1、臨床微生物學(xué)概論研究生大課5院-醫(yī)學(xué)精品臨床微生物學(xué)概論研究生大課5院-醫(yī)學(xué)精品主要內(nèi)容臨床微生物學(xué)概論細(xì)菌的耐藥性及耐藥機(jī)制主要細(xì)菌的耐藥性變遷及實(shí)驗(yàn)室診斷細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)細(xì)菌耐藥性的防治主要內(nèi)容臨床微生物學(xué)概論臨床常見的致病菌G（）：金葡菌，表葡菌，-鏈球菌，-溶鏈（A、B組），肺鏈，腸球菌G（）：需氧球菌： 腦膜炎和淋病奈瑟球菌，卡他莫拉菌需氧桿菌： 不動(dòng)，假單胞，糞產(chǎn)堿桿菌需氧和兼性厭氧：腸桿菌科細(xì)菌，如大腸桿菌，肺 克，傷寒，志賀菌厭氧細(xì)菌： 消化鏈球菌，脆弱擬桿菌等臨床常見的致病菌G（）：簡(jiǎn)述抗菌藥物的作用機(jī)制細(xì)菌對(duì)抗菌藥物的耐藥機(jī)制細(xì)菌耐藥性的遺傳學(xué)基礎(chǔ)二.細(xì)菌耐藥性及耐藥機(jī)制簡(jiǎn)述

2、抗菌藥物的作用機(jī)制二.細(xì)菌耐藥性及耐藥機(jī)制DNA引導(dǎo)的RNA多聚酶鏈霉素慶大霉素、妥布霉素（氨基糖苷類）阿米卡星蛋白合成（tRNA）莫匹羅星DNARNA503050305030核糖體THFADHFAPABADNA旋轉(zhuǎn)酶（解旋、螺旋）喹諾酮類利福平細(xì)胞壁蛋白合成（50S抑制劑）紅霉素氯霉素克林霉素蛋白合成（30S抑制劑）細(xì)胞膜多粘菌素氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶細(xì)胞壁合成環(huán)絲氨酸萬(wàn)古霉素、替考拉寧桿菌肽青霉素類頭孢菌素類拉氧頭孢碳青霉烯類葉酸代謝甲氧芐啶磺胺類藥周質(zhì)空間-內(nèi)酰胺酶氨基糖苷類鈍化酶四環(huán)素大觀霉素細(xì)菌模式圖DNA引導(dǎo)的RNA多聚酶鏈霉素DNARNA503050305（一）抗菌藥物的作用機(jī)制干擾細(xì)

3、菌細(xì)胞壁的合成，使細(xì)菌不能生長(zhǎng)繁殖。損傷細(xì)菌的細(xì)胞膜，破壞其屏障作用。影響細(xì)菌細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成，使細(xì)菌喪失生 長(zhǎng)繁殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。破壞核酸的代謝，阻礙遺傳信息的復(fù)制。抑制細(xì)菌葉酸代謝等。（一）抗菌藥物的作用機(jī)制干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，使細(xì)菌不能生長(zhǎng)抗菌藥物的主要作用靶位細(xì)胞壁合成細(xì)胞壁滲透性細(xì)胞蛋白合成核酸合成葉酸合成-內(nèi)酰胺類多粘菌素類氯霉素利副平磺胺類（SMZ-TMP）糖肽類兩性霉素B四環(huán)素類灰黃霉素磷霉素制霉菌素紅霉素喹諾酮類環(huán)絲氨酸咪康唑林可霉素類桿菌肽酮康唑氨基苷類褐霉素抗菌藥物的主要作用靶位細(xì)胞壁合成細(xì)胞壁滲透性細(xì)胞蛋白合成核酸（二）細(xì)菌主要的耐藥機(jī)制滅活酶與鈍化酶的產(chǎn)生抗生素滲透屏障

4、作用靶位結(jié)構(gòu)改變細(xì)菌代謝狀態(tài)，營(yíng)養(yǎng)缺陷等細(xì)菌菌膜形成（二）細(xì)菌主要的耐藥機(jī)制滅活酶與鈍化酶的產(chǎn)生耐藥機(jī)制1.滅活酶和鈍化酶的產(chǎn)生內(nèi)酰胺酶氨基糖苷類鈍化酶氯霉素酰基轉(zhuǎn)移酶MLS類抗生素鈍化酶（Macrolide-Licosamide Streptogramin）耐藥機(jī)制1.滅活酶和鈍化酶的產(chǎn)生-內(nèi)酰胺酶分類底物譜青霉素酶頭孢菌素酶廣譜酶：青霉素類、一、二代頭孢菌素超廣譜酶：三、四代頭孢菌素、碳青霉烯類遺傳學(xué)基礎(chǔ)質(zhì)粒酶、染色體酶可誘導(dǎo)性體質(zhì)酶（固有的）、誘導(dǎo)酶-內(nèi)酰胺酶分類底物譜-內(nèi)酰胺酶分類Ambler ABush Group 2大多數(shù)為質(zhì)粒酶D 3可被酶抑制劑抑制Ambler CBush Gr

5、oup 1染色體介導(dǎo)酶B4對(duì)酶抑制劑穩(wěn)定-內(nèi)酰胺酶分類Ambler ABush Group 2大-內(nèi)酰胺酶分類Amp CPCITEM1,2SHV1ESBLsPSE1,3,4OXA1-11PSE2頭孢菌素酶碳青霉烯酶金屬酶青霉素酶2be TEM SHV OXA CTX-M 其他2br TEM30- 36 IR-SHV2b（ESBLs）-內(nèi)酰胺酶分類Amp CPCITEM1,2ESBLsPSEESBLs分類來源等電點(diǎn)菌種TEMTemoniera5.2-6.5大腸桿菌肺炎克雷伯菌SHVSulphydryl Variable7.0-8.2肺炎克雷伯菌OXAOxacillin5.8-8.1銅綠假單胞菌C

6、TX-MCefotaxime5.5-8.4大腸桿菌肺炎克雷伯菌其它類：PER-1、2、VEB等5.4銅綠、不動(dòng)、肺克等其他腸桿菌科細(xì)菌ESBLs分類來源等電點(diǎn)菌種TEMTemoniera5.2-氨基糖苷飩化酶氨基環(huán)醇環(huán)和多個(gè)氨基糖分子，由配糖鍵相連接氨基糖苷飩化酶可以對(duì)氨基糖分子的活性基團(tuán)進(jìn)行修飾而使之失去抗菌活性不同的氨基糖苷飩化酶可飩化同一種氨基糖苷類；而同一種氨基糖苷飩化酶可飩化不同的氨基糖苷類氨基糖苷飩化酶氨基環(huán)醇環(huán)和多個(gè)氨基糖分子，由配糖鍵相連接氨基糖苷類藥物結(jié)構(gòu)1512343624561”2”3”4”5”6”AAC（6）AAC（3）AAC（3”） APH（2）ANT(2）氨基糖苷類

7、藥物結(jié)構(gòu)1512343624561”2氨基糖苷類鈍化酶乙酰轉(zhuǎn)移酶 AAC（2） AAC（6） AAC（3）核苷轉(zhuǎn)移酶 ANT（4） ANT（3） ANT（2） ANT（6）磷酸轉(zhuǎn)移酶 APH（3 ） APH（3”） APH（5”）革蘭陽(yáng)性菌 （雙重功能酶） AAC（6）+APH（2）氨基糖苷類鈍化酶乙酰轉(zhuǎn)移酶 耐藥機(jī)制2.抗生素滲透障礙：細(xì)胞壁障礙或細(xì)胞膜通透性的改變，抗生素?zé)o法進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)達(dá)到作用靶位而發(fā)揮作用。細(xì)胞壁：類脂雙層，脂多糖（LPS），阻礙疏水性抗菌藥物進(jìn)入菌體。細(xì)胞外膜：OmpF，OmpA，OmpC孔蛋白丟失或減少，阻礙親水性抗菌藥物進(jìn)入菌體。細(xì)胞內(nèi)膜（胞漿膜）：產(chǎn)生新的能量依賴

8、性轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)。MexA-MexB-OprM。耐藥機(jī)制2.抗生素滲透障礙：細(xì)胞壁障礙或細(xì)胞膜通透性的改變，耐藥機(jī)制3.靶位結(jié)構(gòu)改變靶位酶：二氫葉酸合成酶靶位生理功能：細(xì)菌形態(tài)和活力靶位結(jié)構(gòu)：MRSA的PBP2，DNA旋轉(zhuǎn)酶耐藥機(jī)制3.靶位結(jié)構(gòu)改變耐藥機(jī)制4.其他細(xì)菌代謝狀態(tài)的改變：對(duì)氨苯甲酸產(chǎn)量（PABA）營(yíng)養(yǎng)缺陷、L型細(xì)菌（無(wú)細(xì)胞壁）細(xì)菌菌膜的形成抗菌藥物不能透過整個(gè)菌膜菌膜對(duì)抗菌藥物的敏感性降低菌膜內(nèi)的細(xì)菌具有獨(dú)特的生物學(xué)特征耐藥機(jī)制4.其他4種主要耐藥機(jī)制泵出失活滲透障礙靶位改變X4種主要耐藥機(jī)制泵出失活滲透障礙靶位改變X主要耐藥機(jī)制抗菌藥物主要作用主要耐藥機(jī)制-內(nèi)酰胺類PBPs失活-內(nèi)酰胺

9、酶PBPs親和力降低胞壁滲透障礙糖肽類與肽聚糖前體結(jié)合肽聚糖前體鈍化修飾氨基糖苷類抑制蛋白質(zhì)合成（30S亞基）鈍化酶（乙?；?、磷酸化、核苷化）大環(huán)內(nèi)酯類抑制蛋白質(zhì)合成（50S亞基）Rrna甲基化、外排泵機(jī)制喹諾酮類抑制DNA旋轉(zhuǎn)酶（DNA合成）靶位酶改變、外排泵機(jī)制主要耐藥機(jī)制抗菌藥物主要作用主要耐藥機(jī)制-內(nèi)酰胺類PBPs（三）細(xì)菌耐藥性的遺傳學(xué)基礎(chǔ)染色體介導(dǎo)耐藥質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥（三）細(xì)菌耐藥性的遺傳學(xué)基礎(chǔ)染色體介導(dǎo)耐藥1.染色體介導(dǎo)的耐藥性耐藥基因位于染色體，隨細(xì)菌分裂傳至后代突變頻率低：105109通常只對(duì)1，2種類似藥物耐藥產(chǎn)生或消失和藥物存在無(wú)關(guān)耐藥菌生長(zhǎng)分裂變慢，競(jìng)爭(zhēng)力變?nèi)蹙哟我匚?

10、.染色體介導(dǎo)的耐藥性耐藥基因位于染色體，隨細(xì)菌分裂傳至后代2.質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥性染色體外的DNA耐藥質(zhì)粒：R.plasmid類型： 接合型（Conjugative plasmid） 耐藥決定因子耐藥轉(zhuǎn)移因子非接合型（Nonconjugative plasmid）耐藥決定因子轉(zhuǎn)移方式： 接合型： 接合轉(zhuǎn)移非接合型：轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)導(dǎo)等方式 2.質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥性染色體外的DNA耐藥基因的轉(zhuǎn)移方式轉(zhuǎn)化 Transformation轉(zhuǎn)導(dǎo) Transduction接合 Conjugation轉(zhuǎn)座 Transposition耐藥基因的轉(zhuǎn)移方式轉(zhuǎn)化 Transformation接合（Conjugation）方式：通過

11、耐藥菌性菌毛和敏感菌菌體 的直接溝通，由耐藥菌將耐藥質(zhì)粒邊復(fù)制邊轉(zhuǎn)移給敏感菌。細(xì)菌：革蘭陰性菌，特別是腸道細(xì)菌。發(fā)生頻率：102108臨床意義：可造成耐藥菌的爆發(fā)流行， 種間，屬間，牲畜與人接合（Conjugation）方式：通過耐藥菌性菌毛和敏感菌細(xì)菌耐藥性細(xì)菌細(xì)菌對(duì)抗菌藥物耐藥的生物學(xué)表型既可以通過突變成為細(xì)菌的特征傳給子代,又可以接受或轉(zhuǎn)移耐藥基因,導(dǎo)致耐藥基因擴(kuò)散耐藥基因可編碼多種耐藥機(jī)制來抵制抗菌藥物細(xì)菌耐藥性細(xì)菌新的耐藥細(xì)菌突變XX抗菌藥物耐藥性的出現(xiàn)敏感細(xì)菌耐藥細(xì)菌耐藥基因轉(zhuǎn)移新的耐藥細(xì)菌突變XX抗菌藥物耐藥性的出現(xiàn)敏感細(xì)菌耐藥細(xì)菌耐藥抗菌藥物抗菌藥物抗菌藥物均具有選擇耐藥細(xì)菌的

12、能力，其廣泛使用可導(dǎo)致選擇性壓力增加。每一種新抗菌藥物使用于臨床后不久就可產(chǎn)生耐藥性抗生素總量的消耗與耐藥性選擇有密切關(guān)系抗菌藥物抗菌藥物耐藥菌株極少xx耐藥菌株為主抗生素暴露xxxxxxxxxx抗菌藥物的選擇性壓力耐藥菌株極少xx耐藥菌株為主抗生素暴露xxxxxxxxxx抗三.主要細(xì)菌的耐藥性變遷及實(shí)驗(yàn)室診斷細(xì)菌耐藥性的現(xiàn)狀和變遷實(shí)驗(yàn)室診斷三.主要細(xì)菌的耐藥性變遷及實(shí)驗(yàn)室診斷細(xì)菌耐藥性的現(xiàn)狀和變遷由病原微生物引起的感染仍然是當(dāng)前人類健康的主要威脅據(jù)2019年WHO的統(tǒng)計(jì)資料，因感染而死亡的人數(shù)占全部死亡人數(shù)的第二位。而在全球因感染死亡人數(shù)中，發(fā)展中國(guó)家?guī)缀跽嫉搅?0抗生素的不斷研發(fā)大大地降低

13、了傳染性疾病的發(fā)病率和死亡率，但細(xì)菌耐藥性的出現(xiàn)和蔓延卻嚴(yán)重地威脅和破壞著人類抗感染治療的效果隨著國(guó)際旅游事業(yè)的發(fā)展和經(jīng)濟(jì)貿(mào)易的全球化，使耐藥菌株也在國(guó)際間廣泛傳播，從而導(dǎo)致細(xì)菌對(duì)抗生素耐藥現(xiàn)象的全球化1.細(xì)菌耐藥性的現(xiàn)狀和耐藥性變遷由病原微生物引起的感染仍然是當(dāng)前人類健康的主要威脅1.細(xì)菌耐細(xì)菌耐藥性發(fā)生的重要事件1910 奎寧1939 磺胺1941 青霉素1946 鏈霉素1957 氯喹1961 耐甲氧西林金葡菌（MRSA）1977 多重耐藥霍亂弧菌1982 產(chǎn)ESBL 的克雷伯菌1987 多重耐藥傷寒沙門菌1989 耐萬(wàn)古霉素腸球菌（VRE）2019 萬(wàn)古霉素耐藥金葡菌（VRSA）細(xì)菌耐藥

14、性發(fā)生的重要事件1910 奎寧細(xì)菌耐藥性是全球性問題 1982年，ESBLs在催產(chǎn)克雷伯菌中首次發(fā)現(xiàn)20世紀(jì)末，產(chǎn)生的菌種，酶的品種，地理區(qū)域 1989年，耐萬(wàn)古霉素腸球菌（VRE）1993年，20倍 90年代：MRSA出現(xiàn)和PRSP廣泛流行 2019年：對(duì)萬(wàn)古霉素敏感性降低的金葡菌在日本首次發(fā)現(xiàn) 2019年，美國(guó)發(fā)現(xiàn)了VRSA細(xì)菌耐藥性是全球性問題 1982年，ESBLs在催產(chǎn)克雷伯金葡菌青霉素耐藥金葡菌金葡菌耐藥性的進(jìn)化甲氧西林耐藥金葡菌 (MRSA)甲氧西林1970s青霉素1950s萬(wàn)古霉素1990s萬(wàn)古霉素耐藥腸球菌(VRE)2019萬(wàn)古霉素中度耐藥金葡菌(VISA) 2019 萬(wàn)古霉

15、素耐藥金葡菌金葡菌青霉素耐藥金葡菌金葡菌耐藥性的進(jìn)化甲氧西林耐藥金葡菌 近年來革蘭陽(yáng)性菌的變遷主要表現(xiàn)為金葡菌(尤其是MRSA)耐藥株感染的發(fā)生率增多凝固酶陰性葡萄球菌(CNS)感染增多耐青霉素肺炎鏈球菌（PISP，PRSP）的出現(xiàn)和傳播萬(wàn)古霉素耐藥腸球菌（VRE）耐青霉素和耐頭孢菌素類草綠色鏈球菌上海地區(qū)的細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)資料近年來革蘭陽(yáng)性菌的變遷主要表現(xiàn)為金葡菌(尤其是MRSA)耐藥近年來革蘭陰性菌的變遷主要表現(xiàn)為TEM-1流感嗜血桿菌大腸埃希菌對(duì)氟喹諾酮類的耐藥率上升快克雷伯菌屬及腸桿菌科細(xì)菌中的ESBLs腸桿菌屬細(xì)菌中，尤其是陰溝腸桿菌中高產(chǎn)AmpC 酶非發(fā)酵菌特別是不動(dòng)桿菌、銅綠假單胞

16、菌中的泛耐藥株嗜麥芽窄食單胞菌、黃桿菌固有耐藥株對(duì)碳青霉烯類的耐藥性上海地區(qū)的細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)資料近年來革蘭陰性菌的變遷主要表現(xiàn)為TEM-1流感嗜血桿菌上海地四.抗感染藥物的敏感性試驗(yàn)與 耐藥細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)1.抗感染藥物的敏感性試驗(yàn)藥敏試驗(yàn) 測(cè)定抗菌藥物在體外抑制病原微生物生長(zhǎng)的能力,稱抗菌藥物對(duì)細(xì)菌的抑菌試驗(yàn)，或稱細(xì)菌對(duì)藥物的敏感性試驗(yàn)。四.抗感染藥物的敏感性試驗(yàn)與 耐藥細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)藥敏試驗(yàn)的目的供臨床醫(yī)師選用抗菌藥物時(shí)的參考細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)和耐藥性變遷評(píng)價(jià)新抗菌藥物的藥效學(xué)特征對(duì)細(xì)菌耐藥譜分析和分型有助于某些菌種的鑒定作為醫(yī)院內(nèi)感染流行病學(xué)調(diào)查的手段之一藥敏試驗(yàn)的目的供臨床醫(yī)師選用抗菌藥

17、物時(shí)的參考藥物敏感性試驗(yàn)測(cè)定的方法稀釋法試管稀釋法（肉湯稀釋法）平板稀釋法（瓊脂稀釋法）擴(kuò)散法（紙片法）Kirby-baure(K-B)法Stockes法E-Test藥物敏感性試驗(yàn)測(cè)定的方法稀釋法稀釋法 原理：以一定濃度的抗菌藥物與含有被測(cè)菌株的培養(yǎng)基進(jìn)行一系列的對(duì)倍稀釋經(jīng)培養(yǎng)后，肉眼觀察細(xì)菌生長(zhǎng)的情況 最低抑菌濃度（MIC）：肉眼觀察能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低一管藥物濃度（Minimal inhibitory concentration MIC）稀釋法 原理：以一定濃度的抗菌藥物與含有被測(cè)菌株的培養(yǎng)基幾個(gè)重要的指標(biāo)MIC(最低抑菌濃度 minimal inhibitory concentratio

18、n)在體外能夠抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度 MBC(最低殺菌濃度 minimal bactericidal concentration)在體外能夠使細(xì)菌總數(shù)減少(殺滅)99.9%以上的最低藥物濃度。MIC50、MIC90在一批實(shí)驗(yàn)中能抑制50%或90%受試菌所需的MIC。 MBC50 MBC90在一批實(shí)驗(yàn)中能使50%或90%受試菌的活菌數(shù)減少99.9%所需的MBC。臨界濃度（breakpoint）根據(jù)抗菌藥物抑制細(xì)菌生長(zhǎng)所需要的MIC，結(jié)合常用劑量時(shí)該藥所能達(dá)到的血藥濃度，劃定細(xì)菌對(duì)各種抗菌藥物敏感或耐藥的界限。幾個(gè)重要的指標(biāo)MIC(最低抑菌濃度 minimal inhi擴(kuò)散法 原理：將浸有抗菌

19、藥物的紙片貼在涂有細(xì)菌的瓊脂平板上，抗菌藥物在瓊脂內(nèi)向四周擴(kuò)散，因此敏感細(xì)菌在紙片周圍一定距離內(nèi)的生長(zhǎng)受到抑制，根據(jù)抑菌圈的大小即可推知該藥物的最低抑菌濃度（MIC）。擴(kuò)散法 原理：將浸有抗菌藥物的紙片貼在涂有細(xì)菌的瓊脂平板紙片擴(kuò)散法（K-B）操作步驟紙片擴(kuò)散法（K-B）操作步驟紙片法藥敏和MIC法的回歸直線圖Log2MICMIC7128最664532低41638抑2412菌01-10.5濃-20.25-30.125度-40.06-50.03-60.0156101418222630343842抑菌圈直徑耐藥中敏高敏100株臨床菌株100對(duì)MIC和抑菌圈直徑負(fù)相關(guān)（r =-0.9）中敏：12-2

20、0mm紙片法藥敏和MIC法的回歸直線圖Log2MICMIC7128E-試驗(yàn)（E-Test）原理：基本同擴(kuò)散法，即濃度呈連續(xù)梯度的抗菌藥物從塑料紙條中向藥敏瓊脂中擴(kuò)散，在試條周圍濃度范圍內(nèi)檢測(cè)菌的生長(zhǎng)被抑制，從而形成透明的抑菌圈。E-test綜合了稀釋法和擴(kuò)散法的原理和特點(diǎn)，直接定量測(cè)出藥物對(duì)測(cè)試菌的最低抑菌濃度（MIC）。E-試驗(yàn)（E-Test）原理：基本同擴(kuò)散法，即濃度呈連續(xù)梯度E-試驗(yàn)（E-Test）菌液，藥敏平板 同K-B法E-Test條寬5mm， 長(zhǎng)60mm150mm平皿貼6條90mm平皿貼1條E-試驗(yàn)（E-Test）菌液，藥敏平板如何閱讀藥敏試驗(yàn)報(bào)告 S 高度敏感 I 中度敏感（中介

21、） R 高度耐藥 臨床意義？如何閱讀藥敏試驗(yàn)報(bào)告 高度敏感當(dāng)一種細(xì)菌引起的感染，用該種藥物常用劑量治療有效，這種細(xì)菌即對(duì)該藥高度敏感。即常規(guī)用藥時(shí)達(dá)到的平均血濃度超過對(duì)細(xì)菌MIC的5倍以上。高度敏感當(dāng)一種細(xì)菌引起的感染，用該種藥物常用中度敏感當(dāng)細(xì)菌引起的感染，僅在應(yīng)用高劑量抗菌藥物時(shí)才有效，或者細(xì)菌處于體內(nèi)抗菌藥物濃縮部位，如尿液，膽汁等才被抑制，這種細(xì)菌對(duì)該藥呈中度敏感。常規(guī)用藥時(shí)達(dá)到平均血濃度，一般相當(dāng)于或略高于對(duì)細(xì)菌的MIC中度敏感當(dāng)細(xì)菌引起的感染，僅在應(yīng)用高劑量抗菌高度耐藥 藥物對(duì)某一細(xì)菌的MIC高于藥物在血或體液中可能達(dá)到的濃度；有時(shí)細(xì)菌能產(chǎn)生滅活抗菌藥物的酶，則不論其MIC值大小如

22、何，仍應(yīng)判定該菌為耐藥。高度耐藥 藥物對(duì)某一細(xì)菌的MIC高于藥物在血或體液中可能達(dá)2.耐藥細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和藥敏試驗(yàn)特點(diǎn)2.耐藥細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和藥敏試驗(yàn)特點(diǎn)耐甲氧西林葡萄球菌的檢測(cè)苯唑西林：1ug/片金葡菌 11-12mm凝固酶陰性葡萄球菌 17mm4%NaCl- 6ug/ml苯唑西林鹽平板培養(yǎng)條件：35，24-48小時(shí)結(jié)果：1個(gè)菌落生長(zhǎng)，判定為甲氧西林耐藥（MR）菌株頭孢西?。?0ug/片金葡菌 19mm凝固酶陰性葡萄球菌 24mm分子生物學(xué)方法:PCR擴(kuò)增mecA基因耐甲氧西林葡萄球菌的檢測(cè)苯唑西林：1ug/片藥敏試驗(yàn)的特點(diǎn)-lactamasesmecA抗菌藥物MSSA(甲氧西林敏感金葡

23、菌)/除青霉素外大多敏感MRSA(甲氧西林耐藥金葡菌)大多耐藥（萬(wàn)古霉素除外）藥敏試驗(yàn)的特點(diǎn)-lactamasesmecA抗菌藥物MSS耐萬(wàn)古霉素腸球菌檢測(cè)萬(wàn)古霉素紙片擴(kuò)散法含量：30ug/片結(jié)果：透射光，抑菌圈內(nèi)出現(xiàn)薄霧狀或任何其他生長(zhǎng)或抑菌圈14mm均表示耐藥抑菌圈15-16mm為中度敏感，MIC抑菌圈17mm判定為敏感萬(wàn)古霉素耐藥確證試驗(yàn)含6ug/ml萬(wàn)古霉素的MH平板1-10ul 0.5 5MacFarland Standard菌懸液35 ，24小時(shí)，1個(gè)菌落生長(zhǎng)即判定為耐藥 分子生物學(xué)方法:VanA、VanB、VanC 等基因耐萬(wàn)古霉素腸球菌檢測(cè)萬(wàn)古霉素紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)的特點(diǎn)耐藥基

24、因特性VAN AVAN-R、TEC-R VAN BVAN-R、TEC-SVAN CVAN-I、TEC-SVRE菌株耐萬(wàn)古霉素腸球菌可測(cè)試對(duì)氯霉素、紅霉素及利福平的敏感性藥敏試驗(yàn)的特點(diǎn)耐藥基因特性VAN AVAN-R、TEC-R 耐青霉素肺炎鏈球菌的檢測(cè)苯唑西林：1ug/片抑菌圈直徑20mm為青霉素敏感株（ MIC0.06ug/ml ）抑菌圈直徑19mm可能為青霉素耐藥、中敏或敏感株，必須進(jìn)行青霉素MIC測(cè)定。 0.06ug/ml S（PRSP）0.125-1ug/ml I（PISP） 2ug/ml R（PRSP）耐青霉素肺炎鏈球菌的檢測(cè)苯唑西林：1ug/片藥敏試驗(yàn)的特點(diǎn)PSSP青霉素、阿莫西林

25、等-內(nèi)酰胺類高度敏感對(duì)紅霉素、克林霉素、氯霉素耐藥率較高PISP+PRSP青霉素耐藥，部分菌株對(duì)頭孢曲松等第三代頭孢菌素耐藥；但對(duì)萬(wàn)古霉素、和碳青霉烯類等均呈敏感；對(duì)紅霉素、克林霉素、氯霉素耐藥率更高藥敏試驗(yàn)的特點(diǎn)PSSP青霉素、阿莫西林等-內(nèi)酰胺類高度敏感ESBL細(xì)菌的檢測(cè)篩選試驗(yàn)頭孢泊肟：10ug/片 22mm頭孢他啶：30ug/片 22mm頭孢噻肟：30ug/片 27mm頭孢曲松：30ug/片 25mm氨曲南： 30ug/片 27mm任何一種以上藥物進(jìn)行篩選，出現(xiàn)上述結(jié)果疑為ESBL產(chǎn)生株。ESBL細(xì)菌的檢測(cè)篩選試驗(yàn)ESBL細(xì)菌的檢測(cè)確證試驗(yàn)頭孢他啶（30ug/片）、頭孢他啶/克拉維酸（

26、30/10ug） 頭孢噻肟(30ug/片)、頭孢噻肟/克拉維酸（ 30/10ug ）上述任何一種組合中復(fù)方制劑的抑菌圈直徑與單藥抑菌圈直徑相比，5mm可判定為ESBL產(chǎn)生株。ESBL細(xì)菌的檢測(cè)確證試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)的特點(diǎn)ESBLs菌株主要為大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌，其他的腸桿菌科細(xì)菌和非法酵菌中亦可存在可水解各種廣譜-內(nèi)酰胺類抗生素包括第三代的頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢曲松以及頭孢吡肟和氨曲南等含氧亞氨基側(cè)鏈的頭孢菌素多數(shù)可被酶抑制劑如克拉維酸、舒巴坦、三唑巴坦所抑制對(duì)亞胺培南、美羅培南等碳青霉烯類高度敏感，對(duì)頭霉素類、頭孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/三唑巴坦等酶抑制劑復(fù)方制劑多數(shù)仍呈敏感對(duì)具非-內(nèi)酰胺結(jié)

27、構(gòu)的抗菌藥物如氨基糖苷類、氟喹酮類等的耐藥率亦較非產(chǎn)酶株高藥敏試驗(yàn)的特點(diǎn)ESBLs菌株主要為大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌， AmpCESBL水解頭孢西丁 +-水解頭孢曲松等三代頭孢菌素 + +酶抑制劑抑制- +鄰氯西林抑制+- AmpC酶的檢測(cè)AmpC酶和ESBL酶的特點(diǎn) AmpCESBL水解頭孢西丁 +-水解頭孢曲松等三代頭孢菌產(chǎn)AmpC酶菌株主要發(fā)生在腸桿菌屬、普羅威登菌屬、摩根菌屬、沙雷菌屬何家單胞菌屬細(xì)菌中對(duì)頭霉素類、第三代頭孢菌素和酶抑制劑復(fù)方制劑耐藥，并可同時(shí)對(duì)氟喹酮類和氨基糖苷類耐藥對(duì)第四代頭孢菌素頭孢吡肟和碳青霉烯類敏感如為ESBLs+AmpC酶菌株第四代頭孢菌素頭孢吡肟亦耐藥藥敏

28、試驗(yàn)的特點(diǎn)產(chǎn)AmpC酶菌株主要發(fā)生在腸桿菌屬、普羅威登菌屬、摩根菌屬、抗菌藥物合理應(yīng)用的幾個(gè)問題汪復(fù)；中國(guó)抗感染化療雜志；2019:5(1):13有關(guān)耐藥細(xì)菌感染的抗菌藥物選用 請(qǐng)閱讀抗菌藥物合理應(yīng)用的幾個(gè)問題汪復(fù)；中國(guó)抗感染化療雜志五.細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)細(xì)菌耐藥性的危害性耐藥菌引起的感染治療無(wú)效，發(fā)病率和病死率增加。病程延長(zhǎng)，住院天數(shù)增加，床位周轉(zhuǎn)率低?；ㄙM(fèi)大量的抗菌藥物，使國(guó)家藥政開支增加，嚴(yán)重影響國(guó)民經(jīng)濟(jì)發(fā)展。危害人類健康，對(duì)嬰幼兒和老年人、免疫機(jī)制低下者的生命構(gòu)成威脅。五.細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)細(xì)菌耐藥性的危害性耐藥菌引起的感染目的和意義將感染性疾病的發(fā)病率和病死率將到最低合理使用抗菌藥物，防止濫

29、用，延緩耐藥性發(fā)生。有助于預(yù)防、控制和遏制本地的、地區(qū)的以及全國(guó)的耐藥性發(fā)生發(fā)展。制定修訂經(jīng)驗(yàn)處理和標(biāo)準(zhǔn)化的用藥指南，修訂國(guó)家藥典以提供信息。為國(guó)家制訂研制抗菌藥物和改造老抗菌藥物提供信息目的和意義將感染性疾病的發(fā)病率和病死率將到最低國(guó)外動(dòng)態(tài)世界衛(wèi)生組織（WHO）60年代設(shè)有專題組研究細(xì)菌耐藥性的防治76年制訂了標(biāo)準(zhǔn)化的藥物敏感性試驗(yàn)操作方法(紙片法及試驗(yàn)材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn))，組織了一次國(guó)際性的協(xié)作。84年WHO西太區(qū)組織了本地區(qū)細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)協(xié)作組88年統(tǒng)一方案進(jìn)行細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)WHONET系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析目前已發(fā)展到WHONET5.4國(guó)外動(dòng)態(tài)世界衛(wèi)生組織（WHO）60年代國(guó)外動(dòng)態(tài)世界衛(wèi)生組織（WHO