1、大鼠同種異體異位節(jié)段小腸移植模型目的：建立大鼠同種異體異位節(jié)段小腸移植模型，為研究小腸移植排擠反響提供良好的動物模型。方法：安康成年SD大鼠100只，供、受體各50只，進(jìn)展同種異體異位節(jié)段性小腸移植。結(jié)果：預(yù)試驗(yàn)10次，術(shù)后72h存活率40%。正式實(shí)驗(yàn)40次，術(shù)后72h存活率85。全部手術(shù)時(shí)間平均160in,供體手術(shù)時(shí)間平均70in，受體手術(shù)時(shí)間平均90in。結(jié)論：良好的血管吻合方法以及輸血、補(bǔ)液、保溫等圍手術(shù)期處理是進(jìn)步手術(shù)成功率的關(guān)鍵。小腸移植是治療終末期腸功能衰竭，如短腸綜合征的唯一確切方法1，但由于小腸富含淋巴組織，具有很高的免疫源性，是諸多器官移植中排擠反響發(fā)生率最高和最重的器官2，

2、使小腸移植成為最具挑戰(zhàn)性的腹腔臟器移植。20世紀(jì)80年代前，無論是在實(shí)驗(yàn)室還是在臨床，小腸移植都遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于肝、腎等其它臟器的移植，直到20世紀(jì)80年代后期隨著環(huán)孢素(sA)的問世，小腸移植才開場有了根本性的打破。近年來雖然有強(qiáng)有力的非特異性免疫抑制劑的應(yīng)用，但小腸移植排擠反響仍高達(dá)50%以上3，與其它臟器腎、肝、心臟相比，臨床小腸移植仍處于起步階段。目前困擾小腸移植的主要問題是排擠反響、多源性感染、缺血再灌注損傷和移植腸功能障礙等,因此建立可靠的動物模型進(jìn)展實(shí)驗(yàn)研究極其重要。大鼠作為小腸移植模型實(shí)驗(yàn)動物有顯著的優(yōu)點(diǎn),如購置和飼養(yǎng)的花費(fèi)低、免疫學(xué)的構(gòu)成更可控和對感染相對強(qiáng)的抵抗力等4。因此，在小

3、腸移植研究領(lǐng)域最為常用。本實(shí)驗(yàn)建立一種并發(fā)癥少、存活率高、穩(wěn)定實(shí)用的大鼠小腸移植模型，為今后研究小腸移植排擠反響打下根底，現(xiàn)報(bào)道如下。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動物選用安康成年SD大鼠100只，體重180250g(新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供)，分為供、受體各50只。手術(shù)前禁食1215h，飼以5葡萄糖水喂養(yǎng)。10%水合氯醛(3l/kg)腹腔注射麻醉,100白熾燈光照取暖。手術(shù)在顯微鏡下操作。1.2手術(shù)方法1.2.1供體手術(shù)10%水合氯醛(3l/kg)腹腔注射麻醉,待大鼠麻醉完全后,術(shù)區(qū)備皮，仰臥位固定于顯微鏡下的木板上,酒精消毒腹部皮膚后,尾靜脈置管，緩慢推注肝素乳酸林格液2l含肝素12.5U。十

4、字切口開腹,鹽水紗布保護(hù)腸管,游離腹主動脈，在右腎動脈程度以下、左腎動脈程度上方結(jié)扎腹主動脈。別離解剖結(jié)腸系膜與小腸系膜間的粘連帶，沿十二指腸找到屈氏韌帶，距屈氏韌帶約5處選擇分支較少、供給血管較粗的約1520的一段近端空腸，標(biāo)記備用。游離結(jié)扎切斷回結(jié)腸動靜脈、右結(jié)腸動靜脈、中結(jié)腸動靜脈,同時(shí)游離橫結(jié)腸和升結(jié)腸。翻開橫結(jié)腸及升結(jié)腸，顯露腸系膜上動脈及上靜脈，結(jié)扎切斷腸系膜上動脈及上靜脈之間的結(jié)締組織，顯露腸系膜上動脈根部，并充分游離骨骼化。沿腸系膜上靜脈找到門靜脈，結(jié)扎切除其周圍淋巴結(jié)和結(jié)締組織，游離結(jié)扎切斷十二指腸下動脈和十二指腸上、下靜脈，將胰腺從門靜脈上剝離下來。顯露游離脾靜脈，游離結(jié)扎

5、腸系膜上靜脈匯入門靜脈分支至幽門靜脈。游離腹腔動脈與左腎動脈之間的腹主動脈，結(jié)扎此段腹主動脈的所有腹腔動脈分支，保存腸系膜上動脈。于標(biāo)記腸管遠(yuǎn)端同時(shí)結(jié)扎切斷腸系膜上動靜脈。于標(biāo)記腸管兩端切斷，空腸斷端緩慢而輕柔地注入4慶大霉素鹽水行腸腔灌洗。在腹腔動脈程度阻斷腹主動脈,經(jīng)右腎動脈插管至腸系膜上動脈程度,并以5-0絲線固定。結(jié)扎切斷脾靜脈，緊貼幽門靜脈回流平面下方結(jié)扎切斷門靜脈，遠(yuǎn)心端開放。以含12.5U/l肝素的4乳酸林格液行小腸原位灌洗,同時(shí)將大量冰屑敷于小腸上快速降溫，低壓灌洗腸系膜血管至腸管呈乳白色、門靜脈斷端流出液清亮為止。剪斷腸系膜上動脈根部，將移植物放入4肝素乳酸林格液保存。熱缺血

6、時(shí)間約23in。于腹腔動脈上方穿刺腹主動脈，取血約23l，肝素化保存?zhèn)溆谩?.2.2受體手術(shù)受體麻醉同供體，肌肉注射阿托品0.2g/kg,腹部正中切口，上至劍突,下至恥骨結(jié)合，用自制的腹部拉鉤向兩側(cè)拉開腹壁，用乳酸林格液紗布保護(hù)切口周圍的皮膚,將腸管置于左側(cè)腹外，以乳酸林格液紗布覆蓋保護(hù)。鹽水棉棒暴露游離腎血管程度以下腹主動脈及下腔靜脈段約11.5。5-0絲線于腎動脈程度下及髂血管程度上同時(shí)阻斷下腔靜脈和腹主動脈，依次阻斷近心端和遠(yuǎn)心端。結(jié)扎腹主動脈及下腔靜脈的所有分支,顯微鑷提起血管壁，于腹主動脈壁及下腔靜脈壁各剪出一橢圓形缺口，直徑應(yīng)略大于供體腸系膜上動脈及門靜脈直徑，肝素乳酸林格液沖洗血

7、管腔。乳酸林格液紗布包裹移植腸管并置于腹外,生理鹽水冰屑覆于紗布上以部分降溫。11-0滑線端側(cè)連續(xù)吻合腹主動脈腸系膜上動脈、下腔靜脈腸系膜上靜脈，吻合過程中吻合處浸于肝素乳酸林格液中。以棉球壓迫動脈吻合口周圍,依次松開遠(yuǎn)心端及近心端，恢復(fù)腸管血液循環(huán)。冷缺血5010in，如血管吻合口通暢，移植小腸迅速紅潤并可見明顯的小血管搏動，腸腔內(nèi)分泌出乳白色腸液。吻合后可常規(guī)使用凝膠海綿壓迫于吻合口處止血，假設(shè)仍有少許出血，以棉球輕輕壓迫即可，視出血量經(jīng)尾靜脈置管通路推注供體血約23l。8-0滑線將供體血管周圍組織與受體固定，防止血管扭曲造成血栓形成及供體移植血管缺血壞死。雙側(cè)腸管造瘺于右側(cè)腹壁，10l溫

8、慶大霉素鹽水沖洗腹腔，查無活動性出血后關(guān)腹。2結(jié)果預(yù)試驗(yàn)10次，術(shù)后72h存活4只40%。未能存活72h以上有6只大鼠60%，其死亡主要原因?yàn)槭а孕菘?、吻合后血管狹窄、靜脈吻合口部位血栓形成、腹腔內(nèi)感染以及不明原因。技術(shù)成熟后進(jìn)展正式實(shí)驗(yàn)40次，術(shù)后72h存活34只85%,未能存活72h以上6只大鼠15%。正式實(shí)驗(yàn)時(shí)手術(shù)失敗的6只大鼠主要死亡原因?yàn)殪o脈吻合口部位血栓形成2只，術(shù)后腹腔內(nèi)出血2只，供體腸血管扭曲1只，不明原因1只。全部手術(shù)時(shí)間平均160in,供體手術(shù)時(shí)間平均70in，受體手術(shù)時(shí)間平均90in。整個手術(shù)過程為一人操作，手術(shù)時(shí)間約3h。3討論本研究顯示，顯微鏡下大鼠同種異體異位節(jié)段

9、性小腸移植模型的建立，可為小腸移植根底研究提供良好的動物模型。在手術(shù)操作中移植腸的獲娶血管吻合技術(shù)是進(jìn)步手術(shù)成功率的關(guān)鍵，而術(shù)中輸血、補(bǔ)液、術(shù)后保溫等圍手術(shù)期處理是進(jìn)步術(shù)后存活率的關(guān)鍵。3.1控制體重本組SD大鼠控制體重在180250g，體重適宜，能承受較長的手術(shù)時(shí)間及麻醉時(shí)間，對血管阻斷的耐受力較強(qiáng)，血管的脆性較小，彈性較好，鉗夾時(shí)不易破裂出血。3.2術(shù)前禁食禁食有利于腸道灌洗，而腸道灌洗是關(guān)系手術(shù)成功的一個重要因素。禁食后腸道不充盈，腹腔內(nèi)容量減小，進(jìn)展血管吻合時(shí)有利于操作空間的顯露。禁食時(shí)間過短，達(dá)不到禁食效果，腸道內(nèi)有殘留糞便，易污染手術(shù)野，增加術(shù)中感染機(jī)率和手術(shù)失敗率。禁食時(shí)間過長，

10、導(dǎo)致大鼠免疫力降低，抵抗力下降，對手術(shù)及麻醉的耐受力下降，增加手術(shù)失敗率。用代謝籠防止大鼠食糞及敷料，當(dāng)禁食時(shí)間控制在1215h時(shí)，腸道根本排泄干凈，再輔以5葡萄糖水喂養(yǎng)，可維持大鼠根本營養(yǎng)需要量，短期內(nèi)對其安康狀況及抵抗力影響不大。3.3受體輸血封閉群大鼠間進(jìn)展互相輸血及穿插配血實(shí)驗(yàn)，結(jié)果證明血型符合并且不會出現(xiàn)輸血反響5。手術(shù)過程中常難免會有出血，出血量多少不等將成為實(shí)驗(yàn)干擾因素，所以術(shù)后予大鼠適量輸血是可行的，且能進(jìn)步手術(shù)成功率。3.4術(shù)中保溫及術(shù)后復(fù)溫預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，術(shù)中和術(shù)后保溫是影響動物模型成功建立的重要因素之一。故正式實(shí)驗(yàn)中使用100白熾燈光照取暖，控制溫度在22左右，使大鼠可以更好地耐受手術(shù)，術(shù)后將大鼠飼養(yǎng)于2024的恒溫環(huán)境。3.5血管重建的方式建議在行預(yù)試驗(yàn)前進(jìn)展一段時(shí)間的顯微外科培訓(xùn)。用供體的腸系膜上動脈、門靜脈分別與受體的腹主動脈、下腔靜脈進(jìn)展端側(cè)吻合6，如顯微外科技術(shù)過關(guān)，這一吻合方式并不增加吻