1、第二章 藥物的鑒別試驗(yàn)Identification test of drugs鑒別：判定真?zhèn)螜z查：安全性、有效性、均一性含量測(cè)定：有效成分的定量藥品檢驗(yàn)工作的主要內(nèi)容Basic regularity of drug inspectionIdentification test of drug第一節(jié)、鑒別試驗(yàn)的內(nèi)涵第二節(jié)、鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目第三節(jié)、鑒別試驗(yàn)的方法第四節(jié)、鑒別試驗(yàn)的條件藥物的鑒別試驗(yàn)?zāi)康模焊鶕?jù)藥物的分子結(jié)構(gòu)特征，采用物理、化學(xué)、或生物學(xué)方法，判斷(鑒別)藥物真?zhèn)?。適用性：僅用于證實(shí)貯藏在有標(biāo)簽容器中的藥物是否為其所標(biāo)示的藥物，并非對(duì)未知物化學(xué)結(jié)構(gòu)的確證鑒定。要求：方法專屬，每個(gè)品種一般2

2、3項(xiàng)不同類型的鑒別試驗(yàn)。第一節(jié)、鑒別試驗(yàn)的內(nèi)涵Principles of Identification Test 一、性狀 和 物理常數(shù) 二、鑒別項(xiàng)下規(guī)定的試驗(yàn)一般鑒別：區(qū)分藥物的類別專屬鑒別：區(qū)分個(gè)別的藥物單體 (同類或相同母核)第二節(jié)、鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目Items in Identification Test原料藥鑒別制劑鑒別一、性狀 和 物理常數(shù) 性狀(呈現(xiàn)狀態(tài))：反映了藥物特有的物理性質(zhì)。外 觀溶解度物理常數(shù)Characters/DescriptionPhysical Constants外觀：指藥物的聚集狀態(tài)、晶型、色澤以及臭、味等。如ChP對(duì)維生素B1的描述為“本品為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末

3、；有微弱的特臭，味苦；干燥品在空氣中迅即吸收約4%的水分”。對(duì)于鏈霉素片的描述為“本品為糖衣片或薄膜衣片，除去包衣后，顯白色至微帶黃綠色”。溶解度：不同溶劑中的溶解特性；一定程度上反映了藥品的純度。物理常數(shù)：內(nèi)在物理特征；既可鑒別，也可反映純凈的程度。性狀 和 物理常數(shù)熔 點(diǎn)固體熔化成液體的溫度 熔融同時(shí)分解的溫度 自初熔至全熔的一段溫度 物理常數(shù)（Physical Constants）玻璃毛細(xì)管測(cè)定法：“初熔”：開(kāi)始局部液化，出現(xiàn)明顯液滴時(shí)的溫度?！叭邸保喝恳夯瘯r(shí)的溫度。熔點(diǎn) 及其 測(cè)定法性狀 和 物理常數(shù)第一法：測(cè)定易粉碎的固體藥品(一端熔封 ) 毛細(xì)管放入：傳溫液加熱至較規(guī)定熔點(diǎn)低限

4、約低10時(shí)升溫速率：1.01.5/min；熔融分解 2.53.0/min；重復(fù)測(cè)定3次，取平均。第二法：測(cè)定不易粉碎的固體藥品(如脂肪、脂肪酸、石蠟、羊毛脂等) (兩端開(kāi)口，吸入熔融樣品，冷凍凝固測(cè)定) 升溫速率：0.5/min ， 供試品在毛細(xì)管中開(kāi)始上升時(shí)的溫度。第三法：測(cè)定凡士林或其他類似物質(zhì) 熔點(diǎn) 及其 測(cè)定法性狀 和 物理常數(shù)比旋度：在一定波長(zhǎng)與溫度下，偏振光透過(guò)長(zhǎng)1dm且每1ml中含有旋光性物質(zhì)1g的溶液時(shí)測(cè)得的旋光度。用 表示。應(yīng)用：鑒別藥物 檢查純度 含量測(cè)定(制劑)性狀 和 物理常數(shù)e.g. VitC 熔點(diǎn)190192， +20.521.5,葡萄糖注射液的含量測(cè)定吸收系數(shù)：在

5、給定的波長(zhǎng)、溶劑和溫度等條件下，吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液層厚度時(shí)的吸收度稱為吸收系數(shù)。摩爾()與百分吸收系數(shù)( )。中國(guó)藥典用：依據(jù)同類藥物的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)進(jìn)行的真?zhèn)舞b別。無(wú)機(jī)藥物：其 陰、陽(yáng)離子的特殊反應(yīng);有機(jī)藥物：共有母核、官能團(tuán)特征反應(yīng)。特點(diǎn)：確定(區(qū)分)類別，不能夠確定個(gè)別品種。常見(jiàn)一般鑒別試驗(yàn)：丙二酰脲類、托烷生物堿類、芳香第一胺類、有機(jī)氟化物類、有機(jī)酸鹽、無(wú)機(jī)金屬鹽類、無(wú)機(jī)酸鹽、etcGeneral identification test二、一般鑒別試驗(yàn)有機(jī)氟化物鑒別方法：取供試品約7mg，照氧瓶燃燒法進(jìn)行有機(jī)破壞，用水20ml與0.01mol/L氫氧化鈉溶液6.5ml為吸收液，俟燃

6、燒完全后，充分振搖，取吸收液2ml，加茜素氟藍(lán)試液0.5ml，再加12%醋酸鈉的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀釋至4ml，加硝酸亞鈰試液0.5ml，即顯藍(lán)紫色，同時(shí)做空白對(duì)照試驗(yàn)。 茜素氟藍(lán)藍(lán)紫色配合物水楊酸鹽鑒別方法一：取供試品的稀溶液，加三氯化鐵試液1 滴，即顯紫色。反應(yīng)原理：本品在中性或弱酸性條件下，與三氯化鐵 試液生成配位化合物，在中性時(shí)呈紅 色，弱酸性時(shí)呈紫色。鑒別方法二：取供試品溶液，加稀鹽酸，即析出白色 水楊酸沉淀；分離，沉淀在醋酸銨試液中溶解。依據(jù)：特定藥物分子中的特殊性質(zhì)、特征基團(tuán)或官能團(tuán)的專屬反應(yīng)或測(cè)定進(jìn)行的真?zhèn)舞b別。 Specific identification test

7、三、專屬鑒別試驗(yàn)C17位上有-醇酮基，與四氮唑反應(yīng)e.g. 醋酸潑尼松Prednisolone Acetate取本品約1mg ，加乙醇2ml 使溶解，加10氫氧化鈉溶液2滴與氯化三苯四氮唑試液1ml ，即顯紅色方法分類化學(xué)鑒別法光譜鑒別法生物學(xué)法 HPLC、GC鑒別法 薄層色譜鑒別法 紙色譜鑒別法 呈色反應(yīng)鑒別法 紫外光譜鑒別法 紅外光譜鑒別法 沉淀生成反應(yīng)鑒別法 色譜鑒別法 氣體生成反應(yīng)鑒別法 測(cè)定生成物的熔點(diǎn)熒光反應(yīng)鑒別法 第三節(jié)、鑒別試驗(yàn)方法Identification Test Methods專屬性強(qiáng)，耐用性好，靈敏度高，操作簡(jiǎn)便、快速。常用方法：化學(xué)法，光譜法，色譜法和生物學(xué)法。中藥

8、材鑒別方法：還有顯微鑒別法和特征圖譜或指紋圖譜鑒別法。制劑的鑒別：盡可能與原料藥相同； 必須：排除輔料干擾； 多組分或微量成分，須用更靈敏、專屬的方法。特殊性質(zhì)：采用特定方法。如手性、晶型等。藥物的鑒別方法要求指供試品溶液中加入適當(dāng)?shù)脑噭┤芤?，在一定條件下進(jìn)行反應(yīng)，生成易于觀測(cè)的有色產(chǎn)物。（1）三氯化鐵呈色反應(yīng)： 用于酚羥基或水解后產(chǎn)生酚羥基（2）異羥肟酸鐵反應(yīng)： 多用于芳酸及其酯類、酰胺類（3）茚三酮呈色反應(yīng)： 用于AA 和 結(jié)構(gòu)中含有氨基糖單元的藥物（4）重氮化-偶合顯色反應(yīng)： 用于芳伯氨基或潛在芳伯氨基（5）氧化還原顯色反應(yīng)及其它顏色反應(yīng)多巴胺等酚性藥物與三氯化鐵試液呈色加堿溶液后的變色

9、反應(yīng)1.呈色反應(yīng)鑒別法 一、化學(xué)鑒別法2.沉淀生成反應(yīng)鑒別法 （1）與重金屬離子的沉淀反應(yīng)維生素B1與碘化汞鉀生成淡黃色沉淀 BH2HgI4。（2）與生物堿沉淀劑的反應(yīng)丙二酰脲類藥物與硝酸銀反應(yīng) 常用的熒光發(fā)射形式：（1）藥物本身可在可見(jiàn)光下發(fā)射熒光；（2）藥物溶液加硫酸后，在可見(jiàn)光下發(fā)射熒光；（3）藥物和溴反應(yīng)后，于可見(jiàn)光下發(fā)射出熒光；3.熒光反應(yīng)鑒別法（4）藥物和間苯二酚反應(yīng)后，發(fā)射出熒光及 藥物經(jīng)其它反應(yīng)后，發(fā)射熒光。（1）大多數(shù)的胺（銨）類藥物、酰脲類藥物以及 某些酰胺類藥物，可經(jīng)強(qiáng)堿處理后，加熱，產(chǎn) 生氨（胺）氣。（2）化學(xué)結(jié)構(gòu)中含硫的藥物，可經(jīng)強(qiáng)酸處理后， 加熱，發(fā)生硫化氫氣體。（

10、3）含碘有機(jī)藥物，經(jīng)直火加熱，可生成紫色碘 蒸氣；含醋酸酯和乙酰胺類藥物，經(jīng)硫酸水解 后，加乙醇可產(chǎn)生醋酸乙酯的香味。4.氣體生成反應(yīng)鑒別法1、紫外光譜鑒別法 （1）規(guī)定：最大/最小吸收波長(zhǎng)；（2）規(guī)定：一定濃度供試液，最大吸收波長(zhǎng) 和吸收度；（3）規(guī)定：吸收波長(zhǎng)和吸收系數(shù)法； （4）規(guī)定：幾個(gè)吸收波長(zhǎng)，和吸收度比值；（5）規(guī)定：經(jīng)化學(xué)處理后產(chǎn)物的光譜特性。二、光譜鑒別法氟胞嘧啶紫外光譜鑒別 本品8g/ml的鹽酸溶液(91000.1mol/L)，最大吸收波長(zhǎng)286nm，吸光度約為0.57，最小吸收波長(zhǎng)244nm。 供試品與對(duì)照品(或紅外標(biāo)準(zhǔn)圖譜)的一致性，指紋特性。2、紅外光譜鑒別法 aba:

11、A晶型;b:B晶型(有效晶型)e.g. 棕櫚氯霉素的石蠟糊片IR譜氯羥去甲安定紅外光譜鑒別氯羥去甲安定的測(cè)定：“取本品，經(jīng)干燥后用溴化鉀壓片法測(cè)定其紅外光吸收?qǐng)D譜中3440cm-1，3220 cm-1，1695 cm-1，1614 cm-1，1324 cm-1，1132 cm-1以及828 cm-1波數(shù)附近處有吸收”。 無(wú)定型（無(wú)水）無(wú)水型1三水合物無(wú)水型2氨芐西林四種結(jié)晶態(tài) 粉末x-射線衍射鑒別衍射角（2）、相對(duì)強(qiáng)度、面間距3、其他光譜法：NIR NMR MS AAS x-ray etcTLC，GC，HPLC，聯(lián)用鑒別，etcsr混sRsR 相同濃度的供試品與對(duì)照品比較，主斑點(diǎn)：應(yīng)一致； 供

12、試品溶液與對(duì)照品溶液等體積混合，供試品與混合液主斑點(diǎn)：應(yīng)一致 結(jié)構(gòu)相似的其它藥物與供試品溶液的主斑點(diǎn)比較：應(yīng)區(qū)分 項(xiàng)下兩種溶液等體積混合，應(yīng)顯示兩個(gè)清晰分離的斑點(diǎn) ：應(yīng)區(qū)分三、色譜鑒別法TLC中藥材七葉蓮 中 常春藤皂苷元 與 齊墩果酸 的定性鑒別HPLC法鑒別四、顯微鑒別法靈芝孢子的電鏡掃描照片 靈芝破壁孢子的電鏡掃描照片 Electron scanning microscope 澤瀉內(nèi)皮層細(xì)胞 牡丹皮草酸鈣簇晶 茯苓菌絲 山藥淀粉粒 山茱萸果皮表皮細(xì)胞 地黃薄壁組織六味地黃丸中藥材的顯微特征圖 DNA testing for a murder investigation, 1987 五、生

13、物方法利用藥效學(xué)和分子生物學(xué)的技術(shù)，進(jìn)行藥物的鑒定 mold test kit report air test 9, mold test kit Environmental六、中藥的 指紋圖譜/特征圖譜 鑒別法特定條件下的全部相關(guān)成分圖譜 / 特定條件下主要已知成分的圖譜 三七總皂苷 1：Notoginsenoside R1;211:Ginsenoside Rg1, Re, Rf, Rb1, Rg2, Rc, Rb2, Rb3, Rd and Rg3 一、溶液的濃度 二、溶液的溫度 三、溶液的酸堿度 四、試驗(yàn)時(shí)間 五、方法驗(yàn)證：靈敏、專屬、耐用第四節(jié)、鑒別試驗(yàn)的條件1、反應(yīng)靈敏度和空白試驗(yàn)鑒別試驗(yàn)的靈敏度（sensitivity）最低檢出量（minimum detectable quantity）最低檢出濃度（minimum detectable concentration）空白試驗(yàn)（blank