1、精品文檔水質(zhì)五日生化需氧量（BOD5）的測(cè)定稀釋與接種法HJ505-2009.適用范圍本方法適用于地表水、工業(yè)廢水和生活污水中五日生化需氧量（ BOD5）的測(cè)定。本方法的檢出限為0.5mg/L,方法的測(cè)定下限為2 mg/L ,非稀釋法和非稀釋接種法的測(cè) 定上限為6mg/L ,稀釋與接種法的測(cè)定上限為 6000mg/L。.術(shù)語(yǔ)和定義五日生化需氧量是指在規(guī)定條件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物質(zhì)，特別是分解有機(jī)物所進(jìn)行的生物化學(xué)過(guò)程中消耗溶解氧的量。條件為（201） C培養(yǎng)5天，分別測(cè)定樣品培養(yǎng)前后的溶解氧，兩者之差即為BOD5值，以氧的毫克/升表示。.方法原理將水樣充滿完全密閉的溶解氧瓶中，

2、在（20+） C的暗處培養(yǎng)5d4h或（2+5） d4 先在04 c的暗處培養(yǎng)2d,接著在（20+） C的暗處培養(yǎng)5d,即培養(yǎng)（2+5） d,分別測(cè)定培養(yǎng) 前后水樣中溶解氧的質(zhì)量濃度，由培養(yǎng)前后溶解氧的質(zhì)量濃度之差，計(jì)算每升樣品消耗的溶解氧量。若樣品中的有機(jī)物含量較多，BOD5的質(zhì)量濃度大于6mg/L,樣品需適當(dāng)稀釋后測(cè)定；對(duì)不含或含微生物少的工業(yè)廢水，如酸性廢水、堿性廢水、高溫廢水、冷凍保存的廢水或經(jīng)過(guò)氯化出力等的廢水，在測(cè)定BOD5時(shí)應(yīng)進(jìn)行接種，以引進(jìn)能分解廢水中有機(jī)物的微生物。當(dāng)廢水中存在難以被一般生活污水中的微生物以正常的速度降解的有機(jī)物或含有劇毒物質(zhì) 是，應(yīng)將馴化后的微生物引入水樣中進(jìn)

3、行接種。 4.試劑和材料分析時(shí)，只采用公認(rèn)的分析純?cè)噭┖驼魞?chǔ)水或同等純度的水（在全玻璃裝置中蒸儲(chǔ)的水或去離子水），水中含銅不應(yīng)高于0.01mg/L,并不應(yīng)有氯、氯胺、苛性堿、有機(jī)物和酸類。接種液取POLYSEED膠囊1粒溶于裝有250ml稀釋水的燒杯中。將燒杯置于磁力攪拌器上攪 拌曝氣1h。曝氣結(jié)束，放置0.5h后傾出全部清液，將該清液置于磁力攪拌器上攪拌，此接種 液最多能放置二天。其它獲得接種液的途徑見(jiàn)如下。未受工業(yè)廢水污染的生活污水：化學(xué)需氧量不大于300mg/L ,總有機(jī)碳不大于100 mg/L;含有城鎮(zhèn)污水的河水或湖水；污水處理廠的出水；分析含有難降解物質(zhì)的工業(yè)廢水時(shí)，在其排污口下游適

4、當(dāng)處取水樣作為廢水的馴化接 種液。也可取中和或經(jīng)適當(dāng)稀釋后的廢水進(jìn)行連續(xù)曝氣，每天加入少量該種廢水，同時(shí)加入少量生活污水，使適應(yīng)該種廢水的微生物大量繁殖。當(dāng)水中出現(xiàn)大量的絮狀物時(shí)，表明微生物已繁殖，可用作接種液。一般馴化過(guò)程需38天。鹽溶液磷酸鹽緩沖溶液將8.5g磷酸二氫鉀（KH 2PO4）、16.6g磷酸氫二鉀（K2HP04 3H 2O）、17.7g七水合磷 酸氫二鈉（Na2HPO4）和1.7g氯化鏤（NH4Cl）溶于約500ml水中，稀釋至1000ml并混合均 勻。此緩沖溶液的pH應(yīng)為7.2。 4.2.2七水合硫酸鎂將22.5g的七水合硫酸鎂（MgS04 7H2。）溶于水中，稀釋至1000

5、ml并混合均勻。氯化鈣將27.5g的無(wú)水氯化鈣（CaCl2）溶于水，稀釋至1000ml并混合均勻。六水合氯化鐵將0.25g六水合氯化鐵（FeC13 6H2O）溶解于水中，稀釋至 1000ml并混合均勻。精品文檔精品文檔以上四種鹽溶液在04c可穩(wěn)定保存6個(gè)月。如有沉淀應(yīng)棄去。稀釋水取上述四種鹽溶液（4.2.1、4.2.2、4.2.3和4.2.4）各1 ml,加入約1L水中，然后曝氣2小時(shí)以 上，混合均勻，將此溶液置于 20c下恒溫，確保溶解氧濃度不低于 8mg/L。稀釋水的BOD 5 值不得超過(guò)0.5mg/L。接種稀釋水：根據(jù)接種液的來(lái)源不同，每升稀釋水（4.3）中加入適量接種液（4.1）:城市

6、污水和污水處理廠出水加110ml,河水或湖水加10700ml ,將接種液稀釋水存放在 （201） C的環(huán)境中，當(dāng)天配置當(dāng)天使用。接種的稀釋水pH值為7.2, BOD5應(yīng)小于1.5mg/L。鹽酸溶液，c（HCL）=0.5mg/L :將40ml濃鹽酸溶于水中，稀釋至 1000ml。氫氧化鈉溶液，c（NaOH）=0.5mol/L :將20克氫氧化鈉溶于水中，稀釋至 1000ml。亞硫酸鈉溶液（0.025mol/L）：將1.575g亞硫酸鈉溶于水中，稀釋至1000ml。此溶液需現(xiàn)用現(xiàn)配。葡萄糖-谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：將葡萄糖（C6H12。6）和谷氨酸（HOOCH-CH 2-CH2-CHNH 2-COOH ,

7、優(yōu)級(jí)純）在130c干燥1h,各稱取150mg溶于水中，在 1000ml容量瓶中稀釋至標(biāo)線。此溶液的BOD5為（210 20） mg/L ,現(xiàn)用現(xiàn)配。該溶液也可少量冷凍保存，融化后立即使用。丙烯基硫月尿硝化抑制劑（1.0g/L）溶解0.2g丙烯基硫月尿于200ml水中，4c保存，可穩(wěn)定保存14天。乙酸溶液，1 + 1碘化鉀溶液（100g/L）,將10g碘化鉀溶于水中，稀釋至 100ml。淀粉溶液（5g/L）:將0.5g淀粉溶于水中，稀釋至 100ml。.儀器和設(shè)備培養(yǎng)瓶細(xì)口瓶的容量在200ml之間，帶有磨口玻璃塞，并具有供水封用的鐘形口，最好是直 肩的。培養(yǎng)箱：控制20 C。3溶解氧測(cè)定儀：YS

8、I-58。.干擾水樣的pH若超出6.57.5范圍時(shí)，可用鹽酸或氫氧化鈉稀溶液調(diào)節(jié)pH近于7,但不要超過(guò)水木體積的0.5%。若水樣的酸度或堿度很高，可改用高濃度的酸或堿進(jìn)行中和。水樣中含有重金屬等有毒物質(zhì)時(shí)，可使用經(jīng)馴化的微生物接種液的稀釋水進(jìn)行稀釋，或 提高稀釋倍數(shù)以減少毒物的濃度。含有少量游離氯的水樣，一般放置1 2h,游離氯即可消失。對(duì)在短時(shí)間內(nèi)不能消失的余氯，可加入適量亞硫酸鈉溶液去除樣品中存在的余氯和結(jié)合氯，加入的亞硫酸鈉溶液的量由下述方法確定。取已中和的水樣100ml,加入乙酸溶液10ml、碘化鉀溶液1ml,混勻，暗處?kù)o置 5分鐘。用亞硫酸鈉溶液滴定析出的碘至淡黃色，加入 1ml淀粉

9、溶液呈藍(lán)色。再繼續(xù)滴定至藍(lán)色剛 剛褪去，即為終點(diǎn)，記錄所用亞硫酸鈉溶液體積，由亞硫酸鈉溶液消耗的體積，計(jì)算出水樣中應(yīng)加亞硫酸鈉溶液的體積。一般污水處理廠的水樣，應(yīng)經(jīng)過(guò)硝化池，含有大量硝化菌，可在每升稀釋樣品中加入 2ml濃度為1.0g/L的烯丙基硫月尿（ATU） （ C4H8N2S）溶液以去除。從水溫較低的水域或富營(yíng)養(yǎng)的湖泊忠采集的水樣，可遇到含有過(guò)飽和溶解氧，此時(shí)應(yīng)將 水樣迅速升溫至20 c左右，在不使?jié)M瓶的情況下，充分振搖，并時(shí)時(shí)開(kāi)塞放氣，以趕出過(guò)飽和的溶解氧。從水溫較高的水域或廢水排放口取得的水樣，則應(yīng)迅速使其冷卻至20c左右，精品文檔精品文檔 并充分振搖，使與空氣中氧分壓近平衡。一些氣

10、體和蒸汽如氯、二氧化硫、硫化氫、氨、氟、澳、碘能影響氧電極的測(cè)定，從而 使測(cè)定含該類物質(zhì)的水樣的 BOD會(huì)形成五天前、后溶解氧倒大，此類干擾無(wú)法克服。.樣品采集與保存樣品需充滿并密封于瓶中，置于25c保存到進(jìn)行分析時(shí)。一般應(yīng)在采樣后6h之內(nèi)進(jìn)行檢驗(yàn)。若需遠(yuǎn)距離轉(zhuǎn)運(yùn)，在任何情況下貯存皆不得超過(guò)24ho試樣的制備 7.2.1 pH值調(diào)節(jié)若樣品或稀釋后樣品pH值不在6-8范圍內(nèi)，應(yīng)用鹽酸溶液或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值至6-8。余氯和結(jié)合氯的去除若樣品中含有少量余氯，一般在采樣后放置1-2h,游離氯即可消失。對(duì)在短時(shí)間內(nèi)不能消失的余氯，可加入適量亞硫酸鈉溶液去除樣品中存在的余氯和結(jié)合氯。樣品均質(zhì)化含有

11、大量顆粒物、需要較大稀釋信數(shù)的樣品或經(jīng)冷凍保存的樣品，測(cè)定前均需將樣品攪拌均勻。樣品中有藻類若樣品中有大量藻類存在，BOD:的測(cè)定結(jié)果會(huì)偏高。當(dāng)分析結(jié)果精度要求較高時(shí)，測(cè)定前應(yīng)用濾孔為1.6科血勺濾膜過(guò)濾，檢測(cè)報(bào)告中注明濾膜濾孔的大小。6.2.5含鹽量低的樣品若樣品含鹽量低，非稀釋樣品的電導(dǎo)率小于125忘/cm時(shí)，需加入適量相同體積的四種鹽溶液，使樣品白電導(dǎo)率大于125立/cm。.分析步驟樣品的測(cè)定取樣不經(jīng)稀釋水樣（不接種）如遇到溶解氧含量較高，有機(jī)物含量較少的地表水時(shí)，可直接將其裝滿于培養(yǎng)瓶中待測(cè)。 取樣時(shí)注意不可搖動(dòng)水樣，取上層清液。稀釋水樣稀釋倍數(shù)的確定：根據(jù)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，提出下述計(jì)算方法，

12、供稀釋時(shí)參考。地表水（不接種）：由測(cè)得的高鎰酸鹽指數(shù)與一定的系數(shù)相乘，即求得稀釋倍數(shù)，見(jiàn)下表。高鎰酸鹽指數(shù)（mg/L ）系數(shù)200.5, 0.7, 1.0工業(yè)廢水：由重銘酸鉀法測(cè)得的 COD值來(lái)確定。稀釋倍數(shù)見(jiàn)下表。當(dāng)不能正確的選擇稀釋 倍數(shù)時(shí)，一個(gè)樣品做23個(gè)/、同的稀釋倍數(shù)。BOD5的預(yù)估值mg/L稀釋倍數(shù)6122103052060104012020精品文檔精品文檔10030050200600100400120020010003000500200060001000若試樣中有微生物毒性物質(zhì)， 應(yīng)配制幾個(gè)不同稀釋倍數(shù)的試樣， 選擇與稀釋倍數(shù)無(wú)關(guān)的結(jié)果, 并取其平均值。試樣測(cè)定結(jié)果與稀釋倍數(shù)的關(guān)

13、系確定如下：當(dāng)分析結(jié)果精度要求較高或存在微生物毒性物質(zhì)時(shí)，一個(gè)樣品要做2個(gè)以上不同的稀釋倍數(shù)，每個(gè)試樣每個(gè)稀釋倍數(shù)做平行雙樣同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。測(cè)定培養(yǎng)過(guò)程中每瓶試樣氧的消耗量，并畫(huà)出氧消耗量對(duì)每一稀釋倍數(shù)試樣中原樣品的體積曲線。若此曲線呈線性，則此試樣中不含有任何抑制微生物的物質(zhì)，即樣品的測(cè)定結(jié)果與稀釋倍數(shù)無(wú)關(guān)；若曲線僅在低濃度內(nèi)呈線性，取線性范圍內(nèi)稀釋比的試樣測(cè)定結(jié)果計(jì)算平均 BOD5 值。將水樣振搖均勻，根據(jù)稀釋倍數(shù)確定取樣體積。每個(gè)樣品中加入2ml接種液，用虹吸法加稀釋水至瓶頸處待測(cè)。測(cè)定(待測(cè)樣品應(yīng)盡快測(cè)定)將電極置于加滿稀釋水的培養(yǎng)瓶中。開(kāi)啟電極上的攪拌開(kāi)關(guān)，即可測(cè)定水樣中溶解氧。測(cè)定順

14、序?yàn)椋嚎瞻?一標(biāo)準(zhǔn)樣品一樣品。待顯示的讀數(shù)穩(wěn)定后，該讀數(shù)為水樣中的溶解氧值。 測(cè)定完畢，旋緊培養(yǎng)瓶塞，確保瓶口有封瓶水，蓋上瓶蓋。培養(yǎng)將培養(yǎng)瓶放于培養(yǎng)箱中， 并在暗中放置5天。達(dá)到需要培養(yǎng)的5天時(shí)間時(shí)，取出培養(yǎng)瓶。5天后溶解氧測(cè)定測(cè)定剩余溶解氧值，測(cè)定順序同8.1.2空白試驗(yàn)在培養(yǎng)瓶中加入2ml接種液，加稀釋水滿瓶后待測(cè)。本試驗(yàn)同樣品同時(shí)進(jìn)行，其 BOD5 不能大于1.5mg/L。.結(jié)果計(jì)算被測(cè)定溶液若滿足以下條件，則能獲得可靠的測(cè)定結(jié)果。培養(yǎng)5天后：剩余 DO 2mg/L ;消耗 DO2mg/L。若不能滿足以上條件，一般應(yīng)舍掉該組結(jié)果。9.2計(jì)算不經(jīng)稀釋接種直接培養(yǎng)的水樣BOD5 ( mg/

15、L) =6162式中：C-水樣在培養(yǎng)前的溶解氧濃度，mg/L ;精品文檔精品文檔 TOC o 1-5 h z C2-水樣經(jīng)5天培養(yǎng)后，剩余溶解氧濃度，mg/Lo經(jīng)稀釋接種后培養(yǎng)的水樣式中：Bi-稀釋水在培養(yǎng)前的溶解氧，mg/L;B2-稀釋水在培養(yǎng)后的溶解氧，mg/L;fi-稀釋水在培養(yǎng)液中所占比例；f2-水樣在培養(yǎng)液中所占比例。若有幾種稀釋比所得數(shù)據(jù)皆符合9.1所要求的條件，則幾種稀釋比所得結(jié)果皆有效，以其平均值表示檢測(cè)結(jié)果。.質(zhì)量保證和質(zhì)量控制儀器設(shè)備測(cè)定要在儀器的有效鑒定周期內(nèi)進(jìn)行，以保證檢出限、靈敏度、定量測(cè)定范圍滿足方法要求。定期進(jìn)行期間核查報(bào)告，以保證測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確度、精密度等指標(biāo)符

16、合計(jì)量部門(mén)要求。實(shí)驗(yàn)環(huán)境以上過(guò)程須在恒溫狀態(tài)下完成，實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)溫度應(yīng)控制在201C范圍內(nèi)。方法檢出限在方法正式應(yīng)用前要按照 環(huán)境監(jiān)測(cè)分析方法標(biāo)準(zhǔn)制訂技術(shù)導(dǎo)則（HJ/T168）中8.2.1的規(guī)定進(jìn)行方法撿出限的測(cè)定，測(cè)定值不能大于方法給定的值。空白實(shí)驗(yàn)空白樣品分試劑空白和全程空白，全程空白樣品的濃度測(cè)定值不能大于方法檢出限，而且平行雙份測(cè)定值的相對(duì)差值不應(yīng)大于50%,每批樣品最少要有2個(gè)空白樣。平行樣每批樣品要有10%的平行樣測(cè)定結(jié)果， 其相對(duì)偏差的計(jì)算參照 地表水和污水監(jiān)測(cè)技術(shù) 規(guī)范（HJ/T91-2002） 10.5.2的公式，控制指標(biāo)式樣品含量和基體不同一般為10%30%。標(biāo)準(zhǔn)樣品在兩個(gè)取

17、好標(biāo)準(zhǔn)樣品白培養(yǎng)瓶中各加入2ml接種液，加稀釋水滿瓶后測(cè)定。得到 BOD5應(yīng)在該標(biāo)準(zhǔn)樣品批號(hào)范圍之內(nèi)，否則，應(yīng)檢查接種稀釋水是否適用以及并應(yīng)檢查分析人員的技術(shù)。本試驗(yàn)空白與試驗(yàn)樣品同時(shí)進(jìn)行。數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)的整理和修約及異常值的判斷和處理等按照水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法（第四版） 的相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行。.精密度和準(zhǔn)確度非稀釋法實(shí)驗(yàn)室間的重現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.100.22mg/L ,再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.260.85mg/L。稀釋法和稀釋接種法的對(duì)比測(cè)定結(jié)果重現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差為11mg/L ,再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.722mg/L。.注意事項(xiàng)水中有機(jī)物的生物氧化過(guò)程，可分為二個(gè)階段。第一階段為有機(jī)物中的碳和氫氧化生 成二氧化碳和水，此階段稱為碳化階段。第二階段為含氮物質(zhì)及部分氨氧化為亞硝酸鹽及硝 酸鹽，稱為硝化階段。一般測(cè)定水樣BOD5時(shí)，硝化作用很不顯著或根本不發(fā)生硝化作用。玻璃器皿（培養(yǎng)瓶）應(yīng)徹底洗凈。先用自來(lái)水和蒸儲(chǔ)水清洗三遍，再將其放入超聲波 清洗器中徹底清洗1h。精品文檔精品文檔在兩個(gè)或三個(gè)稀釋比的樣品中，凡消耗溶解氧大于2mg/L和剩余溶解氧大于2mg/L時(shí),計(jì)算結(jié)果時(shí)，應(yīng)取其平均值。若剩余的溶解氧小于1 mg/L,甚至為零時(shí)，應(yīng)加大稀釋比。溶解氧消耗量