細(xì)胞的主要形態(tài)可分為幾大類型：上皮型;成纖維型;游走型;多形型懸浮

6、型細(xì)胞 (suspended cells)于懸浮狀態(tài)下即可生長不需要貼附于支持物表面多見于血液淋巴細(xì)胞第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理幾種常見細(xì)胞的形態(tài)原代培養(yǎng)神經(jīng)元細(xì)胞 （10）原代培養(yǎng)星形細(xì)胞 （10）神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞系 （10）N20Y結(jié)腸癌細(xì)胞系（10）Caco-2第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理培養(yǎng)細(xì)胞生命期所謂培養(yǎng)細(xì)胞生命期，指細(xì)胞在培養(yǎng)中持續(xù)增殖和生長的時(shí)間 細(xì)胞全部生存過程大致分為以下三個(gè)階段：原代培養(yǎng)期傳代期 衰退期第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理原代培養(yǎng)期：也稱初代培養(yǎng)，即從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到第一次傳代階段，一般持續(xù)14周 傳代期：初代培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)傳代后便改稱為細(xì)胞系。在全生命期中此期的持

7、續(xù)時(shí)間最長衰退期：此期細(xì)胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；細(xì)胞形態(tài)輪廓增強(qiáng)，最后衰退凋亡第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理細(xì)胞永生性 (Immortalization)也稱不死性，即細(xì)胞獲持久性增殖能力，成為無限細(xì)胞系無限細(xì)胞系的形成主要發(fā)生在第二期末，或第三期初階段細(xì)胞獲不死性后，核型大多變成異倍體?？赡軔盒宰兗?xì)胞永生性和惡性性非同一性狀第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理培養(yǎng)細(xì)胞一代生存期所謂細(xì)胞“一代”，系僅指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)時(shí)的一段時(shí)間，細(xì)胞傳代后，一般要經(jīng)過以下三個(gè)階段: 潛伏期（游離期，貼壁期） 對(duì)數(shù)生長期 停滯期（平臺(tái)期）第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理培養(yǎng)細(xì)胞一代生存期第

8、一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理細(xì)胞生長過程中的重要現(xiàn)象接觸抑制：由于細(xì)胞的相互接觸而抑制細(xì)胞運(yùn)動(dòng)密度抑制：細(xì)胞因營養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響而停止生長第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理培養(yǎng)細(xì)胞的體外生長環(huán)境無污染環(huán)境基質(zhì)氣體環(huán)境和氫離子濃度液相環(huán)境溫度滲透壓第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理 無污染環(huán)境：高壓蒸汽消毒器電熱干燥箱濾器超凈工作臺(tái)紫外燈 第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理基質(zhì)：玻璃基質(zhì)塑料飼養(yǎng)細(xì)胞，又稱滋養(yǎng)細(xì)胞生物性基質(zhì)處理培養(yǎng)表面金屬 第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理氣體環(huán)境和氫離子濃度 ：5%二氧化碳 95%空氣 pH為7.27.4 第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理液相環(huán)境：水：新鮮配置的三蒸水或去離子水平衡鹽液 ：Han

9、ks液、PBS、Earle液等天然培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基 無血清培養(yǎng)基 第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理溫度維持 ：（36.50.5） 滲透壓 ：290320 mOsm/kg 第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理細(xì)胞培養(yǎng)常見儀器超凈工作臺(tái)細(xì)胞培養(yǎng)箱倒置相差顯微鏡第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理二、細(xì)胞培養(yǎng)的基本方法第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理無菌操作中的注意事項(xiàng)對(duì)實(shí)驗(yàn)中可能用到的器具及培養(yǎng)用液進(jìn)行嚴(yán)格消毒滅菌 培養(yǎng)室的消毒 ：培養(yǎng)室和超凈臺(tái)要用紫外燈和酒精嚴(yán)格消毒 無菌培養(yǎng)室每天都要用0.2%的新潔爾滅拖洗地面次(拖布要專用)， 紫外線照射消毒30-50min，超凈工作臺(tái)臺(tái)面每次實(shí)驗(yàn)前要用75酒精擦洗。 然后紫外線消毒3

10、0min。第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理進(jìn)入無菌室前要按照外科手術(shù)無菌要求進(jìn)行洗手與著裝 原則上和外科手術(shù)相同。 開始操作前要用75酒精消毒手。如果實(shí)驗(yàn)過程中手觸及可能污染的物 品和出入培養(yǎng)室都要重新用消毒液洗手。培養(yǎng)過程中要注意無菌操作 ：時(shí)刻銘記無菌物品與有菌物品要分開處理ABA 超凈工作臺(tái)中的實(shí)驗(yàn)用品要擺放整齊B 實(shí)驗(yàn)前75%酒精噴洗雙手無菌操作技術(shù)第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理C D 開啟封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰就近的地方，并輕輕灼燒CD第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理EFE F移液操作第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理基本培養(yǎng)操作技術(shù)培養(yǎng)細(xì)胞的取材與分離 體外培養(yǎng)細(xì)胞的純化 細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇 第一節(jié) 細(xì)胞培

11、養(yǎng)的基本原理培養(yǎng)細(xì)胞的取材與分離 取材部位準(zhǔn)確 嚴(yán)格無菌操作 盡快培養(yǎng) 減小損傷 制備標(biāo)本第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理細(xì)胞培養(yǎng)常用方法：組織塊培養(yǎng)法酶消化法第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理體外細(xì)胞的純化人工純化：酶消化法、機(jī)械刮除法、反復(fù)貼壁法、克隆法、培養(yǎng)基限定法、流式細(xì)胞儀分離法 等自然純化 第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理細(xì)胞計(jì)數(shù) 血球計(jì)數(shù)板 血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀細(xì)胞活力測定 臺(tái)盼藍(lán)染色 流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞凍存 (freezing) 要點(diǎn)：冷凍過程要緩慢凍存細(xì)胞必須處在對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞復(fù)蘇(thawing)要點(diǎn)：快速解凍解凍后的細(xì)胞應(yīng)離心去除冷凍保護(hù)劑后再接種到培養(yǎng)基中第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理細(xì)胞培養(yǎng)的污染、檢測

12、與控制 微生物污染：細(xì)菌，真菌，支原體等污染化學(xué)污染：指影響細(xì)胞生存的非細(xì)胞所需物質(zhì)混入培養(yǎng)物中 ，應(yīng)在操作中防止 細(xì)胞交叉污染：指目的細(xì)胞中混入其他種細(xì)胞 ，預(yù)防方法主要是嚴(yán)格按照規(guī)定操作，做好標(biāo)記，避免發(fā)生混亂 第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理微生物污染：污染的途徑：空氣 、器材 、操作 、試劑 、組織標(biāo)本 微生物污染的檢測 肉眼觀察，培養(yǎng)檢測，顯微鏡觀察，PCR微生物污染的控制：抗生素除菌法；加溫處理 第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理FL cell polluted by Staphylococcus FL cell polluted by G+ Bacteria 第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理FL c

13、ell polluted by escherichia coli FL cell polluted by mold fungus 第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)一、牙齒相關(guān)細(xì)胞第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)牙周膜細(xì)胞 (Periodontal ligament cells)培養(yǎng)方法：組織塊法；酶消化法細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)免疫組織化學(xué)染色體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長增殖特點(diǎn)功能特點(diǎn)牙周膜細(xì)胞增殖分化的影響因素第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn) 細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn) 原代 人牙周膜成纖維細(xì)胞（10） 第3代人牙周膜成纖維細(xì)胞（10）第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn) 免疫組

14、織化學(xué)染色波形絲蛋白染色陽性（10）角蛋白染色陰性（10） 第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)體外培養(yǎng)細(xì)胞特點(diǎn)：成功率高于牙髓細(xì)胞，達(dá)40%80%可在體外長時(shí)間存活達(dá)412個(gè)月可持續(xù)傳40代以上第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)功能特點(diǎn)分泌功能礦化功能收縮功能再生功能根面吸附等第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)牙周膜細(xì)胞增殖分化的影響因素生長因子胰島素纖維黏連蛋白抗壞血酸羥基磷灰石第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)牙髓細(xì)胞 (Dental pulp cells)培養(yǎng)方法：酶消化法；組織塊培養(yǎng)法細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)：成纖維細(xì)胞型（與牙周膜細(xì)胞類似）免疫組織化學(xué)染色：波形絲蛋白（+）；角蛋

15、白（-）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長增殖特點(diǎn)功能特點(diǎn)第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)生長增殖特點(diǎn)生長增殖較快可傳代至第1520代長時(shí)間體外培養(yǎng)可呈復(fù)層生長第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)功能特點(diǎn)堿性磷酸酶活性礦化現(xiàn)象對(duì)鈣調(diào)節(jié)因子的反應(yīng)對(duì)細(xì)胞因子的反應(yīng)對(duì)氫氧化鈣、羥基磷灰石蓋髓劑的反應(yīng)第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)二、唾液腺細(xì)胞第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)唾液腺細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)免疫組織化學(xué)特點(diǎn)功能特點(diǎn)唾液腺細(xì)胞的增殖與分化調(diào)節(jié)唾液腺細(xì)胞增殖、分化和功能的因素第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)腺泡上皮細(xì)胞：體外培養(yǎng)的腺泡細(xì)胞多呈“鋪路石”樣排列導(dǎo)管上皮細(xì)胞：導(dǎo)管上皮

16、細(xì)胞呈多邊形肌上皮細(xì)胞： 肌上皮細(xì)胞呈梭形或星形第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)導(dǎo)管上皮細(xì)胞 Duct epithelial cells (HSG cell lines)HSG細(xì)胞系（4）HSG細(xì)胞系（10）第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)A 小型豬腮腺上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)（10）B 小型豬腮腺上皮細(xì)胞alpha淀粉酶免疫組化染色（10）腺泡細(xì)胞上皮細(xì)胞 Acinus epithelial cells第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)免疫組織化學(xué)染色腺泡上皮細(xì)胞：角蛋白、淀粉酶、對(duì)氨基水楊酸、 導(dǎo)管上皮膜、前角蛋白、單克隆角蛋白、分泌成分陽性反應(yīng)導(dǎo)管上皮細(xì)胞：角蛋白、上皮膜蛋白、磷

17、酸酐酶抗體染色陽性反應(yīng)肌上皮細(xì)胞：肌動(dòng)蛋白、S-100蛋白、肌凝蛋白抗體染色陽性反應(yīng)第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)功能特點(diǎn)：分泌腺泡細(xì)胞：淀粉酶、PRP、唾液過氧化物酶、特異蛋白等腺泡上皮細(xì)胞：頂端分泌、基底及側(cè)膜分泌導(dǎo)管細(xì)胞：膠原肌上皮細(xì)胞：膠原第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)唾液腺細(xì)胞的增殖分化基底潛能干細(xì)胞理論單細(xì)胞全能干細(xì)胞理論雙細(xì)胞亞全能干細(xì)胞理論第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)調(diào)節(jié)唾液腺細(xì)胞增殖、分化和功能的因素細(xì)胞因子激素細(xì)胞外基質(zhì) 鈣離子第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)三、口腔黏膜細(xì)胞Oral mucosa epithelial cells第二節(jié) 口腔

18、醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)口腔黏膜細(xì)胞 (Oral mucosa epithelial cells)培養(yǎng)方法：組織塊法和酶消化法形態(tài)特點(diǎn)：卵圓形、多邊形，呈“鋪路石”樣單層排列免疫組織化學(xué)染色：波形絲蛋白陰性，角蛋白陽性功能：分泌大量的膠原蛋白與非膠原蛋白第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn) 兔口腔黏膜上皮細(xì)胞ABA 無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)條件下（10）B 滋養(yǎng)細(xì)胞層培養(yǎng)條件下（4）第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)四、頜骨相關(guān)的硬組織細(xì)胞第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)破骨細(xì)胞 (Osteoclasts)形態(tài)學(xué)特點(diǎn)：體積大，多核組織化學(xué)染色：破骨細(xì)胞單克隆抗體呈陽性反應(yīng)，與降鈣素反應(yīng)呈

19、藍(lán)紫色，與抗酒石酸磷酸酶反應(yīng)呈棕褐色功能：骨吸收功能影響破骨細(xì)胞功能的因素： 促進(jìn)破骨細(xì)胞功能：破骨細(xì)胞激活因子、甲狀旁腺素等 抑制破故細(xì)胞功能：-干擾素、降鈣素等第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)成骨細(xì)胞 (Osteoblasts)形態(tài)學(xué)特點(diǎn)：不同培養(yǎng)方法所獲得的成骨細(xì)胞形態(tài)各有差異免疫組織化學(xué)染色特點(diǎn)：BGP、型膠原、堿性磷酸酶活性功能：成骨作用 調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞骨吸收作用第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)軟骨細(xì)胞 (Chondrocytes)形態(tài)學(xué)特點(diǎn)：多角形，可形成甲苯胺藍(lán)染色陽性的物質(zhì)免疫組織化學(xué)染色特點(diǎn)：GAG、型和型膠原功能：形成軟骨或骨影響軟骨細(xì)胞功能、分化的因素：激素、細(xì)

20、胞因子、機(jī)械張力和壓力、體外培養(yǎng)環(huán)境第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)五、口腔腫瘤細(xì)胞第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)口腔鱗癌細(xì)胞 (Cells of oral squamous cell carcinoma)細(xì)胞系來源：舌鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本原代及傳代培養(yǎng)生物學(xué)特性： 多角形上皮樣細(xì)胞 核/漿比例高，多核仁 高貼壁率，克隆形成率和軟瓊脂集落形成率第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)唾液腺腫瘤細(xì)胞人黏液表皮樣癌MEC-1細(xì)胞系：低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株Mc1、Mc2高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株Mc3、M3SP4腺樣囊腺癌ACC-2、ACC-3細(xì)胞系第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)成釉細(xì)胞瘤細(xì)胞細(xì)胞系來源：腫瘤

21、組織原代及傳代培養(yǎng)生物學(xué)特性：生長增殖緩慢，二倍體細(xì)胞型應(yīng)用：目前已獲得永生細(xì)胞系A(chǔ)M-1及 hTERT(+)-AM細(xì)胞系第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用組織工程的基本原理口腔組織特有的干細(xì)胞再生醫(yī)學(xué)技術(shù)在口腔醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用組織工程的基本原理 (tissue engineering)種子細(xì)胞體外擴(kuò)增，與生物材料按一定的比例混合，將細(xì)胞-材料復(fù)合物植入機(jī)體的組織或器官的病損部位，以達(dá)到修復(fù)創(chuàng)傷和重建功能的目的目前組織工程常用的支架材料是合成的可生物降解的高分子聚合物是聚乳酸（PLA）、聚乙醇酸（PGA）、聚乳酸和聚乙

22、醇酸復(fù)合物（PLGA）等第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用口腔組織特有的干細(xì)胞 (stem cells)牙髓干細(xì)胞牙周膜干細(xì)胞脫落乳牙牙髓干細(xì)胞根尖牙乳頭干細(xì)胞唾液腺干細(xì)胞 第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用Dental stem cellshuman dental pulp stem cells (DPSCs)stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED)periodontal ligament stem cells (PDLSCs)stem cells from apical papilla (SCAP)stem ce

23、lls from salivary gland牙髓干細(xì)胞 (DPSCs)比BMSCS具有更強(qiáng)的增殖率、克隆形成率和倍增率可被誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞、神經(jīng)樣細(xì)胞Stroo-1和CD146等干細(xì)胞表面標(biāo)記陽性體內(nèi)誘導(dǎo)可形成類似牙本質(zhì)-牙髓復(fù)合體樣的結(jié)構(gòu)第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用脫落乳牙牙髓干細(xì)胞 (SHED)比BMSSCs具有更強(qiáng)的增殖率、克隆形成率和倍增率Stroo-1和CD146等干細(xì)胞表面標(biāo)記陽性可誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和成牙本質(zhì)細(xì)胞體外可形成鈣化結(jié)節(jié)內(nèi)體可在免疫缺陷小鼠皮下成骨和產(chǎn)生牙本質(zhì)樣物質(zhì)第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用牙周膜干細(xì)胞 (PDLSCs)Stro-1和

24、MUC18及腱特異性標(biāo)記SCX表達(dá)陽性可被誘導(dǎo)分化為牙髓母細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、纖維母細(xì)胞、牙骨質(zhì)細(xì)胞和成骨細(xì)胞體外可形成礦化結(jié)節(jié)，表達(dá)堿性磷酸酶或骨唾液蛋白體內(nèi)試驗(yàn)牙周膜干細(xì)胞能產(chǎn)生沿牙周膜結(jié)締組織方向走行的牙骨質(zhì)樣結(jié)構(gòu)第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用根尖牙乳頭干細(xì)胞 (SCAP)比牙髓干細(xì)胞具有更高的增殖活性CD24是SCAP較特異的表面標(biāo)志物在體外SCAP可橫向分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞和脂肪細(xì)胞，并能產(chǎn)生比牙髓干細(xì)胞更多的牙髓-牙本質(zhì)復(fù)合物第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用唾液腺干細(xì)胞 組織定位：導(dǎo)管上皮 停留在腺泡、間質(zhì)中的前體細(xì)胞可誘導(dǎo)分化為表達(dá)肝細(xì)胞和胰腺內(nèi)分泌細(xì)胞表型體外培養(yǎng)后植入

25、肝臟，可分泌白蛋白第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用再生醫(yī)學(xué)技術(shù)在口腔醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用在頜面重建中的作用： 介導(dǎo)頜面部骨及軟骨缺損修復(fù)在引導(dǎo)口腔組織再生中的作用：促進(jìn)牙周組織重建組織工程化黏膜在口腔醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 組織工程用于人造唾液腺牙再生：組織工程方法-種子細(xì)胞+支架材料 發(fā)育生物學(xué)-模擬牙齒發(fā)育的過程第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法口腔生物學(xué)其他研究方法基因芯片、蛋白芯片 和組織芯片蛋白質(zhì)組學(xué)生物信息學(xué)模式生物學(xué)系統(tǒng)生物學(xué)第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法基因芯片技術(shù) gene microarray基因芯片技術(shù)，又稱DNA微陣列技術(shù)，是將cDNA文庫中已知和

26、未知的全長序列或寡核苷酸序列固定于玻片上，同時(shí)檢測比較生物樣品中多個(gè)已知或未知序列的表達(dá)狀況基因芯片技術(shù)基本原理與經(jīng)典的核酸分子雜交方法是一致的基因芯片技術(shù)是高效地大規(guī)模獲取相關(guān)生物信息的重要手段第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法基因芯片技術(shù)的主要技術(shù)流程芯片的設(shè)計(jì)與制備靶基因的標(biāo)記芯片雜交與雜交信號(hào)檢測第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法基因芯片技術(shù)的應(yīng)用基因表達(dá)譜分析新基因發(fā)現(xiàn)基因突變及多態(tài)性分析基因組文庫作圖疾病診斷和預(yù)測藥物篩選基因測序等第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法基因芯片技術(shù)存在的問題設(shè)備昂貴，例如制造儀器，現(xiàn)代化的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)及激光共聚焦顯微鏡等，并且制造光刻掩膜需較高費(fèi)用DNA芯片上原位合成

27、探針難免有錯(cuò)誤核苷酸摻入及混入雜質(zhì)，使整個(gè)雜交背景增高，降低特異性第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法蛋白芯片技術(shù) protein microarray蛋白芯片是以蛋白質(zhì)代替DNA作為檢測對(duì)象，與在mRNA水平上的檢測基因表達(dá)的基因芯片不同，它直接在蛋白水平上檢測表達(dá)模式在基因表達(dá)研究中比基因芯片有著更加直接的應(yīng)用前景第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法蛋白芯片技術(shù)主要技術(shù)流程Chip membraneHybridizationLabeled protein sampleAdd StreptavidinStreptavidinFluorescent labelingStreptavidin AbAdd f

28、luorescent labelingStreptavidin AbFluorescent detect第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法蛋白芯片技術(shù)的應(yīng)用研究疾病的發(fā)病機(jī)制，協(xié)助尋找疾病診斷和治療的靶分子探討作用物與酶相互作用的機(jī)制的分析開發(fā)新藥以及協(xié)助蛋白質(zhì)組的研究第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法存在的問題固定于載體上的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)單一，無法反應(yīng)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的多樣性固定于載體上的蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性直接影響蛋白芯片的穩(wěn)定性蛋白芯片造價(jià)比較昂貴影響結(jié)果特異性的因素較多第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法組織芯片技術(shù) tissue microarray組織芯片技術(shù)是近年來基因芯片技術(shù)的發(fā)展和延伸它可以將大量臨床組織

29、標(biāo)本排列在一張載體進(jìn)行分析研究可以最大限度地利用組織資源所需樣品少，是一種高通量、多樣本的分析工具第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法應(yīng)用協(xié)助人類基因組學(xué)的研究疾病相關(guān)基因的驗(yàn)證新藥物的開發(fā)與篩選治療過程的追蹤和預(yù)后等方面的研究第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法蛋白質(zhì)組學(xué) proteomics蛋白質(zhì)組學(xué)的研究對(duì)象是特定的時(shí)間和特定的空一個(gè)完整的生物體（或細(xì)胞）所表達(dá)的全體蛋白質(zhì)的特征包括蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，翻譯后的修飾，蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用等在蛋白質(zhì)水平上獲得對(duì)于有關(guān)生物體生理、病理等過程的全面認(rèn)識(shí)第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法蛋白質(zhì)組學(xué)的研究內(nèi)容蛋白質(zhì)鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)功能確定服務(wù)于人類的健康第四節(jié)

30、 口腔生物學(xué)其他研究方法Intact cell of tissueCell lysisProtein LC2D gelsMixture of proteinsCollect fractionIndividual proteinTrypsin digestionProtein LC profileProtein LC profileMass spectrumMixture of proteinElectrospray of MALDIQuantitative ComparisonsProtein IdentificationMass spectrumProtein LC profile2D gelimageTrypsin digestionExtract spotTrypsin di