1、組織切片免疫組化雄鼠腎囊膜移植ES cell 4-6周處死小鼠，1多聚甲醛固定4保存（無限時(shí)）， 脫水50乙乙醇300minn60乙醇330miin700乙醇醇 過夜夜80乙醇 60mmin990乙乙醇 660miin955乙醇醇 20mmin995乙乙醇 255minn1000乙醇醇 200minn1000乙醇醇 255minn透明 以上上每次移移前快速速用濾紙紙吸，但但不能干干，組織織塊輕夾夾，避免免損傷，或者將將組織快快放在離離心管中中，依次次加入不不同濃度度的乙醇醇，每次次更換時(shí)時(shí)，吸出出大部分分的乙醇醇，將剩剩余的連連組織塊塊倒在濾濾紙上，再立即即反過來來將組織織塊導(dǎo)入入離心管管，再

2、加加下一個(gè)個(gè)濃度的的乙醇） 液液液之間誤誤差約為為1miin，進(jìn)進(jìn)入后搖搖晃透明 1100乙醇苯（11：1）10mmin 苯 過午午苯 110miin浸蠟蠟浸蠟（662 恒溫溫箱,將將組織塊塊放在鐵鐵網(wǎng)中，挨個(gè)轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移）蠟蠟10mmin蠟蠟20mmin蠟蠟 200minn包埋：石石蠟盒底底部事先先用手指指涂點(diǎn)甘甘油，石石蠟未凝凝固時(shí)將將組織塊塊擬切面面朝下中中間放置置，蓋上上鏤空塑塑料托，石蠟?zāi)毯螅詠硭?，完全全冷卻后后，將包包埋盒與與塑料托托分離，組織塊塊應(yīng)該留留在托一一邊，收收藏好等等待切片片（避塵塵）【蠟若凝凝固于組組織塊外外圍，將將器皿擱擱酒精燈燈上烤烤烤，化后后移入溫溫箱】【組織

3、塊塊由苯移移入蠟時(shí)時(shí)，瓶邊邊靠上即即可，不不用濾紙紙，在蠟蠟之間移移動(dòng)組織織塊要快快，盡量量避免凝凝固】【用苯替替代二甲甲苯透明明可放置置較長時(shí)時(shí)間，組組織塊不不易脆】切片展片，貼貼片臥式染缸缸2/3蒸餾餾水+110滴蛋蛋清甘油油， 混混勻；將蛋清甘甘油水溶溶液摸勻勻載玻片片上，磨磨砂面朝朝上；將玻片在在酒精燈燈火焰上上晃3-5下（夏天）或6-8下（冬天）用手術(shù)刀刀取一段段適宜長長度的切切片，移移到載玻玻片液滴滴上，光光面朝下下；用展片針針將皺的的組織展展開用手術(shù)刀刀分開組組織片段段，移于于另一載載玻片（事先蛋蛋清甘油油水溶液液滋潤）中間；組織方向向盡量保保持一致致（根據(jù)據(jù)形狀，或有絨絨毛的朝

4、朝上）置置于片盤盤上，做做好標(biāo)記記；移入恒溫溫箱前，不能讓讓切片干干掉，要要保持適適度濕潤潤（否則則切片烤烤后不牢牢），但但切片周周圍盡量量不要留留有蛋清清甘油，以免染染色后影影響片子子美觀；移入488恒溫箱箱，烤片片，過夜夜，2天天都行。染色，封封片1.脫蠟蠟 二甲苯苯 3mmin 二甲苯苯 3mmin1100乙醇 5mmin1100乙醇 5mmin995乙乙醇 5mmin995乙乙醇 5mmin990乙乙醇 55minn80乙醇 5miin700乙醇醇5miin自來來水 33minn蒸餾水水 3mmin染染色（或或修復(fù)，抗體，顯色，如果作作免疫組組化不能能用脫過過伊紅的的酒精去去脫水）蘇木

5、精精 7mmin（染色前前將漂浮浮的氧化化物用濾濾紙撈起起，要慢慢放慢提提，避免免將沉淀淀懸浮起起）自來來水漂洗洗5miin（置置盆中流流水沖洗洗，水不不能直接接沖在玻玻片上）酸酒精精 浸提提N次（4次）（根據(jù)據(jù)分色情情況定）自來水水漂洗55minn（回色色） 漂漂洗前先先用自來來水洗一一遍（漂漂洗后觀觀察分色色情況）蒸餾水水 3mmin 伊紅 5miin 若若置于990酒酒精中褪褪色很快快，往伊伊紅中加加2000ml冰冰醋酸，攪勻，重復(fù)染染色至深深桃紅（染色穩(wěn)穩(wěn)定后一一般不再再加冰醋醋酸）770乙乙醇 浸浸提800乙醇醇 浸提提90乙醇 3miin955乙醇醇 5mmin995乙乙醇 5mm

6、in1100乙醇 5mmin1100乙醇 5mmin二二甲苯1000乙醇醇（1：1） 3miin二甲甲苯3miin二甲甲苯3miin （浸在二二甲苯中中，一片片封完取取另一片片）封片片封片擦干二甲甲苯中性性樹膠滴滴于組織織邊蓋玻玻片朝上上一面酒酒精燈上上晃一下下（去水水分）蓋蓋玻片一一邊小心心置于樹樹膠液滴滴外沿輕輕輕蓋上上（組織織應(yīng)在中中間）置置片盤晾晾干（片片盤晾干干）【從脫蠟蠟起直至至封片，注意組組織片均均不能干干】【看片時(shí)時(shí)，若是是蘇木精精顏色有有點(diǎn)發(fā)黑黑，說明明透明時(shí)時(shí)組織干干了】【看片時(shí)時(shí)，若發(fā)發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)質(zhì)，一要要注意蘇蘇木精染染色時(shí)要要去氧化化物，染染色時(shí)要要輕放輕輕取，二二要在自

7、自來水漂漂洗前將將水龍頭頭包上棉棉花，紗紗布過濾濾】免疫組化化：修復(fù)檸檬檬酸緩沖沖液放在在燒杯中中，置于于水浴中中，當(dāng)檸檸檬酸緩緩沖液溫溫度達(dá)到到95度度時(shí)，將將玻片放放入檸檬檬酸緩沖沖液中，當(dāng)溫度度達(dá)到992度開開始計(jì)時(shí)時(shí)92-98度度30mmin，取出涼涼到室溫溫，再將將玻片取取出，（檸檬酸酸緩沖液液只能使使用一次次），我我放置了了2.55hr才才取出。然后蒸蒸餾水洗洗，PBBS洗55minn，3次次，最后后一次時(shí)時(shí)間可長長，1擦去玻玻片周圍圍的水，放置在在濕盒中中，加BB液，蓋蓋上濕盒盒；2再取另另一片重重復(fù)上一一步，大大約9片片后計(jì)時(shí)時(shí)15mmin；然后全全部結(jié)束束；3.時(shí)間間到后，從

8、第一一片開始始取出玻玻片用蒸蒸餾水沖沖洗2-3次，放入浸浸在PBBS的架架子上，繼續(xù)另另一片；4全部部結(jié)束后后計(jì)時(shí)55minn，3次次，期間間提起架架子混勻勻液體;5.最后后一次洗洗滌時(shí)間間到后，取出按按照1和和2的步步驟加一一抗，和和空缺一一抗對照照；【注注意放置置一抗過過夜時(shí)一一定要放放平濕盒盒，保證證液滴不不流，否否則標(biāo)本本會(huì)干】6重復(fù)復(fù)3和44步7 重復(fù)復(fù)5加AA液8重復(fù)669重復(fù)55加DAAB顯色色液6mmin10蒸餾餾水沖洗洗，終止止顯色，浸入蒸蒸餾水中中的架子子上；蘇蘇木精復(fù)復(fù)染同前前蘇木精精染色。直至封封片。試劑的配配制：各級(jí)濃度度酒精1伊紅紅：1gg曙紅YY溶于1100mml

9、 770乙乙醇中Harrris (德國國最好) 蘇木木精1gg10mml 無無水乙醇醇（充分分溶解）鉀礬220g2200mml 蒸蒸餾水?dāng)嚁嚢柚蠓蟹?蘇蘇木色精精，上海海潤捷化化學(xué)試劑劑有限公公司，進(jìn)進(jìn)口分裝裝；生化化試劑。十二水水合硫酸酸鋁鉀，廣東汕汕頭西隴隴化工廠廠蘇木精酒酒精液攪攪拌緩慢慢礬液（微沸）即加氧氧化汞00.5gg（逐漸漸少量加加入，邊邊加入邊邊攪拌，防止染染液濺出出冷水浴浴(充分分冷卻或或過夜)過濾（準(zhǔn)備實(shí)實(shí)驗(yàn)時(shí)配配制，若若染不上上再配）紅色氧化化汞廣東東汕頭西西隴化工工廠苦味酸飽飽和水溶溶液 苦苦味酸（2.44.6三硝基基酚）ppicrric aciid酸酒精（1%鹽鹽酸）

10、11ml鹽鹽酸 1000ml 70酒精 鹽鹽酸：廣廣東汕頭頭市西隴隴化工廠廠石蠟： 蜂蠟：石蠟=1:99融化過濾濾備用（蜂蠟熔熔點(diǎn)622-677；上海海華永石石蠟有限限公司，華申牌牌，高效效切片石石蠟（hhighh efffecct pparaaffiin ccereesinn）：熔熔點(diǎn)566-588，專供供人體、動(dòng)植物物組織切切片使用用，上海海華靈康康復(fù)器械械廠出品品，復(fù)旦旦大學(xué)上上海醫(yī)學(xué)學(xué)院病理理教研室室監(jiān)制，華靈牌牌）蛋清甘油油：蛋清清打成水水樣，去去泡沫44-5層層紗布過過濾蛋清清：甘油油1：11麝香草草酚（加到到有味即即可） 甘油：廣東光光華化學(xué)學(xué)有限公公司.組織切片片將蠟塊用用保安

11、刀刀切成略略梯形，組織上上下留有有空蠟約約4mmm，左右右留有約約3mmm；將貼有蠟蠟塊的塑塑料托，裝上切切片機(jī)，再裝切切片刀，粗調(diào)刀架架與組織織塊平面面距離及及清除角角（將刀刀刃與組組織平面面之間留留一很小小的角度度間隙，約3-8度，以免切切片時(shí)刀刀刃面或或其下緣緣將組織織刮壞）細(xì)調(diào)距離離：左右右手配合合，組織織塊轉(zhuǎn)到到上方時(shí)時(shí)，左手手旋轉(zhuǎn)調(diào)調(diào)整距離離，反復(fù)復(fù)到有完完整組織織切片出出現(xiàn)。切切過程再再對清除除角進(jìn)行行修正；若切片不不挺，可可用冰塊塊冰鎮(zhèn)11minn左右，組織塊塊上的水水份用毛毛巾輕吸吸，冰鎮(zhèn)鎮(zhèn)前記住住鎖定手手輪，推推上護(hù)刀刀架；若切片卷卷曲，表表明刀口口不利，換個(gè)位位置再切切（

12、移動(dòng)動(dòng)刀架的的鎖鈕要要輕拉，輕扣（換位前前記住鎖鎖定手輪輪，推上上護(hù)刀架架）切片時(shí)要要?jiǎng)蛩?。切片用用松散的的羊毫毛毛筆松卷卷（從蠟蠟片帶背背面托起起），防防止粘連連；將蠟片背背面（光光面）平平鋪于片片盤上，并加蓋蓋，蓋子子采用推推拉，不不能用掀掀，否則則切片會(huì)會(huì)飄起，記住編編號(hào)；清掃刀架架上的蠟蠟片時(shí)，用毛筆筆往刀口口方向掃掃，以防防切割；切好后片片盤托起起擱4，并注注明：品品名，制制作人，時(shí)間；鎖定手輪輪，推上上護(hù)刀架架。組織脫水水浸蠟過過程詳解解 HYPERLINK httpp:/n(20010-07-15 18:33:49)-組織經(jīng)過過透明劑劑的完全全透明后后，被移移放于665左右熔熔化

13、的石石蠟中，于655的電熱熱恒溫箱箱中浸漬漬的過程程稱為浸浸蠟。組織在脫脫水時(shí)，組織中中的脂類類和類脂脂等物質(zhì)質(zhì)在脫水水劑的作作用下被被溶解掉掉，留下下了許多多腔隙，許多管管腔組織織和血管管，也有有許多腔腔隙，這這些都嚴(yán)嚴(yán)重地影影響了切切片。組組織浸蠟蠟時(shí)，由由于誘導(dǎo)導(dǎo)劑（二二甲苯）的作用用，石蠟蠟進(jìn)入到到組織的的各個(gè)角角落，并并在各個(gè)個(gè)角落中中保存下下來。當(dāng)當(dāng)石蠟包包埋后冷冷卻時(shí)，這浸入入到里面面的石蠟蠟便可起起到支撐撐的作用用，而且且使組織織不致于于變形，塌陷等等現(xiàn)象，使切片片能完整整的切出出，便于于鏡下觀觀察。組織浸蠟蠟據(jù)多次次文獻(xiàn)報(bào)報(bào)到必須須換幾次次不同熔熔點(diǎn)的石石蠟。石石蠟有軟軟蠟和

14、硬硬蠟之分分，軟蠟蠟的熔點(diǎn)點(diǎn)有455、522544。硬蠟蠟的熔有有5658，588600、600622。浸蠟蠟的順序序 是先先軟蠟，后硬蠟蠟，浸蠟蠟的時(shí)間間根據(jù)組組織不同同而確定定不同的的時(shí)間。有的人人指出組組織浸蠟蠟先放入入二甲苯苯與石蠟蠟等份混混合的液液體中浸浸漬然后后再放入入軟蠟、硬蠟。根據(jù)使使用經(jīng)驗(yàn)驗(yàn)我認(rèn)為為不必要要這樣做做。因?yàn)闉榻M織經(jīng)經(jīng)二甲苯苯或其它它透明劑劑透明后后，在組組織進(jìn)入入石蠟時(shí)時(shí)，自己己還帶著著殘存的的透明液液，如為為手工操操作，可可將組織織塊控干干，盡量量減少殘殘存液的的存在，而自動(dòng)動(dòng)脫水機(jī)機(jī)則不然然，組織織可存留留一定量量的透明明劑，經(jīng)經(jīng)使用次次數(shù)多次次后，殘殘存的

15、透透明劑可可把石蠟蠟稀釋。因此機(jī)機(jī)器程序序處理的的次數(shù)較較多時(shí)，應(yīng)注意意換石蠟蠟，以防防組織浸浸蠟效果果不好。一、石蠟蠟的性質(zhì)質(zhì) 石蠟是一一種碳?xì)錃浠衔镂?，由礦礦物油的的分裂產(chǎn)產(chǎn)生，它它的性質(zhì)質(zhì)是相當(dāng)當(dāng)?shù)牟煌淙廴埸c(diǎn)在445662之間。熔點(diǎn)高高的為硬硬蠟，硬硬度較高高，適合合于夏天天切片的的用蠟，熔點(diǎn)低低的為軟軟蠟，554以下的的稱為軟軟蠟，這這種適合合于組織織化學(xué)的的切片用用蠟。根根據(jù)石蠟蠟的特點(diǎn)點(diǎn)，根據(jù)據(jù)季節(jié)的的不同，合理地地使用不不同熔點(diǎn)點(diǎn)的石蠟蠟，這是是能否切切好片，使切片片產(chǎn)生帶帶狀的關(guān)關(guān)鍵。二、石蠟蠟性質(zhì)的的改善為了獲得得較好的的連續(xù)切切片，人人們想出出了許多多種方法法，對石

16、石蠟進(jìn)行行改造，使石蠟蠟的硬度度和柔軟軟性更適適合于佳佳片的切切出，提提出了許許多種方方法：石蠟加熱熱冷卻法法 剛購入的的石蠟,不管是是動(dòng)植物物切片石石蠟也好好,還是是工業(yè)用用蠟也好好,都必必須進(jìn)行行處理,方法是是:將石石蠟放于于容器里里,于電電爐上加加熱,此此時(shí)石蠟蠟遇熱熔熔解并發(fā)發(fā)出嗶嗶嗶吧吧的的聲音,這是石石蠟中含含有的雜雜質(zhì),遇遇熱后分分解所發(fā)發(fā)出的聲聲音,隨隨著時(shí)間間的延長長,溫度度的升高高,這種種聲音將將逐漸減減少,直直至消失失。此時(shí)時(shí)可將盛盛裝石蠟蠟的容器器浸入冷冷水中，石蠟?zāi)Y(jié)后，再繼續(xù)續(xù)加熱，如此反反復(fù)幾次次即熔化化冷卻熔化冷卻。這種處處理方法法，可增增加石蠟蠟的密度度和可

17、塑塑性，除除去雜質(zhì)質(zhì)。為達(dá)達(dá)高質(zhì)量量的切片片，這是是必經(jīng)之之法。增加和改改善石蠟蠟的韌性性和粘度度 這種方法法則需要要加入一一些東西西才能獲獲得，如如蜂蠟和和硬脂肪肪，蜂蠟蠟最高熔熔點(diǎn)可達(dá)達(dá)70余余度，增增加它可可增加石石蠟的硬硬度。石石蠟切片片切45umm，600左右的的石蠟可可支撐得得起，如如要切113uum，其其硬度則則不夠，因此，要制出出較薄的的切片，石蠟硬硬度一定定要過關(guān)關(guān)。另外，增增加石蠟蠟的硬度度還可以以加入脂脂蠟酸、柏油、楊梅蠟蠟等，雖雖然如此此，石蠟蠟經(jīng)處理理后，用用時(shí)的顏顏色如肥肥皂一樣樣為最好好。在了解了了石蠟的的性質(zhì)及及如何改改造它后后，下面面再了解解組織浸浸蠟。三、傳

18、統(tǒng)統(tǒng)浸蠟法法這是手工工操作和和不帶真真空負(fù)壓壓的浸蠟蠟方法。根據(jù)石石蠟的熔熔點(diǎn)，確確定浸蠟蠟箱的溫溫度。如如硬蠟的的熔點(diǎn)為為62,浸蠟蠟箱的溫溫度應(yīng)比比石蠟熔熔點(diǎn)高出出233，即浸浸蠟箱調(diào)調(diào)在655，當(dāng)確確定好后后，將組組織放入入軟蠟，后轉(zhuǎn)入入硬蠟，根據(jù)不不同的組組織，組組織的大大小來確確定浸蠟蠟時(shí)間，小組織織2030分分鐘，大大組織幾幾個(gè)小時(shí)時(shí)不等。四、真空空負(fù)壓浸浸蠟法真空負(fù)壓壓浸蠟法法應(yīng)用一一真空泵泵，將箱箱內(nèi)的空空氣抽出出來，形形成真空空負(fù)壓，在這種種條件下下，由于于失重，各種分分子活動(dòng)動(dòng)加快，促使浸浸蠟過程程迅速完完成。為為了浸蠟蠟完全徹徹底，全全密閉自自動(dòng)脫水水機(jī)配有有這一功功能。

19、 浸蠟方法法鼻咽部、宮內(nèi)膜膜穿剌物物、排出出物甲狀腺、肝、脾脾腎、淋淋巴結(jié)子宮肌、平滑肌肌胃、腸腸、橫紋紋肌等所需溫度度傳統(tǒng)浸蠟蠟法40990 mmin901150 minn180 minn以上65度真空負(fù)壓壓浸蠟法法15 mmin25330 mmin601120mmin70度 真空負(fù)壓壓所需壓壓力表40KPP40553KPP66.77KP真空負(fù)壓壓浸蠟法法使用時(shí)時(shí)的注意意事項(xiàng)：真空恒溫溫干燥箱箱的溫度度應(yīng)略高高于傳統(tǒng)統(tǒng)浸蠟法法，因?yàn)闉樵诔闅鈿庑纬烧嬲婵諘r(shí)，箱中的的熱氣會(huì)會(huì)被抽出出，致使使箱中溫溫度下降降，使熔熔化的石石蠟?zāi)Y(jié)結(jié)成塊，所以溫溫度調(diào)至至70度度左右為為宜。 計(jì)時(shí)應(yīng)從從浸蠟完完全熔

20、化化時(shí)計(jì)起起。抽氣氣時(shí)，箱箱中的溫溫度下降降，此時(shí)時(shí)浸組織織塊的蠟蠟如果處處于凝固固時(shí)，應(yīng)應(yīng)待其熔熔化后，方可計(jì)計(jì)時(shí)。 附：幾種種組織處處理程序序。 (1)、常規(guī)組組織處理理程序11、組織織塊沖水水24小小時(shí)。22、700%酒精精24小小時(shí)。33、 880%酒酒精122小時(shí)。4、 90%酒精112小時(shí)時(shí)。5、 955%酒精精（1）2小時(shí)時(shí)。6、 955%酒精精（2）2小時(shí)時(shí)。7、 1000%酒酒精（11）1小小時(shí)。88、 1100%酒精（2）11小時(shí)。9、 二甲苯苯（1）3060分分鐘。110、二二甲苯（2）33060分分鐘。111、 軟蠟11小時(shí)。12、 硬蠟蠟23小時(shí)時(shí)。(2)胃胃腸粘膜膜處理程程序1、70%酒精110miin。22、 880%酒酒精100minn。3、 900%酒精精10 minn。4、 955%酒精精10mmin。5、 1000 %酒酒精100minn。6、 二甲甲苯510 minn。7、 浸蠟蠟15 minn。 (3)臨臨床手工工脫水