1、穿心蓮種子卵白質(zhì)電泳斷定的開端研究【摘要】目的探究sds聚丙烯酰胺凝膠電泳技能對(duì)穿心蓮種子舉行區(qū)分的可行性，為穿心蓮種子區(qū)分及育種研究提供科學(xué)根據(jù)。要領(lǐng)接納聚丙烯酰胺凝膠電泳技能，對(duì)廣東省幾種差異泉源和差異采收期的穿心蓮種子舉行可溶性卵白質(zhì)電泳研究。效果差異產(chǎn)地的穿心蓮種子卵白質(zhì)電泳圖譜之間在譜型和譜帶的強(qiáng)弱、卵白質(zhì)相對(duì)含量上均有必然的差異，差異采收期穿心蓮種子卵白質(zhì)電泳在卵白質(zhì)譜帶的強(qiáng)弱上有必然差異。結(jié)論聚丙烯酰胺凝膠電泳技能可用于穿心蓮種子斷定?！娟P(guān)鍵詞】穿心蓮;聚丙烯酰胺凝膠電泳;種子;斷定abstrat:bjetivetexplrethefeasibilityfseedidentifi

2、atinithsds,andprvidesientifibasisfrbreedingfandrgraphispaniulata.ethdssdsplyarylaidegeleletrphresistehnlgyasadptedfranalyzingslubleprteinsfseveraldifferentsuresanddifferentlletintieinguangdng.resultssignifiantdiffereneserebservedinspetralpattern,ntentsfprteinsandintensityfbandsfandrgraphispaniulataf

3、rdifferentrigins,andinspetraldegreebeteenvariuslletintie.nlusinplyarylaidegeleletrphresistehnlgyanbeusedfrseedidentifiatinfandrgraphispaniulataseeds.keyrds:andrgraphispaniulata;plyarylaidegeleletrphresis;seed;identifiatin穿心蓮andrgraphispaniulata(bur.f.)nees為爵床科植物，具有清熱解毒、涼血消腫等成效,臨床上常用于急性菌立胃腸炎、傷風(fēng)、流腦、氣管

4、炎、高血壓等疾病的治療1。研究表白，差異產(chǎn)地、差異采收期的穿心蓮性狀、身分差異較大，種子稠濁征象也較嚴(yán)峻2。中藥材種子所含卵白質(zhì)的種類和數(shù)量攜帶了其恒久演化的遺傳特性，具有很高的不變性和專屬性，其真?zhèn)魏推贩N區(qū)分是中藥集約化消費(fèi)的緊張環(huán)節(jié)和條件。1991年國際種子查驗(yàn)協(xié)會(huì)將卵白質(zhì)電泳要領(lǐng)正式定為尺度的品種斷定要領(lǐng)。如今，卵白質(zhì)電泳技能敏捷生長和日臻美滿，但大多應(yīng)用于玉米、棉花等植物中3-4，應(yīng)用于藥用植物的研究尚為數(shù)不多5-7。筆者網(wǎng)絡(luò)了幾種差異產(chǎn)地和差異采收期的穿心蓮種子，使用卵白質(zhì)電泳技能對(duì)其舉行檢測，旨在為穿心蓮種質(zhì)資源的庇護(hù)、評(píng)價(jià)，種子的斷定及育種提供參考根據(jù)。1質(zhì)料與要領(lǐng)1.1質(zhì)料網(wǎng)羅

5、4個(gè)差異地域和同一地域3種差異采收期的成熟穿心蓮果實(shí)，室溫下陰干，待果皮天然裂開彈出種子。網(wǎng)絡(luò)于種子瓶中置室溫陰涼處保存，種種子泉源見表1。1.2儀器與試劑dyy-11型電泳儀(北京市六一儀器廠)，dyz-24dn雙垂直平電泳槽(北京市六一儀器廠)，tdl80-2b臺(tái)式離心機(jī)、hk3300h超聲波洗濯器(上?？茖?dǎo)超聲儀器)，phs-30酸度計(jì)(上海細(xì)密科學(xué)儀器)，h-tp12-2型架盤藥物天平(北京醫(yī)用天平廠)。表1穿心蓮種子泉源2ll-1tris-hl(ph=8.8)，1ll-1tris-hl(ph=6.8)，10%(質(zhì)量濃度)sds，50%(體積分?jǐn)?shù))甘油，1%(質(zhì)量濃度)溴酚藍(lán)，考馬斯亮

6、藍(lán)r-250染液(取0.04g考馬斯亮藍(lán)r-250，參加甲醇18l、蒸餾水18l和冰醋酸4l，即得)，考馬斯亮藍(lán)脫色液(10l甲醇、10l冰醋酸和80l蒸餾水混勻)，30%(質(zhì)量濃度,下同)丙烯酰胺，0.8%n，n-甲叉雙丙烯酰胺，10%sds，10%過硫酸銨，1%溴酚藍(lán)。1.3要領(lǐng)2效果與闡發(fā)2.1電泳效果差異產(chǎn)地和差異采收期的穿心蓮種子卵白的sds電泳效果見圖1，按照此繪制的電泳圖譜見圖2。2.2卵白相對(duì)百分含量為了闡發(fā)卵白表達(dá)量，使用凝膠圖像闡發(fā)軟件bandsan對(duì)電泳卵白圖譜舉行闡發(fā)，此中由于有部門譜帶的灰度值太低，難以測出其地點(diǎn)地區(qū)的卵白含量?？蓽y得的目的卵白占總卵白的百分?jǐn)?shù)效果見表

7、2。psa6121af.別離是編號(hào)為af的穿心蓮種子圖1穿心蓮種子可溶性卵白電泳圖譜psa6122;s*2圖2穿心蓮種子可溶性卵白電泳圖譜闡發(fā)圖效果表白，差異泉源地和差異采收期的穿心蓮種子卵白表達(dá)量亦存在差異。3討論穿心蓮?fù)ǔＪ欠N子生殖,故種子的斷定及其品格極為緊張。卵白質(zhì)是基因表達(dá)產(chǎn)物，具有必然的不變性，但亦會(huì)受情況的影響而產(chǎn)生基因的變異，形成差異的生態(tài)型乃至變種。本研究初次使用sds聚丙烯酰胺凝膠電泳技能，對(duì)廣東省4個(gè)差異泉源地的穿心蓮種子及同一產(chǎn)地差異采收期的穿心蓮種子水溶性卵白舉行了卵白質(zhì)電泳的開端研究。研究效果表白，sds聚丙烯酰胺凝膠電泳技能可作為斷定穿心蓮種子的生物指征。別的，同

8、一泉源差異采收期的穿心蓮種子卵白質(zhì)電泳圖譜在譜帶數(shù)量、遷徙率上具有較高相似性，在卵白質(zhì)相對(duì)含量上那么出現(xiàn)出必然的差異，提示可以作為穿心蓮種子成熟以及最正確采收期的生化標(biāo)識(shí)表記標(biāo)幟，相干的研究將鄙人一步事情開展。表2穿心蓮種子可溶性卵白電泳的卵白表達(dá)量本研究表白了使用聚丙烯酰胺凝膠電泳技能對(duì)穿心蓮種子舉行斷定及種子品格研究的可行性，為進(jìn)一步研究穿心蓮種質(zhì)資源的庇護(hù)、評(píng)價(jià)及育種提供參考根據(jù)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1張濤.穿心蓮的研究希望j.中藥材,2000,23(6):366-368.2陳元生,王振華,羅戰(zhàn)勇,等.穿心蓮精良種質(zhì)挑選研究j.當(dāng)代中藥研究與理論,2022,20(4):3-7.3張春慶,伊燕枰,高榮岐,等.棉花種子卵白多態(tài)性與品種斷定要領(lǐng)的研究j.中國農(nóng)業(yè)科學(xué),1998,31(4):16-19.4蘇萍,戴常軍,任紅波,等.玉米卵白質(zhì)組分電泳特性的比力研究j.黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué),2002(1):7-9.5石俊英,孫儈俐,荊雪梅.16種中藥及其差異炮成品的電泳闡發(fā)j.中國中藥雜志,1995,20(9):533.6趙麗麗,涅鳳褆,李